目的探究Plectin响应基质刚度变化调控肝癌细胞迁移的分子机理。方法制备刚度可调的聚丙烯酰胺水凝胶,划痕实验测定不同基质刚度对MHCC-97H和MHCC-97L迁移的影响。RT-q PCR和Western blotting检测Plectin和Integrinβ1在不同基质刚度上...目的探究Plectin响应基质刚度变化调控肝癌细胞迁移的分子机理。方法制备刚度可调的聚丙烯酰胺水凝胶,划痕实验测定不同基质刚度对MHCC-97H和MHCC-97L迁移的影响。RT-q PCR和Western blotting检测Plectin和Integrinβ1在不同基质刚度上的表达水平,免疫荧光检测F-actin的聚合程度。通过敲减Plectin和Integrinβ1及F-actin的解聚,探究Plectin和Integrinβ1在基质刚度调控肝癌细胞F-actin聚合和迁移中的作用。结果与低基质刚度组(7 k Pa)比较,高基质刚度(53 k Pa)明显增强肝癌细胞迁移能力,同时上调细胞Plectin和Integrinβ1的表达,促进F-actin聚合。敲减Plectin抑制了高基质刚度诱导的F-actin聚合和细胞迁移能力。敲减Integrinβ1抑制了高刚度对Plectin表达、F-actin聚合和细胞迁移能力的促进作用。此外,使用F-actin抑制剂Latrunculin A处理后,同样抑制了高刚度条件下细胞迁移能力的增强。结论高基质刚度通过Integrinβ1上调Plectin的表达,促进F-actin的聚合,从而增强肝癌细胞的迁移能力。展开更多
文摘目的探究Plectin响应基质刚度变化调控肝癌细胞迁移的分子机理。方法制备刚度可调的聚丙烯酰胺水凝胶,划痕实验测定不同基质刚度对MHCC-97H和MHCC-97L迁移的影响。RT-q PCR和Western blotting检测Plectin和Integrinβ1在不同基质刚度上的表达水平,免疫荧光检测F-actin的聚合程度。通过敲减Plectin和Integrinβ1及F-actin的解聚,探究Plectin和Integrinβ1在基质刚度调控肝癌细胞F-actin聚合和迁移中的作用。结果与低基质刚度组(7 k Pa)比较,高基质刚度(53 k Pa)明显增强肝癌细胞迁移能力,同时上调细胞Plectin和Integrinβ1的表达,促进F-actin聚合。敲减Plectin抑制了高基质刚度诱导的F-actin聚合和细胞迁移能力。敲减Integrinβ1抑制了高刚度对Plectin表达、F-actin聚合和细胞迁移能力的促进作用。此外,使用F-actin抑制剂Latrunculin A处理后,同样抑制了高刚度条件下细胞迁移能力的增强。结论高基质刚度通过Integrinβ1上调Plectin的表达,促进F-actin的聚合,从而增强肝癌细胞的迁移能力。