别旁茶提取物对实验性炎症性肠病大鼠的作用

目的探讨别旁茶(BPC)提取物对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠炎症性肠病的保护作用。方法采用TNBS灌肠建立炎症性肠病动物模型,造模结束后处死动物检测大鼠结肠组织形态学改变,检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、白介素27(IL-27)、过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平。结果 TNBS成功诱导急性实验性肠炎大鼠,与对照组相比,别旁茶提取物可显著改善TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-27、MPO、SOD的水平(P<0.05),别旁茶高剂量组大鼠结肠组织学损伤明显改善(P<0.05)。结论别旁茶提取物对实验性炎症性肠病大鼠具有显著的保护作用。

UPLC/Q-TOF-MS技术快速鉴定瑶药别旁茶提取物的化学成分

目的采用UPLC/Q-TOF-MS技术快速分析和鉴定瑶药别旁茶的化学成分。方法采用AQUITY UPLC/Q-TOF micro联用仪,以0.1%(体积分数,下同)甲酸-乙腈为流动相梯度洗脱,ESI正负离子模式下采集数据,以Masslynx4.1软件分析数据,根据正、负离子质谱数据及元素组成分析,结合对照品和相关文献得出结果。结果共检测了29个色谱峰,鉴定了其中的26个化合物。结论 UPLC/Q-TOF-MS技术分析可获得别旁茶中各类化学成分丰富的结构信息,为这些化学成分的鉴定提供了一种快速有效的方法,为阐明别旁茶的药效物质基础提供了有力依据。

别旁茶总苷对溃疡性结肠炎小鼠模型干预的代谢组学初步研究

目的观察别旁茶(BPC)总苷对溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型干预的药效作用,考察不同分组小鼠的尿液代谢表达谱的差异。方法 balb/c小鼠随机分为BPC组、三硝基苯磺酸(TNBS)干预组、正常对照组和阳性药组,药物干预后测定药效指标,采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOf MS)分析动物尿样,数据处理采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别法(PLSDA)。结果与模型组比较,BPC组小鼠结肠组织损伤明显减轻,SOD活性升高(P<0.01),MPO活性和MDA水平明显降低(P<0.01)。代谢组学模式识别分析各组区别明显,PLSDA方法区分尤为明显。结论代谢组学初步研究显示,别旁茶总苷可明显改善溃疡性结肠炎小鼠模型的病变,PLSDA代谢组学数据处理方法可靠。

别旁茶苷通过PXR/NF-κB信号通路治疗小鼠溃疡性结肠炎机制研究

目的探讨别旁茶苷Jasminoside(SC)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗作用及其机制。方法将小鼠随机分为正常对照组,模型组,柳氮磺胺吡啶(SASP)组和SC高、中、低剂量组。除正常对照组外,其余各组采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)建立小鼠结肠炎的模型,给药治疗7d后取材,显微镜下观察结肠黏膜损伤情况,采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法测定结肠中α肿瘤坏死因子(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结肠组织中细胞色素P4503A4酶(CYP3A4)、孕烷X受体(PXR)、TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表达;采用Western Blot法检测结肠组织中CYP3A4和核转录因子P65(NF-κBP65)表达。结果与正常对照组相比,模型组有明显的病理变化,小鼠结肠黏膜和粘膜下层的多形核细胞浸润情况较严重,出现溃疡和上皮杯状细胞缺失的情况;与TNBS组相比,SASP组和SC各给药组结肠组织的TNF-α、IL-6、IL-1β和TGF-β1的水平及TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA的表达水平均有显著下降,并呈剂量依赖性,SASP和SC组中CYP3A4和PXR的mRNA水平显着上调;与正常对照组相比,TNBS组NF-κBP65蛋白表达显着增加,而SASP组和SC组中NF-κBP65表达下降。结论SC对溃疡性小鼠结肠炎有显著疗效,其可能通过激活PXR、CYP3A,抑制NF-κB的表达,降低炎症因子TNF-α,IL-6、IL-1β和TGF-β1的水平来发挥保护作用。

别旁茶苷对LPS诱导CRL-1790细胞释放炎症因子的影响及作用机制

目的研究别旁茶苷对LPS诱导CRL-1790细胞释放炎症因子的影响,初步探讨其作用机制。方法应用MTT法检测别旁茶苷对细胞活性的影响,以别旁茶苷提前干预细胞后加入LPS诱导细胞发生炎症反应,采用ELISA法检测IL-1、IL-8和TNF-α的分泌,Western blot法检测NF-κB p65及PXR的蛋白表达水平,RT-PCR法检测代谢酶CYP3A4和CYP1A2的mRNA相对表达水平。结果 10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L的别旁茶苷对细胞活性无显著影响,确定为实验浓度;与正常对照组比较,LPS可显著刺激细胞分泌IL-8,但对IL-1和TNF-α的分泌无显著影响;与LPS诱导组比较,别旁茶苷显著抑制IL-8的分泌和NF-κB p65的蛋白表达水平,显著提高PXR的蛋白表达水平及CYP3A4和CYP1A2的mRNA表达水平。结论别旁茶苷对CRL-1790细胞具有显著的抗炎作用,其可能机制是通过上调PXR的表达,抑制NF-κB p65的表达从而减少IL-8的分泌,并上调代谢酶CYP3A4、CYP1A2的表达从而保护肠黏膜。

别旁茶乙醇提取物对炎症性肠病的保护作用

目的观察别旁茶(BPC)醇提物对炎症性肠病(IBD)小鼠结肠的影响,探索其发挥作用的可能机制。方法给予C57BL/6小鼠自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液7 d以诱导IBD模型。造模期间每日给予对照组和模型组小鼠等体积灭菌水灌胃,BPC高低剂量组每日分别用别旁茶70%乙醇提取物3 g、6 g/kg灌胃。观察小鼠体质量及疾病活动指数变化情况,HE染色法观察结肠结构变化情况,免疫组化法检测Claudin-1表达改变情况,TUNEL染色法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测p-Stat3及iNOS表达情况。结果高剂量(6 g/kg)的BPC醇提物可明显改善IBD模型小鼠体质量减轻(P<0.05)、结肠缩短(P<0.01)、结肠组织炎性浸润(P<0.05)等现象。高剂量BPC醇提物可改善模型小鼠结肠上皮Claudin-1蛋白减低的情况并减少结肠上皮细胞的凋亡。此外,高剂量的的BPC醇提物抑制Stat3的磷酸化(P<0.01)并下调诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达(P<0.05)。结论BPC醇提物能缓解IBD症状,对肠上皮有保护作用。其机制可能与信号转录激活、氮氧应激等过程相关。

别旁茶通过上调CAV-1对炎症性肠病细胞模型增殖、凋亡的影响

目的 探讨别旁茶是否通过调控小窝蛋白-1(caveolin-1,CAV1)的表达影响炎症性肠病(IBD)细胞模型的增殖和凋亡。方法 采用RT-qPCR和蛋白免疫印迹验证CAV-1-siRNA的敲低效率和pcDNA-CAV-1的过表达效率。采用CCK-8测定别旁茶处理对各组HT-29细胞的增殖影响。蛋白免疫印迹检测别旁茶处理对各组凋亡相关蛋白的表达。蛋白免疫印迹检测pcDNA-CAV-1和别旁茶处理对Occludin和Claudin-1的蛋白表达水平的影响。结果 在HT-29细胞中CAV-1-siRNA的敲低效率和pcDNA-CAV-1的过表达效率得到验证。别旁茶可以通过上调CAV-1促进IBD细胞模型中HT-29细胞的增殖水平和抗凋亡蛋白的表达。别旁茶可以通过上调CAV-1来促进Occludin和Claudin-1的蛋白表达水平。结论 别旁茶通过上调CAV-1来促进Occludin和Claudin-1的蛋白表达水平,从而促进HT-29细胞的增殖水平并抑制其凋亡水平,在IBD细胞模型中发挥保护作用。

别旁茶总苷抗溃疡性结肠炎的网络药理学与分子对接研究

目的基于网络药理学与分子对接的方法探讨瑶药别旁茶总苷(BPC)治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法BPC来源于课题组前期研究,运用Pubchem数据库结合Swiss target prediction数据库预测BPC靶点,GeneCard、DisGeNET数据库搜集UC疾病相关靶点,VENNY 2.1取交集靶点在线绘制药物与疾病共同靶标的韦恩图;导入Cytoscape 3.6.0软件构建“成分—靶点—疾病”网络;应用STRING数据库构建网络模型;借助DAVID6.8数据库将获得的关键共同靶点进行GO功能与KEGG通路富集分析,同时将筛选的别旁茶苷类化合物与差异基因排名前4靶点进行分子对接。结果别旁茶总苷治疗UC潜在苷类成分有8种,交集靶点有139个,主要作用于CASP3、TNF、EGFR、SRC、MMP9等靶标,涉及NF‐κB、PI3K‐AKT、TNF信号通路以发挥治疗UC的作用。分子对接显示苜蓿素结合能优于阳性药。体外细胞实验显示别旁茶总苷确能降低IL‐1β诱导的细胞总蛋白NF‐κBp65的含量,且呈一定的剂量依赖性,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论网络药理学预测到瑶药别旁茶总苷中存在多种治疗UC的活性成分,苜蓿素具有潜在研究价值,为其深入研究或药物开发提供理论参考依据。

别旁茶总苷提取物的提取工艺研究

目的优选别旁茶总苷的提取工艺。方法以别旁茶总苷的含量为评价指标,以药材配比、提取时间、提取次数为影响因素,正交试验优选提取工艺。结果别旁茶总苷提取的优选工艺为加10倍量60%乙醇提取2次,每次2h。结论采用优选的提取工艺,别旁茶总苷提取效率高且成本合理。

别旁茶苷治疗溃疡性结肠炎小鼠的疗效及机制探讨

目的:探讨别旁茶苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗作用及其相关的作用机制。方法:18只C57BL/6小鼠随机分为对照组、UC组和UC+别旁茶苷组,每组6只。UC组和UC+别旁茶苷组小鼠自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液7 d,建立UC小鼠模型。对照组小鼠自由饮用不加DSS的水。造模期间,UC+别旁茶苷组小鼠连续7 d给予别旁茶苷灌胃,剂量20 mg/(kg·d);对照组和UC组小鼠给予等体积蒸馏水灌胃。每日观察小鼠体质量和疾病活动指数(DAI)变化情况。给药7 d后处死小鼠,测量结肠长度,HE染色观察结肠炎症情况,Western blot检测各组小鼠结肠组织抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl、小窝蛋白-1(CAV-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、紧密连接蛋白Occludin和Claudin-1的表达情况。统计分析3组小鼠上述指标的差异。结果:所有小鼠均存活。与对照组比较,UC组小鼠体质量更低,DAI评分更高,结肠更短,差异均具有统计学意义(均P<0.05),结肠组织炎性浸润严重。与UC组小鼠相比,UC+别旁茶苷组小鼠体质量更高,DAI评分更低,结肠更长,差异均具有统计学意义(均P<0.05),结肠组织炎性浸润得到缓解。Western blot结果显示,与对照组比较,UC组小鼠结肠组织Bcl-2、Bcl-xl、CAV-1、Occludin和Claudin-1的表达明显更低,iNOS表达明显更高,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。UC+别旁茶苷组小鼠结肠组织中Bcl-2和Bcl-xl、CAV-1、Occludin和Claudin-1的表达明显高于UC组,而iNOS表达低于UC组,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论:别旁茶苷能缓解UC模型小鼠的症状,其作用机制可能与上调抗凋亡蛋白表达、通过CAV-1/iNOS途径保护肠黏膜屏障相关。