制何首乌对脑卒中后抑郁大鼠神经功能的改善作用

目的探讨制何首乌对脑卒中后抑郁(PSD)大鼠的作用及其机制。方法采用线栓法建立脑中动脉阻塞模型(MCAO),将大鼠随机分为模型组、氟西汀组和制何首乌低、高剂量组,每组10只,另设假手术组。于MCAO造模7d后对除假手术组外的其他大鼠进行持续21d的PSD造模,于第1、7、14、21天进行神经功能及行为学评分,第21天,检测脑梗死面积、脑含水量,采用HE染色、尼氏染色及免疫组化染色观察脑缺血半暗带区病理学形态,ELISA及Westernblot法检测脑组织水通道蛋白(AQP3、AQP4、AQP5)及脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达。结果与模型组比较,制何首乌高剂量组可改善神经功能及行为学评分(P<0.05,P<0.01),降低脑梗死面积和脑含水量(P<0.05)。与模型组比较,各给药组缺血半暗带区脑部结构清晰,细胞间隙变小,神经元数量增多,脑组织AQP3、AQP4、AQP5蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),而BDNF蛋白表达升高(P<0.05)。结论制何首乌可通过降低AQP3、AQP4、AQP5蛋白表达,消除脑水肿,提高BDNF蛋白表达,改善神经元微环境,促进神经元的生长存活,增强神经功能,从而减弱PSD大鼠的抑郁程度。

基于多成分含量测定的制何首乌煮散饮片与原饮片煎煮质量比较研究

【目的】建立制何首乌提取液多成分含量测定方法,比较制何首乌煮散饮片与传统饮片煎煮过程中化学成分的变化规律,为中药煮散饮片的制备和临床应用提供科学依据。【方法】采用高效液相色谱法(HPLC)测定没食子酸、5-羟甲基糠醛、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素等主要成分的含量,以出膏率、醇溶性浸出物作为评价指标,考察标准汤剂煎煮法和非标准汤剂煎煮法对制何首乌煮散饮片和原饮片提取液的影响。【结果】非标准汤剂煎煮法:制何首乌煮散饮片中没食子酸、5-羟甲基糠醛、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素等指标性成分含量均显著性提高,提升比例分别为71.18%、141.67%、146.29%、150.00%、625.00%、296.00%,尤其是大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷提升了7.25倍。标准汤剂煎煮法:制何首乌煮散饮片中上述指标性成分含量均显著性提高,提升比例分别为28.09%、10.53%、66.01%、45.45%、316.67%、65.85%,尤其是大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷提升了4.17倍。采用标准汤剂煎煮法的煮散饮片各指标含量的相对标准偏差(RSD)在10%以内。【结论】制何首乌煮散饮片指标性成分溶出和质量均一性均优于原饮片,可提高临床用药的精准性,需酌情减量使用。

红参-制何首乌药对抗衰老作用的HT22细胞和秀丽隐杆线虫模型初步研究

目的初步探讨不同提取工艺下红参-制何首乌药对对神经细胞的抗衰作用,为红参-制何首乌药对在抗衰及抗阿尔茨海默病(AD)作用的应用提供数据支撑。方法分别制备30%和70%乙醇回流提取物,30%和70%乙醇渗漉提取物和水提取物。通过流式细胞术检测不同提取物对HT22细胞中β-半乳糖苷酶含量的影响,初步筛选红参-制何首乌药对神经细胞抗衰效果最佳的提取物,并通过β-半乳糖苷酶染色直观分析该提取物对神经细胞的抗衰效果,用秀丽隐杆线虫寿命试验及瘫痪实验验证其抗衰及抗AD作用。结果红参-制何首乌药对的不同提取方式均对HT22细胞具有显著的抗衰老作用,其中70%乙醇渗漉提取物效果最佳。对其进行多浓度验证,显示具有剂量依赖性的保护作用。浓度为0.2 mg·mL^(-1)的70%乙醇渗漉提取物对秀丽隐杆线虫的寿命有明显的延长作用,浓度为0.008 mg·mL^(-1)的70%乙醇渗漉提取物具有缓解瘫痪的趋势。结论红参-制何首乌药对的70%乙醇渗漉提取物具有明显抗神经细胞衰老的作用,具有抗衰老延长寿命与治疗AD的潜力,应深入研究。

红参-制何首乌药对对神经细胞保护作用的谱效关系

目的建立红参-制何首乌药对不同提取工艺的超高效液相色谱(UHPLC)指纹图谱,并研究其对Aβ_(1-42)诱导HT22细胞模型保护作用的谱效关系。方法制备红参-制何首乌药对30%乙醇回流提取物、30%乙醇渗漉提取物、70%乙醇回流提取物、70%乙醇渗漉提取物和水提取物。采用UHPLC法进行测定并结合《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)建立不同工艺提取物的UHPLC指纹图谱,并进行共有峰指认。采用Aβ_(1-42)诱导海马神经元HT22细胞,利用MTT法评估不同工艺提取物对模型的保护,考察红参-制何首乌药对不同提取工艺对神经细胞的保护作用;采用灰色关联度分析法、偏最小二乘法(PLS)分析不同提取工艺UHPLC指纹图谱中共有峰与神经细胞保护的相关性。结果红参-制何首乌药对不同提取工艺有19个共有峰,通过化学对照品指认13个成分。经灰色关联度分析发现,14个共有峰与神经细胞保护的关联度均大于0.6,呈相关性。经PLS分析发现10个成分对神经细胞保护作用的影响较大。结论建立红参-制何首乌药对不同提取工艺UHPLC指纹图谱并指认了19个共有峰成分;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄素甲醚、20(S)-人参皂苷Rg2、人参皂苷Ro、人参皂苷Rd和14、17、18号峰所代表的化学成分可能是神经细胞保护作用的药效物质。

基于UPLC-MS分析技术测定不同产区制何首乌饮片中8个化学成分的含量

目的建立UPLC-MS分析技术同时测定不同产地制何首乌饮片中4种蒽醌类(大黄素甲醚、大黄素、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷)及3种鞣质类(没食子酸、儿茶素、表儿茶素)和1种二苯乙烯类(反式二苯乙烯苷)活性成分的含量。方法采用Ultimate UPLC-XB C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为乙腈,线性梯度洗脱,流速为0.2 mL·min^(-1);采用电喷雾离子源(ESI)、负离子扫描模式,在多反应监测(MRM)条件下进行定量分析;并用IBM SPSS Statistics 22软件对数据结果进行聚类分析。结果建立的UPLC-MS可以较好地分离8种成分,各成分在相应浓度范围内与峰面积线性关系良好;其定量限和检测限范围分别为0.89~13.00和0.20~4.00 ng·mL^(-1);精密度、重复性、稳定性的RSD值(n=5)均小于5%;加样回收率在99.47%~101.49%,RSD均小于2.5%;聚类分析结果显示12批制何首乌样品分为3类,其中S1、S2、S5、S8~S12归为Ⅰ类,S6、S7归为Ⅱ类,S3和S4归为Ⅲ类;第Ⅲ类样本(广西、广东)中3类成分的平均含量相对较高。结论该方法可靠、准确、快速、重复性好,可用于制何首乌的质量控制与品质相关研究,并为其临床安全用药提供依据。

基于网络药理学方法和动物实验探讨制何首乌治疗非酒精性脂肪肝病的作用机制

目的基于网络药理学和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)动物模型实验,挖掘并验证制何首乌治疗NAFLD的作用机制。方法查阅文献比较何首乌及制何首乌药物成分的不同;通过HERB数据库及SwissADME查找筛选制何首乌药效成分,Swiss Target Prediction预测靶点,OMIM、DISGENET、GEENCARDS数据库筛选NAFLD相关靶点,药效成分靶点与疾病靶点互相映射,使用DAVIDV6.8进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,Cytoscape3.7.2绘制制何首乌治疗NALFD“成分-靶点-KEGG信号通路-疾病”网络;NAFLD小鼠行制何首乌灌胃治疗8周,检测血清甘油三酯含量及谷丙转氨酶活性;HE染色观察小鼠肝组织病变;Western blot实验对制何首乌治疗NAFLD的潜在作用机制进行验证。结果通过网络药理学筛选出了6种制何首乌治疗NAFLD的药效成分及32个潜在作用靶点,GO和KEGG通路富集到脂质和动脉硬化相关通路、AMPK信号通路等;与NALFD小鼠相比,药物干预组小鼠血清甘油三酯、谷丙转氨酶活性下降;HE染色验证制何首乌具有改善NAFLD的功能,且Western blot显示制何首乌干预后AMPK信号通路的脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FASN),乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA carboxylase,ACC)及硬脂酰辅酶A去饱和酶1(Stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)蛋白表达量相关。结论制何首乌可能通过调控AMPK信号通路相关蛋白FASN、ACC、SCD1表达,减少肝脂质新生,缓解NAFLD肝脂滴蓄积。

制何首乌粗多糖含量测定方法的建立

目的:建立制何首乌粗多糖含量测定方法。方法:用水提醇沉法提取出多糖,采用硫酸-蒽酮显色法显色,用紫外分光光度法进行含量测定。结果:制何首乌中粗多糖含量在0.02004~0.1002mg/ml范围内呈良好的线性关系,重复性平均值为27.95%,RSD为1.4%;回收率平均值为100.23%,RSD为1.5%。结论:本研究方法准确可靠,可作为制何首乌质量评价方法。

制何首乌提取物及主要单体成分对细胞酪氨酸酶及抗氧化保护作用研究

为了探究制何首乌发挥乌发功效的机制,我们利用多巴速率氧化法、多巴染色法评价制何首乌水提物(PWE)、粗多糖及二苯乙烯苷、大黄素对B16F10中酪氨酸酶活性的影响,并利用实时荧光定量PCR法检测其对细胞酪氨酸酶mRNA表达量的影响。结果显示,受试药物对B16F10内酪氨酸酶活性无明显激活作用,但500μg/m L的PWE可显著激活酪氨酸酶mRNA表达;另一方面,利用DPPH自由基清除法测定PWE及大黄素、二苯乙烯苷的体外抗氧化能力,并利用Hep G2C8细胞模型考察其在细胞水平上的抗氧化能力,结果发现,PWE及二苯乙烯苷体外可浓度依赖地清除DPPH自由基,且能激活模型细胞Hep G2C8中ARE的表达,表明二者具有显著的抗氧化活性,或为制何首乌乌发作用要因。

制何首乌高效液相指纹图谱分析

目的:采用HPLC/UV建立制何首乌指纹图谱,探讨主成分含量与指纹图谱的关系。方法:指纹图谱分析应用Dia mondC18 (4. 6mm×250mm, 5μm)色谱柱,甲醇和水梯度洗脱,流速 1. 2mL·min-1,柱温40°C,检测波长 280nm。2, 3,5, 4’ 四羟基二苯乙烯 2 0 β D 葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷)含量测定采用WatersNovapakC18 (3. 9mm×150mm, 5μm)色谱柱,乙腈 水(13∶87)为流动相,流速 1. 0mL·min-1,检测波长 320nm,柱温40°C。结果:样品间指纹谱的相似性与二苯乙烯苷含量之间呈正相关。结论:为制何首乌的鉴定和质量评价提供了依据。

何首乌、制何首乌对大鼠免疫球蛋白影响的实验研究

[目的]研究何首乌、制何首乌对SD大鼠免疫球蛋白的影响。[方法]将大鼠分为7组,每日灌胃主药30g/kg,连续给药90d,测定大鼠血清中免疫球蛋白G(IgG)、IgM、IgA的含量和胸腺质量。[结果]给药组与对照组比较,给药60d时大鼠血清中IgM含量,何首乌组、何首乌配大剂量茯苓组、何首乌配小剂量茯苓组、制首乌组、制何首乌配小剂量茯苓组均呈显著性升高(P<0.05)。给药90d时何首乌配大剂量茯苓组、何首乌配小剂量茯苓组、制何首乌配大剂量茯苓组呈显著性升高(P<0.05)。IgG含量仅给药90d的何首乌配小剂量茯苓组降低,以上各组均具有统计学意义。[结论]给药60d、90d何首乌、制何首乌各给药组可以显著增加大鼠血清中IgM的含量,有可能对肝脏的损伤造成有一定意义的影响。

制何首乌中四个有效成分含量的高效液相色谱法测定

目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定制何首乌中二苯乙烯苷、黄豆苷元、大黄素、大黄素甲醚的方法。方法采用高效液相色谱法;色谱柱为Diamonsil C18(5μm,250 mm×4.6 mm);柱温35℃;流速1.2 ml/min;检测波长280nm;流动相为甲醇∶0.5%醋酸溶液(42∶58)。结果被测定峰与其他组分峰完全分离。二苯乙烯苷、黄豆苷元、大黄素甲醚和大黄素的线性范围分别为0.908 4～9.084μg(R2=0.999 8),0.1236～1.236μg(R2=0.999 7),0.6048～6.048μg(R2=0.999 9),0.3648～3.648μg(R2=0.999 2);平均回收率(n=6)分别为100.2%,(RSD=1.9%),98.53%(RSD=2.0%),100.7%(RSD=2.8%)和99.95%(RSD=2.0%)。结论该方法准确、简便、重复性好,可作为制何首乌中二苯乙烯苷、黄豆苷元、大黄素、大黄素甲醚的含量测定方法,并易于推广。

制何首乌3种成分在动脉粥样硬化大鼠血浆中的测定

目的测定制何首乌Polygoni multiflori Radix Praeparata 3种成分在动脉粥样硬化大鼠血浆中的含有量。方法大鼠灌胃制何首乌CMC-Na溶液后,采集血浆。HPLC分析采用Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.03%磷酸,梯度洗脱;体积流量0.9 m L/min;检测波长280 nm,柱温30℃。DAS2.0软件绘制血药浓度-时间曲线,计算药动学参数。结果二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚分别在61.25~6 125μg/L(r=0.999 8)、12.6~3 150μg/L(r=0.999 3)、24.1~6 030μg/L(r=0.999 5)范围内线性关系良好,方法回收率99.5%~105.8%,RSD 1.3%~3.3%;提取回收率87.2%~96.3%,RSD 3.2%~5.9%。3种成分的药动学行为均符合二室模型,但其在血浆中的含有量远低于在药材中。结论二苯乙烯苷、大黄素和大黄素甲醚在动脉粥样硬化大鼠血浆中生物利用率较低,可能与灌胃制何首乌后成分的肠道吸收有关。

制何首乌提取物抗抑郁作用研究

目的考察制何首乌提取物抗抑郁作用。方法通过3种动物模型,即小鼠悬尾实验(TST)、强迫游泳实验(FST)和开场实验(OFT)模型,首次测试制何首乌水提物(ZW)及其75%乙醇提取物(醇提物,ZE)的抗抑郁作用。结果 ZW(1.5,3 g/kg)可使小鼠在TST及FST的不动时间均显著性缩短(P<0.05),呈现出良好的量效关系,且与阳性药盐酸氟西汀(FH)相比无显著性差异(P>0.05),而ZE(1.5,3 g/kg)对小鼠在TST及FST的不动时间均无显著性差异(P>0.05);各组小鼠OFT穿格次数比较,均无显著性差异(P>0.05)。结论首次证实制何首乌水提物具有抗抑郁活性,且与FH的作用相当,而其醇提物在既定给药方案下无抗抑郁活性。

不同地区制何首乌中二苯乙烯苷含量测定及稳定性考察

目的 :测定不同地区制何首乌中 2 ,3,5 ,4′ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷 (简称二苯乙烯苷 )含量 ,同时考察其稳定性。方法 :采用高效液相色谱法测定二苯乙烯苷含量。稳定性实验采用高温试验及60 Co γ射线辐射试验。结果 :制何首乌中二苯乙烯苷含量为 0 .12 7%～ 4 .15 0 %。温度及湿度影响二苯乙烯苷稳定性 ,干燥条件下60 Co γ射线辐射稳定。结论

制何首乌对大鼠肝损伤的实验研究

目的研究不同剂量的野生制何首乌对大鼠的肝损伤。方法本实验给药组每天按不同剂量(分别相当于成人每日12 g临床用量的20,50,100,200倍)灌胃大鼠一次,前3个月为给药期,第4个月为停药恢复期,分别于给药后的2个月、3个月及4个月末采取血液进行生化检测,同时在3个月末摘取大鼠肝脏匀浆进行丙二醛(MDA)、单胺氧化酶(MAO)、谷胱甘肽-S转移酶(GSH-ST)检测及进行大鼠肝脏组织病理学检测。结果与对照组相比,大剂量和较大剂量给药组对大鼠肝脏转氨酶AST在3个月时有一定的影响(P<0.05),MDA有显著性升高(P<0.05)。肝脏组织病理切片显示光镜下大剂量给药组可见散在炎细胞浸润,肝血窦充血,枯否氏细胞增生活跃并可见吞噬色素颗粒。结论制何首乌大剂量长期灌胃对大鼠肝脏有轻度的肝损害,常用剂量各阶段应用则未见毒副作用。停药后可恢复正常。

微粉化对制何首乌中脂溶性和水溶性成分的影响

制何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiforum Thunb．干燥块根的炮制品，具补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨的作用，临床上以6～12g饮片煎服，但制何首乌饮片常为不规则皱缩块片，厚约1cm，质坚硬，以常规饮片形式煎煮其有效成分不能充分溶出。制何首乌中主要含脂溶性葸醌类和水溶性二苯乙烯苷类成分，其中葸醌类大黄素、大黄素甲醚为制何首乌的主要脂溶性有效成分，以游离和结合型共存于制何首乌中。本研究将制何首乌通过气流粉碎成微粉，研究微粉化对制何首乌脂溶性和水溶性成分的影响，探讨微粉化技术在制何首乌中应用的可行性和必要性。

制何首乌多糖对衰老模型小鼠抗氧化作用的研究

目的 :观察制何首乌多糖的抗氧化作用。方法 :应用D 半乳糖复制小鼠衰老模型。结果 :制何首乌多糖能显著提高D 半乳糖衰老模型小鼠血SOD、CAT及GSH Px活力 ,降低血浆、脑匀浆及肝匀浆LPO水平。结论 :制何首乌多糖有抗氧化作用。

援药药对“制何首乌-虎杖”治疗脑小血管病的理论探析

血浊是脑小血管病发生的重要病理因素,从浊血伤髓论治脑小血管病,可以为脑小血管病临床诊疗提供新的思路。援药药对“制何首乌-虎杖”为化浊行血汤的重要组成,具有化浊益髓的作用。文章主要从脑小血管病的病因病机、治疗原则、援药药对配伍意义、援药药对的相关药理研究4个方面对援药药对“制何首乌-虎杖”治疗脑小血管病进行理论探讨。

制何首乌致肝损害1例

病例：患者,男,28岁,因＂纳差、厌油、尿黄＂等症状入院。入院前3～4月曾服用中药饮片制何首乌（每天10片左右）治疗白发,近期由于劳累后自觉出现厌油、尿黄,逐渐出现上腹部饱胀,纳差,进食量减少,间断恶心、皮肤及巩膜黄染等症状。曾按＂胃病＂服用＂吗丁啉。

制何首乌对大鼠肝CYP1A2酶活性及mRNA表达的抑制作用

目的:考察制何首乌水提物对大鼠肝细胞色素P450酶亚型CYP1A2的酶活性及mRNA表达的影响。方法:水回流提取得制何首乌水提物,HPLC确定主要成分并测定其含量。大鼠随机分为空白对照组、制何首乌水提物组(2 g/kg和20g/kg),给药组每天按10 m L/kg量灌胃给予制何首乌水提物,连续7 d。取肝分离肝微粒体,HPLC测定肝微粒体对CYP1A2酶的底物非那西丁的代谢消除率,考察肝微粒体CYP1A2酶活性;实时荧光定量PCR技术检测肝组织中CYP1A2基因mRNA的表达。结果:与空白对照组相比,制何首乌水提物20 g/kg组大鼠肝CYP1A2酶活性和mRNA的表达均明显降低(CYP1A2酶活性,P<0.01;CYP1A2的mRNA表达,P<0.05)。结论:制何首乌水提物20 g/kg对大鼠肝CYP1A2酶活性和mRNA的表达有明显抑制作用。