超声法与闪式提取法提取刺五加中刺五加苷B的工艺对比研究

本试验采用正交试验优化超声法和闪式提取法提取刺五加中刺五加苷B的提取工艺,并对两种提取方法的最佳工艺进行对比研究。以刺五加苷B的提取率为评价指标,设计L_(9)(3^(4))超声法和闪式提取法的正交试验,以高效液相色谱法测定刺五加苷B的含量。结果显示:超声法提取率高于闪式提取法,最佳提取工艺为提取溶剂30%乙醇,超声功率200 W,提取时间0.75 h,料液比1:5(g/mL)。本研究可为刺五加在饲料领域的开发和利用提供参考。

超快速液相色谱法同时测定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E的含量

目的建立一种同时测定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E含量的超快速液相色谱法。方法采用Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm);H_(2)O(A)-CH3OH(B)为流动相,梯度洗脱(0~1 min,10%B→35%B;1~5 min,35%B→50%B;5~8 min,50%B→60%B);流速:0.4 mL·min^(-1);柱温:30°C;进样量:5μL;平衡时间:5 min;检测波长:215 nm。结果刺五加苷B和刺五加苷E分别在10~400μg·mL^(-1)(r=0.9990)和5~200μg·mL^(-1)(r=0.9991)质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为98.9%和98.2%;6批样品中刺五加苷B与刺五加苷E的含量范围分别为0.130%~0.145%和0.0708%~0.0776%。结论与《中国药典》方法比较,该方法稳定性和专属性好,分析时间短,可用于刺五加药材的质量控制研究。

HPLC法测定不同产地的刺五加中刺五加苷B和E含量

应用HPLC法测定不同产地的刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E含量。YMCC18(150×4.6mm,5μm)色谱柱,以0.1%磷酸水溶液和乙腈为流动相的梯度洗脱方法。本方法简便,重现性好,可作为刺五加药材的质量控制方法。

刺五加苷E对去卵巢小鼠骨量及神经肽的影响

目的 研究刺五加苷E(Eleutheroside E,EE)对去卵巢(OVX)小鼠骨量以及神经肽的影响。方法 选取24只7周龄C57BL6/J雌性小鼠,平均分为假手术组(Sham组)、OVX组、EE低剂量组(EE-L组)和EE高剂量组(EE-H组),EE-L组和EE-H组在OVX基础上分别予EE 20 mg/(kg·d)和40 mg/(kg·d)灌胃,Sham组和OVX组以等体积1%羟甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃。12周后收集小鼠左侧股骨和血清标本。左侧股骨行Micro-CT扫描;ELISA法检测血清中骨吸收指标抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、骨形成指标Ⅰ型原胶原氨基端肽(P1NP)、炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)以及神经肽降钙素基因相关肽(CGRP)、神经肽P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)、神经肽Y (NPY)的含量。结果 与Sham组相比,OVX组小鼠骨密度(bone mineral density, BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、P1NP、IL-10、CGRP、SP、VIP和NPY显著性降低(P<0.05,P<0.01),骨小梁分离度(Tb.Sp)、TRAP、TNF-α和IL-6显著性增高(P<0.05);与OVX组相比,EE-L组小鼠Tb.N、VIP和NPY显著性增高(P<0.05),BMD、BV/TV、IL-10、CGRP和SP有增加趋势,但无显著性差异(P>0.05),Tb.Sp、TRAP、TNF-α和IL-6有降低趋势,但无显著性差异(P>0.05),P1NP未见改变趋势(P>0.05);EE-H组小鼠BMD、BV/TV、Tb.N、P1NP、IL-10、CGRP、SP、VIP和NPY显著性增高(P<0.05,P<0.01),Tb.Sp、TRAP、TNF-α和IL-6显著性降低(P<0.05)。结论 EE能够显著增加OVX骨量,其机制可能是通过降低炎症反应,增加神经肽的含量而实现,并呈现剂量依赖性。

刺五加苷B影响EMT进程抑制肺癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨刺五加苷B对人肺癌A549和H460细胞迁移侵袭的影响。方法:采用不同浓度的刺五加苷B(0、5、15、20、25、30、35、40、45 mmol/L)作用肺癌细胞A549和H460,同时设置对照组和空白组,筛选出最佳作用浓度。用最佳药物浓度刺五加苷B作用肺癌细胞进行细胞划痕实验、Transwell迁移侵袭实验,观察细胞划痕面积变化和穿过Transwell小室的细胞数量,探究刺五加苷B对肺癌细胞A549和H460迁移和侵袭的影响。应用Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、Slug、Snail表达情况,探究刺五加苷B对肺癌A549和H460细胞上皮间质转化的作用。结果:刺五加苷B明显抑制肺癌A549和H460细胞划痕面积减少,穿过Transwell小室和基质胶的细胞数量减少。与对照组相比刺五加苷B明显上调上皮标志E-cadherin蛋白表达,并发现EMT转录因子Slug和Snail表达水平显著降低。结论:刺五加苷B能明显抑制肺癌A549和H460细胞生长、并通过影响EMT进程抑制细胞迁移侵袭。

RP-HPLC法研究刺五加注射液中刺五加苷E、刺五加苷B在大鼠体内的药代动力学和组织分布特性

目的:建立大鼠血浆中刺五加苷 E 和刺五加苷 B 的 RP-HPLC 分析方法,并对这2种成分在大鼠体内过程特性进行分析研究。方法:用乙腈沉淀生物样品中的蛋白质,同时又将生物样品中的刺五加苷 B 和苷 E 提取出来,然后用固相萃取法分离提取物,用60%甲醇将刺五加苷 B 和苷 E 从固相萃取小柱洗脱下来,用高效液相色谱法提取出来测定,色谱柱为 KromasilODS(4.6mm×250mm,5pan),柱温25℃,水-乙腈梯度流动相(0→15min,90:10→80:20;15→25min,80:20→50:50),流速0.8mL·min^(-1),一次进样,分别在220nm和206nm 波长下检测刺五加苷 E 和苷 B。结果:Wister 大鼠一次股静脉给药后血药浓度时间曲线呈三室模型,刺五加苷 E 和苷 B 的消除半衰期 t_(1/2)分别为4.66和2.49h。在主要组织中的分布特点是:刺五加苷 E 在血液、肾脏、心脏、肝脏和脾脏中都有分布,刺五加苷 B 在血液、肾脏、心脏、肝脏中都有分布,在脾脏中没有分布,刺五加苷 E 和苷 B 主要由肝、肾代谢、排泄。结论:本法可用于刺五加苷 E 和刺五加苷 B 体内过程的研究。样品直接用固相萃取小柱处理,可消除内源性成分干扰。

HPLC法测定刺五加不同部位刺五加苷B、E含量

目的:建立 HPLC 法同时测定刺五加苷 B 和刺五加苷 E 含量的方法,并对刺五加不同部位的刺五加苷 B 和刺五加苷 E进行含量测定,为合理开发、利用刺五加资源提供理论依据。方法:采用 Nucleosil C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0～8 min:12%B;8～20 min:12%B→18%B;20～25 min:18%B;25 min:12%%B),流速0.8 mL·min^(-1),检测波长210 nm。结果:刺五加苷 B 在茎干中含量最高,叶中最低;刺五加苷 E 在根中含量最高,花中含量最低。除叶以外,其他各部位中刺五加苷 E 的含量均低于刺五加苷 B。结论:本方法简便,重复性好,可作为刺五加药材的质量控制方法,也为合理利用刺五加这一资源提供依据。

刺五加苷B、苷E在体外大鼠肠道菌群中的代谢

目的:观察体外大鼠肠道菌群对刺五加苷B、苷E的代谢。方法:收集大鼠新鲜粪便在厌氧培养基37℃培养24h,分别加入刺五加苷B、刺五加苷E,培养后加甲醇提取离心,取上清液采用HPLC及UPLC/MS方法对代谢成分进行分离和定性分析。结果:刺五加苷B、苷E在大鼠粪便孵育液中代谢,24h后样本中能检测出较高浓度代谢物。在离体条件下,刺五加苷B、苷E可以被大鼠的肠道菌群代谢,经过UPLC/MS的检测,刺五加苷B代谢物的分子离子峰[M+H]^+为193.08,推测为刺五加苷B的苷元再脱一分子水;刺五加苷E代谢物的分子离子峰[M+H]^+为417.17,推测为刺五加苷B的苷元。结论:刺五加苷B、苷E可以被大鼠肠道菌群代谢。

响应面法优化短梗五加中刺五加苷B和E的超声提取工艺

[目的]探索短梗五加中刺五加苷B、E的超声提取条件。[方法]在单因素试验的基础上,采用高效液相色谱法对短梗五加茎皮中的刺五加苷B和刺五加苷E的含量进行测定,并应用响应面法优化刺五加苷B、E的提取条件。[结果]刺五加苷B的最佳超声提取条件为:甲醇浓度为52.46%,超声提取时间75 min,料液比为40 g/ml;刺五加苷E的最佳提取工艺条件为:甲醇浓度49.36%,超声提取时间为75 min,料液比为40 g/ml。[结论]响应面法优化短梗五加刺五加苷B和E提取工艺合理可行,为提高刺五加苷B和E提取率提供了理论依据。

刺五加苷B、苷E在大鼠体内肠道菌群中的代谢

目的:观察刺五加苷B、刺五加苷E等刺五加有效部位在大鼠体内肠道菌群中的代谢情况。方法:以10倍剂量给大鼠灌胃刺五加的有效部位,收集1、2、4、6、8、12h的大鼠肠道内容物和12h的大鼠粪便,加水使粪便与水的比例为1g:4ml,13000r/min离心,取上清液采用HPLC法检测刺五加苷B刺五加苷E的道谢情况。结果:在给大鼠灌胃刺五加有效部位后,12h内的大鼠粪便里检测不到刺五加的有效成分和代谢产物,经过对大鼠肠道内容物的研究得出,4h后刺五加的有效部位被完全代谢,但检测不到刺五加苷B、刺五加苷E的代谢产物。结论:绿原酸和异秦皮啶在大鼠肠道菌群中不发生代谢。体内研究显示,刺五加的有效部位在4h后被完全代谢吸收,但是检测不到刺五加苷B、刺五加苷E的代谢产物,推测其代谢产物可能直接被大鼠吸收。

刺五加苷B及PI3K/AKT/mTOR通路在肿瘤中的作用

癌症是威胁人类生命健康的一种主要疾病,每年确诊癌症的人数和因癌症死亡的人数不断增加。手术和化疗是常见的治疗手段,但预后较差。目前,中药被越来越多的用于肿瘤治疗和预防,刺五加苷B已被证实具有抗肿瘤、提高免疫等多种药理作用。PI3K/AKT/mTOR通路已被认为是经典的癌症靶标,但中药活性成分联合该通路的研究尚少,本文旨在为进一步开发利用刺五加苷B的抗肿瘤药用价值提供参考。

体外培养刺五加生产刺五加苷B、E的研究

目的探讨2,4-D和培养基对刺五加愈伤组织和体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的影响,建立有利于刺五加苷B、E积累的刺五加体外培养体系。方法将来自同一外植体的刺五加愈伤组织和体细胞胚胎分别诱导增殖或产生次级体胚,HPLC法测定培养物中刺五加苷B、E含量和培养物质量,考察培养物类型、培养基种类和激素对刺五加苷B、E生产的影响。结果体细胞胚胎的质量虽略低于愈伤组织的质量,但体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的能力优于愈伤组织。2,4-D对刺五加苷B、E含量影响较小,仅改变了培养物的质量。MS培养基处理中培养物的刺五加苷B、E产量优于1/2MS培养基。结论刺五加体外培养物可以生产刺五加苷B、E,其产量取决于培养物类型、培养基种类和2,4-D浓度。

高效液相色谱波长切换法同时测定微达康膏中的梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ

目的建立HPLC波长切换法同时测定微达康膏中的梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的方法。方法采用Waters Nova-pak C_(18)色谱柱,以乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.9 mL·min^(-1)。结果梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ分别在4.53~90.60μg·mL^(-1)、6.18~123.60μg·mL^(-1)、3.92~78.40μg·mL^(-1)、7.51~150.20μg·mL^(-1)、7.14~142.80μg·mL^(-1)与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9999、0.9998、1.000、0.9996、0.9999;平均加样回收率及相应的RSD分别为98.5%(1.2%)、98.9%(0.77%)、99.1%(0.90%)、97.5%(1.8%)、97.1%(0.84%)。结论本方法快速、准确度高、专属性好,可用于微达康膏的质量控制。

HPLC法测定刺五加根中刺五加苷B、E的含量

目的:利用HPLC法对刺五加根中刺五加苷B、E的含量进行测定,建立刺五加根中刺五加苷B、E含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法测定,Hypersil C18色谱柱(4.6mm×150mm,5um),以水-乙腈为流动相,流速为0.8mL·min-1,柱温:室温,检测波长是210nm。结果:在同一色谱条件下,刺五加苷B在0.043-0.77ug·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9996,回收率99.21%,RSD为1.9%;刺五加苷E在0.047-0.51ug·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9998,回收率为101.81%,RSD为1.3%。结论:该分析方法灵敏快速、结果准确、重现性好,可用于刺五加根中刺五加苷B、E含量的测定。

LC-MS/MS同时测定刺五加根中刺五加苷B、刺五加苷E及黄酮类次生代谢物含量的研究

通过建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定野生刺五加与人工栽培植株根中刺五加苷B、刺五加苷E、金丝桃苷、芦丁、槲皮苷、山奈酚含量,比较野生刺五加与人工种植五加根中目标化合物含量差异。经色谱和质谱方法的考察,结果表明:超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)成功应用于检测刺五加野生植株和人工栽培植株根中目标化合物含量,具有灵敏度高、选择性好、分析时间短、定量分析准确等优点。利用UPLC-MS/MS法测定刺五加植株根中6种药用次生代谢物含量,目标化合物能达到基线分离,各成分回收率在92.47%~96.44%之间;人工栽培植株根中的主成分(Q值)综合得分大于野生植株,目标化合物总含量分别为6.278 56μg·g^(-1)和6.053 63μg·g^(-1),前者高出后者0.224 93μg·g^(-1)。刺五加苷E、芦丁、山奈酚人工栽培植株含量大于野生植株,或具有显著性差异(p<0.05);而刺五加苷B、金丝桃苷、槲皮苷野生植株含量大于人工栽培植株,或具有显著性差异(p<0.05)。

刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷B的含量测定

目的：建立刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷B的含量测定方法。方法：用小鼠负重游泳实验，确定刺五加粗提物的抗疲劳活性部位；硅胶柱色谱，Sephadex LH-20柱色谱，制备液相色谱对活性部位分离纯化，并对分离所得化合物进行理化性质研究和结构鉴定；含量测定中高效液相色谱条件为Diamonsil C18柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相乙腈-水-醋酸（10：90：0．01），流速1．0mL·min^-1，紫外检测波长344nm。结果：从刺五加抗疲劳活性部位Asl中分离得到一化合物，鉴定为刺五加苷B；刺五加苷B的线性范围为0．104—20．8μg，r=0．9999；平均回收率为97．68％，RSD1．4％（n=6）。结论：从刺五加抗疲劳活性部位Asl中分离得到含量较高的刺五加苷B，作为质量控制的指标成分，并建立了刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷B含量测定方法。

高速逆流色谱法对刺五加有效成分刺五加苷E的分离制备

采用高速逆流色谱法分离纯化刺五加粗品中的刺五加苷E。溶剂系统为氯仿 甲醇 异丙醇 水,体积比为5∶6∶1∶4,上相为固定相,下相为流动相,转速为800r/min,流速为2 0mL/min。所得刺五加苷E经高效液相色谱分析,测定纯度为98%(峰面积百分比)。这为其他苷类等极性物质的分离纯化提供了依据。

刺五加苷对D-半乳糖致衰老模型大鼠免疫功能的影响

目的研究刺五加苷对D-半乳糖(D-gal)致衰老模型大鼠免疫功能的影响。方法以不同浓度刺五加苷作用D-gal致衰老模型大鼠后,计算脏器指数,MTT比色法测定T淋巴细胞增殖功能,ELISA法测定白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度。结果刺五加苷改善D-gal致衰老大鼠免疫功能具有浓度依赖性。结论刺五加苷能改善衰老大鼠免疫功能,延缓免疫衰老。

刺五加内生真菌对刺五加苷B和E含量的影响

[目的]分析内生真菌对刺五加中刺五加苷B、E含量的影响。[方法]以分离自不同产地的刺五加内生真菌为试材,以伤口法回接,HPLC法测定刺五加苷B、E含量。[结果]结果表明,25株内生真菌中有16株为致病菌,9株为非致病菌。其中来自产地吉林省梅河口市刺五加的菌株P116-1a、P109-4、P116-1b和P312-1均不同程度地提高了刺五加茎、根茎中刺五加苷B、E的含量。[结论]刺五加内生真菌可通过产生的代谢物调节刺五加苷B、E的含量。

HPLC法测定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E的含量

[目的]建立刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E含量的测定方法。[方法]采用高效液相色谱(HPLC)法测定刺五加苷B和刺五加苷E的含量。[结果]在同一色谱条件下,刺五加苷B在2.76～43.92μg·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9998,回收率98.7%,RSD为1.8%;刺五加苷E在2.34～37.52μg·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9996,回收率为101.9%,RSD为2.0%。[结论]该分析方法简便、准确、重现性好,可用于刺五加药材中刺五加苷B和刺五加苷E的含量测定。