千层纸素A对类风湿性关节炎小鼠的疗效研究

目的探讨千层纸素A(oroxylin A,OA)对鸡二型胶原诱导的关节炎(chicken type II collagen-induced arthritis,CIA)小鼠的治疗作用并观察免疫细胞在其中的变化。方法建立CIA小鼠模型,从第28天起,连续10 d腹腔注射40 mg/kg OA进行治疗,给药期间分3次处死小鼠,在每个时间节点对关节进行临床评分;HE染色观察小鼠踝关节病理情况;流式细胞仪检测小鼠脾脏以及腹股沟淋巴结中Th17、Treg以及巨噬细胞在治疗过程中的变化;ELISA检测小鼠血清中IL-1β、IL-18和IL-6的表达水平;qRT-PCR检测小鼠脾脏中IL-1β、IL-18、IL-6和TNF-α的表达水平。结果OA给药后第34天起,CIA小鼠关节肿胀程度明显缓解,病理评分降低,炎性细胞浸润减少;流式细胞术结果显示,OA组的CIA小鼠脾脏和腹股沟淋巴结中Th17细胞、巨噬细胞比例下降,而Treg细胞比例增加;ELISA和qRT-PCR结果表明,OA可以抑制CIA小鼠体内的炎症水平。结论OA可以通过调节免疫细胞的比例抑制CIA小鼠体内的炎症水平,进而缓解CIA小鼠的症状。

千层纸素A的药理作用及制剂开发的最新进展

千层纸素A主要来源于我国传统中药黄芩，是一种重要的黄酮类有效成分。由于黄芩在我国拥有悠久的药用历史和显著的药用价值，使得千层纸素A一经发现，就很快受到广大研究者的关注。现代研究表明，千层纸素A可以抗炎、抗肿瘤、保护血管与神经细胞、改善记忆障碍、抗病毒等。目前市场上千层纸素A的产品很少。随着千层纸素A提取或合成工艺的不断进步，也将会有更多的千层纸素A制剂产品问世。

千层纸素A内皮依赖性舒张大鼠离体血管的作用

目的:研究千层纸素A对离体大鼠胸主动脉的血管舒张作用及其内皮依赖性作用机制。方法:分离Wistar大鼠的胸主动脉,采用离体大鼠胸主动脉环张力测定法检测千层纸素A对1μmol/L去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)或60mmol/L氯化钾预收缩的大鼠离体胸主动脉环的舒张效应,并观察去内皮或用一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)预处理后千层纸素A舒张血管作用的变化。结果:千层纸素A(10、100μmol/L)可以舒张NE(1μmol/L)和氯化钾(60mmol/L)预收缩的内皮完整的离体血管,10、100μmol/L药物浓度组与溶剂对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);对去内皮血管的舒张作用显著低于内皮完整的血管(P<0.05,P<0.01);终浓度为100μmol/L的L-NAME可以显著降低100μmol/L千层纸素A的舒血管作用,加入L-NAME组与不加入抑制剂组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:千层纸素A可通过内皮依赖的一氧化氮途径发挥舒张血管的作用。

千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究

目的研究千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法 MTT实验考察千层纸素A在Caco-2细胞中的安全浓度范围,再利用Caco-2细胞单层模型研究千层纸素A的双向转运机制,以转运量及表观渗透系数(Papp)为指标,考察时间、浓度、pH和P-gp抑制药维拉帕米对其吸收的影响。结果千层纸素A在Caco-2细胞模型中的转运与时间和浓度呈正相关;并受pH值影响,P-gp抑制药维拉帕米对其转运无影响,从单层细胞层顶端(AP)到基底端(BL)的转运与基底端到顶端的转运大致相同。结论千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收是被动转运。

天然产物千层纸素A的研究进展

天然产物千层纸素A具有广泛的生物活性,如抗肿瘤、神经保护、抗炎、抗分娩、抗瘙痒等,目前引起了国内外学者的广泛关注。综述了近年来国内外关于千层纸素A的植物提取、人工合成、生物活性及作用机制方面的研究进展。

黄芩射干汤中千层纸素A和次野鸢尾黄素的含量测定

目的建立黄芩射干汤有效成分千层纸素A和次野鸢尾黄素的定量分析方法。方法采用HPLC-DAD法测定制剂中千层纸素A和次野鸢尾黄素含量,使用Ultimate XB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相,进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温:25℃。结果千层纸素A和次野鸢尾黄素含量的线性范围分别为0.058 32~0.641 52μg(r=0.999 4)和0.053 76~0.591 36μg(r=0.999 6);平均回收率(n=6)分别为96.98%和97.37%,RSD分别为1.68%和1.98%。结论所建方法快速、准确,重复性好,可作为此制剂的定量分析方法。

汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A油水分配系数测定

目的采用摇瓶-HPLC法测定汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的表观油水分配系数。方法借助水饱和正辛醇、正辛醇饱和磷酸盐缓冲液油水平衡体系,得到在一系列不同pH环境下汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的表观油水分配系数。结果汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A在正辛醇-水体系中的油水分配系数分别为lgP=0.49、lgP=3.78和lgP=3.90(37℃)。结论该法简便、准确、快捷,试验所得三者的油水分配系数可用于佐证其体内吸收变化。

千层纸素A改善大鼠慢性心力衰竭的作用及其分子机制

探讨千层纸素A(oroxylin A,OA)对异丙肾上腺素诱导的大鼠心力衰竭的保护作用及其分子机制。与模型组相比,OA给药组[25、50、100 mg/(kg·d),每组8只大鼠,灌胃给药8周]可剂量依赖地改善大鼠心力衰竭的症状,血流动力学参数和心脏射血分数有较大改善,心脏功能指数明显恢复,心脏彩超及苏木精-伊红染色、Masson染色提示心脏损伤程度明显减轻,多种神经内分泌因子如去甲肾上腺素、醛固酮、脑钠肽等在OA给药组均显著下调。进一步利用大鼠原代心肌细胞发现,OA可通过抑制AKT1-RPS6KB1信号通路促进心肌细胞自噬。实验结果表明,OA可通过促进心肌细胞的自噬来改善异丙肾上腺素所诱导的大鼠心力衰竭。

千层纸素A抗肿瘤机制的研究进展

通过对近年来关于黄芩抗肿瘤方面的报道进行分析,认为千层纸素A抗肿瘤活性广泛,并揭示了千层纸素A抗肿瘤的信号网络,为抗肿瘤新药的研发和应用提供参考。

千层纸素A动员内皮祖细胞促进血管新生作用机制研究

目的探讨千层纸素A通过动员内皮祖细胞发挥促进血管新生作用的机制。方法将30只SPF级健康ICR小鼠制备单侧后下肢缺血模型,按照随机双盲的方法,将后下肢缺血模型造模成功的小鼠分成三组:模型组、千层纸素A组(Oroxylin A)和辛伐他汀组(Sim),每组各10只。采用激光多普勒点扫描成像系统分别检测小鼠术前、术后和给药3、7、14、28d血流量,采用HE染色观察术后28 d缺血腓肠肌组织形态变化;采用流式细胞术检测给药1、3、7d的外周血中内皮祖细胞数量;蛋白芯片检测术后3、7、14d缺血腓肠肌组织CXC型趋化因子配体16(CXCLl6)以及单核细胞趋化性蛋白1(MCP-1)的表达;Western blot检测后下肢缺血小鼠给药3、7、14d基质金属蛋白酶3(MMP3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达;采用ELISA检测血浆中肝细胞生长因子(HGF)的表达。结果在后下肢缺血模型小鼠中,千层纸素A组和辛伐他汀组较模型组相比,外周血中GFP+/Sca-1+/Flk-1+内皮祖细胞的数量显著升高,且千层纸素A组小鼠腓肠肌病理形态较模型组明显改善。与模型组比较,给药后3d,千层纸素A组小鼠血浆中HGF的表达显著升高,给药后7d,缺血组织中MMP3、MMP9的蛋白表达量均显著升高。同时EPCs的细胞因子CXCL16及MCP-1的蛋白表达在给药后第7d显著升高。结论千层纸素A通过促进内皮祖细胞介导血管新生,从而发挥促缺血组织血流恢复及损伤修复作用。

黄芩内生真菌发酵黄芩苷生成千层纸素A的代谢途径及转化条件研究

本研究采用黄芩内生青霉菌Penicillium sp.R3发酵转化黄芩苷生产千层纸素A,探索生物转化途径,优化发酵转化条件,旨在为天然产物千层纸素A的开发利用提供新方法、新途径。菌株Penicillium sp.R3在马铃薯葡萄糖(PDB)培养液中培养并进行转化反应,菌株生长4天后达到最大生物量,之后进入稳定期。通过不用底物添加法分析其生物转化途径,高效液相色谱检测发现菌株转化黄芩苷生成千层纸素A同时伴随黄芩素产生,且黄芩素为中间产物。单因素分析结合正交试验方法获取发酵转化的最适条件为:摇瓶装液量10%,接种孢子浓度1×106~2×106个/mL,30℃,150 rpm培养3天后添加0.08%黄芩苷转化6天。该条件下转化反应摩尔转化率达到42.44%,发酵液中千层纸素A产量达到177 mg/L,且结果稳定性好。实验明确了菌株生长及转化规律,获得了稳定且转化率较高的发酵转化条件,为千层纸素A的进一步开发利用奠定了基础。

基于网络药理学和分子对接探讨千层纸素A治疗椎间盘退变的分子机制

目的运用网络药理学及分子对接技术探讨千层纸素A治疗椎间盘退变的作用机制。方法通过PharmMapper、SwissTarget Prediction和Similarity ensemble approach数据库获取千层纸素A的药物作用靶点。在GeneCards和在线人类孟德尔遗传数据库搜索椎间盘退变疾病相关靶点。在此基础上,将千层纸素A的作用靶点与椎间盘退变疾病靶点取交集得到千层纸素A对椎间盘退变的潜在治疗靶点。运用在线String数据库和Cytoscape 3.8.0软件构建蛋白相互作用网络,运用R语言对共同靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,使用AutoDock vina软件对千层纸素A与关键靶点进行虚拟对接。结果通过筛选共得到35个千层纸素A对椎间盘退变的潜在治疗靶点。靶点涉及的通路主要包括PI3K/AKT信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路以及糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路。结合蛋白相互作用网络和KEGG富集分析共得到白细胞介素-6(IL-6)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)和基质金属蛋白酶9(MMP9)4个核心靶点,与千层纸素A进行分子对接,结果显示亲和力均小于-5 kcal·mol-1,分子对接结果良好。结论本研究采用网络药理学和分子对接的方法,揭示出千层纸素A可能通过抑制髓核细胞凋亡、抑制细胞外基质降解、抗炎和抗血管生成发挥多靶点和多通路的抗椎间盘退变作用,为后续研究其分子机制奠定了基础。

千层纸素A通过调控P4HB蛋白介导的hedgehog信号抑制肝癌血管生成

目的:探讨脯氨酸4-羟化酶β亚基(P4HB)蛋白在千层纸素A抗肝癌血管生成中的作用及其可能的机制。方法:Western blot检测6株人肝癌细胞系HCCLM3、Huh7、HepG2、MHCC97-L、Bel-7402及SMMC-7721中P4HB的蛋白表达。MTS试剂盒检测受试化合物对SMMC-7721细胞体外增殖的影响;LDH检测受试化合物对SMMC-7721细胞毒性影响;Western blot法检测受试化合物对SMMC-7721细胞中P4HB蛋白表达的影响;构建P4HB干扰质粒并转染SMMC-7721细胞,Western blot检测干扰转染效率;采用小管形成实验研究干扰P4HB对SMMC-7721细胞血管生成的影响;采用Western blot检测干扰P4HB对SMMC-7721细胞中hedgehog (Hh)信号相关蛋白Patched、Smo及Hhip蛋白表达影响;采用ELISA试剂盒检测激动Hh信号对P4HB蛋白调控SMMC-7721细胞血管内皮生长因子(VEGF)及血小板衍生生长因子(PDGF)分泌影响。结果:6株细胞中,SMMC-7721细胞表达P4HB蛋白最高。与对照组相比,千层纸素A体外可显著抑制抑制SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05),并在100μmol·L^(-1)以上时对细胞显示毒性作用(P<0.05)。与对照组相比,千层纸素A可显著抑制SMMC-7721细胞中P4HB蛋白表达(P<0.05);与对照干扰组相比,P4HB干扰质粒可显著抑制SMMC-7721细胞中P4HB蛋白表达(P<0.05),表明质粒构建成功;与对照干扰组相比,干扰P4HB可抑制SMMC-7721细胞的血管生成(P<0.05),降低SMMC-7721细胞Patched及Smo的蛋白表达(P<0.05),并升高Hhip蛋白表达(P<0.05)。此外,与对照组相比,千层纸素A亦能够抑制SMMC-7721细胞Patched及Smo的蛋白表达(P<0.05),并增加Hhip蛋白表达(P<0.05)。与P4HB干扰组相比,激动Hh信号可减弱P4HB干扰所致的细胞VEGF及PDGF分泌下降的作用(P<0.05)。结论:千层纸素A能够通过抑制P4HB介导的hedgehog信号抑制肝癌细胞的血管生成。千层纸素A是抗肝癌血管生成疗法的潜在化合物。

千层纸素A的抗肿瘤药理作用及机制研究进展

千层纸素A是从中药黄芩根部提取的主要黄酮类化合物之一,能通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡、诱导细胞周期阻滞和抑制肿瘤转移等多方面发挥抗肿瘤作用。本文主要阐明近5年内对于千层纸素A抗肿瘤活性的多种机制、途径和分子靶点的研究进展,证实千层纸素A的抗肿瘤作用,为进一步开发提供理论支撑。

千层纸素A调控胆碱能抗炎通路抑制结核分枝杆菌致巨噬细胞焦亡

目的探讨千层纸素A(oroxylin A,OrA)对结核分枝杆菌感染诱导的巨噬细胞焦亡的作用及分子机制。方法构建结核分枝杆菌感染J774A.1细胞体外模型;MTT法检测OrA对J774A.1细胞活力的影响;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒检测细胞LDH释放水平;Western blot检测细胞焦亡相关蛋白NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、GSDMD-N、caspase1-p20、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、α7烟碱乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)蛋白质表达水平及NF-κB p65的磷酸化。ELISA检测各组细胞IL-1β表达水平;免疫荧光检测α7nAChR蛋白及定位。结果MTT结果表明OrA在80μmol/L浓度范围内对J774A.1细胞无细胞毒性;OrA抑制J774A.1细胞LDH的释放,降低细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD-N、caspase1-p20的蛋白质表达水平以及ASC寡聚化,促进α7nAChR蛋白表达,并抑制NF-κB p65磷酸化和IL-1β的释放;加入α7nAChR激动剂PNU282987可降低GSDMD-N并抑制NF-κB p65磷酸化。结论OrA可能通过调控胆碱能抗炎通路抑制结核分枝杆菌感染诱导的巨噬细胞焦亡。

生物信息学和实验验证探究千层纸素A抗宫颈癌的效应及其作用机制

目的探讨千层纸素A抑制宫颈癌的作用及潜在机制。方法在GEO和TCGA数据集中分析SHC SH2结构域结合蛋白1(SHCBP1)在宫颈癌患者与健康人之间的表达的差异;通过MTT实验验证千层纸素A对HeLa细胞的抑制作用。采用Western blotting实验对千层纸素A与SHCBP1之间关系进行研究,运用分子模拟对接评估千层纸素A与SHCBP1蛋白的对接效果;Linkedomics分析宫颈癌患者中SHCBP1的共表达基因;基因本体(GO)和京都基因组百科全书(KEGG)分析相关共表达基因的潜在机制;CIBERSORT法分析SHCBP1与宫颈癌免疫细胞浸润的相关性;TISIDB数据库分析SHCBP1与免疫检查点的关系。结果GEO数据库及TCGA数据库的分析结果得出,SHCBP1在宫颈癌患者中显著高表达;MTT和Westernblotting分析结果显示,千层纸素A在10μmol/L即对He La细胞增殖和SHCBP1的表达具有显著的抑制效果(P<0.05)。分子对接结果显示,千层纸素A与SHCBP1具有较好的结合势能;TISIDB数据库的研究及CIBERSORT法对GEO数据集的分析结果得出,SHCBP1参与了宫颈癌细胞的免疫浸润;SHCBP1及其共表达基因主要富集于炎症相关途径中。结论千层纸素A通过抑制SHCBP1介导的免疫浸润来抑制宫颈癌的生长,这可能在宫颈癌的治疗中有重要意义。

UPLC同时测定黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A

目的建立用超高效液相色谱(UPLC)同时测定黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A 5种成分的方法。方法采用UPLC色谱系统,BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,体积流量为0.6 mL/min;进样量为2μL;检测波长为280 nm。结果本方法可在15 min内完成1次色谱分析,黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A色谱峰之间有良好的分离度,5种成分的浓度和各自峰面积之间有着良好的线性关系,精密度、重复性及加样回收率的RSD均小于3.0%。结论本方法快捷、准确,重复性好,能同时测定黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A 5种成分的量。

HPLC法同时测定清开灵注射液中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的含量

目的：建立同时测定清开灵注射液中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷含量的方法，并比较不同厂家、批号产品中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的含量差异。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18，流动相为甲醇-0．1％磷酸溶液（梯度洗脱），流速为1．0ml／min，检测波长为274nm，柱温为30℃，进样量为10ul。结果：黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷检测质量浓度分别在10．1-252．0、1．0～6．0ug／ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0．9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1．6％；平均加样回收率分别为99．64％、99．03％，RSD分别为2．7％、0．9％（n=6）。不同厂家、批号产品中黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的质量浓度范围分别为4．151～4．849、0．097-0．157mg／ml。结论：该方法简单、准确、可靠，适用于清开灵注射液的质量控制；不同厂家、批号清开灵注射液中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的含量存在较大差异。

RP-HPLC测定汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的pK_a

目的:采用反相高效液相色谱法测定汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的pKa,为该单体的剂型设计与临床应用提供重要参考。方法:基于待测成分保留因子(k)随流动相的pH变化而变化,采用乙腈-不同pH缓冲盐溶液作为流动相,依次测定汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的k,根据pKa和k的函数关系计算其pKa。结果:汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的pH-k曲线均呈现S型,pKa分别为3.84±0.16、7.48±0.11、7.53±0.13。结论:该方法具有样品损耗少,分析速度快,重现性好,准确度高,方便简单的特点,可用于测定汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的pKa。

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中千层纸素的浓度

目的建立快速且灵敏的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠血浆中千层纸素的浓度。方法色谱分离采用C_(18)色谱柱,甲醇-10 mmol·L^(-1)醋酸铵(77∶23,V/V)为流动相,流速1.05 m L·min^(-1)。大鼠血浆加入β-葡萄糖醛酸酶/硫酸酯酶,37℃孵化过夜,再加入内标染料木素及0.1%磷酸溶液,用乙酸乙酯提取,上清液40℃水浴中氮气流吹干,以流动相200μL溶解残渣,进行分析。检测器采用四极杆串联质谱仪,离子源采用电喷雾电离离子源(ESI),检测方式采用选择反应检测扫描(SRM),检测离子:千层纸素[M+H]^+284.9→269.9,内标[M+H]^+270.9→270.9。结果千层纸素在5~1 000μg·L^(-1)范围内,线性关系良好,回收率大于85%,日内和日间的相对标准偏差(RSD)小于15%。结论建立的LC-MS/MS法符合生物样品分析的要求,可用于研究大鼠灌胃千层纸素后血浆中千层纸素的测定。