中国半滑舌鳎价格波动及其影响因素研究

作为中高端海水产品,近年来半滑舌鳎的价格波动剧烈,对养殖户和消费者造成了较大影响。对2010—2020年半滑舌鳎月度价格的波动特征及其影响因素进行分析的结果表明,月度价格存在明显的季节性和周期性特征,周期约为5年;在所选变量中,产量、城镇人均可支配收入、海表温度和货币供应量对半滑舌鳎价格有显著影响。其中,半滑舌鳎价格长期下降趋势主要是由于半滑舌鳎产量成本的下降,而波动周期则主要受半滑舌鳎市场供需和养殖时间的影响。脉冲响应分析表明,影响因素与价格之间的关系是非线性的,导致半滑舌鳎价格的未来变化具有不确定性。为保持半滑舌鳎市场的稳定,建议建立半滑舌鳎价格预警系统和信息平台,以便更好地制定策略。

半滑舌鳎响应急性高温胁迫的生理变化和相关基因表达

夏季高温会引起半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)的应激,甚至造成死亡,是工厂化养殖的重要影响因素之一。为探究高温胁迫对半滑舌鳎肝脏氧化损伤及热应激相关基因的影响,本研究选取半滑舌鳎一个全同胞家系为实验对象,通过连续升温达到高温胁迫条件(35℃)后,分别在0、3、6、12和24 h采集肝脏组织,进行苏木精–伊红染色法(HE)和TUNEL染色并观察细胞损伤情况,测定抗氧化酶活性及丙二醛(MDA)含量并检测应激相关基因heatshockprotein familyAmember1A(hspa1a)、heatshockprotein90betafamilymember1(hsp90b1)和dual-specificity phosphatase 1(dusp1)的表达变化。结果显示,急性高温胁迫会造成半滑舌鳎肝脏组织发生明显病理变化并出现细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)活性在高温胁迫6 h时显著高于对照组(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性在高温胁迫12h时显著高于对照组(P<0.05),过氧化氢酶(CAT)活性在高温胁迫0h时显著高于对照组(P<0.05),MDA含量在高温胁迫24h时显著高于对照组(P<0.05);热休克蛋白基因hspa1a和hsp90b1分别在高温胁迫0 h和3 h时显著上调表达,热应激相关基因dusp1在高温胁迫3h时显著上调表达。综上所述,急性高温胁迫下,半滑舌鳎肝脏发生氧化应激,短期内机体可调动抗氧化系统加速清除活性氧,并激活热应激相关基因表达。该研究可为解析半滑舌鳎对高温胁迫的响应机制、预防夏季高温大规模死亡的发生以及开展耐高温良种的选育等提供参考。

半滑舌鳎突触体相关蛋白29基因(SNAP29)克隆及其组织分布和时序表达分析

为了分析半滑舌鳎突触体相关蛋白29基因(SNAP29)的分子生物学特征、组织分布特点以及感染海藻希瓦氏菌后的时序表达规律,通过RT-PCR、生物信息学网站、qRT-PCR技术对半滑舌鳎SNAP29基因进行了扩增、生信分析和表达特征研究。结果表明,半滑舌鳎SNAP29基因CDS区长度为789 bp,编码262个氨基酸,理论等电点(pI)为5.39,分子质量为29.71781 ku,有2个典型的SNARE结构域;二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲组成,二级结构和三级结构基本一致;多序列比对结果显示,半滑舌鳎与欧洲鲈鱼SNAP29基因相似性最高;SNAP29基因在健康半滑舌鳎所测的各组织中均有表达,在鳃组织中表达最高,在脑组织中表达量最低;利用海藻希瓦氏菌人工感染半滑舌鳎后,SNAP29基因在肠道组织、心脏组织和脑组织中表达量主要呈现上调趋势,在肝脏、头肾、脾脏组织中主要呈现下调表达,SNAP29基因在健康半滑舌鳎组织中均有表达;海藻希瓦氏菌感染半滑舌鳎的肠道、脑、心脏、肝脏、头肾、脾脏组织中SNAP29基因呈现差异表达。综上,SNAP29可能参与机体免疫应答过程或病理生理过程。

维生素E对半滑舌鳎垂体α-生育酚转移蛋白基因表达的影响

生育酚转移蛋白(α-tocopherol transfer protein,α-TTP)是一种可以结合维生素E的蛋白,在协助机体转运和调控维生素E含量等方面起到重要作用。维生素E能够影响鱼类垂体中生长和繁殖相关激素的分泌,这是否与α-TTP有关,值得进一步探讨。本实验旨在探究维生素E对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)垂体α-TTP基因表达的影响。在基础饲料中分别添加维生素E(DL-α-生育酚乙酸酯)0、200、400、800和1600 mg/kg,对半滑舌鳎成鱼(464.0±2.6)g进行持续60 d的养殖实验;另外,在L-15培养基中添加0、18和54μmol/L的维生素E,对半滑舌鳎垂体细胞进行为期3 d的体外原代培养实验。分别取垂体组织和垂体原代细胞,克隆α-TTP基因,并通过实时荧光定量PCR分析α-TTP基因相对表达量。结果显示,α-TTP基因全长3964 bp,编码293个氨基酸;α-TTP基因在半滑舌鳎各组织均有表达,其中,在脾脏中表达最高,其次是肾脏,在胃中表达量最低;α-TTP基因表达量随着饲料中维生素E含量的增加而呈先升高后下降的变化趋势,400 mg/kg组显著高于其他各组(P<0.05);随着细胞培养液中维生素E浓度的升高,α-TTP基因相对表达量显著增加。综上所述,本研究首次报道维生素E能够影响垂体中α-TTP基因的表达,饲料中添加400 mg/kg的维生素E能够显著促进半滑舌鳎垂体α-TTP基因的表达。本研究为探讨α-TTP在介导维生素E影响鱼类生长与繁殖方面的潜在机制提供新思路。

采用期望最大化算法的半滑舌鳎性逆转性状高效遗传解析

为了解析半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)性逆转性状的分子遗传作用机制,定位筛选可用于性控育种的分子标记或侯选基因,本研究提出了一种期望最大化算法(Expectation-Maximization algorithm,EM),并基于该算法开展了半滑舌鳎性逆转性状的全基因组关联分析。EM算法直接使用阈模型中隐含连续正态分布表型的期望作为因变量,用迭代最小二乘代替logit回归法的迭代重加权最小二乘,它具有比logit回归法更直观、更易于编程的优点。本研究采用显著主成分控制群体分层后,使用EM算法与logit回归对对半滑舌鳎数据进行GWAS(Genome-wide Association Study,GWAS)分析。结果显示,EM算法结果无明显的假阳性或假阴性,比logit回归法的检测效力更高。基于EM算法的全基因组关联分析共定位到13个与性逆转性状显著关联的QTN(quantitative trait nucleotide,QTN),其中3个QTN位于W染色体上,10个QTN位于Z染色体上。经过基因注释发现,上述定位获得的QTN位于LOC103396896、MALT1、ADGRD2、FBXl17、DMXl1、SMARCA2、DMRT1、LOC103397760、NEUR13和PDLIM5a基因区段内。当进行检索时发现,这些基因参与了其他物种中涉及性别决定或性腺发育等相关过程。本研究提供了一种基于EM算法的具有高检测效力的全基因组关联分析方法,同时也为半滑舌鳎的性逆转遗传机制解析和性控育种提供有效的理论指导。

半滑舌鳎生物钟相关基因克隆及在卵巢发育成熟过程中表达特征分析

为阐明生物钟相关基因在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的作用及机制,采集性成熟半滑舌鳎不同发育期的卵巢组织提取总RNA,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对5个核心生物钟基因Clock1a、Bmal1a、Cry1a、Cry2和Per2的编码区(CDS)序列进行克隆和序列分析。结果显示,Clock1a的CDS序列编码712个氨基酸,序列中有功能性结构域PASD1和PAS11。Bmal1a的CDS序列编码626个氨基酸,序列中有功能性结构域PASD3和PAS11。Cry1a和Cry2的CDS序列分别编码631个、669个氨基酸,序列中均有功能性结构域FAD7。Per2的CDS序列编码1415个氨基酸,序列中有功能性结构域PeriodC和PAS11。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析5个生物钟基因mRNA在性成熟半滑舌鳎卵巢不同发育期的表达特性,发现5个生物钟基因存在性腺发育周年表达规律,且在卵巢Ⅱ期和Ⅲ期相对高表达(P<0.05),在卵巢Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ期相对低表达,这说明生物钟基因对半滑舌鳎的卵巢发育成熟起到重要的调节作用。研究结果为进一步探究生物钟基因调控半滑舌鳎卵巢发育成熟的机制提供了重要参考,为提高半滑舌鳎的繁育效率提供了理论基础。

半滑舌鳎烂尾病的防控

半滑舌鳎烂尾病是一种细菌性疾病,从患病半滑舌鳎病灶处分离鉴定的优势菌经回感后确定该病的病原为溶藻弧菌,该病原菌在TCBS平板上呈现黄色菌落。溶藻弧菌是海水中的常驻菌,革兰氏染色阴性,是海水养殖危害最大的病原菌之一,可导致多种养殖动物患病。一、主要症状该病的主要症状表现为:大个体的半滑舌鳎(体长30厘米以上)有眼侧体表脱鳞,部分鱼溃烂,出现溃疡口、烂尾。

半滑舌鳎rimoc1基因在雌雄鱼中的差异表达

动物中普遍存在性别生长二态性,这种现象在海水鱼中更为明显。半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)性成熟雌鱼体重显著高于雄鱼,雌性个体的生长速度比雄性快2~4倍。本研究旨在探究rimoc1基因在半滑舌鳎雌、雄鱼中的表达差异及与性别和生长的关系。实时定量和原位杂交结果显示,rimoc1在雄性组织中未检测到表达,而在雌性组织中表达量最高的是卵巢和肌肉,在卵巢中表达相对稳定,在孵化后1.5年(1.5yph)和3yph的水平有所增加。在细胞系中通过si RNA干扰敲除rimoc1后,发现生长相关基因igf1、性别分化相关基因sox9b和foxl2的表达水平显著降低,而sox9a的表达升高。启动子活性分析显示,rimoc1启动子可能受到C/EBPdelta、Sox2和c-Jun等转录因子的调控。推测rimoc1可能在半滑舌鳎的性别分化和生长中发挥重要作用,为深入研究半滑舌鳎的性别生长二态性提供了基础。

溶解氧对半滑舌鳎呼吸频率、生理生化指标和组织结构的影响

在循环水养殖系统中由于常出现低氧和高氧的情况,为了解溶解氧变化对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)的影响,本试验检测了低溶解氧(3 mg/L)、对照组(8 mg/L)、高溶解氧(14 mg/L、20 mg/L)条件下半滑舌鳎呼吸、生理生化指标和组织结构的情况。结果表明,低氧组半滑舌鳎在24 h内呼吸频率显著增加,而高氧组呼吸频率显著降低(P<0.05)。在第七天低氧组呼吸频率与对照组无显著差异(P>0.05),而高氧组呼吸频率随溶解氧升高而显著降低(P<0.05)。第十四天后,低氧组呼吸频率与对照组差异不显著,而高氧组呼吸频率随溶解氧升高而显著降低(P<0.05)。低氧组和高氧组较对照组均出现上皮细胞层增生现象,高氧组半滑舌鳎鳃组织较对照组出现较多空泡现象。低氧组肝脏组织结构异常,肝细胞广泛疏松水肿,细胞轮廓不清晰,而高氧组肝细胞轮廓清晰,胞浆红染,未见明显变性。低氧组血液红细胞数量、血红蛋白含量较对照组增高(P>0.05),红细胞比积较对照组减少(P>0.05)。高氧组红细胞数量、血红蛋白含量和红细胞比积均高于对照组(P>0.05)。低氧组和高氧组血浆MDA含量、SOD活力及CAT活力均显著高于对照组(P<0.05)。结论:低氧和高氧都对半滑舌鳎产生胁迫,低氧对半滑舌鳎的胁迫更明显。

养殖与野生半滑舌鳎肌肉营养成分对比分析

完全投喂配合饲料养殖的半滑舌鳎与野生半滑舌鳎的营养价值孰高孰低,目前未见报道。本试验采用国标法检测养殖与野生半滑舌鳎肌肉氨基酸、脂肪酸和矿物质含量。结果表明:养殖半滑舌鳎氨基酸总量含量明显高于野生鱼。根据氨基酸评分(AAS)和化学评分(CS),养殖与野生半滑舌鳎的第一限制性氨基酸均为色氨酸(Trp)。养殖与野生半滑舌鳎肌肉必需氨基酸指数(EAAI)分别为72.45和62.70。养殖半滑舌鳎肌肉脂肪酸总量高于野生鱼,其中二十碳五烯酸(EPA)+二十二碳六烯酸(DHA)总量是野生鱼的7.6倍,EPA是野生鱼的5.5倍,DHA是野生鱼的9.0倍。半滑舌鳎肌肉富含矿物质,其中养殖半滑舌鳎肌肉中硒含量是野生鱼的4.0倍,磷含量比野生鱼高20%,但钙含量比野生鱼低23%。结论:养殖半滑舌鳎肌肉整体营养成分和营养价值均高于野生半滑舌鳎。

一家典型海水工厂化循环水养殖系统运行效果分析——以半滑舌鳎为例

循环水养殖系统作为一种新型高密度养殖方式具有养殖水体环境可控、系统运行平稳、技术安全可靠、高度节水节地等优点。本文以天津市滨海新区某企业养殖半滑舌鳎为例,对循环水养殖系统的运行效果进行分析。结果表明:半滑舌鳎的养殖密度为(20~25)kg/m^(2),初始平均质量为5 g,利用循环水养殖系统养殖407 d,最终平均质量为1079 g,存活率为29.1%。通过水质检测分析,氨氮平均去除率为64%;亚硝酸盐平均去除率为58%;弧菌和细菌的灭杀率为99%;pH值保持在7.0~8.5;盐度维持在18~35。经济性分析结果表明,该海水工厂化循环水养殖系统的可行性和经济性良好,适宜在沿海地区大力推广。

凡纳滨对虾池塘套养不同规格半滑舌鳎对比试验

为促进凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖业的可持续发展,进行了凡纳滨对虾与不同规格半滑舌鳎的池塘套养对比试验。试验结果表明,凡纳滨对虾虾苗(体长1.0 cm以上)放养密度30万尾/hm^(2);半滑舌鳎套养规格400~600 g/尾,放养密度120~180尾/hm^(2)时,凡纳滨对虾产量比单养凡纳滨对虾单产提高20%左右,并且投放规格400~600 g/尾的半滑舌鳎能生长至商品规格,其售卖单价较高,生长速度比工厂化养殖半滑舌鳎快大约25%左右。除上述产量和生长速度优势外,池塘套养的半滑舌鳎在口感和营养价值上更接近于野生品种,并且半滑舌鳎能够更好地起到生物防控的作用,减少疾病对凡纳滨对虾养殖的危害。

海水池塘半滑舌鳎-日本对虾-菊黄东方鲀混养试验

为全面推广半滑舌鳎养殖技术,提高海水池塘养殖效益,进行了不同规格半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)与日本对虾(Penaeus japonicus)和菊黄东方鲀(Takifugu flavidus)的池塘混养对比试验,其中半滑舌鳎放养密度2250尾/hm^(2),放养规格分别为150~250、5~10、20~50 g/尾,日本对虾放养密度6万尾/hm^(2),菊黄东方鲀放养密度6000尾/hm^(2),规格0.54~0.56 g/尾。结果显示,放养规格不小于150 g/尾的半滑舌鳎高雌苗种,当年可收获规格500 g/尾以上的商品鱼,实现综合产量2801.0 kg/hm^(2),综合效益99404元/hm^(2)。

江苏近岸海域半滑舌鳎增殖放流效果评估

为了解江苏近岸海域半滑舌鳎增殖放流效果,于2019年5、8和10月,开展了放流前和放流后大面调查及重点区域跟踪监测。结果表明,半滑舌鳎放流前,大面调查及重点监测出现频率分别为3.85%和23.08%;放流后,8和10月份大面跟踪监测出现频率分别为4.00%和2.00%,重点监测出现频率为11.11%,主要分布在辐射沙脊群海域。根据大面调查数据推算,2019年半滑舌鳎资源量为202.416 t。指出,2016—2019年,随着半滑舌鳎放流数量的增加,其资源量逐年递增;2017—2019年大面调查半滑舌鳎的IRI不断增加,优势种排序位也逐渐上升。

半滑舌鳎Cs-UBE2D4基因的克隆、表达模式及启动子活性

泛素-蛋白酶体系统作为重要的蛋白质修饰途径,参与多个生物学过程,其中泛素结合酶E2作为关键酶可以决定泛素化对靶蛋白的影响。为了探究泛素结合酶E2在半滑舌鳎雌性性腺发育中的作用,本研究克隆了半滑舌鳎Cs-UBE2D4基因的开放阅读框ORF,检测了该基因在不同组织和不同发育阶段性腺中的表达模式;构建了其启动子报告基因载体(pGL3-Cs-UBE2D4)并进行了启动子活性分析。Cs-UBE2D4开放阅读框为360 bp,编码119个氨基酸,含有保守的泛素结合酶E2结构域。荧光定量PCR结果显示,Cs-UBE2D4在雌鱼的各组织中广泛表达,其中在卵巢和肝脏中表达量较高,而在雄鱼中几乎检测不到表达;在卵巢各发育阶段中,该基因的表达量从90日龄开始上调,6月龄达到峰值,之后开始下调,在1.5龄时表达量最低,在3龄时表达量有所回升,其中6月龄表达量为90日龄表达量的1.97倍。双荧光素酶活性检测结果显示,Cs-UBE2D4启动子具有较强的转录活性。本实验将为进一步开展Cs-UBE2D4基因对半滑舌鳎卵巢发育和性别调控相关机制的研究提供理论依据。

半滑舌鳎配合饵料发酵条件的优化及应用

试验旨在研究3种益生菌复合发酵半滑舌鳎配合饵料的最适比例及时间。试验以半滑舌鳎配合饵料为底物,菌种总接种量为3%,35℃下进行酿酒酵母菌、枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的发酵处理,对照组未接种任何菌种。选取健康、平均体重(80.27±0.19) g的半滑舌鳎300尾,随机分为2组,每组3个重复,每重复50尾鱼。对照组半滑舌鳎饲喂配合饵料,试验组在配合饵料中添加10%发酵饵料(按照优化试验所得最适条件发酵饵料)。试验期56 d。结果显示,发酵后各组发酵饵料的活菌数均提高十万倍左右,3种菌种混合发酵效果显著优于对照组(P<0.05)。酿酒酵母菌∶枯草芽孢杆菌∶植物乳杆菌以1∶3∶2的比例发酵第5 d时发酵效果最优。与对照组相比,试验组半滑舌鳎体增重与特定生长率均显著提高(P<0.05)。研究表明,半滑舌鳎全价饵料在35℃下,以酿酒酵母菌∶枯草芽孢杆菌∶植物乳杆菌=1∶3∶2比例发酵5 d的效果较好,且发酵饵料可促进半滑舌鳎生长,提高饵料利用率。

半滑舌鳎室外池塘越冬及混养技术

半滑舌鳎肉质鲜美、营养丰富,具有较高的养殖空间及良好的经济效益,但其自然越冬成活率低的问题已严重制约了半滑舌鳎养殖产业的可持续发展。为此,在江苏连云港市开展了半滑舌鳎室外池塘自然越冬养殖试验,并进行半滑舌鳎混养试验。结果显示:通过池塘改造能够使半滑舌鳎顺利越冬,成活率高达71.7%,收获达到上市规格的半滑舌鳎(0.4 kg/尾左右)760.1 kg;此外通过混养中国对虾、三疣梭子蟹、美洲帘蛤经济品种,使得塘口整体利润达到93286.36元/hm^(2),产出投入比为1.67,池塘养殖效益处于全国前列。该研究解决了半滑舌鳎在江苏池塘中自然越冬成活率低的难题,最大化提高了池塘的经济效益,为半滑舌鳎在江苏地区池塘养殖的推广提供了技术参考。

半滑舌鳎源溶藻弧菌的分离鉴定

为明确半滑舌鳎皮肤溃疡病病因,在皮肤溃疡病灶分离纯化出一株优势菌,并进行细菌培养、革兰氏染色、生化鉴定、药物敏感性测定等相关试验。结果表明:分离菌在血平板上培养呈现的形态为中等大小的白色菌落,在TCBS培养基培养所呈现的形态为光滑圆润的黄色菌落,革兰氏染色为阴性短杆菌;经ATB生化鉴定仪鉴定,分离菌生化特性与溶藻弧菌符合率为96%;确定分离菌为溶藻弧菌,经K-B试纸法检测分离菌对15种抗生素中的头孢曲松、环丙沙星、恩诺沙星、氟苯尼考极为敏感,对阿米卡星、新霉素、卡那霉素、替米考星中度敏感,对氨苄西林等7种抗生素不敏感。

半滑舌鳎源维罗纳假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

为探究导致半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)疾病发生的病原,从患病半滑舌鳎肝脏中分离纯化出一株细菌,命名为CLPV-114,结合细菌形态学观察、生化鉴定和16S rRNA序列分析进行病原鉴定,对其进行药敏试验和生长曲线测定,人工感染试验后测定半数致死剂量(LD50),并进行组织病理学观察。结果表明:菌株CLPV-114为革兰氏阴性杆菌,在系统发育树上与GenBank登录号分别为AF064460、AY144583的维罗纳假单胞菌(Pseudomonas veronii)亲缘关系最近,自然聚为一支;综合生理生化特征和16S rRNA基因序列分析鉴定其为维罗纳假单胞菌;药敏试验显示,CLPV-114对阿莫西林、氨苄西林和头孢哌酮等18种抗菌药物高度敏感,对呋喃妥因、阿奇霉素和四环素等11种抗菌药物中度敏感,对头孢克肟、磺胺异恶唑和甲氧嘧啶等4种抗菌药物耐药;人工感染试验显示,CLPV-114对半滑舌鳎具有致病性,人工感染后的患病鱼与自然患病鱼症状相似,CLPV-114菌株对半滑舌鳎的LD_(50)为1.3×10^(7)CFU/mL;组织病理学观察显示,CLPV-114可引起明显的组织学损伤,表现为肝细胞组织坏死,鳃血管中心充血,脾脏出现含铁血黄素沉积、出血,肠绒毛脱落。研究表明,本次从患病半滑舌鳎肝脏中分离的菌株CLPV-114为维罗纳假单胞菌,对半滑舌鳎具有较强的致病性,可引起不同组织出现明显病理变化,本研究结果可为半滑舌鳎维罗纳假单胞菌病的防控提供科学参考。

半滑舌鳎体表溃疡症细菌性病原的分离鉴定及组织病理学研究

为了探究引起某养殖场半滑舌鳎体表溃疡并大量死亡的原因,从发病鱼体的肝脏、脾脏、肾脏等组织分离细菌,分别从脾脏和肾脏中分离出优势菌株8-0634和8-0635。对这2株菌分别进行人工感染试验,结果显示,只有菌株8-0635能够引起半滑舌鳎的死亡,死亡鱼体表现为鳞片脱落、腹水、肠道充血向外翻出,脾脏、肾脏等器官萎缩充血。病理组织切片HE染色观察显示,发病鱼体内脏组织间隙出现大量炎细胞浸润。革兰氏染色及生理生化试验结果显示菌株8-0635为哈维氏弧菌,利用管家基因及16S rRNA构建系统发育树进行序列分析,进一步鉴定该致病菌为哈维氏弧菌。药敏试验结果显示,菌株8-0635对头孢哌酮、氟苯尼考、氯霉素、氨苄西林等多种药物高度敏感。研究结果为半滑舌鳎体表溃疡症的防治提供了重要参考。