去牛血清清蛋白化对复方壳多糖组织工程皮肤单向混合淋巴细胞反应的影响

目的探索复方壳多糖组织工程皮肤去牛血清清蛋白化的洗涤方法及对其单向混合淋巴细胞反应的影响。方法从头制备复方壳多糖组织工程皮肤,ELISA法检测不同洗涤条件下外渗液中牛血清清蛋白的浓度,然后检测在最优洗涤条件下组织工程皮肤单向混合淋巴细胞反应的强度。结果当洗涤间隔时间为3h,洗涤次数为2次时能使外渗液中牛血清清蛋白的浓度降到50ng/mL以下;按该方法洗涤后,组织工程皮肤的单向混合淋巴细胞反应强度显著降低。结论复方壳多糖组织工程皮肤以3h×2次洗涤,能够显著降低其外渗液中牛血清清蛋白的浓度及其单向混合淋巴细胞反应的强度。

胎盘间充质干细胞与免疫抑制药物体外联合应用对单向淋巴细胞混合反应的作用

目的提取并鉴定胎盘间充质干细胞,检测胎盘间充质干细胞对单向淋巴细胞混合反应的免疫调节作用,并将胎盘间充质干细胞与免疫抑制药物(环孢素A或霉酚酸)联合应用,检测二者联合后对单向淋巴细胞混合反应的作用。方法组织块培养法提取胎盘间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面标志,II型胶原免疫组化染色及甲苯氨蓝染色检测胎盘间充质干细胞向软骨细胞分化的能力。MTT检测单独应用胎盘间充质干细胞或与环孢素A或霉酚酸联合应用后,单向淋巴细胞反应中T细胞的增殖情况。结果成功提取胎盘间充质干细胞,其表面阳性表达CD29和CD44。II型胶原及甲苯氨蓝染色均呈阳性。单独应用胎盘间充质干细胞可抑制单向淋巴细胞混合反应中T细胞的增殖。与环孢素A联合后该作用减弱,与霉酚酸联合后该作用增强。结论组织块培养法可成功提取胎盘间充质干细胞。该细胞对单向淋巴细胞混合反应有负向免疫调节作用。胎盘间充质干细胞与不同的免疫抑制药物联合对单向淋巴细胞混合反应产生的作用是有差异的。

联合应用活体染料CFDA-SE和SNARF-1检测混合淋巴细胞反应

目的建立一种能够对单向混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度进行更全面评价的增殖检测方法。方法BALB/cJ小鼠淋巴结细胞经CFDA-SE标记后作为应答细胞,BALB/cJ或C57BL/6小鼠脾细胞经丝裂霉素C处理后再用SNARF-1标记,作为刺激细胞,进行混合培养。混合培养96h后收获细胞,用流式细胞术进行检测,分析SNARF-1-CFSE+应答细胞的增殖情况,并用ModFitTM软件拟和以获得更多增殖相关指数。结果随着应答细胞分裂代数的增加,CFSE荧光强度逐渐减弱直至与刺激细胞无法分开,通过划除SNARF-1阳性细胞以确定应答细胞,解决了这一问题。应用ModFitTM软件,获得应答细胞的前体频率和增殖指数等多项重要的增殖相关指标。结论联合应用CFSE和SNARF-1染色,结合流式细胞术,可作为评价混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度的有力工具。

同种和异种混合淋巴细胞反应及分类混合淋巴细胞反应的比较

目的:对比体外人外周血淋巴细胞对于异种小鼠细胞和同种异体细胞混合淋巴细胞反应. 方法:建立异种-同种混合淋巴细胞反应模型,进行分类细胞反应试验. 结果:人外周血淋巴细胞对于异种小鼠细胞的反应明显低于对于同种异体细胞的反应(P<0.05).细胞分类研究显示:在异种混合淋巴细胞反应中,主要是CD4+T细胞通过间接途径受小鼠抗原刺激而增生;在同种混合淋巴细胞反应中,主要是CD4+T细胞通过直接途径受同种异体抗原刺激而增生.在两种混合淋巴细胞反应中,CD8+T细胞也参与. 结论:异种混合淋巴细胞反应弱于同种混合淋巴细胞反应, 异种细胞只通过间接途径刺激T细胞.同种和异种混合淋巴细胞反应均需要抗原提呈细胞参与,CD4+T淋巴细胞是反应的主要细胞.

HCV C-Fc基因转染的小鼠树突状细胞促进混合淋巴细胞反应的作用

目的 :观察HCVC Fc基因电穿孔法转染的小鼠树突状细胞(DC)功能的改变。方法 :分离小鼠骨髓单个核细胞与rmGM CSF和rmIL 4培养 1wk,对培养的细胞进行形态学观察 ,并用FACS检测细胞表面DEC2 0 5的表达。以通过质粒pcD NA3HCVC Fc电穿孔法转染培养的DC ,用间接免疫荧光染色测定转染细胞中HCVC Fc的水平 ;用混合淋巴细胞反应检测电穿孔法转染细胞的功能。结果 :培养 1wk后 ,得到具有典型DC形态的细胞 ,以质粒pcDNA3HCVC Fc为载体电穿孔法转染DC后 ,转染细胞中可检测到较高水平的HCVC Fc。与对照组相比较以电穿孔法转染的细胞能明显刺激混合淋巴细胞反应。结论 :小鼠骨髓单个核细胞加GM CSF和IL 4培养 1wk ,可生成大量的DC。质粒pcDNA3HCVC Fc转染培养的DC对T细胞刺激作用显著增强。

混合淋巴细胞反应体系中胎盘间充质干细胞的免疫抑制效应

背景:胎盘由滋养细胞及大量起源于胚外中胚层的间充质和血管共同组成,提示胎盘中存在间充质干细胞成分。目的:探索胎盘间充质干细胞对混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的影响,评价其免疫学特性。方法:分离培养胎盘间充质干细胞,采用人以及兔双向混合淋巴细胞反应体系,根据胎盘间充质干细胞:外周血单个核细胞的不同比例(1:5,1:10,1:20,1:50,1:100,1:500)加入丝裂霉素处理胎盘间充质干细胞。3H掺入法测定淋巴细胞增殖率并用ELISA法测定混合培养上清液中白细胞介素2和γ-干扰素的含量。结果与结论:胎盘间充质干细胞抑制人或兔混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞的增殖,抑制率与加入的胎盘间充质干细胞数量成正比,同时胎盘间充质干细胞减少混合淋巴细胞反应中细胞因子白细胞介素2、γ-干扰素的分泌。提示胎盘间充质干细胞具有免疫调节作用,可以抑制同种异体或异种混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞的增殖。

室内常见气传真菌代谢提取物对异型小鼠混合淋巴细胞反应的影响

目的 探讨室内常见气传真菌代谢提取物的免疫抑制作用。方法 监测室内环境中的气传真菌 ,在此基础上 ,以改良的混合淋巴细胞反应实验研究其代谢产物的免疫抑制作用。结果 室内主要气传真菌属中的青霉属、曲霉属在无明显的细胞毒性浓度下 ,可抑制异型小鼠淋巴细胞混合刺激而产生的增生。

PDL_1Ig基因修饰的恒河猴肝细胞在混合淋巴细胞反应中的效应研究

目的探讨恒河猴来源的PDL1Ig在体外混合淋巴细胞反应中的作用。方法在Gen Bank中检索到恒河猴目的基因PDL1和Ig G1Fc的序列,采用重叠延伸PCR法合成该目的基因,与p GEM-T连接转化感受态E.coli TOP10,经鉴定得到PDL1Ig基因,p Shuttle-CMV线性化后连接目的基因转化感受态E.coli TOP10,克隆p Shuttle-CMV/PDL1Ig重组穿梭质粒。将p Ad Easy-1和线性p Shuttle-CMV/PDL1Ig共电转至BJ5183细胞中同源重组,构建重组腺病毒载体p Ad Easy-1/PDL1Ig骨架,以脂质体2000将p Ad Easy-1/PDL1Ig转染至293细胞中包装成有活性的重组腺病毒。感染恒河猴肝细胞,RT-PCR和Western blotting检测目的基因的表达。混合淋巴细胞反应(MLR)测定其生物学活性。结果成功构建了PDL1Ig重组腺病毒载体,能感染恒河猴肝细胞,RT-PCR和Western blotting检测有目的基因表达,在混合淋巴细胞反应中其能抑制T细胞增殖。结论成功构建了p Ad Easy-1/PDL1Ig重组腺病毒载体,其可在恒河猴肝细胞中高效表达,该重组蛋白可在体外通过PD-1/PDL1通路抑制T淋巴细胞增殖。

人-鼠间同种和异种混合淋巴细胞反应的对比

目的 :对比体外人外周血淋巴细胞对于小鼠细胞和同种异体细胞混合淋巴细胞反应 .方法 :建立异种—同种混合淋巴细胞反应模型 ,进行分类细胞反应试验 .结果 :人T淋巴细胞对于小鼠细胞的反应明显低于对于同种异体细胞的反应 .细胞分类研究显示 :在异种混合淋巴细胞反应中 ,主要是CD4 + T细胞通过间接途径受小鼠抗原刺激而增殖 ;在同种异体细胞混合淋巴细胞反应中 ,主要是CD4 + 细胞通过直接途径受同种异体细胞抗原刺激而增殖 .在两种混合淋巴细胞反应中 ,CD8+ T细胞也增殖 .结论 :异种混合淋巴细胞反应弱于同种混合淋巴细胞反应 .同种和异种混合淋巴细胞反应均需要抗原提呈细胞参与 .同种混合淋巴细胞反应中存在直接和间接两种途径 ;

全血保存前去白细胞的血小板保存7天,质量符合要求无混合淋巴细胞反应

背景全血制备的血小板(WBD-PCs)汇集，在保存前作去白细胞处理，这种方式有利于输血机构按血制品制备的时间顺序发放，减少未被输注血液所致的浪费，简化细菌筛查方面，WBD-PCs优于单一供者浓缩血小板(PC)。研究设计及方法无菌连接将4～6单位去白细胞PC汇集到-1．5LCLX-HP血小板保存袋中。质控是保存前去白细胞PC，单份保存第5和7天取样检测血小板的质量；凝集性、

离体CD4^+CD25^+调节性T细胞的扩增和混合淋巴细胞反应研究

为研究健康人外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cells,CD4+CD25+Tregs)在协同刺激信号作用下的扩增反应及与CD4+CD25-T细胞混合淋巴细胞反应,采用免疫磁珠法分离CD4+CD25+Tregs和CD4+CD25-T细胞,在抗CD3-mAbs和抗CD28-mAbs的刺激下行CD4+CD25+Tregs培养和CD4+CD25+Tregs+CD4+CD25-T细胞混合淋巴细胞培养72 h。然后加入CCK-8溶液孵育1 h,用酶标仪检测OD450值。结果为:CD4+CD25+Tregs组OD450值极显著性地低于CD4+CD25-T细胞组(P<0.01)。CD4+CD25+Tregs与CD4+CD25-T细胞混合组OD450值也极显著性地低于CD4+CD25-T细胞组(P<0.01)。CD4+CD25+Tregs表现出无反应性特征,还可抑制CD4+CD25-T细胞扩增,因此,CD4+CD25+Tregs不只是很惰性的免疫细胞,而是对保持免疫耐受发挥了积极的调节作用。

自身混合淋巴细胞反应与乙型肝炎

1975年,Opelz首先建立了自身免疫识别的体外模型—自身混合淋巴细胞反应(Autolo-gous Mixed Lymphocyte Reaction,AMLR),证实了自身非T细胞上的DR抗原刺激自身反应性T细胞(auto T)增殖,活化的auto T形成一个反馈性的网络,调节机体免疫平衡。因此DR抗原对autoT的作用,可能是自身免疫稳定的重要因素,从而也可能影响免疫性疾病的发病机理,进而对乙型肝炎的致病机理的探讨开辟了新的途径。本文就国内外有关方面的研究进展作一文献综述。 1 AMLR的基本概念

露蜂房对淋巴细胞与胰岛混合培养系统中淋巴细胞转化的影响

目的初步探索露蜂房对淋巴细胞与胰岛混合培养系统中淋巴细胞转化的影响。方法露蜂房水提取液系利用其生药通过水提醇沉法制备获得。无菌制备大鼠淋巴细胞及猪胰岛组织悬液,并对二者进行混合培养,在37℃、5%CO2的培养箱中进行,培养过程中分别加入3种浓度(4.0、0.4及0.2g/ml)的露蜂房水提取液,即露蜂房Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ组,应用3H-TdR掺入法测定放射性核素每分钟脉冲数(cpm),观察大鼠淋巴细胞的转化情况,并设立空白组和环孢素A(CsA)组作为对照。结果3种浓度的露蜂房水提取液对大鼠淋巴细胞的转化均有明显抑制作用(P<0.001),3组抑制率分别为45.3%、29.6%和9.2%;但与CsA相比,免疫抑制作用较弱(CsA抑制率为80.7%)。结论露蜂房对淋巴细胞胰岛混合培养系统中的淋巴细胞转化有抑制作用,且随浓度增加抑制作用增强,提示露蜂房可以抑制T细胞介导的免疫功能。

滑膜间充质干细胞分离培养、免疫表型鉴定及在混合淋巴反应体系中的抑制效应

背景:滑膜组织中可分离出具有多向分化潜能干细胞特性的细胞。目的:探索滑膜间充质干细胞体外分离、培养的可行性、免疫表型的鉴定及对混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞增殖的影响,评价其免疫学特性。方法:关节镜下获取10例半月板损伤患者的膝关节滑膜组织,胶原酶消化获得有核细胞。挑选单细胞克隆,筛选获得滑膜间充质干细胞。检测其增殖能力、细胞活力,流式检测其细胞免疫表型,采用人双向混合淋巴细胞反应体系及植物血凝素刺激的淋巴细胞增殖反应体系,根据滑膜间充质干细胞与外周血单个核细胞的不同比例加入丝裂霉素处理滑膜间充质干细胞。MTT法检测并计算其抑制率。结果与结论:10组滑膜间充质干细胞系增殖能力和细胞活力差异无显著性意义(P>0.05)。10组细胞系免疫表型:CD44、CD90、CD105呈阳性,CD14、CD34、CD45和HLA-DR呈阴性。滑膜间充质干细胞抑制混合淋巴细胞反应体系中及植物血凝素刺激的淋巴细胞增殖反应体系中淋巴细胞的增殖、抑制率与加入的滑膜间充质干细胞数量成正比。提示关节滑膜组织可以分离、培养获得滑膜间充质干细胞,其具有间充质干细胞特异性表型,且滑膜间充质干细胞具有免疫调节作用。

siRNA干扰ADAR1表达对小鼠混合淋巴细胞培养的影响

目的:研究靶向ADAR1基因的siRNA在小鼠双向混合淋巴细胞培养中所扮演的角色.方法:将化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA在Lipofectamine 2000介导下转染处于双向混合淋巴细胞培养试验中的小鼠淋巴细胞,观察转染组与未转染组细胞表型的变化;通过RT-PCR检测两组细胞中ADAR1 mRNA的变化;细胞计数和台盼蓝拒染法检测靶向ADAR1基因的siRNA对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法评价转染化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA后对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用.结果:在经典淋巴细胞混合培养试验中,转染靶向ADAR1基因的siRNA可以明显降低小鼠淋巴细胞内ADAR1的表达,同时ADAR1-siRNA对小鼠淋巴细胞的增殖有抑制作用.结论:在经典淋巴细胞混合培养试验中,化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA能有效抑制ADAR1基因在小鼠淋巴细胞中的表达,并对小鼠淋巴细胞增殖有抑制作用.

受者外周血淋巴细胞黏附分子基因表达对肾移植急性排斥反应的预测作用

目的探讨肾移植受者外周血淋巴细胞LFA-1、ICAM-1基因表达水平对术后急性排斥反应的预测作用。方法(1)在取肾同时取供体脾脏,并制成脾细胞悬液。在术前及术后第4天分别抽取受者外周静脉血,并分离出淋巴细胞。同时跟踪调查受者术后1个月内急性排斥反应的发生情况。(2)以供者及无关者脾细胞为刺激细胞,受者淋巴细胞为反应细胞,做混合淋巴细胞培养。采用MTT法测定供者及无关者脾细胞刺激受者淋巴细胞增殖的刺激指数。采用半定量RT-PCR方法测定在供体脾细胞、无关者脾细胞刺激及未刺激时,受者淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平。结果(1)本组研究了35例能够获取外周血淋巴细胞及供体脾细胞的患者,术后1个月内发生过急性排斥反应10例,未发生急性排斥反应25例,急性排斥反应发生率28.6%。(2)术前及术后第4天时,供体及无关者脾细胞刺激受者淋巴细胞增殖的刺激指数在发生急性排斥反应与未发生急性排斥反应受者之间差异无统计学意义(P>0.05)。术后第4天,正常组淋巴细胞对供体脾细胞反应的刺激指数术后较术前的下降值明显高于排斥组,二者之间差异有统计学意义(P<0.05);而正常组和排斥组淋巴细胞对无关者脾细胞反应的刺激指数术后较术前的下降值差异无统计学意义(P>0.05)。(3)术前及术后4d,未刺激时,受者淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平在发生急性排斥反应与未发生急性排斥反应受者之间差异无统计学意义(P>0.05);术前及术后4d,无关者脾细胞对受者淋巴细胞刺激时,受者淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平在发生急性排斥反应与未发生急性排斥反应受者之间差异无统计学意义(P>0.05);术前及术后4d,供者脾细胞对受者淋巴细胞刺激时,受者淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平在发生急性排斥反应与未发生急性排斥反应的受者之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论(1)术前、术后受者淋巴细胞对供体特异抗原及无关者抗原反应的刺激指数,对术后急性排斥反应发生无预测作用;而术后,受者淋巴细胞对供体抗原反应的刺激指数较术前的下降值可能有一定的预测作用。(2)术前、术后在无关者抗原刺激及无抗原刺激时,肾移植受者外周血淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平对术后急性排斥反应发生无预测作用。(3)术前、术后在供体特异抗原刺激时,肾移植受者外周血淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平对术后急性排斥反应发生有明显预测作用。

构建体外联合培养条件下抗原诱导淋巴细胞反应的抑制模型

目的:观察在体外混合培养条件下,抗原能否诱导外周淋巴细胞反应抑制,建立体外淋巴细胞反应抑制模型。方法:实验于2003-10/2004-04在解放军第四军医大学西京医院心脏外科研究所实验室进行。取健康自愿者新鲜血液用于分离外周淋巴细胞。在体外条件下,以同种异体外周淋巴细胞分作供体和受体进行混合培养,采用四甲基偶氮唑盐比色法、电镜、姬姆萨-瑞氏染色、流式细胞仪检测对照组D组:首次混合培养淋巴细胞(PMLC),即受体淋巴细胞(R)+用丝裂霉素处理过的供体淋巴细胞(DBm)混合培养72h所得,A组(PMLC+DBm)、B组(PMLC+白细胞介素2中和单抗)、C组(PMLC+DBm+白细胞介素2中和单抗)等4组淋巴细胞的活性变化、活性变化的原因及其数量的变化。结果:①4组混合培养淋巴细胞在电镜、显微镜下变化:均可见细胞质染色浓集、核固缩裂解、凋亡小体形成。②四甲基偶氮唑盐比色法检测4组细胞活性即刺激指数:B组和C组比A、D组明显减弱(3.152±0.322,1.802±0.115,4.293±0.269,3.709±0.278,P<0.05);C组细胞活性比B组也明显减弱(P<0.05)。③流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率:单向混合淋巴细胞培养后的T淋巴细胞的凋亡率Bf组和Cf组高于Df对照组和Af组(11.25±0.78)%,(31.65±1.33)%,(5.95±0.24)%,(2.15±0.04)%,P<0.01;

多系统危象综合征、机体损伤反应综合征细胞生物学机制(淋巴细胞及其辅助T细胞作用——兼述SIRS、CARS与MARS问题)

通过对淋巴细胞基本概念,淋巴辅助T细胞特性及其发生机制等细胞生物学作用讨论,并基于"广义生命时空场"学说与机体损伤反应综合征"SD1D2F"4阶段说之观点,阐述了淋巴细胞及辅助T细胞在多系统危象综合征、机体损伤反应综合征中的细胞生物学机制。

小鼠骨髓来源树突状细胞培养鉴定和诱导T淋巴细胞增殖

目的:建立一种体外诱导培养小鼠树突状细胞(DCs)的方法,并观察其不同生长阶段生物学形态及刺激淋巴细胞增殖的能力。方法:联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)诱导培养小鼠骨髓单个核细胞向DCs分化,并从形态学、表型及功能方面对其加以检测。结果:用GM-CSF和IL-4诱导培养小鼠骨髓来源的单核细胞,3 d后可见细胞形态改变,并呈集簇生长,培养至5 d可见典型的树突状突起,体外诱导培养8 d后获得大量成熟的DCs,扫描电镜可见典型的树突状细胞形态,高表达骨髓来源DCs特异性标记CD11c和共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ,成熟DC具有很强的刺激同基因型和同种异基因型T淋巴细胞增殖的能力。结论:小鼠骨髓来源的单个核细胞体外诱导培养可生成大量成熟的DCs,为进一步抗肿瘤疫苗的实验研究奠定了基础。