基于单宁酶处理原料制备的高茶黄素速溶红茶品质分析

目的研究基于单宁酶发酵加工的红茶原料,制备高茶黄素含量的速溶红茶。方法以速溶红茶中的茶黄素含量为主要评价指标,对红茶原叶和红茶粉碎叶进行两种提取溶剂处理,分析制备得到速溶红茶的感官品质及主要化学成分含量。结果研究发现,用60%乙醇提取红茶粉碎叶制备得到的速溶红茶中,茶黄素含量显著高于水提取工艺,速溶红茶茶黄素含量达到2.3%,是传统红茶原料中茶黄素的3倍,并且速溶红茶得率达到了38%,其感官品质以水提取工艺较佳。结论以高茶黄素茶叶为原料,将其磨成粉,用60%乙醇为提取剂制备的速溶红茶,富含茶黄素。研究结果为速溶红茶的生产加工提供了一定的理论依据,也可以为夏秋茶资源的开发利用提供新方法。

单宁酶对核桃内种皮酚类物质含量的影响

【目的】探究单宁酶处理对核桃内种皮酚类物质含量的影响,为合理开发和利用核桃内种皮提供科学依据。【方法】以‘寒丰’核桃内种皮为试验材料,进行单宁酶体外酶解试验,测定分析不同酶解时间、底物浓度、酶添加量下内种皮酚酸、黄酮类等酚类物质含量变化。【结果】添加单宁酶能有效分解内种皮酯型儿茶素ECG,增加非酯型儿茶素EGC、EC含量与没食子酸含量;单宁酶处理能明显降解涩味物质鞣花酸,同时显著提高绿原酸含量。【结论】分解酯型儿茶素、增加非酯型儿茶素与没食子酸的最优工艺为酶解时间5 h、底物浓度20 mg/mL、酶添加量1.2 mg/mL;提取绿原酸与降解鞣花酸的最优工艺为酶解时间1 h、酶添加量1.2 mg/mL、底物浓度10 mg/mL。

一种胞外单宁酶的活力检测方法

介绍了一种胞外单宁酶的活力检测方法。根据绕丹宁与没食子酸在碱性条件下显色的原理,在520 nm波长下测定吸光值,避开了胞外单宁酶粗酶液中干扰物质的吸收峰波长,建立了一种适合固体发酵所产胞外单宁酶的酶活检测方法。

单宁酶对刺梨果汁单宁的脱除作用

以刺梨果汁为原料,探讨单宁酶对刺梨果汁中单宁的脱除效果,通过单因素试验及正交试验确定的最佳脱除条件。结果表明:单宁酶添加量0.12%、pH4.5、脱除温度45℃、脱除时间100min,在此条件下单宁脱除率达到76.07%,均高于明胶法和羧甲基壳聚糖法的脱除率,且单宁酶对刺梨果汁中的营养物质影响不大,但对刺梨果汁混浊度无明显影响。

利用单宁酶改善绿茶滋味品质的研究

为了利用外源单宁酶改善夏茶滋味品质成分和组成,实验设计了在传统绿茶加工工艺的揉捻工序中,添加不同浓度的外源单宁酶,比较不同处理的成品茶在多酚类物质、儿茶素和氨基酸含量方面的差异,分析单宁酶提高夏季绿茶品质的效果。结果表明:单宁酶处理和对照相比,茶叶中茶多酚总量无显著性差异,但儿茶素的组成变化很大,其中表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)明显下降;氨基酸总量有所增加,其中谷氨酸等一些低阈值氨基酸含量增加更为明显。这些成分变化对改善夏季绿茶滋味有积极意义,在夏茶加工中添加外源单宁酶可以在一定程度上降低苦涩味,从而提高茶汤的鲜醇度。

单宁酶和β-葡萄糖苷酶的共固定化

比较了海藻酸钠和壳聚糖两种载体及不同固定化方法对单宁酶和β-葡萄糖苷酶的共固定化效果,结果表明以海藻酸钠为载体,采用交联-包埋-交联固定化方法的效果最佳。对共固定化条件进行了优化,可使单宁酶和β-葡萄糖苷酶的活力回收率分别达67.3%和46.0%。

黑曲霉N5-5单宁酶的纯化及酶学性质测定

采用中空纤维膜超滤和葡聚糖凝胶层析相结合的方法对黑曲霉N5-5单宁酶进行纯化,然后对纯酶性质进行测定。结果显示,黑曲霉N5-5单宁酶用该方法纯化后,可纯化近20倍,酶活力可回收23.30%。对纯酶作十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可知黑曲霉N5-5单宁酶为分子质量64.2 k D的单肽链蛋白。纯酶的酶促反应最适温度为45℃,且在25~45℃范围内热稳定性良好;酶促反应最适p H值为5.0,且在p H 5.0~5.5范围内酸碱稳定性良好。另外,反应动力学测定结果表明,该酶对底物没食子酸丙酯的米氏常数K_m为0.916 mmol/L,最大反应速率vmax为0.877 mmol/(L·min)。

单宁酶发酵生产的研究进展

单宁酶可水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键,生成没食子酸和葡萄糖。单宁酶广泛应用于制革、酿酒、医药、饮料等领域。文中综述了国内外有关单宁酶发酵生产的研究进展,包括产单宁酶菌种的选育、发酵生产方法、底物选择和培养基中添加剂对产酶的影响。

黑曲霉单宁酶提纯及其性质的研究

为探明单宁酶应用于生产的条件 ,从黑曲霉发酵液中分离提纯了单宁酶 ,经过 (NH4) 2 SO4分步沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析和 Sephadex G- 15 0凝胶层析等 3步纯化 ,得到电泳纯的单宁酶 .用 SDS- PAGE法测得该酶有 2种亚基 ,相对分子质量分别为 7.5 9× 10 4,6 .0 3× 10 4.该酶为糖蛋白 ,蛋白质含量为 72 .5 % ,糖含量为12 .3% .该酶的最适 p H为 5 ,最适温度为 40℃ .

响应面法优化黑曲霉发酵产单宁酶条件

通过单因素试验、中心组合实验设计及响应面法对黑曲霉的产单宁酶条件进行优化。确定对发酵产酶影响最大的因素依次为:单宁浓度、培养温度、培养时间。其最适产酶条件为:31.7℃,转速180r/min,单宁浓度1.5%,初始pH 6.0,接种量10%.,装液量20%,培养时间72h。在此条件下,发酵单宁酶活力可达1 141.82U/mL。

基于单宁酶处理的绿茶茶汤沉淀复溶与回收利用研究

沉淀形成不仅会影响茶饮料或茶浓缩汁的风味品质和外观品质,也会导致大量有效成分损失。酯型儿茶素是参与绿茶沉淀形成的关键化学成分,本研究通过单宁酶水解酯型儿茶素探讨单宁酶处理对沉淀复溶和沉淀回收利用的影响。结果表明,采用单宁酶处理沉淀,可有效促进沉淀的复溶和回收利用;随着酶添加量的增加和酶解时间的延长,沉淀复溶程度逐步提高;正交试验优化后,得到35℃、150 min和固形物总量的2.0%的酶添加量是单宁酶处理沉淀的最优参数,可水解98%的酯型儿茶素,减少82%的再沉淀。单宁酶处理还可在一定程度上改善沉淀复溶液和茶浓缩汁的滋味品质。本研究为有效解决茶饮料沉淀问题提供理论依据。

单宁酶的研究与应用

综述了国内外关于单宁酶理论与应用研究的现状，并对单宁酶在中国的开发利用前景作了展望．

共固定化单宁酶和β-葡萄糖苷酶对茶饮料增香和除混效果的研究

以海藻酸钠为载体,采用交联-包埋-交联的方法共固定化了单宁酶和β-葡萄糖苷酶,2种酶的活力回收率分别为67·3%和46·0%。将共固定化酶应用于茶饮料的除混和增香,结果表明,经共固定化酶处理后,绿茶、红茶、乌龙茶3类茶的香精油总量均有所增加,其中以绿茶的香精油总量增加最多,增长率达20·69%,乌龙茶和红茶分别为10·30%,6·79%;3类茶的非酯型儿茶素含量增加,增幅依次为绿茶(52·17%)>红茶(12·94%)>乌龙茶(8·83%),而酯型儿茶素的含量下降,降幅依次为绿茶(20·0%)>乌龙茶(16·68%)>红茶(5·04%);实验中还研究了用共固定化酶处理绿茶饮料的抗沉淀效果,未经共固定化酶处理的绿茶饮料低温时的浊度比经共固定化酶处理的要高,贮藏3个月,经共固定化酶处理的绿茶的澄清度一直很高,而未经共固定化酶处理的绿茶在60d后有少许沉淀产生。

单宁酶降低速溶绿茶中酯型儿茶素含量的研究

酯型儿茶素是速溶茶苦涩味的主体成分,其存在导致所应用产品口感苦涩,难以满足市场消费者的口感需求。单宁酶可降解茶叶中的酯型儿茶素组分,其在速溶茶加工中的应用值得关注。通过单宁酶对不同浓度速溶绿茶溶液的酯型儿茶素降解效果、单位单宁酶的EGCG降解量以及在速溶绿茶加工中的应用,结果表明,速溶绿茶溶液折光度为2.35时,单宁酶酯型儿茶素降解效果最好,单位单宁酶EGCG降解量可达6.70mg·mg-1。应用于速溶绿茶加工时,单宁酶添加量以原料的3‰为宜,先提取分离后酶解,可获得口感醇和的速溶茶粉,茶多酚及儿茶素含量相较于热水提取基本不变。

单宁酶的固定化及性质研究

比较几种固定化载体 ,确定以壳聚糖为载体 ,用戊二醛作交联剂制得固定化单宁酶。壳聚糖用量 0 .1g,用 3%戊二醛 5 ml交联 4 h,然后加入酶 5 8.4 u,于 4°C反应 4 h,固定化酶活回收率可达 73%。单宁酶经固定化后 ,热稳定性、p H稳定性及最适温度均有所提高 ,最适 p H降低。

单宁酶活力测定方法的研究

在紫外光区 2 70nm处 ,没食子酸丙酯在 0 μmol/L - 10 0 μmol/L浓度范围内与其吸光值成正比 ,利用此原理 ,建立了方便、灵敏、准确的单宁酶活力测定方法。

黑曲霉单宁酶的纯化及部分性质研究

黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒ）在五倍子单宁的诱导下产生单宁酶．通过（ＮＨ４）２ＳＯ４分级沉淀、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１５０凝胶过滤，从黑曲霉的发酵液和菌丝中纯化得到凝胶电泳均一的单宁酶．酶作用的最适温度为３０℃，最适ｐＨ值为５．５，在温度１０～３０℃和ｐＨ４～６之间保持稳定．金属离子对单宁酶没有明显的激活作用，Ｆｅ２＋和Ｍｎ２＋则对酶有抑制作用．单宁酶经ＳＤＳＰＡＧＥ测得分子量为５８０００道尔顿．其等电点为４．１．

固态发酵黑曲霉产单宁酶发酵条件研究

经紫外线诱变黑曲霉菌株筛选出1株高产单宁酶的黑曲霉B0201,利用五倍子为诱导物,固态发酵该菌株得到的单宁酶活力有较大提高。单因素优化试验表明,五倍子用量为8%,初始水分含量为50%,初始pH6.0,温度30℃为优化产酶条件。在优化的条件下,培养96h后产单宁酶酶活力达到了58.2 U/g(干基)。因此,黑曲霉固态发酵产单宁酶具有很大的研究意义及广阔的应用前景。

单宁酶固定化及其降低蓝靛果汁口腔染色作用分析

为研究固定化单宁酶对催化蓝靛果单宁水解的影响,本实验对单宁微球固定单宁酶的最佳工艺条件、单宁酶固定化前后结构表征及在蓝靛果果汁水解的应用进行研究。结果表明,经响应面试验得到单宁酶固定化最佳工艺条件为酶质量浓度0.03 mg/mL、戊二醛质量分数0.10%、pH 5.4、固定化时间40 min,此条件下的酶活力回收率为71.78%,比活力为724.72 U/mg;扫描电镜图和红外图谱显示单宁酶很好地固定在单宁微球上。果汁中添加固定化单宁酶水解后,果汁中鞣花酸含量明显提高了29.12%。固定化酶添加量为4 mg时,ΔE*ab为3.49;着色能力明显减弱。显微镜观察表明经过固定化酶处理后的果汁能明显降低对舌头黏膜的着色能力。

单宁酶基因在黑曲霉ST31中的克隆与表达

利用PCR扩增得到米曲霉(Aspergillus oryzae)单宁酶(tannase)基因的编码序列,经DNA测序证实单宁酶基因已成功克隆,然后将其连接到黑曲霉的表达载体ANED2-SP2上构建单宁酶基因表达载体.将构建好的单宁酶基因表达载体通过原生质转化法导入黑曲霉菌株ST31中进行表达研究.结果表明重组菌株的单宁酶活力最高为104.02 U/ml发酵液,比原始出发菌株米曲霉提高2～3倍.研究构建了黑曲霉的高效转化体系,提高了黑曲霉表达系统的应用水平,为其它新酶的研究提供有价值的参考.