单细胞凝胶电泳检测外照射诱导DNA单链断裂和双链断裂

分别应用中性单细胞凝胶电泳、碱性单细胞凝胶电泳技术检测了不同剂量γ射线外照射对小鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤。结果表明 ,γ射线外照射对小鼠外周血淋巴细胞DNA具有明显的损伤作用 ,彗星细胞百分率显著增加 ,DNA电泳迁移 。

应用微核试验和单细胞凝胶电泳技术来检测农药对青蛙蝌蚪及成体的遗传毒性

应用青蛙红细胞微核试验和单细胞凝胶电泳试验研究了两种新型杀虫剂 -吡虫啉和抑食肼对青蛙蝌蚪和成体的遗传毒性 ,结果表明 :当吡虫啉为 2mg/L时 ,蝌蚪红细胞微核率与对照组相比 ,无显著性差异 (p >0 .0 5) ;浓度升高到 8mg/L时 ,微核率与对照组相比 ,有显著性差异 (p <0 .0 5) ;当浓度为 3 2mg/L时 ,微核率与对照组相比 ,有极显著性差异 (p <0 .0 1) ;并有明显的剂量 -效应关系 (r =0 .9843 )。而抑食肼在浓度为 2 .5mg/L和 10mg/L时 ,微核率与对照组相比 ,无显著性差异 (p >0 .0 5) ;当浓度增至 40mg/L时 ,微核与对照组相比 ,有极显著性差异 (p <0 .0 1) ;吡虫啉与抑食肼各浓度组对青蛙红细胞的DNA损伤与阴性对照组相比 ,都有极显著性差异 (p <0 .0 1) ,且具有明显的剂量 -效应关系 (r =0 .960 ,r=0 .990 )。

DNA断裂检测方法──单细胞凝胶电泳法

单细胞凝胶电泳（ｓｉｎｇｌｅｃｅｌｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｓｓａｙ，ＳＣＧＥ）也叫彗星试验（ｃｏｍｅｔａｓｓａｙ），是一种快速、敏感、简便、廉价的检测单个哺乳动物细胞ＤＮＡ断裂的技术，目前已用于检测氧化、紫外线和电离辐射引起的损伤，以及三氯乙烷、丙烯酰胺等化学物及老化、吸烟所致损害的研究．文章介绍ＳＣＧＥ的发展、检测分析方法、原理及其在ＤＮＡ损伤与修复、生物监测、遗传毒理研究、肿瘤治疗方案优化和疗效研究方面的应用前景．

应用蝌蚪快速检测环境变异的两种方法——微核试验和单细胞凝胶电泳

本文介绍了应用无尾两栖类动物的蝌蚪进行环境监测的两种方法———微核试验和单细胞凝胶电泳。此两种环境检测的方法与其他环境检测方法相比具有快速 ,简便 ,易操作 ,适于检测现场应用 ,可大面积推广等优点。

应用单细胞凝胶电泳技术测定农药对蚯蚓的DNA损伤

探讨采用当前国际上较先进的DNA损伤检测技术———单细胞凝胶电泳技术(SCGE) ,来检测农药对蚯蚓DNA的损伤 .由于蚯蚓是陆生生物与土壤生物之间传递污染物的桥梁 ,能很好地指示土壤环境的变化 ,是评价农药对生态环境安全性的一项重要指标 .尝试建立蚯蚓的单细胞凝胶电泳来评价农药对生态环境的影响 .结果表明两种新型农药对蚯蚓的DNA均有损伤作用 .认为蚯蚓的单细胞凝胶电泳技术能敏感地检测农药对细胞DNA的损伤 .

单细胞凝胶电泳技术

单细胞凝胶电泳 (singlecellgelelectrophoresisassay ,SCGE)也叫彗星试验 ,是一种快速、敏感、简便的细胞DNA损伤检测技术。文章简要介绍了SCGE的原理、主要技术流程及其注意事项、存在问题与发展前景。

单细胞凝胶电泳技术分析过氧化氢对大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤作用

目的 观察不同浓度过氧化氢 (2 5～ 2 0 0 μmol/L)分别作用于正常大鼠外周血淋巴细胞不同时间 (5min和 2 0 min)后细胞DNA的损伤情况。方法 利用快速、灵敏的检测细胞 DNA损伤的单细胞凝胶电泳 (SCG)技术结合激光扫描共聚焦显微镜 ,以“彗星样”淋巴细胞出现率 (计数一定量细胞其中彗星样细胞所占的比例 )、总彗星长度 (“彗星”电泳方向上的最大长度 ,即尾长 )和尾距 (尾部 DNA占总 DNA的百分比与头尾部中心间距的乘积 )来评价淋巴细胞 DNA的损伤程度。结果 过氧化氢能剂量依赖性地导致大鼠外周血淋巴细胞 DNA的明显断裂损伤 ,能使“彗星样”淋巴细胞出现率、总彗星长度和尾距显著增加 ,并随着时间的延长损伤加重。结论 提示活性氧或自由基增多可能是造成体内细胞 DNA断裂损伤的重要原因。

利用单细胞凝胶电泳技术研究镉对鲫鱼淋巴细胞DNA的损伤

以鲫鱼作为受试生物,采用单细胞凝胶电泳技术,研究了不同浓度及不同染毒时间氯化镉对鲫鱼淋巴细胞DNA的损伤。结果显示,各氯化镉染毒组DNA平均迁移长度明显增加,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05);另外,随着氯化镉染毒剂量的增加,各剂量组DNA的平均迁移长度逐渐增加,在实验浓度范围内,存在明显的剂量-效应关系(P<0.01),但未见明显的时间-效应关系。氯化镉可引起鲫鱼淋巴细胞DNA损伤,鲫鱼淋巴细胞DNA损伤可望成为一个较好的水环境基因毒剂指标。

应用单细胞凝胶电泳测定人血痕淋巴细胞降解的实验研究

目的探讨血痕形成时间与其DNA降解的淋巴细胞出现率的关系。方法应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,测定离体72h内不同时间段的血痕中彗星样淋巴细胞出现率。结果获得人离体血液经不同放置时间间隔后,经LUC IA图像分析系统采集得到荧光图像,并获得体现DNA降解趋势的二项式回归方程y=-0.0178X2+2.4623X+8.1098,r2=0.9522,具有高度的统计学意义。结论72h内的人血DNA降解的淋巴细胞出现率与血痕形成时间之间具有高度的线性相关。

单细胞凝胶电泳检测除虫脲光解产物对小鼠肝脏DNA损伤研究

采用单细胞凝胶电泳法对不同浓度除虫脲经紫外光照射后的混合物可能导致小鼠肝脏细胞DNA损伤的作用进行了研究,应用CASP软件分析彗星图像,得出彗星尾部DNA百分含量、彗星尾长、尾距和Olive尾距4个指标。通过SPSS软件分析表明,其光降解混合物导致的彗星拖尾现象与空白组有显著区别,且在一定浓度范围呈现剂量-效应关系,表明不同浓度除虫脲经光降解后其混合物具有一定的致突、致癌性,且毒性随着浓度的降低而减小。

重金属诱导拟南芥原生质体DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测

以拟南芥原生质体为实验体系,研究不同浓度的3种重金属离子对拟南芥原生质体的毒性和DNA损伤的差异。结果表明,用1-5mmol.L-1的Zn2+、Cd2+和Cu2+分别处理的拟南芥原生质体,2小时内活力逐渐下降,并表现出明显的浓度依赖性;与相同浓度的Cd2+和Cu2+相比,Zn2+对拟南芥原生质体活力的影响程度较小,表现出较低的毒性。单细胞凝胶电泳检测发现,用0.1-0.8mmol.L-1的Zn2+、Cd2+和Cu2+分别处理拟南芥原生质体30分钟,以OTM值表示的原生质体DNA损伤量随重金属离子浓度的增加而递增;相同浓度(0.5mmol.L-1)的3种重金属离子相比,Zn2+对原生质体的遗传毒性明显低于Cu2+和Cd2+。综合原生质体活力和DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测结果,发现Zn2+对拟南芥原生质体的遗传毒性较低,而Cd2+和Cu2+的遗传毒性较高。本研究建立的拟南芥原生质体实验体系,结合运用单细胞凝胶电泳技术,能够快速、灵敏地检测重金属对植物细胞的遗传毒性。

矩类迁移比作为单细胞凝胶电泳指标的研究

目的 研究单细胞凝胶电泳新指标。方法 采用H2 O2 对人外周淋巴细胞急性染毒作为DNA损伤模型,应用新型图像分析系统分析矩迁移比与惯量迁移比等指标。结果 Olive尾矩、矩迁移比和惯量迁移比3个指标与H2 O2剂量之间存在良好的线性剂量 效应关系,而尾长指标则在H2 O2 的高剂量范围(>160 μmol L)内出现饱和平台现象,且显示矩迁移比和惯量迁移比的变异系数较Olive尾矩有较小。结论 矩迁移比和惯量迁移比既有矩类指标的优点,又有比值类指标的优点,值得推广应用。

多光谱单细胞凝胶电泳图像分析系统及其应用

设计了一套多光谱单细胞凝胶电泳(SCGE)图像分析系统,利用该系统能简便、快捷、准确地同时获得单细胞彗星图像包括彗星、彗星尾、彗星头参数的多个彗星分析指标。并使用该系统测量了H2O2致淋巴细胞DNA损伤的作用,实验证明,该系统可较好的满足SCGE图像的分析要求。

HgCl_2与CdCl_2对河蟹精子DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测研究

采用单细胞凝胶电泳技术,研究了HgCl2和CdCl2对河蟹(Eriocheir sinensis)精子DNA损伤的影响.HgCl2和CdCl2各设置6个相同的浓度梯度,分别为0mmol/L,0.01mmol/L,0.05mmol/L,0.1mmol/L,1mmol/L,5mmol/L,处理温度为37℃(水浴),处理时间为1h;SCGE的检测指标为DNA拖尾长度和DNA损伤率.结果表明,对照组DNA未受损伤,在电场中核DNA几乎不泳动,染色后呈圆形的荧光团,无拖尾现象;各处理组精子DNA均不同程度受损,电泳染色后均呈现彗星状荧光团,且随着HgCl2和CdCl2浓度的升高,河蟹精子DNA迁移距离和损伤率亦随之增加,DNA损伤程度与其浓度之间存在明显的"剂量-效应"关系.此外,本实验亦证实SCGE可用于河蟹精子DNA损伤的检测.

碱性单细胞凝胶电泳技术用于辐射损伤快速剂量估算的时效和量效关系研究

应用碱性单细胞凝胶电泳技术(SCGE),采用小鼠整体照射和人外周血离体照射方式,检测受60Co-γ射线照射的外周血细胞DNA损伤修复的时间效应和剂量效应关系,探讨SCGE用于辐射损伤快速剂量估算的可行性。整体实验结果表明,小鼠外周血细胞DNA损伤程度在照射后即刻最明显,照射后2h DNA损伤已基本修复,照射后24 h与照射前相比已无显著性差异(p>0.05)。离体实验结果发现,照射后即刻人外周血细胞尾矩TM值随剂量增加而增加,照射组与未照射组之间有非常显著性差异(p<0.01),剂量效应呈现良好的线性关系Y=0.3619+2.1834D(r=0.9946);人外周血细胞尾矩TM照射后6 h与未照射组相比已无显著性差异(p>0.05)。以上结果表明,碱性单细胞凝胶电泳是一种快速、灵敏检测DNA损伤的有效方法,具有良好的剂量效应关系;但修复较快,可测时间范围有限。

单细胞凝胶电泳技术及在土壤生态毒理学中的应用

单细胞凝胶电泳技术又称为彗星实验,是最近几年发展起来的一种快速、简单、灵敏、可靠的检测细胞核DNA损伤的技术。总结了近几年来单细胞凝胶电泳技术的发展、原理、方法及其应用,并指出其下一步的发展趋势。彗星实验中,镶嵌于琼脂糖中的细胞核在电场中向正极移动,因细胞核与DNA片段迁移速率不同,而形成类似“彗星”的图像。目前采用的彗星实验有多种,可以检测诸如DNA双链断裂、单链断裂、碱不稳定位点等多种类型的DNA损伤。碱性彗星实验因其高灵敏度而被广泛采用。彗星实验的主要步骤包括细胞核悬浮液的获得、彗星电泳胶板制备、细胞裂解、DNA变性解旋、电泳、中和、染色和观察等。目前彗星实验广泛应用于各个研究领域,近年来开始用于环境污染的基因毒性研究和生物监测,并取得了迅速发展。

单细胞凝胶电泳在真核微生物上的应用

目的 利用真核微生物作为单细胞凝胶电泳的生物材料 ,以建立一种筛选鉴别环境遗传毒物的新方法。方法 酿酒酵母和原生动物四膜虫经培养后 ,对比常规动物细胞实验方法进行单细胞凝胶电泳 ,并对实验条件进行改进。结果 与动物原代和传代细胞相比 ,四膜虫培养时间短 ,成本低廉 ,可实现无损前处理 ,四膜虫DNA解旋后电泳所需电压和电流都必须较低 ,即 15V ,180mA。对H2 O2 、K2 Cr2 O7和丝裂霉素 (MMC) 3种DNA损伤剂的初步测试表明 ,它们可以引起四膜虫DNA不同程度的损伤 ,最低效应浓度分别为 10 0、 10、 1μmol/L。酵母菌因DNA含量少 ,未见明显的彗星现象。结论 四膜虫单细胞凝胶电泳从方法上完全可以与动物原代细胞和传代细胞互相替代 ,但四膜虫单细胞凝胶电泳试验快速、经济、简便的优势 ,则是后二者所不及的。

单细胞凝胶电泳技术检测蜘蛛血细胞DNA损伤研究

以体外染毒法对星豹蛛雌、雄成蛛进行过氧化氢和甲醛染毒处理,采用单细胞凝胶电泳技术检测蜘蛛血细胞DNA损伤效应,用CASP软件分析彗星图像,并计算受损伤细胞率、彗星尾长和Olive尾矩。结果表明,不同浓度的过氧化氢能引起蜘蛛血细胞DNA断裂损伤,且损伤程度与浓度之间有明显的剂量-效应关系;不同浓度的甲醛能引起蜘蛛血细胞DNA损伤,其中在10μmol/L时引起DNA断裂,在25μmol/L、40μmol/L、55μmol/L时引起DNA交联,而在70μmol/L时引起血细胞凋亡。

单细胞凝胶电泳对辐射所致肿瘤细胞DNA损伤的研究

为探测肿瘤细胞的辐射敏感性 ,应用单细胞凝胶电泳技术和3 H -TdR掺入方法 ,对γ射线照射的K5 6 2、SMMC - 772和HOS86 0 3细胞株单细胞DNA链断裂的辐射效应进行了研究 ,实验表明上述 3种肿瘤细胞在受到 1- 2 0Gy60Coγ射线照射后细胞迁移率增高 ,迁移距离延长 ,并且DNA合成受到抑制 ,3 H -TdR掺入下降。