单羧酸转运蛋白4在癫痫患者脑组织中的表达

目的检测癫痫患者脑组织中单羧酸转运蛋白4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)的表达,以探讨其在癫痫发生中的作用。方法收集16例颞叶癫痫患者和6例脑外伤患者清创术后颞叶脑组织作为研究对象,采用免疫组织化学和免疫印记检测脑组织MCT4蛋白表达,并进行图像分析和统计学处理。结果免疫组织化学显示,对照组及癫痫组患者脑内均可见MCT4阳性细胞表达,IPP软件分析显示癫痫组脑内MCT4阳性细胞平均光密度值(0.266±0.012)高于对照组(0.230±0.023),差异具有统计学意义(P<0.05)。蛋白印记检测显示MCT4蛋白在癫痫患者脑内的表达水平(0.426±0.019)较对照组相比明显增加(0.311±0.044),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论癫痫患者脑组织中MCT4表达增高,提示MCT4与癫痫脑内异常的能量代谢密切相关。

单羧酸转运蛋白4在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨单羧酸转运蛋白(MCTs)在结直肠癌(CRC)中的表达及临床意义。方法GEPIA2在线工具分析MCT1~4在CRC组织的表达及临床意义。选择江苏省徐州市中心医院2019年CRC组织标本存档蜡块53例,免疫组化检测MCT4蛋白的表达,正电子发射计算机断层成像(PET/CT)结果由患者术前检查获得。结果癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库中,仅有MCT4 mRNA在结肠腺癌(COAD)组织(275例)和直肠腺癌(READ)组织(92例)中的表达显著高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。MCT4高表达与CRC患者较差的无病生存期(DFS)有关(P<0.05)。此外,MCT4蛋白表达在CRC组织明显高于正常组织,差异有高度统计学意义(P<0.01)。对于MCT4高表达患者,PET/CT检查的18氟脱氧葡萄糖(18F-FDG)的标准化摄取值(SUV)高于MCT4低表达患者,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论MCT4在CRC发生发展中具有重要作用,可望成为新的治疗靶点。

单羧酸转运蛋白4(MCT4)在前列腺癌中的表达及调控研究

目的探讨单羧酸转运蛋白4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)在前列腺癌组织及细胞系中的表达情况,明确其在前列腺癌细胞中的调控作用。方法应用免疫组织化学方法检测MCT4蛋白在前列腺癌(prostate cancer,PCa)、良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)及癌旁组织(para-carcinoma tissues,PCT)中的表达,分析其与前列腺癌Gleason评分及淋巴结转移的关系。免疫印迹(Western blotting)法检测不同前列腺癌细胞系中MCT4蛋白表达差异,分析抑制MCT4蛋白表达对Ncadherin、E-cadherin及p ERK1/2的调控作用。结果免疫组化检测显示,MCT4蛋白在前列腺癌、前列腺增生及癌旁组织中均有表达;但PCa中MCT4表达水平明显高于BPH及PCT(P=0. 003)。另外,MCT4蛋白表达与前列腺癌是否有淋巴结转移密切相关,转移组显著高于非转移组(P=0. 022)。Western blotting检测结果显示,在前列腺正常上皮细胞及激素依赖性前列腺癌细胞LNCap中MCT4表达较弱,而在恶性程度较高的去势抵抗性前列腺癌细胞PC3及DU145中表达明显增强。抑制PC3细胞中MCT4表达可以使N-cadherin及p ERK1/2的蛋白表达下降,而使E-cadherin蛋白表达水平升高。结论单羧酸转运蛋白4可能参与上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程及ERK1/2通路的调控,促进前列腺癌的进展和转移,对前列腺癌的临床诊断和治疗有重要意义。

食管鳞状细胞癌中单羧酸转运蛋白4的表达及对EC109细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)中单羧酸转运蛋白4(MCT4)的表达及对EC109细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:免疫组化法检测60例食管鳞癌和19例正常食管黏膜组织中MCT4蛋白的表达。Western blot法检测正常食管上皮细胞Het1-A和食管鳞癌细胞EC109、EC9706中MCT4蛋白的表达。将靶向MCT4的siRNA转染至EC109细胞中,Western blot法检测MCT4蛋白的表达,采用乳酸试剂盒检测胞外乳酸含量,采用CCK-8法、划痕实验和Transwell技术检测细胞增殖率、迁移率和侵袭率;以未转染细胞和转染阴性对照siRNA的细胞作对照。结果:食管鳞癌组织中MCT4高表达率高于正常组织(70. 0%vs 26. 3%,P <0. 001),低分化癌组织中的高表达率高于高中分化癌组织(P=0. 037)。EC9706、EC109细胞中MCT4蛋白表达水平高于Het1-A(P <0. 05)。与对照组比较,MCT4 siRNA转染的EC109细胞胞外乳酸含量降低,细胞增殖率、迁移率和侵袭率均降低(P <0. 001)。结论:下调MCT4的表达能够抑制食管鳞癌细胞的恶性生物学行为。

直肠癌组织中单羧酸转运蛋白1、单羧酸转运蛋白4的表达情况及与患者临床特征和预后的关系

目的探讨直肠癌组织中单羧酸转运蛋白1(MCT1)、单羧酸转运蛋白4(MCT4)的表达情况及与患者临床特征和预后的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测106例直肠癌患者直肠癌组织中MCT1、MCT4的表达情况,分析其与患者临床特征及预后的关系。对Ⅲ期直肠癌患者(术后均接受辅助性放化疗)进行亚组分析,比较不同MCT1、MCT4表达情况的Ⅲ期直肠癌患者的生存预后。结果106例患者中,57例患者MCT1呈高表达,48例患者MCT4呈高表达。不同临床分期、淋巴结转移情况、血管浸润情况、术后5年内复发和(或)转移情况的直肠癌患者直肠癌组织中MCT1和MCT4的表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。MCT1低表达患者的生存情况优于MCT1高表达患者,MCT4低表达患者的生存情况优于MCT4高表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。MCT1低表达的Ⅲ期直肠癌患者的生存情况优于MCT1高表达的Ⅲ期直肠癌患者,MCT4低表达的Ⅲ期直肠癌患者的生存情况优于MCT4高表达的Ⅲ期直肠癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论直肠癌组织中MCT1和MCT4表达情况与患者临床分期、淋巴结转移情况、血管浸润情况及生存情况有关,可将MCT1、MCT4作为直肠癌预后预测的重要指标。

单羧酸转运蛋白4在胰腺癌中的表达及临床预后价值

目的:分析单羧酸转运蛋白4(monocarboxylate transporter 4,MCT4)在胰腺癌组织中的表达及其在胰腺癌根治性手术后的预后预测价值。方法:回顾性分析2010年2月至2014年6月在复旦大学附属肿瘤医院胰腺外科接受根治性手术切除的379例胰腺癌患者的临床资料。运用免疫组化染色检测MCT4在胰腺癌组织中的表达,分析其与患者临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线和多因素Cox回归分析模型分析MCT4对患者预后的预测价值。结果:胰腺癌组织中MCT4阳性表达患者的肿瘤最大径更大(P=0.004),更容易出现淋巴结转移(P=0.005),TNM分期也更高(P=0.011)。MCT4阳性表达患者的中位总生存(overall survival,OS;12.4个月)和无复发生存(recurrence-free survival,RFS;7.3个月)时间均显著短于MCT4阴性表达患者(21.3个月,P<0.001;11.4个月,P<0.001)。多因素Cox回归分析显示,胰腺癌组织中MCT4阳性表达是胰腺癌患者术后OS时间(风险比=1.814,95%置信区间1.433~2.296,P<0.001)和RFS时间(风险比=1.648,95%置信区间1.319~2.059,P<0.001)短的独立预测因子。结论:胰腺癌组织MCT4阳性表达是胰腺癌患者术后预后不良的独立预测因子,可作为筛选胰腺癌术后高危人群的重要指标以及潜在的治疗靶点。

单羧酸转运蛋白1、4在甲状腺乳头状癌中的表达及其相关性研究

目的研究单羧酸转运蛋白(MCT)1、4在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及临床病理学意义。方法收集2015年1月-2018年2月在新疆医科大学第一附属医院接受手术治疗的220例PTC标本及104例良性甲状腺组织标本。采用免疫组化SP法检测MCT1和MCT4的表达水平,探讨二者与临床病理的关系。结果MCT1在188例PTC组织中呈阳性表达,在29例良性甲状腺组织中呈阳性表达;MCT4在190例PTC组织中呈阳性表达,在35例良性甲状腺组织中呈阳性表达;PTC组织中MCT1、MCT4阳性率均明显高于良性甲状腺组织(P<0.01)。MCT1和MCT4蛋白表达水平与PTC患者年龄、性别、肿瘤大小均无明显相关性,而与颈部淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论MCT1和MCT4在PTC中高表达,且与颈淋巴结转移密切相关,有望成为甲状腺乳头状癌生物行为的有效标志。

葡萄糖转运蛋白1和单羧酸转运蛋白1、单羧酸转运蛋白4在结肠癌组织中的表达和意义

目的观察葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和单羧酸转运蛋白1(MCT1)、MCT4在结肠癌组织中的表达及其与临床特征之间的相关性。方法收集杭州市第一人民医院2008年1月至2016年1月经手术切除的结肠癌组织标本84例和相应的癌旁正常结肠组织标本40例,采集患者的临床资料,采用免疫组化检测患者GLUT1、MCT1、MCT4的表达,进行统计分析。结果结肠癌组织中GLUT1、MCT1、MCT4阳性表达率分别为54.8%(46/84)、47.6%(40/84)、58.3%(49/84),均显著高于正常结肠组织的12.5%(5/40)、7.5%(3/40)、15.0%(6/40),两者差异均有统计学意义(χ^2=19.987、19.253、20.615,均P<0.01);GLUT1、MCT1、MCT4的表达与性别、年龄、肿瘤大小无关,与病变部位、分化程度、淋巴结转移、远处转移和临床分期有相关性(GLUT1:χ^2=6.227、11.629、10.029、14.817、4.709;MCT1:χ^2=6.891、8.615、9.185、5.337、16.131;MCT4:χ^2=8.641、7.077、12.131、6.917、7.077;均P<0.05)。结论结肠癌组织高表达GLUT1、MCT1、MCT4,GLUT1、MCT1、MCT4可能通过能量代谢途径影响结肠癌的发生、发展。

单羧酸盐转运蛋白4对前列腺癌细胞糖代谢及凋亡的影响

目的:探讨单羧酸盐转运蛋白4(MCT4)对前列腺癌细胞凋亡及糖代谢的影响。方法:构建包含shRNA-MCT4的腺病毒载体,转染前列腺癌细胞株DU145及PC-3,不转染载体为空白对照组,阴性载体作为阴性对照组,检测各组细胞MCT4表达、乳酸分泌量、葡萄糖消耗量及细胞凋亡率,比较组间的结果差异。结果:转染shRNA-MCT4腺病毒后,MCT4在DU145及PC-3细胞中的表达均显著低于空白对照组(P分别为0. 008、0. 008)和阴性对照组(P分别为0. 007、0. 009); DU145及PC-3细胞的乳酸分泌较空白对照组(P分别为0. 009、0. 009)和阴性对照组亦明显下降(P分别为0. 009、0. 008),同时单细胞葡萄糖消耗量明显低于空白对照组(P分别为0. 007、0. 007)和阴性对照组(P分别为0. 009、0. 007); DU145细胞中空白对照组、阴性对照组、shRNA-MCT4组细胞凋亡率为(9. 81±1. 24)%、(10. 01±1. 46)%、(22. 11±2. 68)%,shRNA-MCT4组与另两组比较差异有统计学意义(P分别为0. 003、0. 003); PC-3细胞中3组凋亡率分别为(10. 21±1. 58)%、(10. 91±1. 63)%、(23. 38±3. 08)%,shRNA-MCT4组与另两组比较差异有统计学意义(P分别为0. 004、0. 004)。结论:抑制MCT4表达可干扰前列腺癌细胞的糖代谢,促进凋亡; MCT4基因可作为前列腺癌治疗的潜在靶点。

单羧酸转运蛋白1、2、4在急性心衰大鼠模型肾上腺的表达变化

目的观察单羧酸转运蛋白(monocarboxylate transporter,MCT)1、2、4在急性心衰大鼠肾上腺的表达变化,以探讨急性心衰肾上腺的能量代谢变化。方法随机将成年健康SD大鼠(雌雄不限,250±20 g)50只,分为3组:正常组(n=10)、假手术组(n=20,2 subgroups,10 in each)和模型组(n=20,2subgroups,10 in each)。用1.5%戊巴比妥钠静脉注射制作大鼠急性心衰模型;注毕,运用BL-420F生物机能实验系统记录左室内压峰值(LVSP)和左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)的变化曲线;用IHC和Western Blot检测模型鼠,肾上腺MCT1,2,4的表达变化。结果在急性心衰发生10 min时,肾上腺皮质和髓质MCT1、2、4的表达均有升高,此时假手术组MCT1、2、4也有升高。与正常对照组相比较,两组的MCT1、2、4的表达升高均具有统计学意义(P<0.05);在20 min时,大鼠肾上腺MCT1、2、4的表达较正常组却有所下降,与正常组相比较,仅MCT1的表达下调具有统计学意义(P<0.05),而MCT2、4则无明显差别(P>0.05)。假手术20 min组与10 min组相比较,MCT1、2、4的表达无明显差别(P<0.05)。结论在急性心衰和创伤性应激状态下,肾上腺MCT1、2、4的表达,在十分钟内呈代偿性增加,但随着心衰时间的延长,其表达反而降低,机体的能量代谢出现失代偿,提示MCT1、2、4参与创伤性应激及急性心衰的能量代谢过程。

沉默单羧酸转运体4对前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨沉默单羧酸转运体4(monocarboxylate transporter 4,MCT4)对前列腺癌PC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法:利用RNA干扰技术分别将siRNA-MCT4(si-MCT4)和阴性对照质粒(si-NC)转染进PC3细胞,培养96 h后用乳酸测定法检测转染后PC3细胞培养液中乳酸含量,用CCK-8法、Transwell小室法分别检测PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,用Western blotting检测沉默效果及细胞中integrinβ4-FAK-SRC-MEK-ERK信号通路相关蛋白(integrinβ4、p-FAK、p-SRC、p-ERK1/2、p-MEK1/2)和EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin)的表达水平。结果:成功构建沉默MCT4的PC3细胞株。与对照组比较,si-MCT4组PC3细胞培养液中乳酸含量显著降低(P<0.01),细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(P<0.05或P<0.01);si-MCT4组PC3细胞中integrinβ4、p-FAK、p-SRC、p-ERK1/2、p-MEK1/2及N-cadherin水平显著降低(均P<0.01),而E-cadherin表达水平显著升高(P<0.01)。结论:沉默MCT4表达可显著抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制细胞培养液中的乳酸水平和细胞中integrinβ4-FAK-SRC-MEK-ERK信号通路及EMT相关蛋白的表达有关。

基于异常糖代谢探讨MCT4参与胃癌发生发展的机制

目的探讨单羧酸转运蛋白(MCT)在胃癌的表达及临床意义。方法选取2018年1月—2020年12月徐州市中心医院收治的病理学诊断为胃腺癌的患者56例。收集其胃癌组织及其配对的癌旁正常组织标本、正电子发射计算机断层成像(PET/CT)结果。采用GEPIA2和kmplot数据库分析MCT1-4在胃癌组织的表达及其与胃癌疾病分期和预后的相关性。采用免疫组化法检测MCT4、葡萄糖转运蛋白(GLUT1)及缺氧诱导因子(HIF)-1α的表达。采用GEPIA2在线分析MCT4表达与GLUT1和HIF-1的关系。结果GEPIA2分析显示,MCT1和MCT4基因表达在胃癌组织较非肿瘤组织显著增高(P<0.05),而MCT2和MCT3的基因表达差异无统计学意义(P>0.05);MCT1和MCT4基因与胃癌分期相关性差异无统计学意义(P>0.05)。kmplot数据库显示MCT1 mRNA高表达患者总生存期(OS)增加(P<0.001),MCT4 mRNA高表达患者OS减少(P<0.001)。此外,MCT4蛋白表达在胃癌组织较正常组织明显升高(P=0.0006)。GEPIA2分析和免疫组化染色结果提示MCT4表达与葡萄糖转运蛋白(GLUT1)和缺氧诱导因子(HIF-1)的表达呈正相关。结论MCT4参与调控GC糖代谢的重编程和肿瘤微环境,与GC的发生发展密切相关,可作为潜在的预后标志物,有可能作为GC患者的候选治疗靶点。

子宫颈鳞状细胞癌组织中MCT4的表达及其临床病理学意义

目的探讨单羧酸转运蛋白4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组化SP法分别检测72例子宫颈鳞状细胞癌组织和48例子宫颈正常组织中MCT4的表达,分析其表达与子宫颈鳞状细胞癌临床病理特征的关系。结果 MCT4在子宫颈鳞状细胞癌组织中的阳性率为81.9%(59/72),明显高于子宫颈正常组织(35.4%,17/48),两组相比差异有统计学意义(χ2=26.848,P<0.001)。MCT4表达与子宫颈鳞状细胞癌临床分期(χ2=5.389,P=0.020)和淋巴结转移(χ2=4.706,P=0.030)有关,与患者年龄(χ2=1.238,P=0.266)、肿瘤分化程度(χ2=0.530,P=0.467)及浸润深度(χ2=1.300,P=0.254)无关。结论 MCT4在子宫颈鳞状细胞癌组织中高表达,且与临床分期和淋巴结转移密切相关,有望成为子宫颈鳞状细胞癌生物行为的有效指标之一。

MCT1、MCT4在甲状腺乳头状癌中的表达及临床病理学意义

目的 探讨单羧酸转运蛋白1(Monocarboxylate transporter 1,MCT1)、单羧酸转运蛋白4(Monocarboxylate transporter 4,MCT4)在甲状腺乳头状癌中的表达,及其与各临床病理参数的关系。方法 收集新疆医科大学第一附属医院病理科2014年1月1日—2016年12月31日手术切除的甲状腺乳头状癌患者石蜡包埋标本122例为研究对象。采用免疫组织化学法检测标本中MCT1、MCT4的蛋白表达情况,分析其与患者各临床病理参数之间的关系。结果 免疫组织化学结果显示,MCT1、MCT4在甲状腺乳头状癌中的阳性表达率分别为34.4%(42/122)、81.1%(99/122);MCT1、MCT4染色阳性均定位于细胞浆,显示肿瘤细胞胞浆弥漫棕黄色,阴性未着色。MCT1的阳性表达在BRAF基因突变型中明显高于野生型(P=0.034),在BRAF蛋白阳性中明显高于BRAF蛋白阴性(P=0.008)。MCT1在甲状腺乳头状癌患者年龄、性别、甲状腺球蛋白抗体、过氧化物酶抗体、促甲状腺激素、淋巴结转移、病灶位置、肿物直径、病理类型中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。MCT4的阳性表达在BRAF基因突变型中明显高于野生型(P=0.000),在BRAF蛋白阳性中明显高于BRAF蛋白阴性(P=0.000),在病灶位置双叶中明显高于单叶(P=0.041)。MCT4在甲状腺乳头状癌患者年龄、性别、甲状腺球蛋白抗体、过氧化物酶抗体、促甲状腺激素、淋巴结转移、肿物直径、病理类型中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MCT1、MCT4在甲状腺乳头状癌组织中高表达。MCT1、MCT4蛋白的表达都与BRAF基因突变、BRAF蛋白表达有关,说明MCT1、MCT4表达水平与甲状腺乳头状癌的发生和发展有关。

生物合成的MCT4siRNA抑制卵巢癌细胞的增殖作用

目的探索生物合成的单羧酸转运蛋白4(MCT4)siRNA对卵巢癌细胞的作用。方法将靶向单羧酸转运蛋白4(MCT4)的siRNA在大肠杆菌里进行合成,HPLC纯化后,转染卵巢癌细胞A2780和SKOV3,Western blot检测siRNA的干涉效果。利用葡萄糖、乳酸及氧消耗检测试剂盒检测细胞糖酵解水平,MTT实验检测siRNA对卵巢癌细胞增殖的抑制作用。结果利用大肠杆菌发酵获得mg级MCT4siRNA纯品。转染卵巢癌细胞A2780和SKOV3后Western blot显示能有效降低MCT4的表达,降低细胞的糖酵解水平,抑制卵巢癌细胞的增殖。结论生物合成的MCT4具有良好的生物活性,能显著降低靶蛋白的表达,发挥抑癌作用,具有发展成为新的核酸药物的潜力。

补充丙酮酸盐可预防高强度间歇运动诱导代谢性酸中毒并提高大鼠骨骼肌MCT1/MCT4的表达

运动诱导的代谢性酸中毒作为运动性疲劳的发生原因之一而备受关注。补充丙酮酸盐对运动诱导代谢性酸中毒的作用效果少有报道,且其作用机制尚未完全阐明。单羧酸转运蛋白(monocarboxylate transporter,MCTs)对机体酸碱平衡的维持有重要意义,但丙酮酸盐能否通过提高MCTs表达缓解酸中毒尚不清楚。因此,本研究通过预先给大鼠补充丙酮酸盐(616 mg/kg/d)。1周后进行急性高强度间歇运动(high intensity intermittent exercise,HIIE)。具体方案为110%VO_(2max)运动1 min结合1 min休息为1组,共13组,观察大鼠在HIIE后血液、骨骼肌酸碱平衡状态及骨骼肌MCTs表达的变化。结果表明,急性HIIE后大鼠血液pH、碳酸氢根离子(bicarbonate ion,HCO_(3)^(-))、碱剩余(base excess,BE)显著降低(P<0.05),血乳酸水平显著升高(P<0.05);并且快肌和慢肌内pH显著降低(P<0.05),肌内乳酸水平显著升高(P<0.05)。预先补充丙酮酸盐,大鼠血液pH、HCO_(3)^(-)、以及BE均显著提升(P<0.05),快肌和慢肌内pH也显著提升(P<0.05),并且快肌内乳酸水平显著降低(P<0.05)。采用免疫印迹法测定大鼠快、慢肌中MCT1、MCT4相对表达后发现,补充丙酮酸盐,能够显著增高大鼠快肌和慢肌中MCT4表达水平(P<0.05)以及慢肌中MCT1的表达(P<0.05)。以上研究结果表明,补充丙酮酸盐,能够有效预防HIIE诱导的代谢性酸中毒,其可以通过增高大鼠快肌和慢肌中MCT4及慢肌中MCT1的表达,从而改善大鼠骨骼肌和血液的酸代谢。本研究为今后丙酮酸盐缓解运动诱导的酸中毒的机制研究提供了理论基础,并为运动性疲劳的延缓提供了新的营养策略。

TGF-β1通过诱导代谢重组促进子宫内膜异位症内膜间质细胞的迁移和侵袭

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)是否具有诱导子宫内膜间质细胞发生代谢重组的效应,及该效应对内膜间质细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:收集子宫内膜异位症(EMs)患者的异位病灶及在位内膜。免疫组化法分析标本组织内无氧糖酵解标志分子单羧酸转运蛋白1和4(MCT1、MCT4)等表达。体外分离和培养获得原代内膜间质细胞。原代培养的内膜间质细胞用TGF-β1(2ng/ml)干预12h,检测培养液中乳酸浓度。siRNA沉默MCT4基因表达。qRT-PCR和Western blot法检测无氧糖酵解相关基因和蛋白的表达水平,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力。结果:内异症异位病灶组织内无氧糖酵解标志分子MCT1、MCT4表达显著增加。相较无干预细胞组,外源性TGF-β1作用后内膜间质细胞无氧糖酵解标志分子MCT1、MCT4和乳酸脱氢酶A(LDHA)表达均显著上调(P均<0.05);同时TGF-β1干预促进内膜间质细胞的乳酸分泌及迁移和侵袭(P均<0.05),但MCT4基因沉默可显著逆转上述效应。结论:TGF-β1通过诱导内膜间质细胞无氧糖酵解、乳酸分泌促进了细胞的迁移和侵袭,且MCT4在其中发挥了关键性作用。

非小细胞肺癌患者血浆PKM2检测的临床意义

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆丙酮酸激酶M2(PKM2)水平,并对其临床应用价值进行探讨。方法选取确诊为NSCLC并行根治性手术的患者94例为手术组;确诊为手术后复发的NSCLC患者30例为复发组;以正常体检者50例为对照组。酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血浆丙酮酸激酶2(PKM2)的水平,同时检测各组单羧酸转运蛋白4(MCT4)及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的水平。绘制手术组术前及复发组血浆PKM2的ROC曲线。结果血浆PKM2、GLUT1水平3组差异有统计学意义(P<0.05),由高到低依次为复发组、手术组(术前)、对照组(P<0.05);血浆MCT4水平在复发组、手术组(术前)均高于对照组(P<0.05),而复发组与手术组(术前)差异无统计学意义(P>0.05)。手术组患者术后3个指标水平均明显下降,与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关分析显示,手术组术前检测中这3个指标间均存在正相关性(P<0.05);复发组中血浆PKM2与GLUT1、PKM2与MCT4存在正相关(P<0.05),而MCT4与GLUT1则无明显相关性(P>0.05)。手术组术前PKM2检测ROC曲线最佳cut-off值为15.78 U/ml,曲线下面积0.873,对诊断NSCLC的敏感度和特异度分别为69.1%、94.0%;复发组曲线最佳cut-off值为16.87 U/ml,曲线下面积为0.965,对诊断NSCLC的敏感度和特异度分别为83.3%、98.0%。结论 NSCLC患者术前及复发时血浆PKM2水平明显升高,检测血浆PKM2水平对诊断NSCLC及预测肿瘤复发有意义。PKM2可能与MCT4、GLUT1相互调节而参与了NSCLC的进展及复发。

基于MCT4/CD147探讨四君子汤加减改善酸性微环境逆转胃癌前病变的效应机制

目的:观察四君子汤加减治疗胃癌前病变(GPL)模型大鼠胃黏膜乳酸水平及单羧酸转运蛋白1(MCT1),单羧酸转运蛋白4(MCT4)和细胞外基质金属蛋白酶诱导物(CD147)表达的影响。方法:将74只SD雄性大鼠随机分为正常组12只,造模组62只。采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)-氨水复合造模法诱导制作GPL大鼠模型,于第9周将造模组大鼠随机分为模型组,叶酸组(2.7 mg·kg^(-1)),四君子汤加减高、中、低剂量组(12.6,6.3,3.15 g·kg^(-1)),每组12只,灌胃治疗持续12周,观察大鼠一般情况。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胃黏膜组织病理学改变;化学比色法检测胃黏膜组织乳酸含量;免疫组化和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测胃黏膜组织MCT1,MCT4,CD147蛋白和mRNA表达。结果:四君子汤加减可显著改善GPL大鼠胃黏膜上皮腺体结构、排列紊乱和细胞异型性等病理表现。与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织乳酸含量显著升高(P<0.01),MCT1,MCT4,CD147蛋白与mRNA表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,四君子汤加减各剂量组乳酸含量均明显降低(P<0.05,P<0.01),四君子汤加减高、中、低剂量组MCT4和CD147蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01),四君子汤加减高、中剂量组MCT4 mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),四君子汤加减高剂量组CD147mRNA表达明显降低(P<0.05)。四君子汤加减对MCT1无显著调控作用。结论:四君子汤加减可显著改善GPL模型大鼠胃黏膜上皮异常组织病理学表现,其机制可能与下调MCT4和CD147过度表达,抑制乳酸外流,改善胃黏膜上皮酸性微环境有关。

三七芪英饮对慢性萎缩性胃炎大鼠的影响

目的观察三七芪英饮对慢性萎缩性胃炎(CAG)的影响。方法30只Wistar大鼠采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合0.04%雷尼替丁制备CAG大鼠模型,于第15周将造模成功大鼠按随机数字表法分为模型组和三七芪英饮高、低剂量组(0.156、0.078 g药粉/m L),每组10只;同时10只Wistar大鼠设为正常对照组,正常对照组和模型组灌服等量的饮用水,直至第30周。观察大鼠一般情况及体重变化,胃、脾和肉眼可见实体瘤形态改变;检测胃组织病理情况并计算成瘤率。采用Western Blot检测单羧酸转运蛋白4(MCT4)、细胞外基质金属蛋白酶诱导物(CD147)及乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达水平;TUNEL实验观察细胞凋亡情况。结果与正常对照组比较,模型组胃黏膜上皮腺体结构排列紊乱,腺体萎缩、数量减少,细胞核极性减弱,大鼠体重下降(P<0.01,P<0.05),MCT4、CD147和LDHA蛋白表达均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞数增多。与模型组比较,三七芪英饮高、低剂量组均可改善胃黏膜腺体萎缩程度,提高腺体细胞数量,降低模型胃黏膜肿瘤的发生率;MCT4、CD147和LDHA蛋白表达降低(P<0.01),TUNEL阳性细胞减少。结论三七芪英饮能有效改善MNNG复合法诱导CAG大鼠胃黏膜萎缩和细胞凋亡程度,其作用机制可能通过降低MCT4、CD147和LDHA的过度表达,抑制胃黏膜细胞糖酵解,减少乳酸的合成与转运有关。