南非Ⅱ型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立

为满足口岸对南非II型口蹄疫检测、监测的需求，在对南非II型口蹄疫抗原表位分析及相关基因合成的基础上，进行融合蛋白pGEX—VP1-VP3的体外表达，采用柱上酶切方法制备VP1-VP3蛋白。将纯化VP1-VP3抗原包被96微孔板，分别优化抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度，确定阴性临界值。经反复优化，建立的南非II型间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为6．4ug／ml，血清最佳稀释度为1：200，酶标二抗最佳稀释度为1：4000，阴性临界值（0D450）为0．562。检测样品判定标准为：OD450〉0．622为阳性，OD450〈0．502为阴性，0．502≤OD450≤0．622为可疑。特异性试验结果表明，所建立方法与其它血清型口蹄疫间无交叉反应。南非II型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立为我国口岸口蹄疫检疫提供了新的查验方法。