基于表面修饰的高灵敏度免疫分析方法检测牛奶中的卡那霉素

目的为了提高卡那霉素的检测灵敏度,将卡那霉素分子直接共价固化在酶标板上,由此开发一种直接免疫分析方法检测卡那霉素。方法本研究采用戊二醛以及聚乙二胺(polyamidoamine,PAMAM)-戊二醛两种方式,对酶标板进行表面修饰,同时通过酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)比较两种方式的差异,并对牛奶样本中卡那霉素进行检测。结果基于戊二醛表面修饰的ELISA检出限为0.219 ng/mL,线性范围为2.251~87.791 ng/mL;基于PAMAM-戊二醛表面修饰的ELISA检出限为0.119 ng/mL,线性范围为1.348~20.414 ng/mL。此两种方法比常规ELISA方法灵敏度分别提高5倍和10倍。将基于PAMAM-戊二醛表面修饰的ELISA应用于牛奶样本的检测,发现卡那霉素的检出率为12.5%,最高检出质量浓度为1.12 ng/mL。结论本研究采用的戊二醛以及PAMAM-戊二醛两种方式修饰酶标板后大大提高了免疫检测的灵敏度,为食品中小分子污染物的快速筛查提供了新的思路。

分子印迹电化学发光传感器的制备及其对卡那霉素的测定应用

制备了硫化镉量子点-壳聚糖(CdS-CS)复合物修饰的玻碳电极(GCE),记作CdS-CS/GCE。以卡那霉素为模板分子,3-氨基苯硼酸(APBA)为功能单体,采用循环伏安法在CdS-CS/GCE表面电聚合得到了分子印迹聚合物(MIP)膜,所制备的传感器记作MIP/CdS-CS/GCE。卡那霉素可与传感器表面的MIP特异性结合,占据印迹孔穴,阻断共反应剂K2S2O8扩散到电极表面的通路,使电化学发光强度减弱。以传感器在空白溶液中的电化学发光强度(I_(0))与传感器在卡那霉素标准溶液中的电化学发光强度(I)的差值ΔI(ΔI=I_(0)-I)作为响应信号,在优化的试验条件下,响应信号ΔI与卡那霉素浓度的对数值在1.0×10^(-11)~1.0×10-7mol·L^(-1)内呈线性关系,相关系数为0.9990,检出限(3S/N)为5×10^(-12)mol·L^(-1)。按标准加入法对实际样品进行回收试验,回收率为99.9%~103%,测定值的相对标准偏差(n=5)为2.5%~4.3%。

电针对硫酸卡那霉素慢性损害后豚鼠听皮层葡萄糖代谢功能的影响

目的观察电针对硫酸卡那霉素慢性损害后豚鼠听皮层葡萄糖代谢的影响并探讨相关机制。方法105只成年豚鼠随机分为对照组、模型组和电针组。对照组每日颈背部皮下注射生理盐水(500 mg·kg^(﹣1)),连续7 d;模型组和电针组注射硫酸卡那霉素(500 mg·kg^(﹣1)),连续7 d,电针组在每次注射结束30 min后予电针翳风及听宫穴;两组根据观察的时间不同,分为第1、第7、第14、第28、第56、第70和第140天7组。应用正电子发射断层显像(positron emission tomography,PET)/X线计算机体层成像(computer tomography,CT)技术观察豚鼠听皮层葡萄糖代谢功能的变化规律,酶化学法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)活性。结果与对照组比较,模型组第140天组豚鼠听皮层与小脑标准摄入值(standard uptake value,SUV)最大值的比值的平均比值增大(P<0.05);与模型组相比较,电针组第28和第56天组豚鼠听皮层与小脑SUV最大值的比值的平均比值增大(P<0.05)。与对照组比较,模型组第1、第14和第28天组豚鼠听皮层LDH活性升高(P<0.05),第7、第56、第70、第140天组豚鼠听皮层LDH活性无明显变化(P>0.05);与模型组比较,电针组第1、第14和第28天组豚鼠听皮层LDH活性降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组豚鼠听皮层SDH活性变化差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,电针组第7、第14、第28、第56天组豚鼠听皮层SDH活性升高(P<0.05)。结论硫酸卡那霉素慢性损害后,豚鼠听皮层葡萄糖代谢功能可发生重塑;电针可能通过减弱LDH活性及增强SDH活性,减少葡萄糖的无氧酵解,增加有氧代谢,提高葡萄糖代谢水平,促进硫酸卡那霉素慢性损害后豚鼠听皮层葡萄糖代谢功能的重塑进程。

基于改进G-四链体DNA酶的电化学适配体传感器构建及卡那霉素高灵敏检测

将阳离子多肽(peptide)与G-四链体DNA酶(G4 DNAzyme)共价组装得到高活性的G4 DNAzyme-peptide复合物,进一步构建新型电化学适配体传感器,研究该复合物对电化学适配体传感器响应性能的影响,并将该传感器用于牛奶中卡那霉素(KANA)的检测分析。结果表明:G4 DNAzyme-peptide可以显著放大电化学信号,明显提高传感器检测灵敏度;在捕获探针序列最优浓度(2.0μmol/L)下,电流信号强度变化与目标物浓度(0.06 pmol/L~20 nmol/L)对数值呈良好的线性关系,检测限为0.02 pmol/L,优于其他KANA检测方法;该传感器对KANA具有良好的选择性,在实际牛奶样品检测中,KANA的加标回收率为97.1%~105.5%,相对标准差为3.60%~5.74%,且检测结果与ELISA法一致,说明该传感器能够实现牛奶中KANA的高灵敏检测。

电针对硫酸卡那霉素慢性损害后豚鼠听皮层抑制素和吞蛋白-A1表达的影响

目的探讨硫酸卡那霉素慢性损害后豚鼠听皮层蛋白质组的变化,以及电针对抑制素和吞蛋白-A1表达的影响。方法105只成年健康杂色豚鼠随机分为对照组(7只)、硫酸卡那霉素模型组(49只,模型组)、硫酸卡那霉素+电针组(49只,电针组)。模型组与电针组连续注射硫酸卡那霉素7天,电针组注射半小时后予以电针翳风穴和听宫穴15分钟,连续7天,对照组注射等量生理盐水;模型组与电针组根据药物注射后时间再分为注射后1、7、14、28、56、70、140天组(每组7只)。采用双向电泳技术、质谱鉴定分析筛选并切取21个表达差异明显的蛋白点进行鉴定,蛋白质印迹法检测抑制素与吞蛋白-A1的表达。结果①灰度差异2倍以上的差异表达蛋白质有抑制素、吞蛋白-A1等18种。②与对照组相比,模型组注射后第14、28、56天抑制素表达降低(P<0.05),第1、14天吞蛋白-A1表达增高(P<0.05);与模型组相比,电针组注射后第7、70天抑制素表达增高(P<0.05),第14、28、56天吞蛋白-A1表达降低(P<0.05)。结论抑制素等18种蛋白质可能参与了硫酸卡那霉素致豚鼠听皮层慢性损害的过程,电针听宫穴与翳风穴可能通过调节抑制素、吞蛋白-A1的表达促进听皮层的重塑进程。

肉制品中卡那霉素胶体金快速检测试纸条的研制

为实现对肉制品中卡那霉素残留的快速检测,研制了一种卡那霉素胶体金检测试纸条.根据实验结果确定了胶体金试纸条的最佳制备条件,然后对研制的试纸条的灵敏度、特异性和稳定性进行测试.结果表明,该试纸条的最低检测限为100μg/L,试纸条对卡那霉素具有明显的特异性,稳定性好.该试纸条能够用于肉制品中卡那霉素残留的快速检测,而且经济、简便,具有实用价值.

分光光度法测定卡那霉素的研究

在ｐＨ６．５～８．８的水溶液中，作为氨基糖甙类广谱抗生素的卡那霉素与Ｃｕ２＋离子迅速反应形成稳定的２∶１带正电荷络合物，其λｍａｘ为２５６ｎｍ，其表观ε为１．８１×１０３Ｌ·ｍｏｌ－１·ｃｍ－１。卡那霉素含量在１．３０～１２０ｍｇ／Ｌ范围内遵从比耳定律，并探讨了络合物的结构。该方法用于注射用硫酸卡那霉素样品中卡那霉素含量的测定，结果与常规的抗生素微生物法相比，具有简便和快速的优点。

丁胺卡那霉素复方制剂治疗鸡大肠杆菌病的作用分析

近些年来,我国畜禽养殖产业规模不断扩大,尤其各地区经济水平大幅度提升下,人们经济收入持续增长,物质生活品质也得到很大程度上的改善,“餐桌”上的美食种类越来越多样化。如今在现代化新进科技的支持下,鸡养殖早已实现规模化、系统化,但同时也带来了一定的疾病威胁,尤其一些传染性疾病较为多发,在很大程度上影响了鸡养殖企业的良好发展。

高效液相色谱法-蒸发光散射检测器结合化学计量学方法测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素A

将高效液相色谱法-蒸发光散射检测器和化学计量学方法结合起来,建立了一种新的测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素A含量的方法。考察了流动相的种类、比例以及检测器的条件等对测定的影响。实验确定的色谱条件为:C_(18)色谱柱(200mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇:水(50:50);蒸发光散射检测器;漂移管温度50℃;增益50。实验结果表明,该方法的RSD为6.5%。根据经化学计量学方法处理后的图谱计算样品中卡那霉素A的含量为0.08g/mL。

复方卡那霉素眼药水中卡那霉素和地塞米松的含量测定

目的 :解决复方卡那霉素眼药水中卡那霉素和地塞米松的含量测定问题。方法 :在复方卡那霉素眼药水中加入衍生试剂 ,使卡那霉素形成二氢吡啶衍生物 ,利用其在紫外有吸收的特点进行测定。地塞米松的测定因受到对羟基苯甲酸乙酯的干扰 ,所以采用双波长分光光度法进行测定。结果 :卡那霉素在 8～ 2 0 μg/ml范围内呈线性r=0 .9998,地塞米松在 1 2～ 2 0 μg/ml范围内呈线性r=0 .9998,卡那霉素和地塞米松的平均回收率分别为 X =99.92 % (RSD为 0 .4 0 % )和 X =99.52 % (RSD为 0 .4 2 % )。结论 :方法快速 ,简便、准确。

硫酸卡那霉素及其注射液的HPLC衍生化测定

以异硫氰酸苯酯（ＰＩＴＣ）为衍生试剂，用往前衍生化反相ＨＰＬＣ分离测定硫酸卡那霉素及其注射液。对杂质卡那霉素Ｂ采用归一化法进行了检查。

MTB对阿米卡星和卡那霉素耐药相关rrs与eis基因突变的研究

本研究搜集了吉林省全部9个地级市结核病医疗机构2014-2017年内1357株结核分枝杆菌分离株。采用比例法进行Am和Km的药物敏感性试验，并对rrs和eis缸基因进行PCR和测序分析。发现28株同时耐Km和Am，单耐Km者有2株；其中26株MTB的rrs基因均发生突变，基因突变率为92．86％；6株菌存在g妇基因突变，突变率为21．43％。60株对照株未发现基因突变。吉林省MTB对Am和Kin存在较高的交叉耐药现象；rrs基因的突变可以作为两者交叉耐药的分子标志，为建立耐Am和（或）Km结核病快速检测技术提供分子基础。

HPLC-CAD法同时测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素和卡那霉素B的含量

目的:建立HPLC-CAD法测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素和卡那霉素B含量的方法。方法:采用Boston Green ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.2 mol·L^(-1)三氟醋酸溶液-甲醇(95∶5)作为流动相,流速:1.0 ml·min^(-1),柱温:30℃,喷雾温度:55℃,喷雾压力:56.4 psi。结果:卡那霉素在0.385~38.500μg·ml^(-1)之间呈现良好的线性关系(r=0.999 9),检出限为0.075μg·ml^(-1),定量限为0.154μg·ml^(-1),回收率为100.97%(n=9)。卡那霉素B在0.374~37.400μg·ml^(-1)之间呈现良好的线性关系(r=1.000 0),检出限为0.075μg·ml^(-1),定量限为0.150μg·ml^(-1),回收率为100.44%(n=9)。结论:建立的HPLC-CAD测定卡那霉素和卡那霉素B含量的方法检出限低,操作简单准确,可以有效控制硫酸卡那霉素注射液的质量。

二阶导数高速脉冲极谱法用于卡那霉素的定量分析

将二阶导数高速脉冲极谱法用于卡那霉素及其制剂的定量分析,先将卡那霉素与茆三酮缩合,产生具有极谱活性的>C=0再行测定,于-0.37V(VSAg/AgCl)处出现良好的导数峰,在0.46～2.30×10^(-3)mol/L范围内,浓度与峰电流呈线性关系。检测限为4.6×10^(-8)mol/L。

HPLC-CAD法测定硫酸卡那霉素及注射液含量及有关物质

目的建立测定硫酸卡那霉素原料及其注射液中有关物质与卡那霉素含量的高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLCCAD)方法。方法采用Waters HSS T3色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以0.2 mol/L三氟乙酸水溶液为流动相,流速0.3m L/min,柱温30℃,电喷雾检测器的喷雾器温度为35℃。结果新建方法对卡那霉素与硫酸盐、有关物质分离良好,精密度、重复性、回收率均满足分析要求。卡那霉素浓度与峰面积线性关系良好(R2>0.99),检出限可达到6.1ng。采用该方法对单硫酸卡那霉素、硫酸卡那霉素以及硫酸卡那霉素注射液进行了测定,检出的有关物质个数及含量均高于现行标准的结果。结论新建方法灵敏度更高、分离度更好,能检出更多杂质,可以满足硫酸卡那霉素原料及注射液有关物质及含量测定分析要求。

复方卡那霉素可溶性粉组分含量的测定

通过实验筛选,采用分光光度法测定复方卡那霉素可性粉盐酸多西环素含量,采用微生物效价测定法测定复方卡那霉素可溶性粉卡那霉素的含量,回收率分别为98.3%和98.4%,相关系数达到0.9993。方法简便,结果准确可靠。

金纳米微粒作探针共振瑞利散射光谱法测定卡那霉素

在一种含柠檬酸盐的溶液中,柠檬酸根阴离子自组装于带正电荷的金纳米微粒表面,使金纳米微粒成为一种被柠檬酸根包裹的带负电荷的超分子化合物.在pH4.4-6.8的弱酸性介质中,它可与质子化的卡那霉素(KANA)阳离子借静电引力、疏水作用力结合,形成粒径更大的聚集体(平均粒径从12增至20nm),这种聚集体的形成在引起金纳米的等离子体吸收带明显红移(△λ=102nm)的同时,共振瑞利散射(RRS)显著增强并且倍频散射(FDS)和二级散射(SOS)等共振非线性散射也有较大的增强,最大散射峰分别位于280nm(RRS),310nm(FDS)和480nm(SOS)处.在适当条件下,散射强度(△I)与卡那霉素的浓度成正比,其中RRS法灵敏度最高,因此金纳米微粒可作为测定卡那霉素的高灵敏RRS探针,它对卡那霉素的检出限为10.52ng·mL-1,方法有较好的选择性,可用于血液中卡那霉素的测定,文中还讨论了有关反应机理和RRS增强的原因.

卡那霉素对棉花下胚轴愈伤组织生长的影响

以三个具有不同特点的棉花新品系为试材的研究表明，卡那霉素对棉花下胚轴的愈伤组织形成和增殖均有明显的抑制作用，随其浓度的增加，愈伤组织形成的频率降低，增殖的倍数减少；当浓度增加到１００ｍｇ·Ｌ－１时，愈伤组织严重褐化，其正常生长受到完全抑制；

卡那霉素对不同小麦品种的效应及其在遗传转化筛选中的应用

为建立利用卡那霉素筛选遗传转化小麦的有效体系,采用不同浓度的卡那霉素对小麦西农1376、郑麦9023、豫麦18、小偃22种子及幼苗进行筛选处理,并较为系统地研究了不同品种、不同时期及西农1376T1植株对卡那霉素的反应。结果表明,不同小麦品种幼苗期对卡那霉素的抗性存在显著基因型差异,同一品种存在不同的敏感时期和敏感浓度。西农1376幼苗的适宜筛选时期为三叶一心前,用20000 mg/L卡那霉素可对西农1376小麦转基因后代植株有效进行初步筛选。

卡那霉素对大豆生长的抑制及筛选试验研究

用 3个大豆品种作为研究材料 ,研究了卡那霉素对种子萌发、子叶节培养、茎尖和组培苗生根的抑制效应。结果表明不同的外植体对卡那霉素的反应存在较大的差异 ,用卡那霉素浸泡种子 ,浓度最好是 10 0 0ppm ,而种子在含卡那霉素培养基上萌发 ,一般为 10 0 - 2 0 0ppm效果较好 ,子叶节在生长培养时卡那霉素可采用 5 0 - 10 0ppm。而茎尖、子叶节组培苗 ,一旦放入含有卡那霉素培养基内 ,不论浓度多少 ,无一生根。不同的基因型亦稍有差异。所以在筛选转化子之前一定要进行临界浓度的筛选试验。