白藜芦醇通过介导GAL-3表达促进卵巢癌细胞凋亡并增强其化疗感性

目的 探讨白藜芦醇(RES)对卵巢癌细胞凋亡和化疗敏感性的影响及其作用机制。方法研究样本为卵巢癌SKOV3细胞,分为3组,每组11株,均进行常规培养,对照组不给予干预,顺铂组给予10μmol/L顺铂干预,RES+顺铂组给予50μmol/L RES+10μmol/L顺铂干预。采用CCK-8实验检测细胞活力,BrdU实验检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡试验检测细胞凋亡,比色测定试验检测caspase-3活性,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力,侵袭试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹分析caspase-3、GAL-3、p-Akt、AKT、Iκβα、P65、Bcl-2、 p-IKKα/β蛋白相对表达。结果 RES+顺铂组、顺铂组、对照组细胞活力分别为(62±14)%、(74±16)%、(98±16)%,细胞增殖率分别为(59±16)%、(76±17)%、(97±17)%,RES+顺铂组、顺铂组细胞活力、细胞增殖率显著低于对照组,RES+顺铂组显著低于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组、对照组细胞凋亡率分别为(64.29±13.14)%、(47.48±9.52)%、(14.72±3.03)%,RES+顺铂组、顺铂组细胞凋亡率显著高于对照组,RES+顺铂组显著高于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组caspase-3活性、蛋白相对表达显著高于顺铂组、对照组(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组细胞迁移量、细胞侵袭量显著低于对照组,RES+顺铂组显著低于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组GAL-3、p-Akt蛋白相对表达显著低于顺铂组、对照组(P<0.05),各组AKT蛋白表达差异无统计学意义(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组p-IKKα/β、P65、Bcl-2、蛋白相对表达显著低于对照组,RES+顺铂组显著低于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组Iκβα蛋白相对表达显著高于对照组,RES+顺铂组显著高于顺铂组(P<0.05)。结论 RES诱导癌细胞凋亡可能与GAL-3水平降低有关。其作用机制可能是通过调节卵巢癌细胞凋亡、转移相关蛋白表达抑制其增殖、侵袭并增强其对顺铂的敏感性。

利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的研究

目的:利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的可能机制,为临床化疗提供有效的依据。方法:①通过GEO在线GEO2R工具从两组数据库(GSE15372和GSE33482)中,分别比较对顺铂耐药的A2780与对顺铂敏感的A2780中的基因表达差异,并筛选出高表达基因和低表达基因;使用维恩图确定两组数据库中耐药的高表达共同差异基因和低表达的共同差异基因。②利用GO分析和KEGG通路富集分析耐药基因的生物学功能。③利用蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络及Cytoscape软件筛选出A2780对顺铂耐药核心靶基因。④利用Kaplan-Meier Plotter工具对Hub基因进行总生存期分析。结果:①两组数据集的高表达共同耐药基因共37个,低表达共同耐药基因共2个。②GO分析结果显示:生物学过程(BP)分析结果表明,耐药基因主要参与着细胞间信号传导、趋化作用等;细胞组成(CC)分析表明,耐药基因主要位于细胞外区域、细胞间隙、细胞表面;分子功能(MF)分析表明,耐药基因参与着趋化因子相结合等作用。KEGG通路富集分析显示,耐药基因主要在细胞因子与细胞因子受体相互作用的信号通路、趋化因子信号通路上发挥作用。③PPI网络及Hub基因筛选结果显示:CCR5、POSTN、LOX、DACT1、RTN1、CCR1、CXCL6、PITX2、SNCA、AREG是核心耐药基因。④Hub基因中POSTN、LOX、DACT1、RTN1、PITX2的高表达与卵巢癌的不良预后有关(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株A2780中顺铂耐药基因的异常表达,在卵巢癌化疗耐药中发挥着重要的作用,需要进一步的体外实验研究来证实其在临床化疗耐药中的作用。

川芎嗪基于KDM2B调控卵巢癌细胞顺铂耐药的机制

目的探索川芎嗪调控卵巢癌细胞顺铂耐药的潜在机制。方法用顺铂(cisplatin,DDP)诱导A2780细胞成为A2780顺铂耐药细胞株(A2780/DDP);将其分为对照组、阴性对照组、干扰组和川芎嗪组。干扰组和阴性对照组分别用si-KDM2B和si-NC进行转染。川芎嗪组给予终浓度为5 nmol·L^(−1)的川芎嗪(培养基溶解)处理细胞,对照组给予相同体积的培养基。每组细胞培养48 h后,收集耐药细胞。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)用于检测mRNA表达水平,噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)用于细胞增殖实验,流式细胞术用于检测细胞凋亡,Western blotting用于检测细胞凋亡相关蛋白[(B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白X(BCL2-associated X protein,Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)]的表达水平。结果赖氨酸特异性去甲基化酶2B(lysine-specific demethylase2B,KDM2B)在A2780/DDP中高表达,A2780/DDP细胞经川芎嗪或者KDM2B敲减处理后可以抑制A2780/DDP细胞增殖、促进细胞凋亡、上调凋亡相关蛋白(Bax和caspase-3)和下调BCl-2的表达水平。结论川芎嗪可能通过调控KDM2B抑制A2780/DDP细胞增殖和促进细胞凋亡。

对不同的卵巢上皮性腺癌细胞株建立裸鼠动物模型的实验研究

目的 :探讨卵巢上皮性腺癌细胞株建立裸鼠动物模型的最佳方案。 方法 :采用两种卵巢上皮性腺癌细胞株CAOV3(贴壁细胞 )、COC2 (悬浮细胞 )对裸鼠进行不同细胞密度皮下接种及不同方法的组织块接种。 结果 :在 5× 10 6/ (0 .2 0ml·只 )到 6× 10 7/ (0 .2 0ml·只 )细胞浓度内 ,两株细胞的成瘤率及肿瘤成形时间与接种细胞量无关。与COC2细胞株相比 ,CAOV3成瘤早 (以组织块接种者为甚 ) ,成瘤率高 ,成瘤后生长缓慢。而COC2细胞株一旦成瘤 ,则肿瘤生长速度极快 ,以至于实验尚未完成荷瘤鼠已死亡。 结论 :在建立卵巢上皮性腺癌裸鼠动物模型的实验中 ,以选用贴壁细胞株。

环境干扰物对卵巢癌细胞株PEO_4增殖的影响

目的 观察环境干扰物壬基酚 ( 4 -n -nonyphenol,NP)、双酚A (bisphenolA ,BisA)、邻苯二甲酸酯二丁酯(DibutylphthalateDBP)对卵巢癌细胞株PEO4 增殖的影响。方法 PEO4 细胞在DMEM培养基 (含 1 0 %小牛血清 )中采用开放式单层贴壁培养。试验前 5d将细胞用PBS洗涤 ,改为在无酚红DMEM培养基 (含 5%活性碳 -葡聚糖处理过的胎牛血清 )中继续培养 ,以耗尽细胞内储存的雌激素 ,实验设溶剂对照、雌激素对照及 3种受试物各 4个剂量组 ,采用MTT法、3H -TdR掺入法及流式细胞术对PEO4 细胞的增殖情况进行分析。结果 3 2 μmol/LNP、32 μmol/LBisA和 96 0 μmol/LDBP对PEO4 细胞处理 72h可产生与雌激素类似的效果 ,即促进PEO4 细胞增殖和细胞DNA合成 ,并推进G0 /G1期细胞进入S期 ,提高细胞增殖指数 ,且其促进增殖作用存在时间 -依赖和剂量 -依赖关系。结论 对 -壬基酚、双酚A和邻苯二甲酸酯二丁酯均能促进雌激素受体阳性卵巢癌细胞株PEO4 增殖 ,提示近几年环境污染加剧可能与女性生殖肿瘤发病率增高有关。

姜黄素诱导卵巢癌细胞株A2780细胞周期阻滞和凋亡

目的 探讨姜黄素对卵巢癌细胞株 A2 780的生长抑制作用及其机制。方法 10～ 5 0μm ol/ L姜黄素作用 6～2 4 h后 ,MTT比色法检测细胞生长活性 ,流式细胞仪测定细胞周期时相变化 ,末端 Td T酶标记技术和 DNA L adder检测细胞凋亡 ;透射电镜观察细胞超微结构变化。结果 姜黄素能显著抑制卵巢癌细胞株 A 2 780的体外生长 ,呈时间与剂量依赖性 ;细胞周期阻滞于 G0 / G1 期 ;部分细胞出现凋亡形态学改变 ,凝胶电泳可见“梯形”条带 ,凋亡率为 6 .4 1%～ 2 8.4 8% (P<0 .0 1)。结论 姜黄素通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制 。

RNAi沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达对细胞增殖能力的影响

目的:构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的H-ras癌基因的短发夹状RNA重组质粒,研究它对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达的抑制作用以及H-ras基因与卵巢癌发生和耐药的关系。方法:运用基因克隆技术构建靶向于H-ras基因的重组质粒pshRNA/H-ras并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM,通过W est-ern blot、RT-PCR检测H-ras蛋白的表达及mRNA转录水平的变化;MTT法检测它对SK-OV3/ADM细胞增殖的抑制作用,AO/EB实验检测pshRNA/H-ras对SKOV3/ADM细胞凋亡的影响。结果:构建的两重组质粒pshRNA/H-ras1、2均能明显抑制H-ras基因的表达。蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pshRNA/H-ras1、2的SKOV3/ADM细胞靶蛋白的抑制率分别为86.87%和92.21%,RT-PCR检测到H-ras基因mRNA转录水平下降;pshR-NA/H-ras1、2明显抑制SKOV3/ADM细胞的增殖,MTT检测转染48h后的抑制率分别为62.4%和47.9%,AO/EB实验观测到转染24h和48h的细胞凋亡率分别为20.3%和35.6%。结论:H-ras基因在耐药的卵巢癌细胞增殖与凋亡过程中发挥作用,重组质粒pshRNA/H-ras可有效地抑制SKOV3/ADM细胞内源H-ras基因的表达和mRNA的转录,并抑制细胞的增殖和促进凋亡的发生,为化疗耐受的肿瘤细胞提供了新的基因治疗手段。

CAR抑制卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的研究

背景与目的:柯萨奇-腺病毒受体(coxsackieandadenovirusreceptor,CAR)最早作为2,5型腺病毒的受体而被人们发现和认识,近年的研究发现它还是粘附分子家族的一员,并参与肿瘤恶性表型改变。本研究通过转染真核表达载体,探讨其对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的影响。方法:利用Westernblot和RT-PCR检测4株卵巢癌细胞CAR的表达;脂质体介导转染含有全长CAR基因的真核表达质粒至SKOV3细胞,经G418筛选出稳定表达的阳性细胞克隆;体外粘附实验及软琼脂克隆形成实验验证CAR对SKOV3侵袭转移表型的影响。结果:4株卵巢癌细胞中,CAR表达水平不同程度下调,其中SKOV3细胞CAR表达缺失。转染后,SKOV3细胞CARmRNA和蛋白质水平表达均明显增高;细胞间粘附力明显增强;软琼脂克隆实验显示转染细胞每孔克隆形成数(25.3±8.9)明显低于未转染组(88.8±14.0)和转染空质粒组(82.5±19.4)。结论:外源性CAR基因的导入可以增强卵巢癌细胞SKOV3间的粘附性,从而抑制肿瘤细胞的侵袭转移表型。

牛黄天龙饮对裸鼠人卵巢上皮性癌SKOV3细胞株抗肿瘤作用的电镜观察

目的利用透射电镜观察了牛黄天龙饮对人卵巢上皮性癌SKOV3细胞凋亡的诱导作用。方法把人卵巢上皮性癌SKOV3细胞种植到BALB/C裸鼠体内,造成荷瘤裸鼠模型,并将荷瘤小鼠模型进行分组,然后对各组裸鼠模型进行不同浓度牛黄天龙饮灌胃给药,22d后取出肿瘤组织,在透射电镜下观察各组肿瘤组织的超微结构。结果牛黄天龙饮可诱导SKOV3细胞凋亡,且有浓度依赖性。低浓度牛黄天龙饮可引起癌细胞凋亡的早期超微结构改变。中、高浓度牛黄天龙饮可引起凋亡的晚期形态改变,而且还可引起细胞坏死。结论牛黄天龙饮诱导SKOV3细胞凋亡是其抑制肿瘤细胞生长的机制之一。

卵巢癌细胞株SKOV-3ipl对缺氧的适应及其与VEGF、Bcl-2蛋白表达的关系

目的 :研究卵巢癌细胞株SKOV 3ipl在缺氧条件下的适应力及其与VEGF、Bcl 2蛋白表达的关系。方法 :贴壁培养卵巢癌细胞株SKOV 3ipl在缺氧条件下培养 (85 %N2 ,5 %CO2 ,1 0 %H2 ,极低氧浓度 :<1 0 0×1 0 - 6 ) ,在不同缺氧时相收集细胞 ,应用免疫细胞化学PARP标记检测细胞凋亡、免疫细胞化学检测VEGF的表达 ,Westernblot检测PCNA及Bcl 2蛋白表达的改变。结果 :缺氧培养 8至 1 6小时后 ,凋亡细胞增加 (与缺氧 0小时相比 ,P <0 .0 1 ) ,PCNA表达下降 (与缺氧 0小时相比 ,P <0 .0 1 )、VEGF无表达 ;缺氧 2 4小时后细胞凋亡与 0小时相比 ,差异无显著性 ,PCNA表达回升 ,Bcl 2蛋白及VEGF表达明显升高 (与缺氧 0小时相比 ,P <0 .0 1 )。结论 :卵巢癌细胞株SKOV 3ipl在缺氧培养 8至 1 6小时内发生凋亡、细胞增殖抑制 ,2 4小时后对缺氧耐受 ,细胞增殖 ;细胞对缺氧的适应可能与VEGF及Bcl

逆转录酶抑制剂对卵巢癌细胞株HO-8910细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

目的 研究逆转录酶抑制剂 (AZT)对卵巢肿瘤细胞端粒酶活性的影响 .方法 采用 TRAP- EL ISA方法检测卵巢癌 HO- 8910细胞在 AZT作用前后端粒酶活性的变化 ,以流式细胞仪分析细胞周期的改变 .结果 AZT作用后的 HO-8910细胞端粒酶活性明显受抑制 ,且细胞的 G2 /M期 DNA含量明显增高 .结论 AZT能明显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 .

miR-21转染对卵巢癌细胞株A2780/Taxol紫杉醇耐药性的影响及机制探讨

目的探讨microRNA-21(miR-21)在卵巢癌化疗耐药中的作用及机制。方法荧光定量RT-PCR法检测miR-21在人卵巢癌细胞株A2780及A2780/Taxol的表达水平,合成miR-21的干扰序列,以脂质体为载体转染A2780/Taxol细胞;MTT法检测细胞转染前后对紫杉醇的耐药性;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测磷酸酶基因(PTEN)、BAX及Bcl-2蛋白。结果 miR-21表达下调后,A2780/Taxol对紫杉醇的IC50值明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞内PTEN、BAX蛋白表达水平增加,Bcl-2表达降低。结论 miR-21在人卵巢癌耐药株中呈高表达,其可能是介导人卵巢癌耐药的主要因素之一,具体机制可能是降低PTEN、BAX及升高Bcl-2来介导肿瘤细胞耐药。

SPAG6促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨抑制精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,SPAG6)对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养正常卵巢上皮细胞(NOE-71)和卵巢癌细胞(SKOV-3、OVCAR-3),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测细胞中SPAG6基因的表达。将4种潜在抑制SPAG6基因表达的“SPAG6-shRNA”质粒分别转染到SKOV-3细胞,RT-qPCR和Western blot实验筛选有效抑制SPAG6基因表达的细胞株;采用细胞计数法和平板克隆实验检测抑制SPAG6基因表达对卵巢癌细胞增殖的影响;运用细胞划痕实验和Transwell实验检测抑制SPAG6基因表达对细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞实验检测抑制SPAG6基因表达对细胞周期的影响;免疫荧光实验和Western blot检测在SKOV-3细胞中抑制SPAG6表达对p27kip1分布的影响。结果:SPAG6基因在卵巢癌细胞SKOV-3和OVCAR-3中的表达均显著高于正常卵巢上皮细胞NOE-71,且在SKOV-3细胞中表达最强。RT-qPCR和Western blot实验显示2种“SPAG6-shRNA”质粒能够有效抑制SKOV-3细胞中SPAG6基因的表达;与对照组细胞相比,抑制SPAG6基因表达能够降低SKOV-3细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.01);平板克隆实验显示抑制SPAG6基因表达能降低SKOV-3细胞的克隆形成率,差异有统计学意义(P<0.01);细胞划痕实验和Transwell实验显示抑制SPAG6基因表达能够降低卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01);流式细胞实验显示抑制SPAG6基因表达能使细胞G0/G1期显著上调,S期显著下调(P<0.01)。SKOV-3细胞中抑制SPAG6表达可降低细胞质中p27kip1的水平而增加细胞核中p27kip1的水平。结论:SPAG6促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

粒细胞集落刺激因子对卵巢癌细胞株生长曲线的影响

目的 :探讨粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)对卵巢癌细胞株生长曲线的影响。方法 :采用 XTT比色法检测不同浓度 G-CSF对卵巢癌细胞株 3AO及 CAOV3细胞生长曲线的影响。结果 :不同浓度 G- CSF作用 2 4～ 1 2 0 h范围内 ,对 3AO及 CAOV3细胞的生长曲线均无明显性的影响 (P >0 .0 5 )。结论 :G- CSF作用较长时间对卵巢癌细胞株 3AO及

Bcl-xL和Caspase3在人卵巢癌细胞株凋亡过程中的调节作用

目的 探讨 Bcl- x L和 Caspase3基因在顺铂诱导人卵巢癌细胞株凋亡过程中的表达及其在肿瘤细胞凋亡中的作用。方法 应用流式细胞术 ,RT- PCR技术和原位杂交技术 ,分别对顺铂诱导人卵巢癌敏感细胞株 (COC1)及卵巢癌耐药细胞株 (COC1/ DDP)的细胞凋亡及其 Bcl- x L和 Caspase3表达进行研究。结果 1不同顺铂浓度 (3、 6、 9.9μg/m l)作用下 COC1和 COC1/ DDP细胞凋亡率不同 ,COC1/ DDP细胞明显低于 COC1(P<0 .0 5 )。 2 COC1和 COC1/ DDP细胞株中均有 Bcl- x L基因表达 ,但 COC1/ DDP表达明显强于 COC1。在 6μg/ m l顺铂作用下 COC1和 COC1/ DDP细胞株中 Bcl- x L基因表达下调 ,以 COC1下降更明显。3原位杂交结果 ,6μg/ m l顺铂作用后 COC1和 COC1/ DDP细胞 Cas-pase3呈阳性 ,可见到凋亡细胞特征性形态学变化。结论 凋亡抑制基因 Bcl- x L在人卵巢癌多药耐药细胞株 (COC1/DDP)中高表达 ,是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因 ,Caspase3在顺铂诱导凋亡的过程中被激活 。

姜黄素单独及联合顺铂对人卵巢癌细胞株3AO,SKOV_3增殖及其对Notch1,Hes1信号表达的影响

目的:检测姜黄素与顺铂单独及联合作用对SKOV3、3AO细胞体外生长及其对Notch1/Hes1信号mRNA表达变化的影响,证实姜黄素通过Notch信号途径影响卵巢癌细胞增殖及可能通过Notch信号途径增加顺铂的化疗敏感性。方法:采用RT-PCR检测姜黄素与顺铂单独及联合作用于人卵巢癌细胞株3AO,SKOV3对Notch1,Hes1信号表达的影响。结果:1 RT-PCR分别检测经不同浓度姜黄素及顺铂处理后的Notch1,Hes1信号表达,灰度分析结果作单因素方差分析,姜黄素组与阴性对照组比较,组间及组内差异均有显著性差异(P<0.05),姜黄素下调目的基因条带的表达。顺铂组与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05),顺铂增强Notch1,Hes1信号表达;2RT-PCR检测经不同浓度(80、40、20μg/ml)姜黄素联合顺铂1.25μg/ml处理后的Notch1,Hes1信号表达,与姜黄素单独作用比较,灰度分析结果作单因素方差分析有显著性差异(P<0.05)。联合用药下调目的基因条带的表达,其可能通过干预Notch1-hes1信号途径发挥协同作用。结论:Notch1信号与肿瘤增殖相关,姜黄素可能通过干预癌细胞的Notch1-hes1信号途径抑制肿瘤细胞的增殖,增加化疗敏感性,与顺铂发挥协同作用。

川芎嗪对人卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM逆转作用实验研究

目的探讨川芎嗪(TMP)逆转卵巢癌A2780/ADM细胞对阿霉素(ADM)的耐药作用及机制。方法应用MTT法测定细胞的药敏性;用荧光分光光度法测定细胞内阿霉素浓度的变化;采用流式细胞术检测耐药细胞凋亡率的变化。结果非细胞毒性剂量川芎嗪能显著降低卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM的IC50,逆转倍数为2.07倍;非细胞毒性剂量川芎嗪能显著增加耐药细胞内ADM的浓度和耐药细胞的凋亡百分率,显著降低P-gp的表达。结论川芎嗪具逆转卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制可能与增加细胞内ADM浓度和抑制该细胞P-gp的表达有关。

异甘草素对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制和诱导自噬作用

目的探讨异甘草素(ISL)对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制作用。方法从30例卵巢浆液性乳头状腺癌患者中提取SKOV3细胞株,采用MTT比色法观察分析ISL对SKOV3细胞株体外增殖的抑制作用;应用Western印迹检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达水平。结果 ISL能够有效抑制SKOV3细胞株的体外增殖,与药物使用时间、剂量呈正比;ISL对SKOV3细胞株作用48 h后,ISL剂量5、10μg/ml的两组细胞自噬相关蛋白表达明显高于对照组(P<0.05)。细胞核进行荧光染色后,出现变圆、破碎以及染色质浓缩的现象。结论 ISL对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖有明显的抑制与诱导肿瘤细胞自噬的作用,是一种有效的治疗检测方法。

上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与VEGF和P53蛋白表达的关系研究

目的研究上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与血管内皮生长因子(VEGF)和P53蛋白表达的关系。方法前瞻性收集新疆维吾尔自治区人民医院的卵巢癌组织标本112例(A组)、卵巢癌旁组织标本85例(B组)及正常卵巢组织标本75例(C组)。采用实时荧光定量PCR法对三组标本中的miRNA-22表达量进行检测。将卵巢癌SKOV-3细胞株分为转染miRNA-22-mimic(转染组)、miRNA-22-NC(空白载体组)及正常对照组。采用实时荧光定量PCR法对各组细胞中的miRNA-22表达量进行测定,通过Transwell小室法对各组细胞的侵袭能力进行检测,并用Western blot法对各组细胞中的P53及VEGF蛋白表达情况进行检测。结果A组miRNA-22表达量较B、C组均明显下降(P<0.05),而B、C组miRNA-22表达量的比较,并无显著差异(P>0.05)。相比正常对照组与空白载体组,转染组细胞中的miRNA-22表达量明显升高(P<0.05),而正常对照组与空白载体组细胞中miRNA-22表达量的比较,无显著差异(P>0.05)。Transwell小室法检测结果发现,转染组卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭能力较正常对照组与空白载体组明显减弱(P<0.05),而正常对照组与空白载体组侵袭细胞数的比较,无显著差异(P>0.05)。Western blot法检测结果发现,转染组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平较正常对照组与空白载体组明显下降(P<0.05),而正常对照组与空白载体组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平的比较,无显著差异(P>0.05)。结论上调miRNA-22表达可起到阻滞卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭的作用,其机制可能与P53和VEGF蛋白表达水平下降密切相关。

PI-103对人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双抑制剂PI-103对卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响。方法:将PI-103、顺铂及两者联合分别作用于SKOV3/DDP细胞,采用CCK-8法检测细胞生长情况,流式细胞技术检测药物单独或联合作用对细胞凋亡的影响;应用Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、核糖体蛋白(rpS6)、磷酸化rpS6(p-rpS6)以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达变化。结果:PI-103能够抑制SKOV3/DDP细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;联合用药可以明显增加对细胞生长抑制和凋亡作用。PI-103能下调Akt和rpS6的磷酸化水平,促DDP上调Bax和下调Bcl-2的表达。结论:PI-103抑制PI3K/Akt/mTOR信号传导通路,促DDP上调促凋亡蛋白及下调抗凋亡蛋白的表达,从而抑制癌细胞生长,诱导其凋亡,增加卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP细胞对DDP的化疗效果。