太子参多糖对卵清白蛋白诱导免疫抑制小鼠肠道免疫应答影响的研究

为研究太子参多糖(PHPS)对模式抗原卵清白蛋白(OVA)引起免疫抑制小鼠肠道免疫应答能力的影响,本研究将84只雄性ICR小鼠随机均分为7组,即PBS对照组(PBS组)、环磷酰胺对照组(CY组)、OVA单独免疫组(OVA-CY组)、铝佐剂对照组(OVA-CY-AL组)、OVA-CY-PHPS低、中、高剂量组(OVA-CY-PHPS-L组、OVACY-PHPS-M组、OVA-CY-PHPS-H组)。除PBS组以外,各组小鼠均于实验开始后1 d~3 d和18 d分别经腹腔注射环磷酰胺(CY,50 mg/kg),建立免疫抑制小鼠模型。于实验开始后4 d~8 d和19 d~23 d,OVA-CY-PHPS-L组、OVA-CY-PHPS-M组、OVA-CY-PHPS-H组小鼠分别灌胃对应剂量PHPS (50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg),PBS组、CY组、OVA-CY组和OVA-CY-AL组小鼠灌胃等体积双蒸水;第9 d和24 d,OVA-CY-PHPS-L组、OVA-CY-PHPS-M组、OVA-CY-PHPS-H组、OVA-CY组小鼠均经腹股沟皮下注射100μg OVA (0.2 m L/只)进行一免和二免。PBS组与CY组小鼠经相同方式注射等体积无菌PBS,OVA-AL组小鼠经相同方式注射OVA/铝佐剂混合液(OVA 100μg+Alum 200μg) 0.2 m L/只。第38 d剖杀各组小鼠,制作十二指肠、空肠、回肠病理切片观察小鼠肠道病变,采用Image-Pro Plus 6.0软件计算各肠段绒毛高度、隐窝深度、肠道上皮中的淋巴细胞数量;采用ELISA法检测各组小鼠各肠段IL-6、TNF-α含量、分泌型免疫球蛋白A (SIgA)抗体水平;采用荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)法检测各组小鼠各肠段细胞因子m RNA的相对转录水平。结果显示,与OVA-CY组相比,各剂量PHPS均能改善免疫抑制小鼠肠道绒毛稀疏、肿胀、破裂的情况,低剂量的PHPS能够显著提高免疫抑制小鼠十二指肠、空肠绒毛高度与隐绒比(V/C)值(P<0.05),低、高剂量的PHPS均能够显著提高免疫抑制小鼠回肠的肠绒毛高度与V/C值(P<0.05);较OVA-CY组,高剂量PHPS能够显著提高免疫抑制小鼠空肠上皮内淋巴细胞的数量(P<0.05),低、高剂量PHPS能够显著提高免疫抑制小鼠回肠上皮内淋巴细胞的数量(P<0.05);与OVA-CY组相比,各剂量PHPS均能够显著提高免疫抑制小鼠十二指肠中IL-6含量及各肠段中TNF-α含量和SIg A抗体水平(P<0.05);与OVA-CY组相比,各剂量PHPS均能够显著上调免疫抑制小鼠各肠段IL-6和TNF-α m RNA的相对转录水平(P<0.05)。上述结果表明,PHPS能在一定程度上修复免疫抑制小鼠肠道黏膜结构的损伤,调节其细胞因子的分泌及其基因的转录水平,增强肠道黏膜免疫功能,从而提高免疫抑制小鼠对OVA的免疫应答能力。本研究为PHPS对动物肠道免疫调节作用的研究提供参考,为进一步开发PHPS提供借鉴。

沙葱多糖对小鼠卵清白蛋白的免疫佐剂作用

本试验旨在研究沙葱多糖(AMRP)对模型抗原卵清白蛋白(OVA)免疫小鼠的佐剂作用。选择40只6~8周龄、体重为(20±2)g的无特定病原体(SPF)级雌性昆明小鼠,随机分为5组,分别为空白对照组(BC组)、OVA免疫对照组(OVA组)、OVA+低剂量沙葱多糖组(LAMRP组)、OVA+中剂量沙葱多糖组(MAMRP组)和OVA+高剂量沙葱多糖组(HAMRP组),每组8个重复,每个重复1只。预试期7 d,正试期34 d。第1~4天和第16~19天,BC组和OVA组小鼠灌胃生理盐水,LAMRP组、MAMRP组和HAMRP组分别灌胃15、20和25 mg/kg BW沙葱多糖,灌胃量为0.2 mL;第5天和第20天,BC组小鼠腹部皮下注射0.1 mL/只生理盐水,其余各组小鼠注射100μg/只OVA溶液,二免后2周进行样品采集。结果表明:1)与BC组和OVA组相比,不同剂量沙葱多糖对试验各阶段小鼠体重和增重率均无显著影响(P>0.05)。2)与BC组和OVA组相比,各剂量沙葱多糖组小鼠胸腺指数均无显著差异(P>0.05);MAMRP组脾脏指数极显著提高(P<0.01),脾脏生发中心直径显著提高(P<0.05)。3)与BC组和OVA组相比,MAMRP组和HAMRP组小鼠血清白细胞介素-10(IL-10)含量极显著提高(P<0.01);与OVA组相比,LAMRP组和MAMRP组血清干扰素-γ(IFN-γ)含量显著提高(P<0.05);各组间血清白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-4(IL-4)含量均无显著差异(P>0.05)。4)与BC组相比,MAMRP组小鼠血清OVA特异性抗体免疫球蛋白G(IgG)含量极显著提高(P<0.01)。综上所述,沙葱多糖可提高小鼠对抗原OVA的免疫能力,进而表现出一定的佐剂效用,可以作为一种有效的疫苗佐剂诱导机体免疫应答;本试验条件下,以灌胃20 mg/kg BW沙葱多糖时佐剂效果较佳。

腹腔注射卵清白蛋白致大鼠内脏高敏感的研究

目的 :建立鸡卵清白蛋白致内脏高敏感大鼠模型 ,研究该模型内脏高敏感与肥大细胞的关联。 方法 :腹腔注射鸡卵清白蛋白使大鼠内脏致敏 ,分别在给药 3d及 2周后用特殊染色法观察结肠肥大细胞的形态学改变。用腹部撤离反射 (abdom -inal withdrawal reflex,AWR)评估致敏大鼠对直肠扩张刺激的内脏感觉改变。 结果 :甲苯胺蓝染色法显示 ,致敏大鼠肠黏膜及肠系膜肥大细胞数量明显增加 (P<0 .0 1)。阿尔辛蓝 -藏红染色法显示 ,对照组及致敏给药后 3d的肠系膜肥大细胞内主要为未成熟颗粒 ,而致敏后 2周肥大细胞内主要为成熟颗粒。直肠扩张显示内脏致敏大鼠 3m l及 5 m l气囊组 AWR评分显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腹腔注射鸡卵清白蛋白致内脏高敏感的作用确切 ,内脏致敏作用很可能和肥大细胞的增生和脱颗粒状态相关。

邻苯二甲酸二丁酯(DBP)与卵清白蛋白(OVA)联合染毒对小鼠肺脏和脾脏组织的氧化应激

为研究邻苯二甲酸二丁酯(dibutylphthalate,DBP)单独染毒及与卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)联合染毒对小鼠肺脏和脾脏组织氧化应激的作用,将BALB/c小鼠随机分为8组:(1)未处理对照组(生理盐水组);(2)0.5mg·kg-1DBP染毒组;(3)5.0mg·kg-1DBP染毒组;(4)50mg·kg-1DBP染毒组;(5)1.67mg·kg-1OVA单独染毒组;(6)0.5mg·kg-1DBP与1.67mg·kg-1OVA联合染毒组;(7)5.0mg·kg-1DBP与1.67mg·kg-1OVA联合染毒组;(8)50mg·kg-1DBP与1.67mg·kg-1OVA联合染毒组。未处理对照组和DBP染毒组每天按体质量给予生理盐水和DBP灌胃。2周后,测定肺脏组织活性氧物种(ROS)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量以及脾脏组织ROS、GSH含量。结果显示,联合染毒组相较于其他组的肺脏组织各指标均有不同的显著性差异(P<0.05),联合染毒组的脾脏组织中ROS含量较其他组有显著差异(P<0.05),而GSH含量无统计学意义(P>0.05)。结果说明,DBP与OVA联合染毒能够增强肺脏组织的氧化应激作用,对于脾脏组织的氧化应激作用不明显;DBP在联合染毒中显示一定免疫佐剂效应。

融合表达淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和卵清白蛋白CD8^+T细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定

依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8+T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8+T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVACD8+T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经PCR扩增和序列测定分析,证实成功构建T细胞表位与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒pYAGFPL＿O,将此重组质粒pYAGFPL＿O转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,获得重组沙门氏菌X4550(pYAGF PL＿O)。用SDS＿PAGE电泳测得重组菌表达的融合蛋白约为30kD。同时,荧光显微镜下观察到X4550(pYAGFPL＿O)发出黄绿色荧光。这些结果表明LCMV和OVAT细胞表位已成功表达。重组菌X4550(pYAGFPL＿O)的获得为研究沙门氏菌载体携带外源抗原的T细胞应答规律及调控机理打下了重要基础。

鸡卵清白蛋白多肽抗皮肤光老化的功能研究

本文以昆明小鼠和鸡卵清白蛋白多肽为研究对象，研究了鸡卵清白蛋白多肽对紫外线损伤的小鼠光老化皮肤的保护作用。实验动物随机分为正常对照组、模型对照组、Vc阳性对照组、卵清白蛋白多肽低剂量组、卵清白蛋白多肽高剂量组五组。除正常对照组外，运用紫外灯管模拟紫外线长期照射各组小鼠皮肤的无毛部分，建立小鼠皮肤光老化模型。同时，用5％Vc溶液、10％的鸡卵清白蛋白多肽溶液、40％的鸡卵清白蛋白多肽溶液分别外涂于Vc阳性对照组、卵清白蛋白多肽低剂量组、卵清白蛋白多肽高剂量组小鼠背部无毛皮肤，正常对照组和模型对照组涂抹蒸馏水。60天后，观察各组小鼠皮肤的表观特征并测定相关生化指标。结果显示，与模型对照组相比，鸡卵清白蛋白多肽高、低剂量组小鼠皮肤光滑，褶皱较浅，富有弹性，红斑极少，接近正常对照组小鼠皮肤；皮肤重量均显著降低（p〈0．01，p〈0．01），羟脯氨酸（HPY）含量均显著降低（p〈0．01，p〈0．05），丙二醛（MDA）含量存在显著差异（p〈0．05，p〈0．05），超氧化物歧化酶（SOD）活力显著增强（p〈0．05，p〈0．05）。说明鸡卵清白蛋白多肽对小鼠光老化皮肤有明显的保护作用。

鸡卵清白蛋白溶液最佳离心分离条件的研究

本文研究了采用离心分离法去除鸡卵清白蛋白(以下简称卵清蛋白)溶液中可见杂质的方法,确定了离心分离的最佳离心速度、离心时间和离心温度。结果表明:离心速度10000r/min、离心时间30min、离心温度4℃可达到最佳的分离效果。本研究具有一定的实用性,可为卵清蛋白溶液作为超滤膜截留性能测试的使用液提供技术保障。

卵清白蛋白-没食子酸-葡聚糖共聚物对白藜芦醇稳定性和抗氧化性的影响

采用碱法接枝和干热美拉德反应制备卵清白蛋白-没食子酸-葡聚糖(ovalbumin-gallic acid-dextran,OVAGA-DEX)共聚物,并通过与卵清白蛋白-没食子酸(ovalbumin-gallicacid,OVA-GA)和卵清白蛋白-葡聚糖(ovalbumin-dextran,OVA-DEX)的比较,分析其理化性质以及对白藜芦醇稳定性和抗氧化性的影响。结果表明:GA或DEX与OVA共价结合,改变OVA的二级结构组成,并提高了其亲水性和乳化稳定性;3种共聚物(OVAGA、OVA-DEX以及OVA-GA-DEX)在Pickering乳液中的粒径分布较均匀,其中OVA-GA-DEX具有更小的平均粒径((85.07±10.74)nm)并显示出其更好的稳定效果;OVA-GA-DEX的包埋有效地保护了白藜芦醇,防止其氧化或降解,并使白藜芦醇具有较高的抗氧化能力。

酶解卵清白蛋白条件的研究及其应用

对卵清白蛋白的最佳水解条件及水解液的应用进行了研究。结果表明 :底物浓度5%、酶用量 50 0 0 μ/ g底物、反应温度 50℃、反应初始 pH 5 0时 ,Flavourzyme对卵清白蛋白的水解度达 55 1 % 。

光谱法研究联苯双酯及其类似物与卵清白蛋白的相互作用

本课题旨在研究模拟生理条件下联苯双酯(DDB)及其类似物与卵清白蛋白(OVA)之间的相互作用,同时研究了DDB猝灭OVA荧光发射的机理。通过荧光光谱法、同步荧光光谱法、三维荧光光谱法结合紫外-可见吸收光谱法对其相互作用进行检测分析发现,DDB及其类似物对OVA内源性荧光具有猝灭作用,计算得到相应的猝灭常数。深入研究发现,它们之间主要作用力是疏水作用,DDB及其结构类似物与卵清白蛋白之间发生了非辐射能量转移,且OVA的构象发生了改变。

钙结合蛋白S100A4对鸡卵清白蛋白诱导的免疫应答作用

目的:探究钙结合蛋白S100A4对鸡卵清白蛋白(OVA)诱导的免疫应答作用。方法:10只C57BL/6雌性野生型(WT)小鼠随机均分OVA组(右踝关节注射OVA 20μg)与OVA联合S100A4蛋白组(右踝关节注射OVA 20μg和S100A4蛋白5μg混合液,即联合组),注射2周后收集2组小鼠引流淋巴结和血清,采用流式细胞术检测引流淋巴结T细胞与树突状细胞(DC)及其活化百分比,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中OVA特异性免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白E(IgE)的水平。结果:流式细胞术检测结果显示,联合组小鼠引流淋巴结中T细胞(CD3+)、DC(CD11c+)、活化T细胞(CD3+CD69+)及活化DC(CD11c+MHC-Ⅱ+)百分比均高于OVA组(P<0.05);ELISA检测结果显示,联合组小鼠血清中OVA特异性IgG明显高于OVA组(P<0.01)。结论:S100A4蛋白能够促进OVA诱导的免疫应答,起着免疫佐剂的作用。

疏水性电荷诱导层析磁性微球分离鸡蛋卵清白蛋白

利用疏水性电荷诱导层析磁性微球从鸡蛋中分离卵清白蛋白,优化卵清白蛋白的分离工艺.辛酸预处理pH为5.8,辛酸加入量为50μL/mL蛋清处理液,磁性微球吸附pH为5.8,洗脱pH为3.8,洗脱时加入NaCl,其浓度为1 mol/L,卵清白蛋白的回收率约为78%,表明疏水性电荷诱导层析磁性微球可以有效分离卵清白蛋白.

过敏原卵清白蛋白诱导慢性哮喘小鼠模型的建立及其免疫应答特征的动态分析

目的 建立过敏原卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)诱导的慢性哮喘小鼠模型,并对该模型免疫应答特征进行动态分析。方法 以OVA经腹腔致敏22只雌性BALB/c小鼠,并经鼻腔反复滴注刺激气道反应,于不同时间点取样进行分析。收集小鼠支气管肺泡灌洗液,进行炎性细胞计数;取灌洗液离心上清,ELISA法检测多种相关细胞因子水平。取小鼠肺组织,制备切片,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法检测肺组织炎性细胞浸润情况,高碘酸-希夫(periodic acid-Schiff,PAS)染色法检测气道上皮杯状细胞增生情况;马松三色(Masson′s Trichrome)及Sircol染色法检测肺组织胶原积累情况。采集小鼠静脉血,分离血清,ELISA法检测血清中OVA特异的IgE、IgG1、IgG2a水平。应用FlexiVent小动物肺功能仪的强制低频振荡模式分析小鼠气道反应性。结果 OVA的反复刺激成功诱导了小鼠气道及肺组织炎性细胞应答、炎性细胞因子积累、气道杯状细胞增生、肺组织纤维化、过敏原特异IgE抗体应答、气道高反应性等哮喘典型指标,且呈现不同应答特征。随着OVA反复刺激,炎性细胞应答、杯状细胞增生有所下降,但胶原沉积增加,而气道的高反应性在末次刺激4周后仍存在。转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)伴随炎性应答的持续呈高表达,TGF-β2及白介素-33(interleukin-33,IL-33)在末次刺激4周后才呈高水平表达。结论 本研究采用OVA持续刺激诱导建立了慢性哮喘小鼠模型,并展现了该模型的免疫应答特征,为慢性哮喘机制的研究、治疗靶点及药物研发奠定了基础。

仿生荧光免疫分析卵清白蛋白

利用分子印记技术， 制备了卵清白蛋白（ＥＡ） 的人工抗体． 研究了其对抗原的特异性吸附能力， 在此基础上， 模拟竞争型免疫反应， 建立了卵清白蛋白的仿生荧光免疫分析方法．

巴卡丁Ⅲ对模式抗原鸡卵清白蛋白的免疫佐剂作用

研究巴卡丁Ⅲ对模式抗原鸡卵清白蛋白（OVA）在小鼠上引起的免疫效果.小鼠分6组（n=8）,对照组为生理盐水组,试验Ⅱ组为OVA组,试验Ⅲ～Ⅴ组在试验Ⅱ组上分别再添加50、100、200μg的巴卡丁Ⅲ,试验Ⅵ组在试验Ⅱ组上再添加200 μg铝胶,每次免疫间隔3周,共免疫2次.免疫后2周后分离小鼠血清和脾淋巴细胞,分析样品中IgG、IgG亚类、IgM水平,淋巴细胞增殖反应以及细胞因子表达情况.结果表明：OVA中添加巴卡丁Ⅲ可以显著提高机体产生更强的IgG,IgG亚类和IgM反应（P＜0.05）;添加巴卡丁Ⅲ试验组显著增强了脾淋巴细胞体外对OVA的刺激增殖指数、细胞因子（IL-4,IL-10,IFN-γ和IL-12）的表达（P＜0.05）.巴卡丁Ⅲ具有很好的佐剂效果,是一个理想的疫苗候选佐剂.

卵清白蛋白特异性T细胞克隆的建立及T细胞受体使用情况分析

目的 体外建立可长期培养的抗原特异性T细胞系及克隆 ,并分析其T细胞受体的使用情况。方法 用卵清白蛋白 (OVA)免疫BALB c小鼠 ,取淋巴结细胞在体外用抗原反复刺激建立抗原特异性T细胞系 ,通过有限稀释法进行克隆 ,应用锚定PCR方法分析其特异的T细胞受体的应用。结果 建立了H 2 d 限制的OVA特异性T细胞系 ,获得了 3株特异性较高的T细胞克隆 ,T细胞系中TCRAV11S4和BV4S1应用频率最高 ,3株T细胞克隆的TCR均为AV5S2和BV2S1,这些T细胞所使用的TCRα链和 β链在CDR3区有明显的共性。结论 获得了卵清白蛋白特异的T细胞系和克隆 。

卵清白蛋白特异性T细胞免疫诱导BALB/c小鼠的调节性免疫应答

目的 研究T细胞免疫后正常小鼠的调节性免疫应答。方法 应用体外扩增的卵清白蛋白 (OVA)特异的T细胞克隆免疫BALB c小鼠 ,3 H TdR掺入法分析细胞增殖 ,3 H TdR标记靶细胞检测杀伤T细胞的杀伤效应 ,间接免疫荧光法分析血清中抗T细胞抗体水平。结果 T细胞免疫后能诱导BALB c小鼠产生调节性T细胞的增殖反应、对靶细胞的杀伤效应以及针对于活化的T细胞的体液免疫应答 ,并进一步降低机体对OVA抗原的应答。

卵清白蛋白诱导小鼠建立哮喘模型的研究现状

哮喘动物模型是研究哮喘发病机制及防治方法的主要工具之一，在哮喘动物模型的建立过程中，卵清白蛋白（ovalbumin，OVA）诱导小鼠建立哮喘模型的方法最为常见。本文回顾了近十年来的国、内外文献，对用该方法建立的哮喘模型的分类，建模过程中小鼠种属、性别及饲养环境的选择，模型制备过程中致敏、激发等主要环节的处理方式，以及哮喘模型的评价方法等问题作一综述。