卷丹百合黄酮提取物抗氧化活性研究

该实验旨在研究卷丹百合黄酮提取物抗氧化活性。以化学法、秀丽隐杆线虫模型为评价方法,用自由基清除率、抗氧化酶活力及线虫寿命等为指标,探究卷丹百合黄酮化合物的抗氧化能力。结果表明,卷丹百合黄酮提取物在料液比为1:10(g:mL)时,抗氧化活性达到最大值,其中DPPH自由基清除率为83.46%,ABTS阳离子自由基清除率为73.26%。卷丹百合黄酮提取物能显著提高线虫体内抗氧化酶活力和谷胱甘肽含量,提高线虫抗氧化能力,起到延长线虫寿命的作用。经过卷丹百合黄酮提取物处理的线虫在氧化应激条件下平均存活时间能达到10 h。卷丹百合黄酮提取物具有良好的抗氧化活性,具备开发食品抗氧化剂或功能食品的潜力。

卷丹百合LlARF12基因的克隆、表达及功能分析

【目的】探究卷丹百合珠芽发生前细胞和组织学层面的变化,讨论卷丹百合珠芽发生的内在机制。克隆生长素响应因子基因LlARF12,为解析LlARF12基因在卷丹百合珠芽发生过程中的作用机制提供参考。【方法】利用石蜡切片的方法对卷丹百合珠芽器官形成前的叶腋部位进行了组织学观测,从卷丹珠芽形成过程的转录组中筛选得到参与珠芽发生的关键基因LlARF12,克隆得到其编码区(CDS)序列,利用生物信息学软件对其进行分析预测,通过qRT-PCR对不同时期、不同种与品种的百合组织中的LlARF12基因进行表达模式分析,并通过VIGS技术对卷丹种球进行LlARF12基因沉默,从而验证其基因功能。【结果】克隆获得LlARF12基因长度为2346 bp,编码781个氨基酸;qRT-PCR结果显示,LlARF12在珠芽发生的小白点时期表达量显著低于未发生珠芽时期、在S1时期植株茎秆上部表达量显著低于茎秆下部、在能够自然发生珠芽的百合品种中表达量显著低于其他百合品种;沉默LlARF12基因导致卷丹珠芽发生时间提前,且发生的珠芽数量增多。【结论】在卷丹百合珠芽发生的S1时期之前,腋生分生组织已经开始启动,此处靠近表皮的薄壁细胞层数增加、细胞核堆积,并且逐渐产生成熟的维管组织。LlARF12在卷丹百合不能发生珠芽的组织部位和时期的表达量普遍更高,推测其在珠芽发生过程中可能发挥转录抑制作用,通过VIGS技术进行的基因功能验证证明了LlARF12对珠芽发生的抑制作用。

百合斑驳病毒在卷丹顶端分生组织中的分布

【目的】百合斑驳病毒(lily mottle virus,LMoV)是危害重要食药用百合卷丹的主要病毒之一,每年给百合种植业造成数十亿的损失。通过原位杂交技术明确LMoV在卷丹顶端分生组织中的分布,为百合脱毒培养提供支撑。【方法】采用种植于贵州省清镇市的栽培卷丹作为试验材料,利用RT-PCR并于NCBI网站下载不同地方LMoV分离物构建进化树鉴定卷丹所携带的病毒种类,据检测结果选取LMoV为对象,基于LMoV基因组序列设计并制备RNA荧光探针,开展卷丹茎尖和根尖石蜡切片组织的RNA原位杂交,观察卷丹茎尖和根尖中LMoV的分布。【结果】RT-PCR检测表明卷丹材料侵染了LMoV,构建进化树发现本实验分离物与吉林和辽宁的LMoV分离物关系最近,原位杂交进而表明卷丹茎尖中LMoV杂交信号主要分布在顶端分生组织下方0.15-0.2 mm的组织中,靠近紧挨分生组织叶原基的初生叶基部有较弱的病毒杂交信号,靠近初生叶的成熟叶顶端中病毒荧光信号强烈,感染LMoV的卷丹分生组织中心纵切面无毒区大小为(0.4-0.6)mm×(0.15-0.2)mm;在根尖0.25 mm×0.2 mm分生组织中无杂交信号分布,在皮层细胞中信号最强烈,在根冠和根伸长区信号较弱。【结论】卷丹顶端分生组织及最接近顶端的一个叶原基[大小约(0.4-0.6)mm×0.2 mm]未发现病毒信号,可作为茎尖脱毒的起始材料。根顶端分生组织外侧根冠有较强病毒信号,不适合作为卷丹脱毒培养的外植体。

卷丹多糖的结构表征及其对PM_(2.5)暴露致小鼠急性肺损伤的影响

对卷丹多糖(Lilii Lancifolii Bulbus polysaccharide,LP)的结构进行表征,并考察卷丹水提液(Lilii Lancifolii Bulbus water extract,LW)及其多糖部位对PM_(2.5)暴露致小鼠急性肺损伤的保护作用。采用水提醇沉法得到LP并利用苯酚-硫酸法测定其总糖含量,利用纤维素层析法对其进行分离纯化,采用凝胶渗透色谱以及1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)柱前衍生化法对LP结构进行分析,并考察了LW和LP对PM_(2.5)暴露致小鼠急性肺损伤的影响。结果测得LP的总糖含量为(70.98±2.36)%,分离纯化得到LP主要成分LP-1的相对分子量为5906 Da,主要由甘露糖和葡萄糖组成,摩尔比为1.00∶2.01。与空白组相比较,模型组小鼠体重增势缓慢(P<0.01),肺组织损伤严重,肺指数以及肺组织中的炎症因子平增加(P<0.01)。与模型组相比较,阳性药(地塞米松)组以及LW和LP组小鼠体重显著增长(P<0.01),肺组织结构均相对完整,肺指数、肺组织病理评分、炎症因子水平显著降低(P<0.05)。并且,相同给药剂量下,LW与LP组之间的疗效基本一致,表明卷丹多糖可能是卷丹有效改善肺损伤小鼠的肺部组织形态,减少肺部炎症因子表达,发挥PM_(2.5)暴露致急性肺损伤疗效的重要药效物质基础。

多因素处理诱导卷丹珠芽发芽和生根研究

为获得卷丹百合珠芽快繁的方法,探究多因素处理对卷丹珠芽发芽和生根的影响,利用多因素方差分析低温预处理、培养基质和培养温度以及三者之间的互作对卷丹珠芽发芽和生根的影响。结果表明,低温预处理与培养基质之间的互作对卷丹珠芽发芽的影响表现为极显著,对珠芽生根的影响表现为显著,且影响占比最大;培养温度对珠芽发芽和生根的影响分别表现为极显著和显著;培养基质仅对珠芽发芽的影响表现为显著;将珠芽经4℃处理14 d后置于26℃发酵锯末中培养,是诱导卷丹珠芽发芽和生根的最佳方式,培养56 d时发芽率可达98.33%,生根率可达98.89%。研究结果阐明了不同培养因素及其互作对卷丹珠芽繁殖的重要性,为卷丹珠芽的离体快繁提供了技术支持,也为珠芽在其他植物生产栽培过程中的应用提供参考。

有机肥部分替代氮肥对卷丹百合品质的影响

在典型的百合种植区,以卷丹百合为研究对象开展田间小区试验,试验设100%化肥处理(CK)、以有机肥中的氮分别替代25%(T1)、50%(T2)、75%(T3)和100%(T4)的化学氮肥5个处理,通过研究百合鳞茎产量及品质指标变化,探讨自制有机肥替代部分氮肥对百合品质的短期效应和适宜用量。结果表明:T1、T2对百合鳞茎单颗重及产量均无显著影响,而T4产量显著下降26.4%;各处理百合鳞茎中氮、钾含量无显著变化,但T2、T3处理磷含量分别显著提高21.36%和22.85%;T4处理百合鳞茎蛋白质含量显著下降16.41%,而纤维素含量显著提高16.67%;淀粉含量随替代量的增加呈先降低后升高的趋势;各处理百合维生素C含量无显著变化,T1对百合鳞茎总糖含量无显著影响,但其在T2和T3中则显著降低约18%。综合考虑产量和品质,供试有机肥替代氮肥量控制在25%以内较好。

卷丹百合生根期镉吸收转运规律初探

为了探讨卷丹百合根系对镉胁迫的生理响应,以卷丹百合为实验材料,设置不同浓度的水培试验,比较不同镉浓度处理的卷丹百合生根期根部镉吸收、转运规律,并比较根系蛋白质表达的差异。结果表明:在镉胁迫下,卷丹百合鳞茎生根期没有富集镉的特性,而卷丹百合根在20μmol/L及以上浓度情况下,富集系数大于1;转运系数分析表明,卷丹百合生根期鳞茎对镉的转运能力很弱,同时卷丹百合根系蛋白质发生了差异表达,这些蛋白功能包括与氧化活性相关的过氧化物歧化酶、与异黄酮分解相关的异黄酮还原酶、多功能调节酶核苷二磷酸激酶b。

卷丹茬口土壤对3种代表性蔬菜幼苗苗期生长的影响

为科学地筛选出适宜卷丹轮作的后茬作物,试验设置卷丹茬口土壤和未作卷丹土壤(CK)2个处理,研究卷丹茬口土壤对萝卜、白菜和黄瓜幼苗苗期生长的影响。结果表明,卷丹茬口土壤对萝卜、白菜和黄瓜幼苗出苗无显著影响,对苗期生长均具有显著的化感抑制作用,其中萝卜和白菜较弱,黄瓜最强,化感综合效应分别为-0.15、-0.13、-0.26。综上所述,3种代表性蔬菜比较,卷丹后茬作物选择根菜类蔬菜萝卜和叶菜类蔬菜白菜较好。

不同植物生长调节剂对卷丹百合扦插繁殖效果的影响

本试验选取生长健壮、无病虫害的优良卷丹鳞茎为试验材料,比较不同浓度(100、300、500 mg/L)IAA、IBA、KT、6-BA处理对卷丹扦插繁殖的鳞茎发生率、繁殖系数、生根数、根长以及新生小鳞茎直径的影响。结果表明,生长调节剂种类与浓度共同影响卷丹鳞片的扦插繁殖效果,其中不同生长调节剂种类之间的影响差异更为明显。与IAA、6-BA、KT相比,IBA处理卷丹的繁殖效果较好,且以100 mg/L IBA处理效果最佳。与6-BA和KT处理相比,IAA和IBA处理卷丹鳞茎发生率较高,其中300 mg/L IBA处理的鳞茎发生率高达100%。

索氏提取法-高效液相色谱法测定卷丹百合中秋水仙碱的含量

利用索氏提取法提取卷丹百合中的有效活性成分秋水仙碱,建立高效液相色谱法(HPLC)测定百合中秋水仙碱的含量。通过单因素试验探究索氏提取过程中样品预处理方式和萃取剂因素对秋水仙碱含量的影响。HPLC色谱条件为色谱柱Hypersil ODS 5μm(4.6 mm×250 mm),甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长为350 nm,流速0.6 mL/min,柱温为30℃。经定量限试验、系统适应性试验、线性关系考察、回收率试验验证,在HPLC色谱条件下,秋水仙碱在0.101~1.522μg/mL浓度范围内线性关系良好,线性回归方程为Y=1.0154X+0.0112,R2=0.9998,平均回收率为99.18%,RSD为0.0038%。湖南、浙江、湖北、山东产地的卷丹样品中的秋水仙碱含量存在差异,其中山东产地的卷丹样品中秋水仙碱含量最高。

卷丹鳞茎腐烂病株及种植土壤真菌多样性研究

为探明药用百合基源植物卷丹发生鳞茎腐烂病后植株与土壤真菌群落结构的变化,解析卷丹鳞茎腐烂病的发生机制,采用分离培养方法鉴定了发生鳞茎腐烂病卷丹的可培养真菌及主要病原菌类群,利用Illumina MiSeq高通量测序技术对比分析了发病土壤与健康土壤真菌群落结构的差异。结果表明,从卷丹病鳞上分离鉴定出273株可培养真菌,其中镰刀属为优势属,这些可培养真菌中共有8属14种具有致病性。发生鳞茎腐烂病卷丹种植土壤中链格孢属(Alternaria)、葡萄孢属(Botrytis)、镰刀属(Fusarium)、青霉属(Penicillium)、栓菌属(Trametes)5个病原菌属的相对丰度分别高出健康土壤0.025、0.006、0.132、0.078、0.002百分点。发病土壤真菌α-多样性高于健康土壤,β-多样性分析显示病土真菌群落结构与健康土壤存在差异。通过Lefse分析确定发病与健康土壤的特定标志物,结果显示,发病土壤的标志物包括头梗霉属(Cephaliophora)、念珠菌属(Candida)、瘤突毛壳菌(Chaetomium strumarium)等,健康土壤的标志物为油瓶霉属(Lecythophora)及其属下种。综上,卷丹种植土壤病原菌积累,真菌多样性与群落结构改变可能是鳞茎腐烂病发生的重要原因。

卷丹与7个百合杂交亲和性的初步研究

【目的】本研究旨在探究卷丹与不同百合种及品种间的杂交亲和性,以期培育出优良性状的卷丹杂交后代。【方法】将卷丹与7个百合种及品种进行远缘杂交,首先采用液体培养基悬滴法测定父本百合的花粉生活力,杂交后统计杂交组合的果实膨大率,并对获得的杂交蒴果进行胚拯救以获得杂种苗。【结果】实验结果表明,7种百合花粉在9号萌发液中(150 g/L蔗糖,200 mg/L硼酸,75 mg/L氯化钙)普遍萌发较好,其中龙牙百合、‘Strawberry Event’的花粉萌发率高于其他父本品种,花粉活力较好。卷丹与亚洲百合杂种系品种远缘杂交的果实膨大率较高,其中与‘Strawberry Event’杂交的果实膨大率最高,为14.7%,并且只有此杂交组合成功获得了2株杂交后代。【结论】本研究表明卷丹与亚洲百合杂种系杂交亲和性更好,为今后卷丹的远缘杂交育种提供了技术支持。

卷丹中新甾体皂苷的分离和鉴定

目的 研究卷丹 (LiliumlancifoliumThunb .)鳞叶的化学成分。方法 用各种色谱技术进行分离和纯化 ,用MALDI TOF MS ,HR SI MS ,IR ,1 HNMR ,1 3CNMR ,DEPT ,1 H 1 HCOSY ,HMQC和HMBC等光谱和波谱技术鉴定其结构。结果 从卷丹鳞叶中分得 2个甾体皂苷 ,鉴定化合物 1为薯蓣皂苷元 3 O {O α L 鼠李糖基 (1→ 2 ) O [β D 木糖基(1→ 3) ] β D 葡萄糖苷 ,化合物 2为薯蓣皂苷元 3 O {O α L 鼠李糖基 (1→ 2 ) O [α L 阿拉伯糖基 (1→ 3) ] β D 葡萄糖苷。结论 化合物 2为新化合物 ,命名为卷丹皂苷A。

高海拔环境下栽培措施对藏产卷丹百合鳞茎生长特性的影响

本研究旨在建立适合我区的卷丹百合(Lilium lancifolium Thunb.)种植技术体系。选用中等带茎苗和大田种植生长4年的藏产卷丹百合鳞茎为实验材料,探究不同栽培措施对卷丹百合鳞茎生长特性的影响情况。结果说明,我区藏产卷丹百合田间试验适宜的种植密度为株距25 cm,产业推广过程中建议种植密度可以调整为株距15 cm,待出苗齐整后铺设防草布,栽培第4年且选用抹除珠芽并打顶的田间管理方式,可以提高其产量,以期能够为藏产卷丹百合在我区推广应用奠定一定的研究基础。

大花卷丹和卷丹的核型研究

利用染色体常规压片法,对辽宁省产大花卷丹和卷丹百合种进行了核型研究。结果如下:①大花卷丹BH31(L.leichtlinii var.maximowicziiBaker.)核型公式为2n=4m(2SAT)+10st+10t;②卷丹BH15(L.lancifoliumThunb.)核型公式为2n=6m(3SAT)+12st+15t+3T。它们不仅在染色体数目、相对长度、臂比和次缢痕数目及其分布有区别,而且核型类型也不同。大花卷丹的核型为3A型,卷丹的核型为3B型。

超声波提取卷丹鳞茎中总黄酮研究

本文对超声波方法和传统方法提取卷丹鳞茎中总黄酮进行试验比较,同时对影响超声波提取卷丹鳞茎中总黄酮的多个因素进行正交实验分析。结果表明:超声提取总黄酮效果较好;超声波法提取的最佳方法条件为:80%乙醇,料液比1∶30,在80℃下提取40 min,连续提取2次,黄酮的总提取率可达到99.25%。

卷丹百合辐射诱变的生物学效应及变异研究初报

【目的】探索药食兼用型卷丹百合辐射诱变的生物学效应、变异特点。【方法】以湖南龙山卷丹百合为材料,用0～3Gy4个不同剂量60Co-γ射线辐射处理其鳞茎,分析其辐射后代的性状表现及变异情况。【结果】经0、1、2、3Gy60Co-γ处理的成苗(株)率分别为100%、100%、60%和0。诱变卷丹百合第1营养世代(VM1)出现较明显的辐射损伤,其株高、茎粗、单株珠芽数、单株鳞茎鲜重均随着辐照剂量的增加而降低。第2营养世代(VM2)的株高、单株珠芽数和单株鳞茎重等性状出现分离,且三者的变异具有一致性,均以2Gy60Co-γ处理的变幅较大。【结论】用60Co-γ射线辐射诱变卷丹百合有明显效果,适宜诱变剂量为2Gy60Co-γ;选择获得1株优良卷丹百合变异株。

卷丹百合提取物的体外抑菌作用研究

为探讨百合不同溶剂提取物的抑菌作用,采用琼脂打孔扩散法和稀释法对百合不同溶剂提取物进行抑菌实验研究。结果表明,百合的不同溶剂提取物对细菌和真菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、藤黄微球菌、绿脓杆菌、黄霉菌以及粪肠球菌)均有一定程度的抑制效果,为百合的进一步开发提供依据。

野生卷丹百合黄酮类化合物抗氧化能力的研究

以野生卷丹百合、兰州百合为材料,测定D-101大孔树脂纯化处理前后的总黄酮含量,并比较卷丹百合、芦丁和兰州百合的抗氧化能力。结果表明,用D-101大孔树脂纯化处理前后卷丹百合中总黄酮含量分别为2.187 9和1.723 4 mg/g,兰州百合在纯化前后总黄酮含量分别为1.650 6和1.326 3 mg/g。卷丹百合总黄酮对O2-.、.OH和DPPH都有良好的清除能力且清除效果强于芦丁及兰州百合,表现为:①当提取物质量浓度达到4.00 g/L时,对O2-.的清除率达到89.64%,比同质量浓度芦丁与兰州百合分别高出70.58%和2.57%;②当提取物质量浓度达到2.40 g/L时,对.OH的清除率为62.83%,而同质量浓度芦丁与兰州百合分别为35.68%和25.35%;③当提取物质量浓度达到1.00 g/L时,对DPPH的清除率为47.45%,在同质量浓度下分别比芦丁与兰州百合高出6.82和7.39个百分点。

卷丹百合化学成分抗肿瘤活性研究

目的对卷丹百合化学成分进行抗肿瘤活性研究。方法采用CCK-8法对百合中分离得到的对香豆酸、没食子酸、芦丁、β-胡萝卜苷进行体外抗肺癌细胞A549、胃癌细胞SGC-7901和HGC-27活性研究。结果对香豆酸对肺癌A549及胃癌SGC-7901细胞增殖具有较弱的抑制活性,高浓度400μg/mL的增殖抑制率分别为30.74%和33.32%,均表现出浓度依赖性。没食子酸对胃癌HGC-27细胞增殖具有明显的抑制作用,且作用随着浓度增大而明显增强,其最高浓度100μg/mL的抑制率高达79.90%。芦丁对肺癌A549细胞增殖具有弱抑制作用,高浓度200μg/mL的增殖抑制率为26.84%;其对胃癌SGC-7901、HGC-27细胞也有抑制作用,高浓度200μg/mL的增殖抑制率分别为35.63%和34.98%。结论卷丹百合中对香豆酸、没食子酸和芦丁有抑制肿瘤活性作用,可为今后卷丹百合的开发和利用提供一定理论依据。