大鼠正畸牙移动牙周组织中叉头框蛋白O1和成骨特异转录因子RUNX2的表达

目的:检测大鼠正畸牙移动牙周组织中叉头框蛋白O1(forkhead box O1,Fox O1)和Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达变化,初步探讨Fox O1和Runx2在正畸牙移动牙周组织改建中的作用及相互关系。方法:将40只8周龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为5组,建立正畸牙移动模型,以上颌左侧加力的第一磨牙为实验侧,右侧不加力的第一磨牙为对照侧。分别加力1、3、5、7、14 d后处死大鼠,解剖分离出含有第一磨牙的牙槽骨制备标本,进行苏木精-伊红(H-E)染色和Fox O1、Runx2免疫组织化学染色,利用Image Pro Plus图像分析系统对染色后的切片做定量分析,采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学处理。结果:Fox O1在牙周膜主要表达于成骨细胞及成牙骨质细胞中,Runx2主要表达于成骨细胞、成纤维细胞及成牙骨质细胞中。实验组加力后,大鼠牙周组织中Fox O1和Runx2的表达增强,在3~5 d内达到峰值,而后表达降低;14 d时与对照组相比无显著差异(P>0.05),其余组与对照组相比均有显著差异(P<0.05)。结论:Fox O1和Runx2参与了正畸牙移动中的牙周组织改建,且主要参与了成骨细胞和骨形成的过程。

叉头框转录因子O1在肾纤维化中的作用及其调控

慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)已成为全球不可忽视的一种慢性疾病,而肾的纤维化是CKD的最终结果和关键性病理特征。在CKD的整个过程中均伴随着肾损伤的修复与愈合,且长期慢性刺激会促使肾纤维化逐渐步向肾衰竭,其主要特征是肌成纤维细胞持续活化及细胞外基质过度产生和沉积。肾的纤维化是一个由多种信号分子介导的多种信号通路参与的协同过程,而TGF-β/Smad和Wnt/β-Catenin信号通路是其中最经典的2个。FoxO1是人体中一个重要的转录因子,在多种细胞类型中表达,参与细胞多种生命活动并发挥重要调节作用。目前的研究已经表明,叉头框转录因子O1(forkhead transcription factor O1,FoxO1)在肾纤维化病变中扮演着重要角色。FoxO1可通过STAT、SIRT1、Wnt/β-Catenin、PI-3K/Akt等多种信号通路调控肾纤维化的发生和发展,例如FoxO1/STAT信号可调节TIF和肾小管凋亡;SIRT1/FoxO1信号可调控氧化应激反应和脂肪毒性;FoxO1/β-Catenin可抑制Wnt/β-Catenin信号通路;PI-3K/Akt/FoxO1通路调节炎症反应及糖脂代谢等。另外,一些相关研究表明,FoxO1/Smad很可能在肾的纤维化中发挥了作用。本文综述了FoxO1在肾纤维化中的作用及其分子调控机制,旨在进一步明确肾纤维化的发病机制,从而为CKD的治疗提供新的方向与前景。

转录因子FoxO1与miR-142-3p在口腔鳞癌中的表达关系及意义

目的探讨转录因子叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)与微小RNA-142-3p(miR-142-3p)在口腔鳞癌(OSCC)中的表达关系及意义。方法选取2016年5月~2018年6月于本院手术中留取的OSCC组织72份为观察组,选取50份形态学正常的癌旁口腔黏膜组织为对照组,比较两组FoxO1、miR-142-3p表达与OSCC临床病理特征的关系及二者的相关性,并采用COX回归模型分析OSCC患者预后不良事件的影响因素。结果观察组较对照组FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05);高分化、中分化、低分化相比,FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均依次降低(P<0.05);与Ⅰ~Ⅱ期相比,Ⅲ~Ⅳ期FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05);与无淋巴结转移相比,淋巴结转移者FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05)。Spearman结果显示,观察组FoxO1、miR-142-3p表达呈正相关(P<0.05)。单因素分析显示,性别、年龄、BMI、病理分级均与OSCC患者不良预后无关(P>0.05),临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是OSCC患者不良预后的影响因素(P<0.05)。多因素分析显示,临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是影响OSCC患者预后发生不良事件的独立危险因素(P<0.05)。结论FoxO1、miR-142-3p与OSCC的发生、发展及预后密切相关,FoxO1可能受miR-142-3p的靶向调控,这一结果可为病情评估及治疗靶点提供临床参考依据。

转录因子FOXO1和干细胞标志物CD133与神经母细胞瘤临床病理因素相关性

目的探究叉头框转录因子O亚族(FOXO)1与干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤(NB)中的表达及其相关性分析。方法使用免疫组织化学方法检测53例NB组织(病例组)和27例癌旁正常组织(对照组)中FOXO1和CD133蛋白表达情况;应用Western印迹检测3例NB组织及3例癌旁组织FOXO1和CD133蛋白表达情况。结果FOXO1在病例组中阳性表达率显著低于对照组;CD133在病例组中阳性表达率显著高于对照组;FOXO1、CD133与临床分期、组织类型和病理分型存在相关性(P<0.05);FOXO1在NB组织显著低于癌旁组织,而CD133在NB组织显著高于癌旁组织;FOXO1和CD133在蛋白表达水平上有明显相关性(P<0.05)。结论FOXO1可能通过负性调节CD133表达来调节NB干细胞特性,是NB发生发展的重要机制。

氧化苦参碱调控FOXO1表达对TNF-α诱导HaCaT细胞炎症因子分泌的影响

目的探讨氧化苦参碱调控叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)表达对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HaCaT细胞炎症因子分泌的影响。方法细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测不同浓度TNF-α对HaCaT细胞增殖活性的影响,筛选TNF-α诱导浓度和时间。将诱导后的HaCaT细胞分为模型组(25μg/L TNF-α)、氧化苦参碱组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,未转染)、氧化苦参碱+LV-NC-GFP组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染空载体)、氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染FOXO1过表达载体),另取正常培养的HaCaT细胞为对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中FOXO1表达水平;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中炎性因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中AKT、TLR-4和FOXO1蛋白表达水平。结果本研究采用25μg/L TNF-α处理24 h诱导HaCaT细胞。与对照组相比,模型组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与模型组相比,氧化苦参碱组和氧化苦参碱+LV-NC-GFP组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与氧化苦参碱+LV-NC-GFP组相比,氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论氧化苦参碱可能通过靶向抑制FOXO1表达降低炎性因子分泌,并可促进HaCaT细胞凋亡,抑制细胞增殖。

叉头框蛋白O1通过信号传导和转录激活因子3信号通路对高糖高脂诱导的H9c2心肌细胞自噬及凋亡影响的研究

目的 探讨叉头框蛋白O1(FoxO1)通过信号传导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对高糖高脂诱导的H9c2心肌细胞自噬及凋亡的影响。方法 H9c2细胞分为正常对照组(Con)、高糖高脂(HG)组、阴性对照(si-NC)组、FoxO1小干扰RNA组(si-FoxO1)、si-FoxO1+STAT3小干扰RNA组(si-FoxO1+si-STAT3)。检测各组细胞增殖、细胞内自噬体、细胞凋亡、活性氧簇(ROS),Western blot法检测各组FoxO1、p-FoxO1、STAT3、p-STAT3、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果 与Con组比较,HG、si-NC、si-FoxO1、si-FoxO1+si-STAT3组细胞MDC阳性细胞、细胞凋亡率、ROS平均荧光强度升高(P<0.05),OD_(450)降低(P<0.05),HG、si-NC、si-FoxO1+si-STAT3组p-FoxO1/FoxO1、LC3Ⅱ、Beclin1、Bax蛋白表达升高(P<0.05),p-STAT3/STAT3、Bcl2蛋白表达降低(P<0.05),si-FoxO1组LC3Ⅱ蛋白表达升高(P<0.05),FoxO1、Bcl2蛋白表达降低(P<0.05)。与HG、si-NC组比较,si-FoxO1、si-FoxO1+si-STAT3组OD450、p-STAT3/STAT3、Bcl2蛋白表达升高(P<0.05),细胞MDC阳性细胞、细胞凋亡率、ROS平均荧光强度、FoxO1、LC3Ⅱ蛋白表达降低(P<0.05),si-FoxO1组p-FoxO1/FoxO1、Beclin1、Bax蛋白表达降低(P<0.05)。与si-FoxO1组比较,si-FoxO1+si-STAT3组细胞MDC阳性细胞、细胞凋亡率、ROS平均荧光强度、FoxO1、p-FoxO1/FoxO1、LC3Ⅱ、Beclin1、Bax蛋白表达升高(P<0.05),OD450、p-STAT3/STAT3、Bcl2蛋白表达降低(P<0.05)。结论 降低FoxO1可激活STAT3信号通路,以实现对高糖高脂诱导的H9c2心肌细胞自噬和凋亡过度的缓解。

转录因子Fox家族与心肌梗死关系的研究进展

转录因子Fox家族在心肌梗死中发挥重要作用。FoxP1既调控巨噬细胞,加重炎症反应;也促进内皮细胞增殖,增加血管新生。FoxO3发挥抗氧化应激和调控自噬作用,同时促进心脏微血管内皮细胞凋亡或抑制心肌细胞凋亡。FoxO4和FoxO6促进心肌细胞凋亡和氧化应激。本文对Fox家族在心肌梗死中的作用及其分子机制作一综述,以期对心肌梗死的诊疗提供新方向。

原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13 FOXO1表达水平及其临床意义

目的探究原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13、FOXO1表达水平及其临床意义。方法选取2019年1月至2022年12月在本院收治的183例原发性肾病综合征儿童作为研究组。另选取同时期在本院体检的185名体检健康的儿童作为对照组,苏木精-伊红(ELISA)法检测血清Apelin-13、FOX-O1水平;采用Pearson法分析Apelin-13、FOXO1水平与血脂指标的关系;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析Apelin-13、FOXO1对原发性肾病综合征的诊断价值;多因素Logistic回归分析影响原发性肾病综合征发生的危险因素。结果与对照组比较,研究组患儿血清Apelin-13水平降低,甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白(apo)B、FOXO1水平升高(P<0.05);与研究组治疗前比较,治疗后血清Apelin-13水平升高,TG、TC、LDL-C、apoB、FOXO1水平降低(P<0.05);Pearson相关性分析表明,原发性肾病综合征患儿血清Apelin-13与TG、TC、LDL-C、apoB均呈负相关,FOXO1与TG、TC、LDL-C、apoB均呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析表明,Apelin-13、FOXO1诊断原发性肾病综合征发生的曲线下面积(AUC)为0.795、0.734,二者联合诊断的AUC为0.920;多因素Logistic回归分析显示,Apelin-13与FOX-O1是影响原发性肾病综合征发生的危险因素。结论原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13呈低表达、FOXO1呈高表达,二者与血脂水平有关,并且对原发性肾病综合征具有一定的诊断价值。

头颈鳞癌患者血清外泌体miR-96-5p高表达抑制FoxO1的生物学意义

目的:通过证实头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)患者血清外泌体(Exos)中miR-96-5p对叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)的靶向调节作用,探讨Exo-miR-96-5p对HNSCC细胞增殖、侵袭、迁移等恶性生物学行为的影响及分子机制。方法:取2020年9月至2022年1月我院收治的HNSCC患者(25例)及同期体检健康者(40例)血清标本,超速离心法提取Exos,RT-PCR检测Exos中miR-96-5p表达;PKH67染液标记Exos后,与HNSCC细胞系-AGZY-973共培养,观察HNSCC细胞对Exos摄取的影响。AGZY-973细胞分为:Control组(加入DMEM培养基正常培养)、HNSCC患者血清Exos组(加入DMEM培养基和50μL HNSCC患者血清Exos悬液共培养)、健康对照者血清Exos组(加入DMEM培养基和50μL健康对照者血清Exos悬液共培养),CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测凋亡率;Transwell检测迁移、侵袭;RT-PCR法检测miR-96-5p表达;Western blot法检测细胞FoxO1及促凋亡蛋白Bax、死亡调解子(Bim)、凋亡蛋白p21表达。双荧光素酶报告试验验证miR-96-5p与FoxO1靶向关系;36只裸鼠分为Control组、Exos组、Exos-miR-96-5p inhibitor组、Exos-inhibitor-NC组、Exos-pcDNA FoxO1组、Exos-pcDNA NC组,每组6只。Control组接种AGZY-973细胞培养液,其余各组分别接种含50μL HNSCC患者血清Exos悬液、Exos-miR-96-5p inhibitor悬液、Exos-inhibitor-NC悬液、Exos-pcDNA-FoxO1悬液、Exos-pcDNA-NC悬液的AGZY-973细胞培养液,28d后,检测瘤体体积及瘤体重量,以验证HNSCC患者血清Exos对miR-96-5p及FoxO1调控的影响。结果:HNSCC患者血清Exos及健康对照者血清Exos均有完整膜,形态呈杯口状,均可被AGZY-973细胞摄取。HNSCC患者血清Exos中miR-96-5p表达高于健康对照者血清Exos(P<0.05)。与Control组相比,HNSCC患者血清Exos组AGZY-973细胞miR-96-5p表达升高,FoxO1及Bax、Bim、p21等凋亡蛋白表达降低,细胞增殖、迁移及侵袭能力升高,凋亡率降低(P<0.05);健康对照者血清Exos对AGZY-973细胞miR-96-5p/FoxO1轴及生物学行为影响不大(P>0.05)。miR-96-5p与FoxO1之间有靶向调控关系。HNSCC患者血清Exos中转染miR-96-5p inhibitor或pcDNA-FoxO1,均可部分逆转Exos发挥的促瘤体生长作用(P<0.05)。结论:HNSCC患者血清Exos可通过传递miR-96-5p,靶向下调FoxO1,发挥促进HNSCC细胞增殖、侵袭、迁移、生长等恶性生物学行为的发展。

血清FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平在冠心病合并高尿酸血症患者中的意义

目的探讨冠心病合并高尿酸血症(HUA)患者叉头转录因子O亚家族成员3a(FOXO3a)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)水平变化的意义。方法选取河南科技大学第一附属医院2021年1月至2022年8月收治的156例冠心病患者为研究对象,根据尿酸水平分为HUA组(62例)和UA正常组(94例)。比较两组一般临床资料及FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平,分析FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平与临床资料中有统计学差异指标及UA水平相关性,采用logistic回归分析影响冠心病合并HUA的危险因素,以受试者工作特征(ROC)曲线分析FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平联合检测对冠心病合并HUA的诊断价值。结果HUA组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平高于UA正常组(P<0.05);HUA组FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平高于UA正常组(P<0.05);相关性分析发现,FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平与TC、TG、LDL-C、UA水平均呈正相关(P<0.05);logistic回归分析发现,TC(>5.04 mmol·L^(-1))、TG(>1.88 mmol·L^(-1))、LDL-C(>2.53 mmol·L^(-1))、FOXO3a(>4.65μg·L^(-1))、sICAM-1(>195.73μg·L^(-1))、NLRP3(>1322.12 ng·L^(-1))水平是冠心病患者合并HUA的危险因素(P<0.05);ROC分析发现,FOXO3a、sICAM-1、NLRP3水平联合诊断冠心病合并HUA的曲线下面积(AUC)为0.811,敏感度、特异度分别为95.16%、67.02%,优于各指标单一指标诊断,具有较高诊断效能(P<0.05)。结论FOXO3a、NLRP3、sICAM-1参与冠心病合并HUA发生过程,且在临床诊断冠心病合并HUA方面具有较高效能。

叉头转录因子O亚家族1及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ在肝癌组织的表达及意义

目的探讨叉头转录因子O亚家族1（FoxO1）蛋白及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）在肝癌组织中的表达及意义。方法免疫组织化学超敏二步法分别检测52例肝癌组织、30例癌旁组织及16例正常肝组织中FoxOl及LC3-Ⅱ蛋白的表达，分析两者表达与各临床病理因素的关系以及两者表达的相关性。结果FoxO1在肝癌、癌旁及正常肝组织中表达主要定位于细胞核，肝癌组FoxO1阳性表达率（46．15％）低于癌旁组（76．67％，P〈0．05），癌旁组阳性表达率低于正常组（81．25％，P〉0．05）；LC3-Ⅱ蛋白在肝癌、癌旁及正常肝组织中表达主要定位于细胞质，肝癌组织中LC3-Ⅱ阳性表达率（40．38％）低于癌旁组（70．00％，P〈0．05），癌旁组阳性表达率低于正常组（75．00％，P〉0．05）。FoxO1及LC3-Ⅱ在肝癌组织中的阳性表达分别与肿瘤大小、Edmondson分级、TNM分期呈负相关（P〈0．05）；Fox01与LC3-Ⅱ在肝癌组织中的表达呈正相关（rs=0．496，P〈0．01）。结论肝癌组织自噬活性降低，Fox01及LC3-Ⅱ表达下调可能参与了肝癌的发生发展过程。

CircFoxo3调节miR-130a-5p/TEAD1轴对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨环状RNA叉头框蛋白O3(CircFoxo3)调节miR-130a-5p/TEA域转录因子1(TEAD1)轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠分为对照组、HF组、si-NC组、si-CircFoxo3组、agomir NC组、miR-130a-5p agomir组、si-CircFoxo3+antagomir NC组、si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射盐酸阿霉素的方法构建HF大鼠模型。建模成功后进行药物处理,每3 d给药一次,持续3周。应用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测心肌组织中CircFoxo3、miR-130a-5p表达水平。应用彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清人基质裂解素2(ST_(2))、N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平。应用HE染色、Masson染色检测大鼠心肌组织病理变化和心肌纤维化情况。通过TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平。应用Western blot法检测大鼠心肌组织TEA域转录因子1(TEAD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1的关系。结果与对照组比较,HF组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化严重,LVESD、LVEDD水平上升,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p和Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、si-NC组比较,si-CircFoxo3组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、agomir NC组比较,miR-130a-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化有所改善,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-CircFoxo3组、si-CircFoxo3+antagomir NC组比较,si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化加剧,LVESD、LVEDD水平升高,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p、Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1存在靶向关系。结论沉默CircFoxo3可能通过海绵化上调miR-130a-5p来抑制TEAD1表达,进而抑制HF大鼠心肌细胞凋亡。

沉默FOXO1基因对人主动脉血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨叉头框转录因子O1(FOXO1)基因对腹主动脉瘤(AAA)血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法:收集19例AAA患者动脉瘤组织(AAA组)及邻近正常主动脉组织(对照组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平,透射电镜观察2组研究对象动脉瘤组织中自噬溶酶体形成情况;Western blotting法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1及自噬相关蛋白卷曲螺旋肌球蛋白样B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)结合蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3α(LC3)和P62蛋白表达水平。体外培养人主动脉血管平滑肌细胞(hVSMCs),并采用FOXO1 siRNA(si-FOXO1)及其阴性对照(si-NC)慢病毒感染hVSMCs,10μmol·L^(-1)血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)联合自噬激活剂雷帕霉素(Rap)进行干预,将细胞分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+si-NC组、AngⅡ+si-FOXO1组、AngⅡ+si-NC+Rap组和AngⅡ+si-FOXO1+Rap组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,ELISA法检测各组细胞上清中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,RT-qPCR法检测各组细胞中FOXO1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中FOXO1、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、Beclin1、LC3和P62蛋白表达水平。结果:与对照组比较,AAA组动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平升高(P<0.05),自噬溶酶体数量增多(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),P62蛋白表达水平降低(P<0.05)。与空白对照组比较,AngⅡ组hVSMCs增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高(P<0.05),细胞中Bax、Cleaved caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),Bcl-2和P62蛋白表达水平降低(P<0.05);与AngⅡ+si-NC组比较,AngⅡ+si-FOXO1组hVSMCs增殖活性升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平降低(P<0.05),细胞中Bax、Cleaved-caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05),Bcl-2和P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。与AngⅡ+si-FOXO1组比较,AngⅡ+si-FOXO1+Rap组细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高(P<0.05),细胞中Beclin1蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05),P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:FOXO1基因沉默可能通过降低自噬水平来提高AngⅡ暴露下hVSMCs增殖活性,并抑制其凋亡,从而参与AAA的发病。

FoxO1过表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其机制分析

观察FoxO1过表达转染后甲状腺乳头状癌(PTC)细胞增殖、凋亡和细胞周期变化情况,并分析相关机制。 方法:于中国医学科学院肿瘤细胞库获取 PTC 细胞株 KTC-1,培养后接种于 24 孔板中,随机分为参照组、过表达组,各 12 孔,予以参照组转染空载体慢病毒,予以过表达组转染 FoxO1 过表达慢病毒,转染培养 72h,观察两组细胞增值率、细胞凋亡率、G0 / G1 期比例;并以 Western Blot 法检测两组细胞磷脂酰肌醇3 激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶 B 蛋白(p-Akt)、Bim 蛋白。 结果:过表达组 KTC-1 细胞增殖率低于参照组,凋亡率高于参照组,G0 / G1 期高于参照组,差异均有统计学意义(P<0.05);过表达组 KTC-1 细胞中 PI3K、p-Akt 低于参照组,Bim 高于参照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论:FoxO1 过表达能够减少肿瘤细胞增殖、使细胞停滞在 G0 / G1 期、诱导细胞凋亡,控制 PTC 发展,上述作用受 PI3K / Akt / Bim 通路调控。

微小RNA-96靶向叉头框转录因子O1促进肺癌细胞增殖和迁移

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-96通过靶向叉头框转录因子O1(FOXO1)促进肺癌细胞增殖和迁移的作用。方法应用茎环反转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-96在肺癌细胞株中的表达;干扰慢病毒感染抑制miR-96表达后,分别利用细胞增殖试验(CCK-8)和划痕试验检测其对肺癌细胞增殖和迁移的影响;蛋白质印迹法(Western blot)和双荧光素酶活性试验验证miR-96靶基因FOXO1。应用GraphPad Prism 5统计学软件进行分析,计量资料比较采用t检验。结果CCK-8实验显示抑制H1299细胞miR-96表达后,实验组24、48、72 h吸光度值分别为1.293±0.019、1.684±0.038、2.180±0.034,明显低于对照组的1.655±0.056、1.880±0.020、2.493±0.060,差异有统计学意义(t=5.646、4.426、14.670,P<0.01);划痕试验显示对照组4 h和10 h细胞迁移率为(29.21±3.96)%、(47.49±3.33)%,明显高于实验组[(5.80±2.94)%、(13.63±3.18)%],差异有统计学意义(t=4.748、7.352,P<0.01);筛选miR-96靶基因FOXO1,将miR-96过表达后,肺癌细胞FOXO1表达明显降低;反之,抑制miR-96表达后,FOXO1表达明显增高。荧光素酶活性试验显示miR-96和FOXO13’非翻译区(3’UTR)野生型质粒共转染后,野生型为(22.5±7.6)%,与对照组的(97.2±13.2)%及突变型的(115.6±13.5)%比较,荧火虫/海肾荧光素酶比值明显降低(t=14.750、12.040,P值均<0.01)。结论miR-96通过靶向调控FOXO1促进肺癌细胞增殖和迁移。

吉马酮通过FOXO3-FOXM1轴调控甲状腺癌BCPAP细胞的增殖、迁移和化疗耐药

目的:探究吉马酮通过叉头盒蛋白O3(FOXO3)-FOX亚类M1转录因子(FOXM1)信号通路调控人甲状腺癌细胞BCPAP和多柔比星(DOX)耐药BCPAP细胞(BCPAP/DOX)的增殖、迁移和化疗耐药。方法:常规培养BCPAP细胞,用BCPAP细胞构建BCPAP/DOX细胞,用MTT法检测不同浓度吉马酮对BCPAP和BCPAP/DOX细胞增殖的影响。将BCPAP和BCPAP/DOX细胞分为Ctrl组(空白对照)、sh-NC组(转染sh-NC质粒)、低浓度吉马酮组(0.10 mmol/L)、高浓度吉马酮组(0.15 mmol/L)、高浓度吉马酮(0.15 mmol/L)+sh-FOXO3组(转染sh-FOXO3质粒),用转染试剂将sh-NC质粒和sh-FOXO3质粒转至相应的BCPAP和BCPAP/DOX细胞中。用CCK-8法、划痕愈合实验和WB法分别检测各组细胞的增殖、迁移能力,以及FOXO3、FOXM1、BAX、MMP-9和多药耐药-1(MDR-1)蛋白的表达。结果:在BCPAP和BCPAP/DOX细胞中成功地敲减了FOXO3的表达,低浓度和高浓度吉马酮均可显著抑制BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖、迁移能力,降低细胞中FOMX1、MMP-9或MDR-1(BCPAP/DOX细胞)蛋白的表达,提升FOXO3和BAX蛋白的表达(均P<0.05),与低浓度比较,高浓度吉马酮的作用更为显著(均P<0.05),敲减FOXO3后可部分逆转吉马酮对这两种细胞的作用(均P<0.05)。结论:吉马酮可能通过FOXO3/FOXM1信号通路调控BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖和迁移能力,降低BCPAP/DOX细胞化疗耐药性。

颅脑外伤患儿血清FoxO3a和Cav-1水平变化及其临床意义

目的探讨颅脑外伤患儿血清叉头框转录因子O3a(FoxO3a)和陷窝蛋白-1(Cav-1)水平变化及其临床意义。方法选取2020年12月—2022年11月南京医科大学附属儿童医院颅脑外伤患儿107例,根据格拉斯哥昏迷评分(GCS)分为轻度组(49例)、中度组(37例)和重度组(21例)。收集所有患儿临床资料,并检测血清FoxO3a、Cav-1水平。对所有患儿从入院当日起连续随访60 d,根据预后情况分为预后不良组和预后良好组。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价FoxO3a、Cav-1判断颅脑外伤患儿预后的效能,采用多因素Logistic回归分析评估颅脑外伤患儿预后不良的危险因素。结果轻度组、中度组和重度组血清FoxO3a和Cav-1水平均依次升高(P<0.001)。预后不良组血清FoxO3a和Cav-1水平均显著高于预后良好组(P<0.001)。血清FoxO3a和Cav-1单项检测和联合检测判断颅脑外伤患儿预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.764、0.843、0.908。预后不良组入院GCS得分≤8分、合并其他脏器损伤、受伤至入院时间、D-二聚体(DD)、白细胞(WBC)计数、血小板(PLT)计数均高于预后良好组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,入院GCS评分≤8分、合并其他脏器损伤、FoxO3a≥6.31 ng·mL^(-1)、Cav-1≥23.15 ng·mL^(-1)是颅脑外伤患儿预后不良的危险因素[比值比(OR)值分别为1.943、2.061、2.649、3.337,95%可信区间(CI)分别为1.414~2.669、1.474~2.881、1.711~4.100、2.076~5.362,P<0.001]。结论血清FoxO3a、Cav-1水平异常与颅脑外伤患儿的病情和预后密切相关,FoxO3a高水平和/或Cav-1高水平是颅脑外伤患儿预后不良的危险因素。

基于SIRT1/FOXO3a信号通路探讨“温阳通脉”灸法对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠炎症反应的影响

【目的】探讨“温阳通脉”灸法防治动脉粥样硬化(AS)的作用机制。【方法】将10只饲喂普通饲料的C57BL/6J小鼠设为空白组;将30只ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化模型,随机分为模型组、辛伐他汀组和艾灸组,每组10只。于造模第1天开始干预,艾灸组小鼠给予膻中、神阙、内关、血海穴艾灸,辛伐他汀组给予辛伐他汀蒸馏水混悬液灌胃,共干预12周。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠胸主动脉病理形态结构,透射电镜观察小鼠胸主动脉内皮细胞超微结构,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)水平,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测胸主动脉沉默信息调节因子1(SIRT1)和叉头框转录因子O3a(FOXO3a)的mRNA表达水平,Western Blot法检测胸主动脉SIRT1和FOXO3a蛋白表达水平。【结果】与空白组比较,模型组小鼠胸主动脉及血管内皮细胞病理变化明显,血清炎症因子TNF-α、ICAM-1和VCAM-1水平升高(P<0.05或P<0.01),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,辛伐他汀组和艾灸组小鼠的胸主动脉及血管内皮细胞结构得到明显改善,血清TNF-α、ICAM-1、VCAM-1水平均降低(P<0.05),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量增加(P<0.05或P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。辛伐他汀组和艾灸组上述指标组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】“温阳通脉”灸法可通过调控SIRT1/FOXO3a信号通路减轻炎症反应防治小鼠AS。

慢病毒介导shRNA干扰FoxO1促进猪成肌细胞中MyHCⅠ的表达

叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)是调控骨骼肌生长、代谢及细胞分化过程的重要转录因子,在肌纤维类型转化过程中发挥重要作用.为深入研究其对肌纤维类型的影响,构建FoxO1短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰慢病毒载体并感染猪成肌细胞,用real-time PCR和Western印迹法检测FoxO1和肌球蛋白重链Ⅰ(myosin heavy chainⅠ,MyHCⅠ)mRNA和蛋白的表达情况.测序结果证实,Lenti H1 RNAi FoxO1质粒构建正确,获得Lenti H1 RNAi FoxO1病毒颗粒滴度为8×107U/mL.病毒感染猪成肌细胞后,与对照组相比,siFoxO1a组FoxO1在转录水平上降低了58%,蛋白水平降低了77%,而MyHCⅠmRNA表达量提高了2.58倍.结果表明,本研究成功构建了猪FoxO1基因shRNA干扰慢病毒载体,且沉默FoxO1促进猪成肌细胞中MyHCⅠmRNA的表达.

足细胞SIRT1/FoxO3自噬通路与糖尿病肾脏疾病关系的研究进展

糖尿病肾脏疾病(DKD)是糖尿病微血管并发症之一,也是目前全球范围内导致终末期肾病的首要原因,足细胞在DKD发病机制中发挥重要作用,而自噬对维持足细胞生存及内环境稳定具有重要意义。因此,自噬及相关通路是DKD的潜在治疗干预靶点。沉默信息调节因子1通过介导叉头框转录因子O3的去乙酰化,激活足细胞自噬相关通路,调节自噬相关基因和氧化应激反应,维持足细胞结构和功能,从而延缓DKD的进展。未来对足细胞自噬相关通路与DKD发病机制的关系进行深入探索,将为DKD的临床诊断和靶向治疗提供新思路。