铼[^(188)Re]羰基化合物标记新双功能螯合剂的研究

合成了三种新的三齿配体L1NH2、L2H和L3NH2,用于设计合成新的以fac-[188Re(CO)3]+为核心的放射性药物。标记条件实验证明,三种配体在低浓度(10-5mol/L)的条件下,反应时间为60min内,配体标记率可达88%以上,放射化学纯度大于90%。同时合成了冷羰基铼配合物fac-[Re(CO)3L1NH2]+、fac-[Re(CO)3L2H]和fac-[Re(CO)3L3NH2]作为参照标准品。稳定性实验也说明三种标记物均具有很高的体外稳定性,标记后24h内基本不发生分解;组氨酸和半胱氨酸体外竞争实验证实fac-[188Re(CO)3L1NH2]+和fac-[188Re(CO)3L2H]比fac-[188Re(CO)3L3NH2]稳定,不易被组氨酸和半胱氨酸取代,可能羧基上的-OH与fac-[188Re(CO)3]+的配位能力比吡啶环上的N稍低,也可说明三种配体均是较理想的标记fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+的双功能螯合剂。

双功能螯合剂联肼尼克酰胺衍生物的合成

6 -氯尼克酸与水合肼反应生成 6 -联胺吡啶 - 3-羧酸 ,后者与二叔丁基碳酸酯反应生成6 -BOC -联胺吡啶 - 3-羧酸 ,使联胺基团得到保护。在DCC、DMF催化下 ,6 -BOC -联胺吡啶- 3-羧酸与NHS反应 ,生成物在盐酸二恶烷作用下脱去BOC保护基团 ,最终生成NHS

MAMA双功能螯合剂前体的合成及结构表征

双功能螯合剂在放射性药物的研究、合成、应用,特别是在生物分子的放射性标记方面发挥着极为重要的作用。本文采用简易方法合成了MAMA双功能螯合剂前体,N-(2″-对甲氧苄巯乙基)-2-[(2′-对甲氧苄巯乙基)氨基]乙酰胺,并通过Uv-visI、R1、HNMR、MS以及元素分析等对其结构组成进行了确证;同时,利用Gaussian 03W程序对其进行了结构优化描述,并计算了相应的分子能量。此外,对制备得到的前体进行了稳定化处理,将其转化为盐酸盐形式,并用IR1、HNMR等进行了检验,确定了此处理是合理可行的。

基于双功能螯合剂的^(99m)Tc间接标记depreotide的探索

目的探索使用采用双功能螯合剂作为偶联剂进行间接标记,以避免直接标记所带来的损伤。方法使用近年来常用的三种螯合剂HYNIC、NHS-MAG3及SHNH进行间接标记。结论三种标记体系的标记率、放化纯及比活度较高,为核素分子显像提供了必要的基础条件和临床应用前景。稳定性测定发现^(99m)Tc-MAG3-depreotide在室温、血清以及血浆中更稳定。^(99m)Tc HYNIC-depreotide和^(99m)Tc-SHNH-depreotide在血液、心脏、胃、肠的分布显著较高。而^(99m)Tc-MAG3-depreotide标记物主要经过肾脏排出体外,在血液、肝脏和肾脏中清除较快,而心脏、肺、肌肉、骨骼和脑组织放射性分布均较低,且在整个过程中变化不显著。

两种^(99)Tc^m标记双功能螯合剂:NHS-MAG3和HYNIC

99Tcm在标记蛋白、核酸、多肽和抗体时,常采用双功能螯合剂作为偶联剂的间接标记法,以避免直接标记所带来的损伤。研究表明,近年来常用的两种螯合剂NHS-MAG3及HYNIC合成路线清晰,偶联及标记方法成熟,标记率、放化纯及比活度较高,为核素分子显像提供了必要的基础条件和广阔的临床应用前景。

含生物素的双功能螯合剂合成及[^(99)Tc^m(CO)_3(H_2O)_3]^+标记

设计合成了一种新的用于生物素偶联的双功能螯合剂N--α(2-皮考基)-N-ε-D-生物素基-L-赖氨酸甲酯(PLB),并完成其Re(CO)3-PLB配合物的合成及化学结构的表征。[99Tcm(CO)3(H2O)3]+的标记条件研究表明,PLB配体浓度在10μmol/L以上,pH在正常生理值7.4左右,于95℃加热30 min,标记物的放化纯度大于95%,比活度达37~55.5 TBq/mmol。

稀土铕双功能螯合剂的合成

均相时间荧光免疫分析(HTRF)是一种快速、简便的分析方法,它将荧光共振能量转移与时间分辨荧光相结合,以稳定的穴状稀土螯合剂为荧光标记物进行检测分析。为了满足HTRF的分析要求,以2,6-二甲基吡啶-4-羧酸甲酯为原料,经N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)溴化、水解等化学反应制备得到Eu^(3+)-双功能螯合剂2,6-{N,N',N,N'-[二(2,2’-联吡啶-6,6’-二甲基)]二氨甲基}-吡啶-4-羧酸-Eu^(3+),通过IR、MS等表征方法证明各化合物结构的准确性。对螯合剂荧光性质进行研究。螯合剂的最大激发波长为320nm;最大发射波长为597nm (~5D_0-~7F_2),Stokes位移达到277nm;荧光寿命828μs;荧光量子产率Y_f=0.233。其荧光性质可以满足HTRF的分析要求。

基于杂环类双功能螯合剂DOTA的重金属铅人工抗原的制备与鉴定

以2-S-(4-氨基苯)-1,4,7,10四氮杂环壬烷-1,4,7,10-四乙酸(P-NH2-Bn-DOTA,简称DOTA)和重金属铅为研究对象,研究杂环类双功能螯合剂在重金属人工抗原制备方面的效果。选取DOTA为双功能螯合剂,采用戊二醛法将重金属铅离子分别与载体蛋白BSA和OVA偶联制备免疫原和包被原,经测定其结合比分别为13∶1和9∶1。用合成的免疫原免疫制备兔多克隆抗体并建立间接竞争ELISA(ic-ELISA),结果显示,其ic-ELISA线性回归方程为y=12.014lnx-13.249(R2=0.9951),IC50和IC20分别为193.4 ng/mL和15.9 ng/mL,具有较好的检测灵敏度。交叉反应试验显示,除了与镉交叉反应率达20.4%外,该抗体与其它重金属铁、铅和锌等的交叉反应率均小于6.4%,特异性较好。本研究成功制备、鉴定了重金属铅人工抗原并制备了兔多克隆抗体。灵敏度和特异性分析表明:用杂环类双功能螯合剂制备的重金属人工抗原的制备效果较好,为下一步开展该杂环类双功能螯合剂在重金属快速检测技术中的研究奠定基础。

四氮杂环双功能螯合剂的合成

1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯是一种新型双功能螯合剂,传统合成方法副产物多、重复性差、纯度和产率较低。本研究对反应关键步骤的催化剂、溶剂、后处理进行改进,从而得到了合成目标产物的最佳方法。实验结果表明,改进后的工艺路线条件温和、重复性好、成本较低。产物纯度达98%以上,总收率达39.3%。

基于双功能螯合剂NOTA的重金属铜人工抗原的合成与鉴定

为研究杂环类双功能螯合剂在重金属铜人工抗原制备方面的效果,以2-S-(4-氨基苯)-1,4,7三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸(P-NH_2-Bn-NOTA,简写为NOTA)为双功能螯合剂,采用戊二醛法将重金属铜离子分别与载体蛋白BSA、OVA偶联制备免疫原和包被原,并用合成的免疫原免疫制备免多克隆抗体,建立间接竞争ELISA(ic-ELISA)。结果表明,所建立的ic-ELISA线性回归方程为y=7.8632Ln(x)+9.6765(R2=0.9934),IC50和IC20值分别为168.70、3.72 ng·m L-1。交叉反应试验结果显示,除与锌交叉反应率达16%外,该抗体与其他重金属铁、铅和镉的交叉反应率均小于5.6%。本研究成功合成了重金属铜人工抗原并制备了兔多克隆抗体,为杂环类双功能螯合剂应用于重金属快速检测技术奠定了理论基础。

识别和解聚金属-Aβ42聚集体的苯并噻唑类双功能螯合剂

以硫磺素T为母体,合成和表征了一种苯并噻唑类双功能荧光螯合剂ZY5,并考察了它与金属-Aβ（amyloid-β）聚集体的相互作用。结果表明：ZY5的荧光强度在p H 4.0~10.0的范围内基本稳定,基本不受时间和光照的影响。ZY5符合严格的Lipinski类药标准,能识别和解聚金属-Aβ42聚集体,在一定程度上可抑制由Cu-Aβ42聚集体产生的毒性。

双功能螯合剂的研究进展

文章介绍了双功能螯合剂的种类及各自的代表物。并综述了DTPA和DOTA及其衍生物在放射性核素标记生物分子中的应用实例。

用于正电子发射断层显像的^68Ga双功能螯合剂的研究进展

癌症是一种严重威胁人类健康的疾病,对其早期诊断有利于提高治疗率。目前,核医学以及PET技术的发展,实现了肿瘤部位可视化,达到早期诊断癌症或治疗的目的。PET成像依赖于放射性同位素通过双功能螯合剂与靶向配体的结合,因此双功能螯合剂的发展是PET成像中的重要一环,68Ga作为常用于PET成像的同位素之一,其双功能螯合剂得到了快速的发展及运用。简要概括了近年来常用的PET中放射性金属68Ga的双功能螯合剂。

用双功能螫合法连接放射性金属元素于单克隆抗体上

本文报道用ＤＴＰＡ环酐（ＣＤＴＰＡＡ）连接１１３ｍ于单克隆抗体（ＭｃＡｂ）上的初步结果，并试验了不同比值的ＣＤＴＰＡＡ／ＭｃＡｂ对标记率的影响。当此比值由１：２０增至１：２００时。标记率由６１％升至６８％。经与ＣＤＴＰＡＡ水解对照组比较，对照组的标记率仅为２５％。本结果提示，ＣＤＴＰＡＡ与ＭｃＡｂ的结合是以未水解的ＣＤＴＰＡＡ连接放射性金属元素于ＭｃＡｂ上为基础的。作者还讨论了反应环境中的ｐＨ值、反应时间及蛋白质浓度对连接效率的影响。本文对放射免疫治疗有意义的金属元素的标记法做了有益探索。

重金属汞螯合物人工抗原的合成与鉴定

以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸为双功能螯合剂,合成了半抗原,并将半抗原与钥孔戚血蓝素或牛血清白蛋白偶联制备抗原。用二喹啉甲酸(BCA)法测抗原浓度,对半抗原、抗原、KLH和BSA分别进行紫外分光光度计扫描,利用SDS-PAGE电泳进行定性鉴定,用三硝基苯磺酸法间接测偶联率,用石墨炉原子分光吸收法检测抗原中Hg2+的含量。研究结果表明抗原合成成功,Hg-ITCBE-KLH、Hg-ITCBE-BSA、ITCBE-BSA中载体蛋白ε-氨基的替换程度依次为34.75±4.60%,40.61±0.99%,61.27±0.69%,Hg2+的含量依次为:38.4±0.5μg/ml,125.5±0.9μg/ml,0μg/ml。

铅螯合物人工抗原的制备与鉴定

以双功能螯合剂异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)螯合铅离子,制备得半抗原Pb-ITCBE,然后再分别与载体蛋白KLH或BSA偶联制备得免疫原Pb-ITCBE-KLH与包被抗原Pb-ITCBE-BSA,ITCBE-BSA。用二喹啉甲酸法测3种抗原的浓度,分析半抗原、抗原与载体蛋白的紫外吸收光谱,利用SDS-PAGE对3种抗原的分子量进行鉴定,用三硝基苯磺酸法检测3种抗原中的赖氨酸残基的ε-NH2被半抗原替换的程度,用石墨炉原子分光吸收法检测抗原中铅的含量。研究结果表明,免疫原与包被抗原制备成功,Pb-ITCBE-KLH、Pb-ITCBE-BSA、ITCBE-BSA的浓度依次为6.47±0.08mg/ml,6.68±0.06mg/ml,5.57±0.05mg/ml;抗原与载体蛋白的紫外吸收光谱的特征各不相同;SDS-PAGE的结果显示3种抗原的分子量均不同于各自的载体蛋白;抗原中载体蛋白ε-氨基的替换程度依次为1.86±0.74%、55.53±1.13%、54.19±1.34%;铅的含量依次为15.64±0.11μg/ml,17.33±0.15μg/ml,0μg/ml。

镉螯合物特异性单克隆抗体的制备与鉴定

为了获得镉螯合物特异性单克隆抗体,以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸为双功能螯合剂螯合镉离子制得半抗原,再分别与钥孔戚血蓝素或牛血清白蛋白偶联制得免疫原与包被抗原.经过抗原鉴定,免疫Balb/c小鼠,取小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤,经筛选和2次克隆化等步骤,从制备的腹水中获取单克隆抗体.酶联免疫吸附测定结果表明,单克隆抗体3A9D9G7的腹水效价为4×10-4,单抗亚类为IgM,轻链为κ型,亲和常数为1.44×1010mol/L,灵敏度低于50μg/L,与其他金属螯合物的交叉反应率低于0.90%,说明该单克隆抗体能特异性识别镉螯合物,可用于环境样品与食品中残留镉的快速检测.

重金属汞螯合物人工抗原的合成与鉴定

以重金属汞为起始物质,将其离子化为二价汞,与双功能螯合剂谷胱甘肽(GSH)螯合后,获得半抗原,然后将半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)进行偶联,获得完全抗原。实验对各步骤的反应条件进行优化,采用紫外光谱、凝胶电泳对产物进行表征,成功制备了汞-GSH-BSA完全抗原。为计算完全抗原中重金属和载体蛋白的偶联比,采用石墨炉原子吸收法测定产物中重金属汞的含量,采用二喹啉甲酸(BCA)法测定抗原中载体蛋白的含量,所制备的免疫原中汞和蛋白的偶联比是9:1。Hg-GSH-BSA的成功合成是制备可识别重金属汞螯合物抗体的基础。

重金属镉螯合物人工抗原的合成与鉴定

[目的]合成并鉴定重金属镉螯合物抗原。[方法]以乙二胺四乙酸(EDTA)或二乙烯三胺五乙酸(DTPA)为双功能螯合剂,合成了半抗原,并将半抗原与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)或卵清蛋白(OVA)偶联制备完全抗原,对其进行浓度测定、紫外分光光度计扫描、SDS-PAGE电泳定性鉴定和石墨炉原子吸收光谱法检测。[结果]利用二喹啉甲酸(BCA)法检测分离纯化后的的Cd-DTPA-OVA、Cd-EDTA-KLH、DTPA-OVA和EDTA-KLH中蛋白的实际浓度依次为1.862±0.038、5.121±0.024、25.155±0.014和8.459±0.018mg/m l,紫外扫描和电泳鉴定证明,抗原合成成功;用吸收光谱法检测的上述抗原中的镉离子含量依次为34.6±0.3、96.5±0.5、0和0μg/m l,表明半抗原确实偶联到蛋白质上,进一步证明抗原合成成功。[结论]该研究为重金属螯合物单克隆抗体的制备和建立快速检测方法奠定基础。