针对c-myc mRNA两个不同位点的c-myc反义寡脱氧核苷酸抑制类风湿滑膜细胞增殖的比较

目的:研究针对c-myc mRNA不同位点的两种反义寡脱氧核苷酸序列(AS-ODN):myc-AUG AS-ODN,myc-CRD AS-ODN,对类风湿滑膜细胞增殖的抑制作用。方法:培养人类风湿滑膜B型细胞,合成反义寡脱氧核苷酸序列并进行硫代磷酸化修饰,以脂质体L ipofectin为载体,转染滑膜细胞,用MTT法检测细胞的增殖情况。结果:myc-AUG AS-ODN,myc-CRD AS-ODN均能抑制滑膜细胞增殖,使细胞数目减少的最大值分别为40.0%和41.4%。myc-AUG AS-ODN抑制滑膜细胞增殖的起效时间早于myc-CRD AS-ODN。在高浓度时寡脱氧核苷酸具有非序列特异性细胞毒作用。结论:两种AS-ODN序列均可用于抑制滑膜细胞增殖。

PDE5基因反义寡脱氧核苷酸对人阴茎海绵体平滑肌细胞cNMP的影响

目的 :观察PDE5基因反义寡脱氧核苷酸对人阴茎海绵体平滑肌细胞内cAMP和cGMP的影响 ,为阴茎勃起功能障碍的基因治疗提供理论和实验依据。 方法 :将PDE5基因反义寡脱氧核苷酸 (含第 1外显子部分序列 )与脂质转染试剂DOTAP共同转染人阴茎海绵体平滑肌原代细胞 ,以酶联免疫法分别检测转染后不同时间 (1～ 4 8h)海绵体平滑肌细胞内cAMP和cGMP的浓度变化 ,观察反义寡脱氧核苷酸对平滑肌细胞内cNMP的影响。 结果 :转染后 ,反义实验组平滑肌原代细胞内cGMP水平 (1～ 6h)显著高于对照组 (P <0 .0 1)。 结论 :PDE5基因反义寡脱氧核苷酸可以增加人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP水平 ,本研究有助于了解PDE5基因与cNMP在阴茎勃起中的作用 ,并为阴茎勃起功能障碍的基因治疗提供理论和实验基础。

超顺磁性氧化铁标记反义寡脱氧核苷酸探针在转染细胞磁共振成像中的应用

目的制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针,探讨其应用于转染细胞磁共振(MR)成像的可行性。方法采用化学交联法将SPIO标记于c-erbB2癌基因的ASODN制成ASODN探针,原子力显微镜检测探针形态,高效液相凝胶色谱法检测联接率和生物活性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测稳定性。将ASODN探针转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br3肿瘤细胞株,普鲁士蓝染色后于光学显微镜下观察细胞内铁分布,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,MR扫描观察细胞信号强度变化情况。结果制备的ASODN探针近似球形,粒径在25～40nm间,分散均匀,联接率为100%,仍保持原有生物活性,稳定性好。转染ASODN探针后的SK-Br3细胞胞浆内可见多少不等的蓝色铁颗粒,细胞内铁含量明显高于未转染ASODN探针的其他各组细胞(P均<0.01);MR扫描显示其信号强度最弱,信噪比值明显低于其他各组细胞(P均<0.05)。结论成功制备SPIO标记ASODN探针,该探针能有效进入SK-Br3细胞内,明显降低MR扫描下的转染细胞信号强度。

反义bcl-2寡脱氧核苷酸对U937细胞增殖和存活能力的影响

本实验观察了与人类ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ翻译起始部位相互补的硫代反义ｂｃｌ－２寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ｓＯＤＮ）对Ｕ９３７细胞增殖和存活能力的影响，结果表明：一定浓度的ＡＳ－ｓＯＤＮ可明显抑制细胞Ｂｃｌ－２蛋白的表达，但对细胞增殖和存活能力无明显影响。

乙酰肝素酶反义硫代寡脱氧核苷酸对人肝癌细胞系侵袭力的抑制作用

目的探讨乙酰肝素酶反义硫代寡脱氧核苷酸对人肝癌细胞系侵袭力的抑制作用。方法设计合成互补于HPAmRNA起始密码区的硫代反义寡脱氧核苷酸AS-ODN及相应的无义对照寡脱氧核苷酸NS-ODN,以阳离子脂质体OligofectamineTMReagent包埋后转染SMMC-7721、BEL-7402细胞。采用RT-PCR和Western-blot检测转染前后细胞HPAmRNA及蛋白表达的变化,以基底膜重建实验检测SMMC-7721、BEL-7402细胞侵袭力的变化。结果与正常对照组相比,AS-ODN转染组SMMC-7721、BEL-7402细胞HPAmRNA和蛋白的表达均显著下降(P<0.01,P<0.05),转染后两细胞系的侵袭力抑制率分别为55.8%和61.8%。结论HPA硫代反义寡脱氧核苷酸可通过下调HPAmRNA和蛋白的表达抑制肝癌的侵袭力。

血管内皮生长因子反义寡脱氧核苷酸联合血管生成素-1对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响

目的观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)反义寡脱氧核苷酸(ASODN)联合血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响。方法选取健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组(A组)5只和糖尿病组55只,糖尿病组通过链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型成功后再饲养3个月行眼底荧光血管造影检查,确定DR大鼠模型且视网膜病变程度相仿的大鼠,随机抽取45只分为DR对照组(B组,5只)、PBS缓冲液对照组(C组,10只)、VEGFASODN干预组(D组,10只)、Ang-1干预组(E组,10只)、联合干预组(F组,10只)。C组玻璃体内注射PBS缓冲液5μL;D组玻璃体内注射浓度为100μmol·L-1VEGFASODN5μL;E组玻璃体内注射浓度为160mg·L-1Ang-15μL;F组玻璃体内注射100μmol·L-1VEGFASODN及160mg·L-1Ang-1各5μL;3d后再次行上述操作。各组大鼠行眼底荧光血管造影检查,对比观察不同组别大鼠视网膜血管渗漏情况,病理组织切片光学显微镜下突破内界膜的观察视网膜新生血管芽细胞核数。结果 A、B、C、D、E和F组视网膜新生血管渗漏面积分别为0、(20.98±1.14)mm2、(21.47±1.65)mm2、(14.60±1.55)mm2、(13.80±1.19)mm2、(10.81±1.35)mm2;D、E、F组新生血管渗漏面积低于B、C组,差异有统计学意义(F=103.99,P<0.05);F组渗漏面积低于D、E组,差异有统计学意义(F=190.94,P<0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t=0.22,P>0.05)。A、B、C、D、E和F组突破内界膜的新生血管芽细胞核数分别为(1.13±0.31)个、(80.31±5.21)个、(81.08±2.57)个、(37.37±3.41)个、(41.07±2.09)个、(14.41±1.23)个;D、E、F组突破内界膜的血管芽细胞核数均低于B、C组,差异有统计学意义(F=1339.41,P<0.05);F组突破内界膜的血管芽细胞核数低于D、E组,差异有统计学意义(F=714.91,P<0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t=0.35,P>0.05)。结论 VEGF ASODN联合Ang-1玻璃体内注射能明显抑DR大鼠视网膜新生血管的生成,减少视网膜血管渗漏。

PCNA反义寡脱氧核苷酸对牛晶状体上皮细胞体外增殖活性的影响

目的使用增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸（ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ）作用于牛晶状体上皮细胞，观察其对细胞增殖活性的影响，以探讨ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ技术防治后发性白内障形成的新途径。方法应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测细胞增殖活性，用流式细胞仪检测晶状体上皮细胞 ＰＣＮＡ蛋白的表达。结果 ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ ３０～５０ μｍｏｌ／Ｌ可使细胞增殖显著受抑制，其 ＣＰＭ值分别从对照组的 ６ ６９９． ６７下降为 ５ ９８６． ３３，５ ５２５． ３３和 ５ １５４． ６７，ＰＣＮＡ蛋白在晶状体上皮细胞的表达阳性率下调至１２．３２％，与对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。ＰＣＮＡ ＳＯＤＮ组则作用不明显，与对照组比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５），而ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ组与ＰＣＮＡ ＳＯＤＮ组比较差异显著（Ｐ＜０．０１）。结论ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ可以显著抑制牛晶状体上皮细胞体外增殖活性，其抑制作用可能通过阻断ＰＣＮＡ ｍＲＮＡ的翻译过程而影响 ＰＣＮＡ蛋白表达。

HSP70反义寡脱氧核苷酸促进MRC-5细胞衰老的研究

目的采用反义寡核苷酸技术了解HSP70与细胞衰老之间的关系。方法设正义组、反义组,在转染后12,24 h,3,5 d,分别用流式细胞技术和免疫荧光技术检测HSP70蛋白水平、凋亡细胞比例和细胞周期。在转染后第2、4、6天,分别收集正义组、反义组和空白对照组细胞爬片进行SA-β-Gal染色。结果各时间点反义组蛋白表达均低于正义组(P<0.05),凋亡细胞比例均高于正义组(P<0.05)。随观察期延长,处于G1期的细胞数逐渐增多,但反义组均高于正义组(P<0.05)。相同时间点反义组SA-β-Gal染色阳性细胞(蓝染细胞)数均较正义组和空白对照组多,随观察期延长,各组蓝染细胞均增多。结论HSP70反义寡脱氧核苷酸下调MRC-5细胞HSP70的表达,使细胞出现G1期阻滞,促进细胞衰老。

纳米微粒介导反义寡脱氧核苷酸逆转乳腺癌细胞多药耐药的实验研究

目的探讨纳米微粒介导耐药基因mdr-1、mrp反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)转染对多药耐药乳腺癌MCF-7/ADR细胞的影响。方法采用纳米微粒介导mdr-1、mrp-ASODN转染耐药细胞株MCF-7/ADR,RT-PCR、Western blot检测转染48h后细胞耐药基因mdr-1、mrp的表达;MTT法检测经转染后MCF-7/ADR细胞对阿霉素(ADR)、表柔比星(epirubicin)、5-氟脲嘧啶(5-FU)和紫杉醇(paclitaxel)的敏感性。结果纳米微粒介导mdr-1、mrpASODN转染48h后,MCF-7/ADR细胞的mdr-1、mrp在mRNA和蛋白质表达水平上均显著降低(P<0.05);细胞对ADR、表柔比星、5-氟脲嘧啶和紫杉醇的耐药指数均显著降低(P<0.05)。结论耐药基因反义寡脱氧核苷酸能在体外抑制耐药基因的表达,从而提高细胞的药物敏感性;纳米微粒具有较好的体外介导反义寡脱氧核苷酸转染效果。

鞘内注射M受体和GDNF反义寡脱氧核苷酸抑制吗啡戒断大鼠蓝斑c-Fos表达

应用免疫组化方法观察鞘内注射毒蕈碱型乙酰胆碱(muscarinic acetylcholine receptor,M) 受体和胶质细胞源性神经营养因子(glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)反义寡脱氧核苷酸对吗啡戒断大鼠蓝斑(locus coeruleus,LC)区内Fos表达的影响。结果显示,鞘内注射M_2受体和GDNF反义寡脱氧核苷酸明显减少大鼠吗啡戒断症状评分值(n=6,P<0.05)。正常大鼠LC区神经元Fos基础表达较低,吗啡依赖大鼠LC区神经元Fos表达增加,吗啡依赖大鼠纳酪酮(4mg/Kg,ip)催促戒断后,Fos表达进一步增加;鞘内注射M_2受体和GDNF反义寡脱氧核苷酸处理后均减少吗啡戒断大鼠LC区神经元Fos表达(n=5,P<0.05)。而鞘内注射M_1受体反义寡脱氧核苷酸处理组LC 区神经元Fos表达较吗啡戒断组没有显著差异(n=5,P>O.05)。结果提示:脊髓M_2受体调节吗啡戒断时LC区的神经元激活,而这种神经上行性激活涉及神经元与胶质细胞之间的适应性调节。

bcl-2、IL-6、IL-6R反义寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞作用的比较

目的:比较bcl-2、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(antisense phosphorothiate oligodeoxynucleotide,AS-PS-ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖及诱导凋亡的作用,初步探讨反义核苷酸技术治疗中靶基因的选择策略。方法:合成反义寡脱氧核苷酸bcl-2AS-PS-ODN、IL-6AS-PS-ODN、IL-6RAS-PS-ODN,分别作用于NCI-H446细胞株,通过细胞克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化,细胞凋亡线粒体流式检测及DNA倍体分析检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测相关基因表达水平的变化。结果:(1)bcl-2AS-PS-ODN、IL-6AS-PS-ODN、IL-6RAS-PS-ODN均能够抑制肺癌细胞增殖活性和诱导细胞凋亡,其中以IL-6AS-PS-ODN抑制作用最强,bcl-2AS-PS-ODN次之,IL-6RAS-PS-ODN作用最弱。(2)3种反义寡脱氧核苷酸均能下调肺癌细胞相应基因的表达水平,其中以IL-6下调幅度最大,达(84.1±5.01)%;bcl-2和IL-6R基因下调幅度相近,分别为(62.6±3.42)%和(60.3±4.45)%。(3)反义核苷酸作用后除了引起自身基因表达下调外,还伴对其他基因表达的调节作用,如IL-6AS-PS-ODN作用使bcl-2基因表达下调(32.2±0.20)%;而bcl-2AS-PS-ODN作用使IL-6基因表达上调(74.3±4.13)%。结论:IL-6AS-PS-ODN较bcl-2AS-PS-ODN和IL-6RAS-PS-ODN能更有效地诱导小细胞肺癌细胞凋亡,IL-6是NCI-H446小细胞肺癌反义核苷酸治疗较为合适的靶基因。

脂质体介导寡脱氧核糖核苷酸转染人视网膜色素上皮细胞的转染率及分布测定

目的:观察阳离子脂质体LipofectamineTM 2000介导的寡脱氧核糖核苷酸(ODNs)在体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中的转染效率及其在细胞中的分布。方法:在阳离子脂质体LipofectamineTM 2000的介导下将人工合成的FAM荧光标记的ODNs转入人RPE细胞中,荧光显微镜下观察转染后20 min、1 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h其在细胞内的分布,流式细胞仪检测其在RPE细胞中的转染效率;并用MTT法检测脂质体处理组、脂质体-ODNs复合物处理组和正常对照组的细胞增生活性,观察脂质体的毒性。结果:LipofectamineTM 2000能迅速将FAM-ODNs转入人RPE细胞的胞质和胞核内,4～6 h达高峰,转染效率高达(85.85±5.75)%,与其他时点比较差异有统计学意义(P<0.05),24 h后其转染率还有(70.11±5.81)%;且脂质体对RPE细胞无明显细胞毒性,3组间细胞增生活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LipofectamineTM 2000能有效地将FAM-ODNs转入人RPE细胞中,可作为一种安全有效的基因转移载体用于基因治疗。

K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌靶基因表达的抑制作用

目的 观察针对于胰腺癌K ras基因点突变的反义寡核苷酸对靶基因表达的抑制作用。方法 脂质体将人工合成的针对于K ras基因第 12位密码子点突变的反义寡核苷酸转染体外培养的人胰腺癌细胞株PC 2 ,用免疫组化和原位杂交技术检测靶基因的表达。结果 转染 4 8h后 ,反义寡核苷酸作用组胰腺癌细胞株PC 2的ras蛋白和K rasmRNA的表达程度较正义组和对照组均明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 针对于K ras基因点突变的反义寡核苷酸作用于体外培养的胰腺癌细胞 。

MMP-2反义寡脱氧核苷酸对人膀胱癌BIU-87细胞株侵袭能力影响的初步研究

目的应用反义核酸技术,探讨阳离子脂质体介导的MMP-2反义寡脱氧核苷酸对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。方法人工设计合成一段硫代修饰型互补于MMP-2的反义寡脱氧核苷酸序列(antisenes oligodeoxynucleotide,ASODN),并设计与其碱基组成相同,但碱基顺序随机排列的无义寡脱氧核苷酸序列(nonsense oligodeoxynucleotide,NS-ODN)作为对照。以阳离子脂质体介导将不同浓度的ASODN及NS-ODN转染至膀胱癌细胞系BIU-87细胞中,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测转染前后BI-U-87细胞中MMP-2mRNA表达;以四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验检测细胞的增殖能力;采用MTT比色法与transwell小室侵袭试验相结合的方法测定肿瘤细胞的体外侵袭力。结果转染MMP-2ASODN可以显著降低BIU-87细胞中的MMP-2mRNA表达。MMP-2ASODN处理细胞24h,于1.0μmol/L的MMP-2ASODN浓度条件下即可显著抑制BIU-87细胞的体外侵袭,而且这种抑制作用随ASODN浓度的增加而增强。结论以MMP-2反义寡脱氧核苷酸阻遏MMP-2在膀胱癌BIU-87细胞株中表达可以成功地抑制BI-U-87细胞侵袭能力,提示应用反义核酸技术等方法抑制MMP-2活性可能可以应用于临床治疗膀胱癌。

c-erbB2反义寡脱氧核苷酸联合紫杉醇对乳腺癌细胞SK-Br-3的抑制作用

目的:探讨以c-erbB2 mRNA为靶点的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)联合紫杉醇对乳腺癌SK-Br-3细胞的抑制作用.方法:实验分为7组:ASODN组,紫杉醇组,赫赛汀组,表阿霉素组,ASODN+紫杉醇组,赫赛汀+紫杉醇组,表阿霉素+紫杉醇组.分别处理乳腺癌SK-Br-3细胞72 h,MTT法测定细胞抑制率,中效原理判定药物联合应用的效果,WesternBlot检测细胞c-erbB2,Bcl-2蛋白表达水平.结果:各组中SK-Br-3细胞的抑制率均随药物浓度的增加而增大;紫杉醇的中效浓度紫杉醇组为0.14μmol/L;ASODN+紫杉醇组为0.07μmol/L,其合用指数(CI)<1,为协同作用.ASODN+紫杉醇组c-erbB2,Bcl-2蛋白表达明显低于紫杉醇组,两组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:ASODN可明显增强紫杉醇对乳腺癌SK-Br-3细胞的抑制效应,可明显降低紫杉醇的用药量.

反义寡脱氧核苷酸及卵泡刺激素对卵巢黏液性囊腺癌细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的观察卵泡刺激素受体(FSHR)反义寡脱氧核苷酸(antisense ODN)及卵泡刺激素(FSH)对体外培养人卵巢黏液性囊腺癌(OMC)细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法OMC细胞与不同浓度的FSH、antisenseODN和无义ODN(nonsense ODN)共培育48、72 h后,采用免疫细胞化学SP法检测细胞核内PCNA的表达。结果FSH明显增强PCNA的表达,而antisense ODN则显著降低PCNA的表达,与对照组比较,差异均有显著性意义(均P<0.05或P<0.01);应用nonsense ODN未观察到其对PCNA表达的影响。同时,antisense ODN可明显拮抗FSH促PCNA表达增加的作用,差异有极显著性意义(P<0.01)。结论在OMC发展过程中,FSH具有一定的促进作用,anti-sense ODN可有效抑制癌细胞的增殖以及FSH的促增殖作用。

反义bcl-2寡脱氧核苷酸对BcaCD885细胞内源性bcl-2表达的阻断作用

目的 探讨与 bcl-2翻译起始部位碱基互补的反义 bcl-2寡脱氧核苷酸 ( oligodeoxynucleotide,ODN)对 Bca-CD885细胞内源性 bcl-2表达的阻断作用。方法 以脂质体 Lepofectin为载体 ,一过性转染 2 0 μmol/L 反义及正义 bcl-2 ODN于 Bca CD885细胞中 ,FCM-抗体观测转染后 2 4h、3 6h、48h细胞内 bcl-2基因蛋白表达变化 ,RT-PCR技术检测转染后 2 4h bcl-2 m RNA的表达变化。结果 转染反义 bcl-2 ODN后 2 4h、3 6h、48h Bca CD885细胞内 bcl-2基因蛋白表达与对照组相比都明显下降 ( P<0 .0 5 ) ,而正义组与对照组无差异 ( P>0 .0 5 ) ;正反义组 bcl-2m RNA与对照组相比无明显变化 ( P>0 .0 5 )。结论 反义 bcl-2 ODN能在蛋白翻译水平特异性抑制颊癌细胞内源性

反义寡脱氧核苷酸对内皮细胞缺氧再复氧损伤组织因子表达的影响

目的研究反义寡脱氧核苷酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧再复氧损伤后组织因子(TF)基因转录和表达的影响。方法培养的HUVEC随机等分成为正常对照组、缺氧再复氧组、反义寡脱氧核苷酸转染组(AS/TF组)、正义寡脱氧核苷酸转染组(S/TF组)和错配寡脱氧核苷酸转染组(Sc/TF组)。设计合成针对人TF的反义寡脱氧核苷酸(AS/TF),同时设计TF的正义寡脱氧核苷酸(S/TF)的错配寡脱氧核苷酸(Sc/TF)作为对照。用SuperFectTransfectionReagent(SF)作载体,将AS/TF、S/TF和Sc/TF分别转染AS/TF组、S/TF组和Sc/TF组HUVEC,正常对照组和缺氧再复氧组HUVEC只加SF,不转染任何寡核苷酸。将缺氧再复氧组、AS/TF组、S/TF组和Sc/TF组HUVEC培养24h后,充入氮气,缺氧条件下培养2h,正常条件下培养1h,完成缺氧再复氧模型的制作。收集各组HUVEC,用发色底物法检测HUVEC表面TF的活性,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测HUVEC中的TF抗原(TF:Ag)。并用膨胀裂解法分离细胞核,进行细胞核连缀反应(Run-onreaction)后,Bio-dot狭线印迹杂交检测HUVEC中的TFmRNA。结果与未经缺氧再复氧的正常对照组HUVEC相比,经过缺氧再复氧的HUVEC表面TF活性明显增强(P<0.001),细胞裂解液中的TF:Ag也显著增多(P<0.001),AS/TF组HUVEC的TF活性和TF:Ag的增加幅度低于缺氧再复氧组、S/TF组以及Sc/TF组(P<0.05-0.01)。体外细胞核连缀反应后,Bio-dot狭线印迹杂交显示,HUVEC缺氧再复氧后TF基因的转录增强,AS/TF组HUVECTFmRNA的转录弱于缺氧再复氧组、S/TF组和Sc/TF组。结论HUVEC缺氧再复氧后,TF基因的转录和表达均显著增强,针对TF的反义寡脱氧核苷酸能够明显抑制HUVEC缺氧再复氧损伤后TF基因的转录和表达。提示TF反义寡脱氧核苷酸对于因TF水平升高所致的血栓性疾病可能有潜在的治疗作用。

HER-2反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌细胞的影响

目的 乳腺癌发病率高,远期生存率低。原癌基因HER-2与乳腺癌的恶性转化密切 相关。本课题以HRE-2反义寡脱氧核苷酸(ASODN)抑制乳腺癌细胞目的mRNA的转录表达,观察 对细胞的影响。方法:HER-2寡脱氧核苷酸(ODN)与表皮生长因子(EGF)连结,形成ODN-EGF。 将6．8 μmol·L1 ODN-EGF250μl·d1加入对数生长期乳腺癌细胞SK-Br-3培养,每天给药一次,连 续给药3天。末次给药后24小时,消化和收集细胞。用RT-PCR逆转录扩增HER-2 DNA,进行凝 胶电泳。电镜检测细胞显微结构的改变。结果 5组药物细胞mRNA RT-PCR的扩增片断为98bp DNA。电泳条带灰度值ASODN-EGF组13 009．33±74．19,SODN-EGF组13 291．33±39．72, NODN-EGF组13 234．00±95．50,ASODN组13 216．33±77．78,正常对照组13 284．67±31．94。电 镜检测ASODN-EGF组细胞,核畸形,胞浆内有裂痕和自身围成的腺腔,脂滴空泡化改变,线粒体外 室轻度肿胀,上皮样细胞特征角蛋白表达减少。结论 ASODN-EGF具有抑制SK-Br-3细胞HER-2 mRNA转录和表达的作用。