南平市艾滋病免费抗反转录病毒治疗效果分析

目的监测艾滋病患者经免费抗反转录病毒治疗(ART)的结果,并评价治疗方案效果,依据实际情况调整治疗方案,使患者获得更好的疗效。方法选取南平市疾病预防控制中心2021年1月至2021年12月接受免费ART治疗的艾滋病患者1086例,监测其CD4细胞数、病毒载量和耐药情况,分析疾病人口学特征及耐药情况,并比较患者治疗前后的CD细胞数概率分布及病毒载量值。结果艾滋病男性患病率高于女性,年龄<20岁的占比仅有0.74%,在婚/同居发生率高达52.12%,比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后患者CD4细胞数增加,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05);经治疗病毒载量<400 copy/ml患者共1009例,治疗有效率为92.91%,且治疗后病毒载量值低于治疗前(P<0.05);而经Pearson相关性分析治疗后病毒载量与CD4细胞数呈负相关;耐药性调查表明:患者耐药性率为1.01%。结论经调查,南平市2021年接受免费ART治疗的大部分艾滋病患者获得了显著疗效,仅少部分患者存在耐药情况。

高效抗反转录病毒疗法治疗艾滋病的应用效果

评估艾滋病患者接受治疗时,应用高效抗反转录病毒疗法的效果。方法 在内蒙古自治区疾病预防控制中心(内蒙古自治区预防医学科学院)中,抽取2022年1月至2024年10月确诊的54例艾滋病患者进行研究,依据不同的治疗方法分组,具体为对照组(常规治疗)、研究组(高效抗反转录病毒疗法),各27例。比较治疗效果。结果 研究组整体治疗的效果较对照组更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 在对艾滋病患者进行治疗时,采用高效抗反转录病毒疗法,可以改善患者的CD4+T淋巴细胞计数,控制患者的病情,减少不良事件的出现,维护患者的治疗效果,促使患者的生活质量得以提升,适合推广。

HIV感染者抗反转录病毒治疗后发生高血糖的影响因素分析

目的探讨HIV感染者抗反转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)后高血糖的发生率及其影响因素。方法回顾性选取2016年5月至2021年5月首都医科大学附属北京佑安医院HIV感染者1000例,根据ART后是否发生高血糖分为病例组(n=121)和对照组(n=879)。采用多因素logistic回归分析HIV感染者ART后发生高血糖的影响因素,并建立风险因素预测模型。结果1000例HIV感染者中,男987例、女性13例;年龄19~81岁,平均(36.6±11.2)岁;HIV感染者ART后高血糖的发生率为12.10%。多因素logistic回归分析结果显示,年龄越大(OR=1.036,95%CI:1.013~1.442,P=0.002)、BMI越高(OR=1.208,95%CI:1.074~1.636,P<0.001)、存在糖尿病家族史(OR=2.427,95%CI:2.287~2.725,P<0.001)、周运动时间越短(OR=0.053,95%CI:0.003~0.095,P=0.016)、CD4^(+)T淋巴细胞计数越低(OR=0.268,95%CI:0.035~0.486,P=0.018)的患者更容易发生高血糖。预测模型为logit(Y)=7.396^(+)0.302×年龄^(+)0.729×BMI^(+)0.355×家族史-0.006×周运动时间-1.227×CD4^(+)T淋巴细胞计数。ROC曲线分析结果显示,该模型预测HIV感染者ART后发生高血糖的AUC为0.927(95%CI:0.910~0.944,P<0.001),灵敏度为0.8702,特异性为0.9533,阳性预测率为0.9022,阴性预测率为0.9351。结论HIV感染者ART后高血糖的发生率较高,年龄、BMI、家族史是HIV感染者ART后发生高血糖的独立危险因素;周运动时间及CD4^(+)T淋巴细胞计数为其独立保护因素。构建的风险因素预测模型对HIV感染者ART后发生高血糖的预测价值较高。

抗反转录病毒疗法对结核病/人体免疫缺陷病毒双重感染患者生存预后的影响

目的分析抗反转录病毒治疗(ART)对结核病(TB)/人体免疫缺陷病毒(HIV)双重感染患者生存预后的影响。方法选取2020年1月至2022年4月抚州市第一人民医院感染科收治的72例TB/HIV双重感染患者作为研究对象,根据是否接受ART分为ART组(n=40)与对照组(n=32)。对照组给予常规抗结核对症治疗,ART组在对照组基础上2周内给予ART方案,比较两组治疗前后CD4+T淋巴细胞数、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、HIV载量及治疗后转阴率、治疗失败结局。结果治疗后1、3、6、12个月,ART组CD4+T淋巴细胞数均多于前一个时间点,对照组CD4+T淋巴细胞数均少于前一时间点,且ART组均多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,ART组IL-10、TNF-α水平均低于治疗前,对照组IL-10水平高于治疗前,且ART组IL-10、TNF-α水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,ART组HIV载量少于治疗前,对照组多于治疗前,且ART组少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后1、3、6、12个月,ART组转阴率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ART组治疗失败率为17.50%,低于对照组的100.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ART对TB/HIV双重感染患者的治疗具有积极意义,可增加CD4+T淋巴细胞数,减少HIV载量,提高转阴率,改善患者生存预后。

艾博韦泰抗反转录病毒治疗方案与传统抗反转录病毒治疗方案治疗初治重症艾滋病患者的效果比较

目的探讨艾博韦泰抗反转录病毒治疗(ART)方案与传统ART方案治疗初治重症艾滋病(AIDS)患者的效果比较。方法选取2020年7月至2022年8月的赣州市第五人民医院感染科收治的初次接受治疗60例重症AIDS患者作为研究对象,根据治疗方式分为对照组和观察组,各30例。对照组患者采取传统ART方案,观察组患者采取艾博韦泰ART方案。比较两组的临床疗效、免疫功能[T淋巴细胞(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+),CD4^(+)/CD8^(+))]、生存质量[世界卫生组织艾滋病生存质量简表中文版(WHOQOL-HIVBREF)]以及不良反应发生率。结果治疗前两组患者HIV RNA载量比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后两组患者HIV RNA载量均低于治疗前且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前两组患者CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+),CD4^(+)/CD8^(+)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后两组患者CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于治疗前且观察组高于对照组,CD8^(+)水平低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组患者WHOQOL-HIVBREF评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,两组患者WHOQOL-HIVBREF评分均高于治疗前,且观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论针对初治重症AIDS患者采用艾博韦泰ART方案与传统ART方案治疗,前者安全性良好,对病毒的抑制作用更好,更有助于增强患者免疫功能,改善生存质量,建立临床推广使用。

快速启动高效抗反转录病毒治疗对较高CD4^(+)T淋巴细胞的人类免疫缺陷病毒感染-艾滋病患者治疗依从性及预后的影响

目的探讨快速启动高效抗反转录病毒治疗(HAART)对较高CD4^(+)T淋巴细胞的人类免疫缺陷病毒感染-艾滋病(HIVAIDS)患者治疗依从性及预后的影响。方法选取2021年7月至12月在新余市人民医院感染科住院和艾滋病门诊就诊的HIVAIDS患者61例,将确诊7d以内及时就诊且知情同意下启动抗病毒治疗的32例患者设为快速启动组,将确诊后未及时转至艾滋病门诊或转来后未接受快速启动HAART的患者29例设为未接受快速启动组。记录两组患者的基线病毒载量(HIV-RNA)及CD4^(+)T淋巴细胞计数以及抗病毒治疗6、12个月病毒载量及CD4T淋巴细胞计数,并记录入组患者治疗依从性、病毒抑制率、失访率。结果快速启动组治疗6、12个月的CD4^(+)T淋巴细胞计数高于未接受快速启动组,差异有统计学意义(P<0.05);快速启动组治疗6、12个月的HIV-RNA低于未接受快速启动组,差异有统计学意义(P<0.05);快速启动组的治疗依从性和病毒抑制率高于未接受快速启动组,失访率低于未接受快速启动组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论快速启动(确诊7d以内)HAART能最大程度提高较高CD4^(+)T淋巴细胞的HIV/AIDS患者抗病毒治疗依从性,提高病毒抑制率、CD4^(+)T淋巴细胞计数水平,并能减少失访率,值得临床推广。

联合抗反转录病毒治疗后HIV/AIDS患者的消化道症状及影响因素

目的探讨HIV/AIDS患者在联合抗反转录病毒治疗后不同免疫应答状态下消化道症状的差别并分析其影响因素,为HIV/AIDS患者抗病毒治疗后的免疫重建和病情控制提供参考依据。方法利用查阅病历资料、发放问卷调查等方式对解放军总医院第五医学中心2021年1月至2024年1月病房收治与门诊接诊的229例HIV/AIDS患者的一般及临床资料进行回顾性分析。所有患者均经过2年及以上的联合抗反转录病毒治疗,按照患者免疫应答状态的不同进行分组,比较其出现消化道症状的差别并分析影响因素。结果229例患者中存在消化道症状者68例,占比29.69%,其中免疫应答患者、不完全免疫应答患者和免疫无应答患者出现消化道症状的比例分别为31.19%、20.51%和32.10%,3组中最常见的症状均为腹痛腹泻,占比分别为19.27%、7.69%和17.28%,Logistic多因素分析发现性别为男性、感染途径为同性性接触传播、CD4/CD8比值倒置是患者出现消化道症状的促进因素。结论HIV/AIDS患者经联合抗反转录病毒治疗后消化道症状仍然常见,其中腹痛腹泻出现的比例最高,该类症状的存在可能与患者性别、感染途径、CD4/CD8比值有关。因此,HIV/AIDS患者抗病毒治疗后仍应继续关注患者的消化道症状表现并及时处理,定期监测其CD4^(+)T细胞计数、CD4/CD8比值水平,对于控制消化道病变及其他HIV/AIDS相关并发症、延缓患者病情发展具有重要的临床意义。

火龙果Ty3-gypsy类反转录转座子反转录酶序列的克隆及分析

【目的】克隆Ty3-gypsy类反转录转座子反转录酶(RT)序列并分析其特性,为火龙果遗传变异和进化研究提供新的信息。【方法】根据Ty3-gypsy类反转录转座子RT保守区设计简并引物,从红肉和白肉火龙果及其突变体中扩增出430 bp左右的目标片段,回收、克隆、测序获得RT序列,并进行生物信息学分析;采用RT-PCR检测其转录活性。【结果】共获得82条RT序列,其中有55条序列发生终止密码子突变,5条序列发生移码突变;经RT序列对比,火龙果与水稻、拟南芥有较高的同源性;3条RT序列具有转录活性。【结论】火龙果Ty3-gypsy类反转录转座子RT序列具有高度异质性,部分序列具有转录活性,与其他物种存在反转录转座子的横向传递。

急性腹泻患儿粪便诺如病毒GⅠ/GⅡ型时荧光反转录-聚合酶链反应检测结果的分析

目的分析急性腹泻患儿粪便诺如病毒GⅠ/GⅡ型实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测结果。方法选择2023年1月至2024年1月南昌大学第一附属医院赣江新区医院急性腹泻患儿150例,均采用实时荧光RT-PCR技术检测粪便样本诺如病毒GⅠ/GⅡ型,并对检测结果进行统计分析。比较不同特征急性腹泻患儿诺如病毒阳性率、不同年龄段诺如病毒阳性与阴性病例症状、不同年龄段及发病季节诺如病毒阳性患儿基因型分布情况。结果150例急性腹泻患儿的150份粪便样本中共检出诺如病毒阳性42份(28.00%);不同性别、户籍患儿诺如病毒阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);春、冬季诺如病毒阳性率高于夏、秋季,差异有统计学意义(P<0.05);<1岁急性腹泻患儿诺如病毒阳性率高于1~5岁、6~12岁患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。<1岁急性腹泻患儿中,诺如病毒阳性病例呕吐、腹泻<5次/d占比高于阴性,差异有统计学意义(P<0.05);1~5岁、6~12岁急性腹泻患儿中,诺如病毒阳性与阴性病例发热、呕吐、腹泻症状比较,差异无统计学意义(P>0.05);急性腹泻诺如病毒阳性患儿中,包括GⅠ型3例(7.14%)、GⅡ型38例(90.48%)、GⅠ/GⅡ混合型1例(2.38%);与其他年龄段比较,6~12岁GⅠ型占比(25.00%)较高;与春、冬季比较,夏、秋季GⅠ型占比(16.67%、20.00%)较高,春、冬季GⅡ型占比(100.00%、91.30%)较高。结论南昌市西湖区急性腹泻患儿诺如病毒阳性率较高,以GⅡ型为主,且好发于<1岁患儿及春季与冬季。

依非韦伦与洛匹那韦利托那韦抗反转录病毒治疗艾滋病的对照研究

目的:比较依非韦伦(EFV)与洛匹那韦利托那韦(LPV/r)抗反转录病毒治疗(ART)艾滋病(AIDS)患者的效果及对脂代谢水平影响。方法:回顾性分析本院2020年3月-2022年3月200例接受EFV、LPV/r与ART的AIDS患者临床资料,根据治疗方法分为EFV组(n=105)和LPV/r组(n=95),两组均予以替诺福韦与拉米夫定基础治疗。EFV组在基础治疗上予以依非韦伦片治疗,LPV/r组在基础治疗上予以洛匹那韦利托那韦片治疗。两组均持续给药1年。比较两组临床疗效、治疗前后人类免疫缺陷病毒(HIV)RNA载量、T淋巴细胞(CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、CD_(8)^(+)和CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+))水平、血脂指标[血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)]水平、焦虑情绪、抑郁情绪及治疗期间不良反应发生率。结果:治疗后,LPV/r组临床疗效优于EFV组(P<0.05);治疗后,两组HIV RNA载量、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)、HAD-A、HAD-D评分均低于治疗前,且LPV/r组低于EFV组(P<0.05)。治疗后,两组CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、CD_(8)^(+)、FTG、TG、TC水平均高于治疗前,且LPV/r组高于EFV组(P<0.05);两组不良反应率无统计学差异(P>0.05)。结论:相较于EFV,LPV/r更能有效提高AIDS患者临床疗效,导致血脂代谢异常,提高AIDS患者免疫力,调节不良情绪,两者用药安全性无统计学差异。

植物反转录转座子及其在功能基因组学中的应用

高等植物中的反转录转座子是构成植物基因组的重要成分之一。它分病毒家族和非病毒家族两类,病毒家族包括反转录病毒和类似于反转录病毒的非病毒转座子,病毒家族中的反转录转座子可再细分为Ty3 gypsy类和Ty1 copia类;非病毒家族可细分为LINE类和SINE类。正常情况下大部分反转录转座子不具有活性,某些生物或非生物因素胁迫可激活部分反转录转座子转座。反转录转座子自身编码反转录酶进行转录,以“拷贝-粘贴”的转座模式导致基因组扩增和进化。具有活性的反转录转座子通过插入产生新的突变,可作为一种基因标签技术,应用于功能基因组学研究,并成为研究植物基因功能和表达的重要技术平台。本文综述了近几年来在植物反转录转座子方面的研究进展,主要包括植物反转录转座子的结构、特征、活性及其对基因组的影响和它们在功能基因组学中的应用。

Copia类型反转录转座子在籽粒苋中的表现

利用籽粒苋为材料 ,通过PCR扩增、克隆研究了copia类型反转录转座子的反转录酶序列在籽粒苋中的表现 ,结果表明 :(1)反转录转座子在苋属的 30个品系中同时检测到 ,说明反转录转座子在籽粒苋的不同种中普遍存在 ;(2 )对野生苋 (A .quitensis)中克隆、序列分析 2 8个反转录转座子的反转录酶序列 ,碱基分析表明 ,它们存在高度异质性 ,不同的反转录酶序列均存在不同程度的碱基缺失突变和终止密码子的突变 ;(3)对 2 8个序列与已发表的一些不同物种 (如水稻、矮牵牛和果蝇等 )的同一类型序列聚类分析表明 ,存在于野生苋中的反转录转座子与来源于双子叶或单子叶植物的反转录转座子关系密切 ,它们与果蝇的copia因子和

人雌激素β受体RNAi反转录病毒载体在人成骨样MG63细胞中的表达

背景:目前已有较多关于雌激素α受体基因如何参与骨代谢的研究,而对雌激素β受体基因如何参与骨代谢的研究则相对较少。目的:构建人雌激素β受体RNAi反转录病毒表达载体,并通过病毒介导其在人成骨样MG63细胞中表达。方法:根据GeneBank数据库提供的雌激素β受体基因核苷酸序列,选择设计3条针对人雌激素β受体干扰靶序列,并与pRNAT-H1.4/Retro质粒定向连接,构建真核表达载体pRNAT-H1.4/Retro-雌激素β受体-shRNA,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。将pRNAT-H1.4/Retro-雌激素β受体-shRNA经脂质体转染至293细胞包装成反转录病毒。将包装好的反转录病毒,以空白及非特异性shRNA作为对照,感染人成骨样MG63细胞株。结果与结论:3个连接了雌激素β受体-shRNA的重组质粒经酶切鉴定分析证实目的序列己插入到预计位点,符合设计要求,测序鉴定表明重组质粒中含有针对雌激素β受体基因目的序列,表明重组质粒构建成功。并经脂质体转染至293细胞后成功包装成反转录病毒。反转录病毒载体能高效、稳定的感染人成骨样MG63细胞株,感染效率为70%左右。包装后的3种雌激素β受体-shRNA反转录病毒均能高效、稳定的感染人成骨样MG63细胞,并显著抑制雌激素β受体的表达。其中以雌激素β受体-shRNA3为最佳的干扰序列。

102例HIV-1感染者病毒株反转录酶基因多态性及耐药性变异研究

目的:目前中国未接受或已接受反转录酶抑制剂(RTI)治疗的HIV感染者的HIV反转录酶基因类型的数据较少。本研究探讨了HIV-1反转录酶的基因多态性,及在RTI选择性压力下出现的已知和未知变异位点。方法:分析研究21例未接受治疗及81例接受RTI治疗的HIV感染者的RT基因。大部分感染者(>80%)应用司他夫定(d4T)+地达诺新(ddI)+奈韦拉平(NVP)或d4T+拉米夫定(3TC)+依菲韦仑(EFV)三联HAART治疗方案。结果:在未接受治疗的患者中,发现了4个高度多态性位点(122、200、207和211)。在接受RTI治疗的患者中,发现了2种耐药相关变异(RAMs):①接受ddI+d4T+NVP治疗方案的患者中发现,K65R(9.8%)、L74V(7.4%)、M184V(7.4%)、Q151M(5%)和胸腺嘧啶类似物变异(TAMs)(9.3%),包括T215Y(5.5%);②接受d4T+3TC+EFV治疗方案的患者中发现,T215Y(23%)、M184V(20%)和TAMs(15.4%)。在所有病例中,非核苷反转录酶抑制剂(NNRTI)RAM的出现率很高(41.9%),而在142、221、224和228位点发现了4种可疑的新RAMs。结论:目前中国非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)耐药相关变异十分普遍,本研究描述了RTI选择性变异的基因模式,提出了新的一些变异与RTI治疗的相关性。

反转录病毒介导人骨形态发生蛋白2基因修饰骨髓基质细胞的体内成骨效应

目的:构建人骨形态发生蛋白2反转录病毒表达载体,探讨以转人骨形态发生蛋白2基因骨髓基质细胞为种子细胞的组织工程骨修复骨缺损的可行性。方法:实验于2001-05/2003-01在北京大学医学部完成。①采用DNA重组技术,将骨形态发生蛋白2cDNA克隆到pLXSN反转录病毒质粒,经酶切及测序鉴定正确后,包装成为pLXSN/BMP2重组反转录病毒。取15d龄BALB/c系小鼠5只用于骨髓基质细胞的提取。将重组病毒感染小鼠骨髓基质细胞,经筛选后,聚合酶链反应鉴定人骨形态发生蛋白2cDNA在转基因骨髓基质细胞中的整合情况。②转基因骨髓基质细胞的骨形态发生蛋白2表达情况采用免疫印渍杂交和核糖核酸印渍杂交技术检测。转基因骨髓基质细胞碱性磷酸酶的表达采用钙-钴法染色检测,用以评定表达骨形态发生蛋白2的生物活性。③取6周龄BALB/c小鼠6只,将转基因骨髓基质细胞与羟基磷灰石构建人工骨植于小鼠骨骼肌内,体内成骨情况予组织学观察评估。结果:①pLXSN/BMP2质粒的鉴定结果:经酶切及DNA测序证实重组pLXSN/BMP2序列正确。②重组病毒的滴度测定结果:包装的病毒滴度为(6～8)×105cfu/mL。③基因整合及表达的分析:聚合酶链反应证实转基因骨髓基质细胞基因组中有骨形态发生蛋白2cDNA整合;核糖核酸印渍杂交和蛋白免疫印渍杂交证实转基因骨髓基质细胞稳定表达人骨形态发生蛋白2;钙-钴法染色证实转基因骨髓基质细胞碱性磷酸酶阳性。④小鼠体内成骨情况:甲苯胺蓝染色的组织切片镜下观察显示转骨形态发生蛋白2基因骨髓基质细胞构成人工骨可见少量软骨细胞及软骨基质存在,软骨细胞呈巢状分布。结论:成功地构建了pLXSN-BMP2重组反转录病毒载体,该载体不仅有效地表达骨形态发生蛋白2蛋白,表达的骨形态发生蛋白2能够诱导未分化的骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化,且在体内肌肉环境下能促进成骨。

哺乳动物的反转录转座子及其在进化中的作用

哺乳动物基因组中整合了大量反转录转座子 .根据它们的结构特点和起源 ,对反转录转座子的分类、扩增途径和扩增酶学进行了探讨 ,提出了反转录转座子本身的进化方向及其在基因组进化中的作用 .依据原祖 7SLRNA演化为人类 Alu家族的过程 ,讨论了

BB染色体组野生种花生LTR反转录转座子RT基因的多样性分析

利用简并PCR技术从野生花生种(Arachis ipaensis Krapov.et W.C.Greg.)的基因组中扩增分离Ty1-copia类(1类)和Ty3-gypsy类(2类)反转录转座子RT基因,并对其序列特征、多样性、系统进化关系及转录活性进行分析。结果显示:对于1和2类RT基因,目的条带分别约为260和430 bp;分离获得了23和32条序列,长度范围分别为262~266、395~435 bp;AT所占比例分别为61.60%~69.17%和55.79%~61.34%;核苷酸序列间相似性分别为52.5%~98.9%和45.0%~98.8%,氨基酸序列间相似性分别为39.8%~100%和9.0%~97.2%。其中2类基因的异质性高于1类;1类和2类基因分别有3条和15条发生了无义突变,2类的无义突变发生率远高于1类。1类基因的保守基序保守性较高,2类的保守基序呈一定程度的变异。代表序列的蛋白质三级结构基本类似。聚类分析结果显示,1类和2类基因可被分为5个和6个家族。1类和2类基因都有部分序列与其他物种的RT基因序列亲缘关系较近,表明它们之间可能存在两类反转录转座子的横向传递。通过比对花生EST数据库,本研究发现1类有1条以及2类有7条序列为具有转录活性的反转录转座子,且2类基因比1类更具有转录活性。

果蔗Ty3-gypsy类反转录转座子RT基因的多样性分析

【目的】分析Ty3-gypsy类反转录转座子反转录酶基因(RT)序列特征、多样性、系统进化关系及转录活性,为深入研究果蔗Ty3-gypsy类反转录转座子全长序列、转录转座活性及生物学功能提供理论参考。【方法】以果蔗品种拔地拉为试材,根据Ty3-gypsy类反转录转座子RT基因保守区设计简并引物对,利用其进行PCR扩增,将目的条带回收纯化后连接至pMD18-T载体,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆进行测序。依据测序结果对RT基因序列进行生物信息学分析。【结果】从果蔗拔地拉中扩增获得51条序列(SoRT4-1~SoRT4-51),去除重复序列和非RT基因序列后共获得44条RT基因序列,长度为423~433 bp,AT含量为56.84%~64.97%,AT∶GC比值为1.32~1.85,核苷酸序列间相似性为44.4%~99.3%,其编码的氨基酸序列间相似性为10.8%~100.0%,说明氨基酸序列比核苷酸序列表现出更高异质性。44条RT基因序列被划分为4个家族,其中Ⅰ和Ⅲ为主要家族。44条RT基因编码的氨基酸序列中有20条发生了无义突变,说明其突变率较高。44条RT基因编码蛋白序列存在5种保守基序,其中,有29条序列同时包含Motif 1~Motif 4,其余15条序列的保守基序变异较大,说明保守基序存在一定异质性。4个家族代表性序列编码蛋白的三级结构在氢键和转角的数量方面差异较大;系统发育进化树分析结果显示,44条RT基因序列被分为七大类,Ⅰ类和Ⅱ类中的果蔗RT基因序列分别占序列总数的40.91%和27.27%,Ⅱ类和Ⅵ类中的部分果蔗RT基因序列与拟南芥的BAB40828.1、粳稻的BAB40824.1、菠菜的BAB40833.1和大豆的BAB40834.1亲缘关系较近,推测这些物种在进化过程中发生了Ty3-gypsy类反转录转座子的横向传递。初步发现1条Ty3-gypsy类反转录转座子(SoRT4-40)具有转录活性。【结论】获得44条果蔗Ty3-gypsy类反转录转座子RT基因序列,其中仅有1条序列具有转录活性,这些RT基因序列可用于开发基于Ty3-gypsy类反转录转座子的甘蔗分子标记。

反转录病毒介导端粒酶基因对人口腔黏膜角化细胞寿命的影响

目的：以pBABE-tert重组反转录病毒为载体,介导端粒酶反转录酶基因（hTRT）转染体外培养的人口腔角化细胞,探讨端粒酶对细胞寿命的影响。方法：将含有hTRT的pBABE-tert重组反转录病毒载体扩增后,转染体外培养的人口腔角化细胞,挑选阳性克隆进行传代培养,以PCR-ELISA和PCR-PAGE电泳检测端粒酶活性。结果：获得端粒酶活性稳定表达的口腔角化上皮细胞克隆,寿命可延长至8~9代。结论：转导端粒酶反转录酶基因的人口腔角化细胞寿命延长1倍,但不能永生化,说明人口腔上皮角化细胞的永生化是复杂和多点调控的过程,端粒酶活性增加是细胞永生化的关键但不是唯一原因。

栽培种花生Ty1-copia类反转录转座子反转录酶序列的克隆及分析

克隆Ty1-copia类反转录转座子反转录酶序列并分析其特性,为开发栽培种花生基于LTR反转录转座子的分子标记奠定基础。根据Ty1-copia类反转录转座子反转录酶的保守区设计简并引物对,利用PCR技术对栽培种花生品种“桂花1026”的基因组DNA进行扩增,目的条带经回收、克隆、测序,最后对序列进行生物信息学分析。目的条带大小约260 bp,克隆获得了34条反转录酶序列,序列长度变化范围为256~267 bp,AT所占比例范围为51.36%~67.79%,AT与GC比例范围为1.06~2.10,序列间相似性范围为44.9%~98.5%,序列存在较高异质性,表现为缺失突变与点突变;34条反转录酶序列系统聚类为3个家族,家族Ⅰ和家族Ⅱ分别占到了总序列数的55.88%和35.29%;翻译成氨基酸后,有14条序列发生了无义突变,序列间相似性范围为11.4%~98.9%,呈现高度异质性;序列间保守基序也存在较大差异,呈现较高异质性;对栽培种花生与其他物种植物该类型反转录酶的氨基酸序列构建系统进化树,结果显示所有序列被分为7类,其中Ⅰ类和Ⅱ类分别包含16条和11条栽培种花生反转录酶序列,表明栽培种花生反转录酶序列具有比较高的保守性,同时栽培种花生也与葡萄、马铃薯、辣椒、烟草、番茄、大豆、甜菜、草莓等物种植物的反转录酶序列之间具有较近的亲缘关系,表明不同物种植物的Ty1-copia类反转录转座子之间有可能存在着横向传递。本研究所获得的反转录酶序列为栽培种花生Ty1-copia反转录转座子的分子标记开发利用及花生分子育种奠定了一定基础。