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发根农杆菌介导的甜瓜CRISPR/Cas9系统靶位点的检测
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作者 朱蕾 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2024年第8期15-23,共9页
选取甜瓜栽培材料龙庆八号作为受体材料,构建CmCURT1A基因CRISPR/Cas9基因编辑载体,经发根农杆菌介导检测靶位点的编辑情况,为后续甜瓜遗传转化试验提供载体基础。以甜瓜CmCURT1A基因(ID:MELO3C006053.2)为靶基因构建双靶位点敲除载体,... 选取甜瓜栽培材料龙庆八号作为受体材料,构建CmCURT1A基因CRISPR/Cas9基因编辑载体,经发根农杆菌介导检测靶位点的编辑情况,为后续甜瓜遗传转化试验提供载体基础。以甜瓜CmCURT1A基因(ID:MELO3C006053.2)为靶基因构建双靶位点敲除载体,经发根农杆菌K599介导的简单遗传转化技术使甜瓜组织长出不定根,经PCR测序发现在不定根中分别存在65 bp、72 bp不同碱基片段的缺失。该方法成功进行了甜瓜CRISPR/Cas9载体靶位点敲除情况的检测,简单高效,实现了在甜瓜中基因编辑靶点的快速鉴定,为研究甜瓜基因功能和遗传改良奠定基础。 展开更多
关键词 甜瓜 CRISPR/Cas9 发根农杆菌 基因敲除
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平邑甜茶发根农杆菌介导转化体系构建与优化
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作者 周雪婷 武凯凯 +10 位作者 崔蓝芳 张坤玺 白团辉 史江莉 焦健 王苗苗 刘昱 赵玉洁 万然 郝鹏博 郑先波 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期999-1008,共10页
【目的】建立并优化平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd.)幼苗简单、高效、快速的发根农杆菌转化体系。【方法】以不同苗龄的平邑甜茶幼苗为材料,使用携带GFP及GUS过表达质粒的发根农杆菌K599,通过注射法、活化菌液浸染及菌株涂抹方法侵染... 【目的】建立并优化平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd.)幼苗简单、高效、快速的发根农杆菌转化体系。【方法】以不同苗龄的平邑甜茶幼苗为材料,使用携带GFP及GUS过表达质粒的发根农杆菌K599,通过注射法、活化菌液浸染及菌株涂抹方法侵染平邑甜茶根颈部诱导毛状根,利用GFP荧光检测、GFP蛋白印迹检测、DNA检测和GUS染色方法进行转基因株系验证,同时对成功转化株系根、茎、叶组织的表达量进行分析,检测发根农杆菌在转化平邑甜茶株系中的迁移性。【结果】不同苗龄平邑甜茶幼苗诱导毛状根能力具有较大差异,其中三叶龄幼苗诱导毛状根率最高,为96%,五叶龄幼苗最高的毛状根诱导率为65%,以使用菌株涂抹方式转化植株的毛状根分布为最佳、毛状根诱导率为最高。发根农杆菌在成功转化株系中存在随机向地上部迁移的现象,并能够整合目的基因至叶片叶柄及部分主叶脉基因组中,但在培养30 d时无法通过蛋白印迹方式在蛋白水平上检测到蛋白信号。【结论】建立并优化了简单、高效的发根农杆菌介导的平邑甜茶转化体系,鉴定了发根农杆菌在转化株系中随机向地上部迁移规律,为发根农杆菌技术的进一步利用提供理论依据。 展开更多
关键词 平邑甜茶 发根农杆菌 转化效率 迁移性
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发根农杆菌介导的柑橘黄龙病抗性快速评价体系优化及应用
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作者 曹鹏 周金环 +5 位作者 王新亮 李楚欣 李佳欣 姜培 刘金香 宋震 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第16期3182-3191,共10页
【目的】黄龙病(Huanglongbing,HLB)是一种毁灭性柑橘病害,主要由韧皮部杆菌属亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)侵染引起。本研究旨在探究侵染初期CLas在柑橘毛状根中的增长规律,优化发根农杆菌(Agrobacterium rhizogen... 【目的】黄龙病(Huanglongbing,HLB)是一种毁灭性柑橘病害,主要由韧皮部杆菌属亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)侵染引起。本研究旨在探究侵染初期CLas在柑橘毛状根中的增长规律,优化发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)介导的黄龙病抗性快速评价体系并应用于抗菌肽的抗性评价。【方法】基于植物表达载体pGNGM1300,通过发根农杆菌K599介导的毛状根转化体系转化不同柑橘品种,筛选毛状根诱导快、转化率高的品种;接种CLas后,利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)对毛状根中的CLas进行定期检测,揭示其增长规律;在优化黄龙病抗性评价体系的基础上,通过CLas和相关基因的(RT-)qPCR、胼胝质含量检测、显微结构观察和症状观察等开展抗菌肽的黄龙病抗性评价。【结果】供试的11个柑橘品种中,香橼(Citrus medica)的毛状根诱导最快(15 d)、诱导率最高(73.75%),并且毛状根中转基因阳性率高(53.54%)。qPCR定期监测结果显示,在接种后第20—30天(days post inoculation,dpi),CLas开始在根中定殖;在30—50 dpi,CLas含量呈显著上升的趋势;CLas含量在60—120 dpi时略有波动,但与50 dpi时差异不显著。抗菌肽MaSAMP(stable antimicrobial peptide)、HBD-4(homo sapiens defensin beta 4)和CB(cecropin B)的抗性评价结果分析显示,在50—120 dpi,MaSAMP和CB表达植株中CLas含量均低于对照,且差异显著,除90 dpi外HBD-4表达植株中CLas含量也显著低于对照。3种抗菌肽表达植株中的胼胝质含量均显著低于对照(60 dpi),韧皮部细胞壁增厚不明显,未出现明显的淀粉粒和胼胝体沉积,并且均未发现根部死亡等现象(90 dpi)。【结论】揭示了侵染早期CLas在柑橘毛状根中的增长规律;优化了发根农杆菌介导的黄龙病抗性快速评价体系;明确转基因过表达抗菌肽MaSAMP、HBD-4和CB可显著抑制CLas的增殖,减少胼胝质沉积,减轻黄龙病症状,具有用于黄龙病防控实践的潜力。 展开更多
关键词 柑橘黄龙病 抗菌肽 发根农杆菌 毛状转化 抗性评价
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发根农杆菌和ABT1对杉木扦插生根的影响
4
作者 吴漳辉 《福建林业》 2024年第3期45-48,共4页
以杉木插穗为试材,研究了ABT1和A4发根农杆菌对其扦插生根的影响。结果表明:A4发根农杆菌能有效提高杉木扦插的不定根再生效率,扦插60 d后杉木插条的生根率表现为ABT1+A4(93.37%)>A4(72.93%)>ABT1(64.22%)>CK(46.32%);经ABT1+A... 以杉木插穗为试材,研究了ABT1和A4发根农杆菌对其扦插生根的影响。结果表明:A4发根农杆菌能有效提高杉木扦插的不定根再生效率,扦插60 d后杉木插条的生根率表现为ABT1+A4(93.37%)>A4(72.93%)>ABT1(64.22%)>CK(46.32%);经ABT1+A4处理的杉木插条内源激素IAA、可溶性糖含量及生根数目、根系直径、体积、根表面积等根系参数均高于对照或者单一处理;用500 mg·kg^(-1) ABT1和0.5 OD值A4发根农杆菌菌液分别浸泡杉木插穗10 min和30 min,能显著缩短插条生根时间也能提高生根数目。 展开更多
关键词 杉木 扦插 不定 发根农杆菌 系参数
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发根农杆菌介导的细茎柱花草毛状根转化体系的建立 被引量:3
5
作者 赵兴坤 孙昊 +2 位作者 杨丽云 罗丽娟 刘攀道 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期581-586,共6页
细茎柱花草(Stylosanthes gracilis)是圭亚那柱花草(S.guianensis)的野生近缘种,具有茎秆直立、种子落粒性低、抗旱能力较强等特点。为开发一种高效的细茎柱花草毛状根转化体系,本研究以细茎柱花草子叶节为外植体及4个发根农杆菌为供试... 细茎柱花草(Stylosanthes gracilis)是圭亚那柱花草(S.guianensis)的野生近缘种,具有茎秆直立、种子落粒性低、抗旱能力较强等特点。为开发一种高效的细茎柱花草毛状根转化体系,本研究以细茎柱花草子叶节为外植体及4个发根农杆菌为供试菌种,探索菌液浓度、侵染时间、共培养时间对毛状根转化效率的影响。结果表明MSU440为诱导毛状根发生的最优菌株,诱导率为88.3%。其中,该菌株诱导毛状根产生的最佳条件为菌液浓度OD600=0.3、侵染时间为15 min、共培养4 d,转化效率达34.72%。同时,获得的转基因材料通过聚合酶链式反应(PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)分子鉴定方式,证实了外源基因已整合到细茎柱花草毛状根的基因组中。因此,本研究成功建立了一种细茎柱花草的毛状根转基因体系。 展开更多
关键词 细茎柱花草 子叶节 发根农杆菌 转基因 毛状
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发根农杆菌介导的甘薯遗传转化体系优化 被引量:3
6
作者 陶娜 李茂兴 郭华春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期175-183,共9页
遗传转化体系对植物基因功能的验证具有重要意义,为在甘薯(Ipomoea batatas L.)中建立发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)介导的遗传转化体系,本研究采用3×3×5三因素试验设计研究发根农杆菌侵染时间、外植体类型、发根农... 遗传转化体系对植物基因功能的验证具有重要意义,为在甘薯(Ipomoea batatas L.)中建立发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)介导的遗传转化体系,本研究采用3×3×5三因素试验设计研究发根农杆菌侵染时间、外植体类型、发根农杆菌菌株对甘薯毛状根诱导率的影响。确定合适的外植体类型、侵染时间,在此基础上采用5×5双因子设计,研究5种发根农杆菌菌株和甘薯品种(系)对甘薯发根诱导率的影响。用PCR技术检测诱导出的毛状根,证实了发根农杆菌Ri质粒的rolB基因已经整合到甘薯细胞基因组中。结果表明,发根农杆菌侵染时间、外植体类型、发根农杆菌菌株、甘薯品种均影响发根诱导率,且各因子间存在交互作用。最适宜发根的外植体为茎段,最佳侵染时间是20 min,‘徐薯22’适宜菌株为MSU440,‘泰中6号’适宜菌株为K599,‘1610’适宜菌株为C58C1,‘YS’适宜菌株为K599,‘灰薯’适宜菌株为C58C1。采用发根农杆菌菌株MSU440,以‘徐薯22’茎段为外植体、农杆菌侵染20 min,最高获得了79.63%的毛状根诱导率。构建过表达载体进行毛状根遗传转化,通过目的基因的PCR扩增发现甘薯毛状根的转基因效率为38.1%。建立了发根农杆菌介导的甘薯遗传转化体系,为甘薯进一步的转基因育种奠定基础。 展开更多
关键词 甘薯 发根农杆菌 毛状 诱导率 转基因 转基因率
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发根农杆菌介导的闽楠遗传转化体系构建与优化
7
作者 吴梦洁 洪家都 +3 位作者 李芳燕 周生财 林二培 程龙军 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1516-1522,共7页
闽楠[Phoebe bournei(Hemsl.)Yang]为我国重要的珍贵树种。为建立闽楠遗传转化体系,以闽楠幼苗为材料,利用pCAMBIA1300-GFP质粒转化的发根农杆菌介导植株转化。在比较注射和菌液浸泡两种侵染方式侵染效率的基础上,进一步利用正交[L9(3^(... 闽楠[Phoebe bournei(Hemsl.)Yang]为我国重要的珍贵树种。为建立闽楠遗传转化体系,以闽楠幼苗为材料,利用pCAMBIA1300-GFP质粒转化的发根农杆菌介导植株转化。在比较注射和菌液浸泡两种侵染方式侵染效率的基础上,进一步利用正交[L9(3^(3))]试验从菌株种类、菌液侵染浓度和侵染植株苗龄三个方面优化了遗传转化体系。另外,对不同光强影响闽楠毛状根诱导及转化率情况进行了分析。结果表明,注射法的毛状根诱导率和遗传转化率分别为80.0%、66.7%;而菌液浸泡法的诱导率和遗传转化率分别为41.2%、35.3%。正交试验中,影响闽楠毛状根诱导率和遗传转化率的主要因素为菌株种类。最大诱导率和转化效率分别达到了87.5%、70.6%。该体系的最优组合为:K599菌株在菌液浓度OD_(600)=1.2条件下注射侵染三叶期的闽楠幼苗。此外,较弱光强(50μmol·m^(-2)·s^(-1))的培养条件比较强光照(100μmol·m^(-2)·s^(-1))更有利于闽楠幼苗的生长和遗传转化。本研究创建并优化了一套高效、稳定的闽楠遗传转化体系,成功获得了具有转基因毛状根的闽楠植株,为闽楠重要基因挖掘、新种质创建和遗传改良奠定了基础。 展开更多
关键词 闽楠 遗传转化 发根农杆菌
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基于发根农杆菌的大豆CRISPR/Cas9系统靶点可行性的快速检测方法
8
作者 罗可 王珞 刘辉 《农业灾害研究》 2023年第7期56-58,共3页
研究选取大豆FAD2-1A和FAD2-1B基因为靶标,使用CRISPR/Cas9基因编辑系统构建靶点的基因敲除载体,并利用发根农杆菌K599的特性侵染大豆植株,以获取不定根,通过对不定根的DNA提取和PCR测序鉴定,发现靶点前的序列峰图平稳且准确,在靶点处... 研究选取大豆FAD2-1A和FAD2-1B基因为靶标,使用CRISPR/Cas9基因编辑系统构建靶点的基因敲除载体,并利用发根农杆菌K599的特性侵染大豆植株,以获取不定根,通过对不定根的DNA提取和PCR测序鉴定,发现靶点前的序列峰图平稳且准确,在靶点处开始出现杂乱的套峰,表明大豆FAD2-1A与FAD2-1B2个基因均被成功编辑。此方法操作简单、实验周期较短,实现了对大豆中选择靶点的可行性的快速鉴定,为研究大豆的FAD2基因功能和遗传改良方面提供了新的技术支持。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 大豆 发根农杆菌 基因编辑
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IBA和发根农杆菌对糠椴嫩枝扦插的影响 被引量:25
9
作者 张芹 李保会 +4 位作者 朵建国 王文凤 刘云强 梁海永 杨建民 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期201-204,共4页
研究了IBA和发根农杆菌处理对糠椴嫩枝扦插生根的影响,并对其影响生根的机理进行了初步探讨。结果表明:IBA和发根农杆菌处理显著(P<0.01)提高了插条生根率,增加了成活苗的生根数和根长,明显缩短了生根时间。IBA和发根农杆菌处理还显... 研究了IBA和发根农杆菌处理对糠椴嫩枝扦插生根的影响,并对其影响生根的机理进行了初步探讨。结果表明:IBA和发根农杆菌处理显著(P<0.01)提高了插条生根率,增加了成活苗的生根数和根长,明显缩短了生根时间。IBA和发根农杆菌处理还显著(P<0.01)提高了插条生根期内源GA3和IAA、可溶性总糖和全氮的含量及IAA/ABA比值,降低了ABA含量,对糠椴嫩枝扦插生根有明显的促进作用,其中以500mg.kg-1IBA+发根农杆菌处理的生根效果最好,插条的生根率、成活苗的生根数、成活苗的根长分别比对照增加了122.08%、65.75%和23.63%,生根时间比对照缩短了14d。 展开更多
关键词 糠椴 IBA 发根农杆菌 嫩枝扦插 内源激素 营养物质
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超声波辅助处理对发根农杆菌介导的苦豆子遗传转化的影响 被引量:21
10
作者 赵东利 陈红波 +2 位作者 聂秀菀 王新宇 郑国锠 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第3期468-472,共5页
以发根农杆菌转化苦豆子的子叶和下胚轴外植体,结果表明,辅助以超声波处理有助于转化率的提高,当超声波(功率120W,震荡频率50kHz)处理25min时,转化率达到最高峰(子叶为83.7%,下胚轴为39.1%),分别高于对照(14.4%和9.8%)69.3%和29.3... 以发根农杆菌转化苦豆子的子叶和下胚轴外植体,结果表明,辅助以超声波处理有助于转化率的提高,当超声波(功率120W,震荡频率50kHz)处理25min时,转化率达到最高峰(子叶为83.7%,下胚轴为39.1%),分别高于对照(14.4%和9.8%)69.3%和29.3%。在此条件下,进一步添加AS100μmol/L,可使转化率再进一步提高9.9%和7.6%。 展开更多
关键词 苦豆子 超声波处理 发根农杆菌 遗传转化 乙酰丁香酮 药用植物
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发根农杆菌对短叶红豆杉的转化及毛状根中紫杉醇的产生 被引量:58
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作者 黄遵锡 慕跃林 +5 位作者 周玉敏 陈文久 许坤一 余尊祥 卞云萍 杨桂仙 《云南植物研究》 CAS CSCD 1997年第3期292-296,共5页
发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)A4(ATCC31789)感染短叶红豆杉(Taxusbrevifoli-a)芽外植体,30~35d后可诱导出毛状根,40d后转化率可达30%,毛状根经农杆碱... 发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)A4(ATCC31789)感染短叶红豆杉(Taxusbrevifoli-a)芽外植体,30~35d后可诱导出毛状根,40d后转化率可达30%,毛状根经农杆碱单克隆抗体酶联免疫分析,证明已被转化。毛状根生长速度较快,5株毛状根在无激素的B5液体培养基中悬浮培养20d,生物量平均增加约9倍,是同等条件下短叶红豆杉愈伤组织液体悬浮培养的2.9倍。经紫杉醇单克隆抗体酶联免疫反应检测,毛状根中含有紫杉醇,其含量为短叶红豆杉愈伤组织的1.3~8.0倍,悬浮培养过程中,毛状根也向培养液中分泌0.01~0.03mg/L的紫杉醇。 展开更多
关键词 短叶红豆杉 紫杉醇 发根农杆菌 毛状培养
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宁夏枸杞发根农杆菌转化系的建立及影响转化因素的研究 被引量:29
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作者 胡忠 杨军 +1 位作者 郭光沁 郑国锠 《西北植物学报》 CAS CSCD 2000年第5期766-771,共6页
以发根农杆菌 A4 菌株介导 ,对宁夏枸杞叶片和茎切段的遗传转化进行了初步研究 ,建立了发状根体系 ,并优化了转化条件。乙酰丁香酮的添加、农杆菌液的浓度、共培养时间、外植体取材部位及时间 ,均可以影响发状根的诱导频率。采用添加 1 ... 以发根农杆菌 A4 菌株介导 ,对宁夏枸杞叶片和茎切段的遗传转化进行了初步研究 ,建立了发状根体系 ,并优化了转化条件。乙酰丁香酮的添加、农杆菌液的浓度、共培养时间、外植体取材部位及时间 ,均可以影响发状根的诱导频率。采用添加 1 0 0 μmol/L的乙酰丁香酮、振荡培养 2 4 h的 A4 菌液感染 3周龄的叶片切段 ,并共培养 3d,可以得到最佳的转化效果 ,发状根的诱导率为 48.9%。在同样的转化条件下 ,只有 1 3.6%的茎切段上能诱导出发状根。在感染菌液之前 ,外植体预培养 3d对发状根的诱导也有一定的促进作用。 展开更多
关键词 宁夏枸杞 发根农杆菌 转化系
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发根农杆菌诱导人参产生发根及离体发根中人参皂甙含量的测定 被引量:19
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作者 赵寿经 杨振堂 +2 位作者 李昌禹 臧埔 申玉华 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期57-63,共7页
发根农杆菌A4菌株诱导人参 (PanaxginsengC .A .Meyer)产生发根 ,诱导率 31 .6%。转化发根可在无任何激素的MS培养基上快速生长 ,且具有分枝性强、丛生、无向地性等特点。通过对液体培养条件的选择 ,发现人参发根在 1 /2MS液体培养基上 ... 发根农杆菌A4菌株诱导人参 (PanaxginsengC .A .Meyer)产生发根 ,诱导率 31 .6%。转化发根可在无任何激素的MS培养基上快速生长 ,且具有分枝性强、丛生、无向地性等特点。通过对液体培养条件的选择 ,发现人参发根在 1 /2MS液体培养基上 ( 2 5℃、1 1 0r/min摇床上暗培养 )获得最大生长速率 ,经 1 4d培养 ,人参发根鲜重增加了 7.97倍。利用高效液相色谱法测定发根中人参皂甙含量发现 ,发根系R992 3中人参单体皂甙Rb1 含量达到 1 0 .38mg/g ,超过栽培六年生人参根中Rb1 含量 ( 6.45mg/g)。用高压纸电泳方法在人参发根中检测到农杆碱及甘露碱的存在。Southern点杂交证明 :本研究获得的人参发根确已被A4菌株Ri质粒的T -DNA所转化 ,并被整合到人参发根DNA上。 展开更多
关键词 人参 遗传转化 人参皂甙 液体培养 人参 含量测定 发根农杆菌
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发根农杆菌诱导牡丹生根的初步研究 被引量:14
14
作者 杨至德 王雁 +2 位作者 刘雪梅 缪崑 汤巧香 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2007年第2期292-295,共4页
The paper explored the possibility of hairy root occurrence of peony induced by Agrobactrium rhizogenes.It showed that R1000 had the highest hairy root inducement with a hairy root rate of 35%,whereas strains A4,MSU-2... The paper explored the possibility of hairy root occurrence of peony induced by Agrobactrium rhizogenes.It showed that R1000 had the highest hairy root inducement with a hairy root rate of 35%,whereas strains A4,MSU-2 and MT232 had little difference in hairy root occurrence.Infect conditions had great influence on hairy root inducement,and the better ones are: acetosyringone concentration,30 mg·L-1;infection time,15 minutes;and culturing conditions of strains,temperature 28 ℃,28 hours shaking culture under dark environment with shaking.Pre-experiment on tissue culture system of peony was conducted,and got better medium composition as: WP+6-BA 0.5 mg·L-1+ IBA 0.1 mg·L-1+GA30.5 mg·L-1for base buds,and MS + 6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+GA3 0.5 mg·L-1for stem segments. 展开更多
关键词 发根农杆菌 牡丹 侵染 组织培养 毛状
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发根农杆菌T-DNA基因对3种葛属植物毛状根形态和葛根素含量的影响 被引量:14
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作者 刘传飞 李玲 +1 位作者 潘瑞炽 金乐红 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2001年第2期143-146,共4页
野葛、山葛和三裂叶葛的离体叶片与发根农杆菌R16 0 1直接感染诱导出毛状根并能够合成葛根素 ,毛状根离体培养后均出现两种形态 :一种是有较高的葛根素含量的典型毛状根 ,另一种是葛根素含量低但生长速率较快的愈伤组织化毛状根 .两类... 野葛、山葛和三裂叶葛的离体叶片与发根农杆菌R16 0 1直接感染诱导出毛状根并能够合成葛根素 ,毛状根离体培养后均出现两种形态 :一种是有较高的葛根素含量的典型毛状根 ,另一种是葛根素含量低但生长速率较快的愈伤组织化毛状根 .两类毛状根均有rolB基因存在 ,表明rolB基因对所有毛状根的诱导和生长是必需的 .aux1存在于所有愈伤组织化毛状根 ,而在典型毛状根中的检出率为 2 0 %~ 5 0 % ,表明aux1基因有诱导毛状根产生愈伤组织的作用 .含有ags基因的毛状根葛根素含量低于不含ags基因的毛状根葛根素含量 ,表明ags基因不利于次生代谢物合成 .表3参 展开更多
关键词 发根农杆菌 葛属 毛状 形态 遗传转化 T-DNA基因 药用植物
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发根农杆菌对苦豆子高频转化条件的优化 被引量:14
16
作者 赵东利 张春广 +1 位作者 王新宇 郑国锠 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第4期220-223,共4页
为优化发根农杆菌对药用植物苦豆子(Sophora alopecroides)遗传转化的条件,系统地研究了苦豆子外植体的种类(子叶、下胚轴、幼茎、幼叶),发根农杆菌的悬浮介质和密度、乙酰丁香酮的有元,以及共感染时的辅助处理方法(振动培养、真... 为优化发根农杆菌对药用植物苦豆子(Sophora alopecroides)遗传转化的条件,系统地研究了苦豆子外植体的种类(子叶、下胚轴、幼茎、幼叶),发根农杆菌的悬浮介质和密度、乙酰丁香酮的有元,以及共感染时的辅助处理方法(振动培养、真空渗透)等因素对转化率的影响。实验结果发现,(1)以子叶为外植体;(2)用MS培养基重悬菌体至光密度 0D600=0.6,并添加终浓度为 100μmol/L的乙酰丁香酮作为诱导菌液;和(3)真空(7.0 X104Pa)渗透 15 min,3者的组合可有效地提高发根农杆菌 A4对苦豆子的转化频率,最高频率可达到89.1%。 展开更多
关键词 发根农杆菌 苦豆子 高频转化条件 优化 真空渗透
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发根农杆菌RiT-DNA对墨旱莲的遗传转化 被引量:13
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作者 张汉明 许铁峰 +1 位作者 丁如贤 李博华 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期924-926,共3页
目的 建立墨旱莲 Eclipta prostrata的毛状根离体培养系统。方法 分别用发根农杆菌 A4,R16 0 1,ATCC15 8343种菌株感染墨旱莲的子叶外植体 ,获得毛状根 ,并筛选了优质株系 ;测定了毛状根的生长曲线 ;利用高压纸电泳法对毛状根进行 T- ... 目的 建立墨旱莲 Eclipta prostrata的毛状根离体培养系统。方法 分别用发根农杆菌 A4,R16 0 1,ATCC15 8343种菌株感染墨旱莲的子叶外植体 ,获得毛状根 ,并筛选了优质株系 ;测定了毛状根的生长曲线 ;利用高压纸电泳法对毛状根进行 T- DNA转化的检测。结果 首次利用发根农杆菌 A 4,R16 0 1,ATCC15 8343种菌株成功地从墨旱莲中诱导出毛状根 ;经高压纸电泳检测 ,墨旱莲毛状根中含有甘露碱 ,表明 Ri质粒的 T- DNA已整合进毛状根中。 展开更多
关键词 发根农杆菌 毛状银 墨旱莲 RI质粒 T-DNA
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茶叶儿茶素对发根农杆菌的抑制作用及抗酚菌株筛选研究 被引量:10
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作者 毛清黎 施兆鹏 +2 位作者 李玲 刘仲华 朱旗 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期243-247,共5页
本文研究了茶叶儿茶素对发根农杆菌的抑制作用并进行了抗酚菌株的筛选。结果表明:儿茶素(TC80)对发根农杆菌有明显的抑制作用,其MIC90为25~100μg/ml,这阐明了茶树中富含儿茶素等多酚类是制约农杆菌介导法对茶树进行遗传转化的关键因... 本文研究了茶叶儿茶素对发根农杆菌的抑制作用并进行了抗酚菌株的筛选。结果表明:儿茶素(TC80)对发根农杆菌有明显的抑制作用,其MIC90为25~100μg/ml,这阐明了茶树中富含儿茶素等多酚类是制约农杆菌介导法对茶树进行遗传转化的关键因子。通过抗酚筛选获得的抗酚菌株R1000AP,其抗酚性提高10~40倍,其诱导茶树的发根频率提高46.5%(P<0.05)。 展开更多
关键词 儿茶素 发根农杆菌 抑制作用 抗酚菌株 筛选 频率
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发根农杆菌介导云南萝芙木的遗传转化 被引量:14
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作者 王泓 廖志华 +3 位作者 田桂香 徐秀梅 曾建军 孙敏 《西南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期137-141,共5页
用发根农杆菌A4分别感染云南萝芙木幼嫩的真叶和茎段,诱导出毛状根,并对毛状根进行了离体培养, PCR检测转基因毛状根和HPLC检测毛状根中利血平的含量.结果表明:这两种外植体的转化频率及诱导出的毛状根差异极大,幼嫩的真叶叶片比茎段... 用发根农杆菌A4分别感染云南萝芙木幼嫩的真叶和茎段,诱导出毛状根,并对毛状根进行了离体培养, PCR检测转基因毛状根和HPLC检测毛状根中利血平的含量.结果表明:这两种外植体的转化频率及诱导出的毛状根差异极大,幼嫩的真叶叶片比茎段更适合作转化外植体用.PCR检测结果表明,诱导毛状根的基因rolB和 rolC整合到云南萝芙木基因组中,HPLC含量检测表明毛状根中利血平的含量比自然根中利血平的含量有显著的增加,因此可以作为利血平来源生产的有效途径之一. 展开更多
关键词 发根农杆菌 云南萝芙木 遗传转化 毛状
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发根农杆菌转化青蒿影响因素的研究 被引量:9
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作者 刘本叶 叶和春 +4 位作者 李国凤 贾燕涛 麻密 陈建林 张艳萍 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 1998年第4期349-353,共5页
对叶盘法转化过程中各种影响因素进行研究.结果表明:发根农杆菌种类、基本培养基和青蒿株系对转化率有明显影响,而培养基pH在5.2~5.8对转化率没有明显影响;发根农杆菌ATCC15834的转化率最高;基本培养基中MS效... 对叶盘法转化过程中各种影响因素进行研究.结果表明:发根农杆菌种类、基本培养基和青蒿株系对转化率有明显影响,而培养基pH在5.2~5.8对转化率没有明显影响;发根农杆菌ATCC15834的转化率最高;基本培养基中MS效果最好;青蒿株系025对发根农杆菌最敏感;处于对数生长期的发根农杆菌(D660nm=0.75)稀释5倍后用来转化效果最好;幼嫩的叶片的转化率比成熟叶片高;向共培养培养基中加入乙酰丁香酮等酚类物质对转化没有促进作用.在最适的转化条件下,发根农杆菌ATCC15834对青蒿株系025的转化率可达到100%.PCR检测证明,青蒿发根基因组中含有发根农杆菌Ri质粒TDNA上的rolC片段. 展开更多
关键词 青蒿 发根农杆菌 诱导率 RI质粒
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