猪流行性腹泻病毒变异毒株一步法RT-PCR鉴别检测方法的建立及临床应用

为了建立一种快速鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株的病原学方法和掌握洛阳市PEDV变异毒株的流行规律,试验根据GenBank中PEDV变异毒株的特异性序列设计引物,通过优化退火温度、模板添加量、引物添加量建立PEDV变异毒株一步法RT-PCR鉴别检测方法,并分析了该方法的特异性、敏感性和重复性;同时应用该方法检测采集自洛阳市的251份临床样品,并对不同地区、不同年份、不同养殖模式的检测结果进行比较分析。结果表明:优化后的退火温度为51℃,模板添加量为5μL,引物添加量为0.5μL;该方法对PEDV变异毒株能够扩增出550 bp特异性条带,而检测的PEDV经典毒株、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)均为阴性;对PEDV变异毒株RNA的最低检测限达到0.74 ng,对3份PEDV变异毒株阳性病料和3份PEDV变异毒株阴性病料重复检测3次的结果完全一致;检测采集于洛阳市251份临床样品的平均阳性率为29.48%,其中不同地区阳性率介于13.33%~44.44%之间,2018—2022年阳性率介于28.30%~31.58%之间,散养户和规模化猪场的阳性率分别为38.24%和19.13%。说明试验建立的PEDV变异毒株一步法RT-PCR鉴别检测方法特异、敏感、稳定、准确,洛阳市PEDV变异毒株的流行特点为个别地区较严重的情况、近几年流行率基本持平、散养户流行情况较规模化猪场严重。

猪伪狂犬病病毒变异毒株与经典毒株实时荧光定量PCR鉴别诊断方法的建立和应用

为了建立猪伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株与经典毒株的快速鉴别诊断方法,本试验根据PRV变异毒株与经典毒株的糖蛋白gC基因设计鉴别引物和探针,加入纳米金优化建立实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测方法,验证其敏感性、特异性和重复性。利用建立的qPCR和测序分析方法同时对新疆4个不同地区采集的猪场临床样品进行检测和分析。优化后的qPCR检测结果显示,重组阳性质粒PUC57-Var标准品在1×10^(9)~1×10^(3)copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.999,斜率为-3.325,最低检测限为1×10^(3)copies/μL,与其他猪源常见病毒未发生交叉反应,组内和组间重复性试验的变异系数均小于3%;该qPCR方法对临床样品的检测结果与测序分析结果一致。结果表明,本试验建立的qPCR方法可用于PRV变异毒株与经典毒株的鉴别诊断,为PRV的准确诊断和疫苗应用提供科学依据。

兔出血症病毒经典毒株和变异毒株的RT-PCR鉴定

本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株(RHDV)和变异毒株(RHDV2)的RT-PCR检测方法。根据Gen Bank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计2对分别结合两种基因的特异性引物。利用2对引物,以人工合成RHDV2的VP60基因构建的p MD19-T-VP60-2和p MD19-T-VP60为模板,进行RT-PCR体系退火温度的优化,优化后的退火温度为58.2℃。对优化后的RT-PCR体系进行RHDV和RHDV2的敏感性试验、特异性试验,并用于检测RHDV人工感染样品和疑似临床样品,结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性,经典RHDV和RHDV2的检测限度分别为95拷贝和76拷贝的靶基因片段,且对支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌、大肠杆菌等病原以及重组质粒p MD19-T-EBHSV的检测结果均为阴性。RHDV人工感染的组织样品检出率为100%,15份临床样品中3份为经典RHDV阳性,其他均为经典RHDV及RHDV2阴性。该方法的建立能够实现快速、特异及敏感地检测RHDV和RHDV2,为监测RHDV变异株的流行情况提供技术支撑。

猪流行性腹泻病毒变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株多重RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株的S基因和ORF3基因,设计合成2对特异性扩增引物,用以扩增PEDV S基因和ORF3基因,通过目的片段的数量和片段大小来判断PEDV的毒株类型;通过对退火温度等反应条件的优化,建立了检测不同PEDV毒株类型的多重RT-PCR鉴别检测方法。结果显示,所建立的多重RT-PCR鉴别检测方法能特异性区分PEDV变异毒株、经典毒株和弱毒疫苗株;PEDV变异毒株扩增出2条目的条带,分别为234 bp的ORF3基因片段和826 bp的S基因片段;PEDV经典毒株扩增出1条目的条带,片段大小为234 bp的ORF3基因片段;而弱毒疫苗株扩增出1条目的条带,片段大小为185 bp的ORF3基因片段;与猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒、猪嵴病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪乙型脑炎病毒、猪细环病毒及猪细小病毒均无交叉反应;敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸浓度为2.3×10-4ng/μl;且该方法具有良好的重复性。利用该方法对采集自广西部分地区的91份临床腹泻样品进行检测,样品中PEDV阳性样品有64份,其中变异毒株占89.06%(57/64),经典毒株占4.69%(3/64),弱毒疫苗株占6.25%(4/64)。结果表明,该多重RT-PCR鉴别检测方法特异性强、灵敏度高、操作简单,为猪流行性腹泻的流行病学及病原的鉴别诊断研究提供了可供借鉴的技术手段。

猪流行性腹泻病毒变异毒株一步法双重RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

为了建立与应用一种快速鉴别检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）变异毒株的方法,试验采用特异性试验、敏感性试验、临床应用等方法对鉴别诊断PEDV变异毒株的一步法双重RT-PCR方法进行了研究。结果表明：该方法对PEDV变异毒株能扩增出大小为870 bp和543 bp的二条特异性条带,对PEDV经典毒株和疫苗株均只能扩增出大小为543 bp的一条特异性条带;对猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（RV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）均无任何扩增条带;对变异毒株、经典毒株、疫苗株的检测灵敏度分别达0.75 ng、0.80 ng、0.09 ng的RNA含量;用该方法检测136份猪腹泻病料样品,共检测出阳性样品72份,其中变异毒株阳性样品65份,变异毒株阳性率达47.79%,与基于S基因单重RT-PCR方法和基于ORF3基因单重RT-PCR方法的符合率均为100%。说明该一步法双重RT-PCR鉴别检测方法具有良好的特异性和敏感性,操作简单,可以准确、快速鉴别诊断出PEDV变异毒株。

广州市新型冠状病毒Delta变异毒株感染患者与野生株感染患者的临床特征对比分析

目的探讨广州市新型冠状病毒Delta变异毒株感染患者与野生株感染患者的临床及实验室特征。方法采用回顾性研究方法,收集2021年5月21日至2021年6月14日广州医科大学附属市八医院确诊的145例Delta变异株感染者的临床资料,收集2020年1月20日至2020年2月10日期间,收治的278例COVID-19患者作为野生株组,比较两组患者流行病学特点、临床症状、实验室指标、胸部CT影像学特征差异。结果变异株感染者中,普通型居多,重型及危重型13例(11%),发病转重症时间方面,变异株组要短于野生株组(P <0.05)。咽部不适、嗅觉减退患者的比例变异株组要多于野生株组(均P <0.05)。变异株患者以淋巴细胞减少多见,下降人数要多于野生株组(P <0.05)。变异株组患者CT首次阳性时肺内病灶主要表现为磨玻璃影、间质性改变,与野生株组患者影像学特点比例差异无统计学意义(均P> 0.05)。结论 Delta变异毒株感染患者仍以普通型为主,重症率未见上升,但转重症时间缩短,合并多器官损害的情况与野生株感染患者差异不大。

猪伪狂犬病毒变异毒株的特性及其疫苗的研究现状

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒引起的高死亡率的急性传染病。该病在我国发生较为严重，是严重危害我国养猪业的疫病之一。我国于20世纪70年代从匈牙利引进了伪狂犬疫苗Bartha-k61株，白20世纪90年代以来国内规模化猪场普遍使用该基因缺失疫苗，使猪伪狂犬病得到了很好的控制。但是，自2011年以来，一种由伪狂犬病毒变异毒株引起的猪伪狂犬病在我国暴发，

一株兔出血症病毒变异毒株的分离与鉴定

2021年3月份河南省某养兔场肉兔疑似感染兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV),为了分离鉴定肉兔感染毒株,并对所分离毒株特性进行研究,试验对兔场送检的病死兔进行解剖、细菌与病毒分离、RT-PCR检测、纯净性检测、血凝性测定,并进一步进行半数致死量(LD;)、传统疫苗免疫兔攻毒保护试验和免疫原性测定。结果表明:病死兔剖检可见肝脏、心脏、肺脏等实质内脏器官广泛出血。病料未分离到细菌,RT-PCR检测鉴定感染病毒为RHDV;用分离株注射非免疫健康家兔后,兔48 h内死亡,症状表现和剖检病变与兔出血症相似;将所分离RHDV命名为HN株,其对人"O"型红细胞无血凝性,对兔的LD_(50)为1×10^(-6.77)/mL;灭活后免疫兔,能抵抗RHDV HN株攻击。说明养兔场肉兔感染了RHDV,且成功分离鉴定得到一株变异型RHDV,其具有良好的免疫原性。

德尔塔变异毒株致新型冠状病毒肺炎中医分析

德尔塔变异毒株较原始毒株载量更高,传染性更强,病情进展更快,目前尚无特效药物,中医药在国内德尔塔变异毒株引起的疫情防控中发挥了重要作用。根据国内疫情发生的岁运、地域、四时以及患者的临床症状,认为目前德尔塔变异毒株引起的疫情较去年的新型冠状病毒肺炎疫情有变化,病因当为湿热疫毒,兼夹暑邪特点,病机与湿、热、暑、痰、瘀、毒、虚相关。治疗上应以清利湿热、清暑益气、化痰祛瘀、扶正解毒等为原则。同时重视“三因制宜”“天人合一”的治病理念。

新冠变异毒株“德尔塔”肺炎定点救治医院儿科病房管理实践

目的:探讨新冠变异毒株“德尔塔”肺炎定点救治医院儿科病房管理实践。方法:采用“责任制”加“主责制”护理管理模式,在新冠变异毒株“德尔塔”肺炎疫区定点救治医院创建儿科病房管理、病人管理及院感防控兼顾的护理管理策略。结果:在儿科病房管理、病人管理及院感防控上取得良好的成效,医务人员零感染,医患满意度高。结论:“责任制”加“主责制”护理管理模式,适用于新冠变异毒株“德尔塔”肺炎疫区定点救治医院儿科病房管理,值得推广。

新冠病毒Omicron变异毒株的研究进展与展望

引发新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019,COVID-19)的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)已经在全世界大规模传播了3年,并衍生出许多变异毒株。目前,在全球造成大规模传播的Omicron变异毒株具有极高传染性和较低毒性的特点,并已经演变出BA.4、BA.5、XBB等亚型,其对疫苗引发的免疫具有逃逸性,但疫苗加强针的施打可恢复一定程度的中和能力。针对Omicron变异毒株的新代疫苗和治疗药物正陆续问世,为人类提供了新的抵御措施和治疗方法。本文对Omicron变异毒株的特征、人体的免疫机制、现今疫苗和药物的研发以及感染后遗症问题进行了总结和浅析,并对未来应对SARS-CoV-2的方式提出了建议。

猪伪狂犬病病毒变异毒株的流行与防控

自2011年以来,我国猪场陆续发生由PRV变异株引起的PR疫情,变异毒株与以往流行的经典毒株相比其毒力与致病性均显著增强,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。文章对PRV变异毒株的流行特点、与疫苗株的交叉保护性、疫苗研究进展、防控措施进行阐述,以期为我国PR的净化提供参考。

我国猪流行性腹泻流行现状分析及变异毒株鉴别检测方法研究进展

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的以仔猪呕吐、腹泻、脱水、死亡为主要特征的一种急性、高度接触性、病毒性肠道传染病。

猪伪狂犬病病毒变异毒株HeNZK-2014的分离鉴定及gE基因序列分析

为了解猪伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株的特点,本研究采集临床疑似PRV感染发病猪的淋巴结等组织样品进行PCR鉴定,选取仅PRV阳性的组织样品经研磨除菌后取上清接种于PK-15细胞进行病毒分离培养、蚀斑纯化、PCR和间接免疫荧光法(IFA)鉴定,采用Reed-Muench法测定PRV的TCID50,接种小鼠并观察临床症状,对纯化的PRV和死亡小鼠脑组织样品进行gE基因PCR扩增及测序分析。结果显示,PRV阳性病料接种于PK-15细胞24h后出现典型细胞病变(CPE),经3轮蚀斑纯化后PCR和IFA鉴定结果均为阳性,分离株命名为HeNZK-2014,其TCID50为10-9.77/0.1mL;以1×108个TCID50病毒悬液接种小鼠22h后可引起小鼠出现奇痒、撕咬、死亡等典型猪伪狂犬病症状,死亡小鼠脑组织样品PRV PCR检测结果为阳性;纯化病毒和死亡小鼠脑组织样品gE基因核苷酸序列同源性为100.0%,与GenBank中2011年以前登录的经典毒株位于不同分支,与2011年之后中国流行毒株位于同一分支,在第48和496位各有1个天冬氨酸(D)的插入,具有变异毒株的典型特征。本研究成功分离了1株PRV变异毒株,为进一步开展针对PRV变异毒株的疫苗及其防控研究奠定了基础。

猪伪狂犬病病毒经典毒株与变异毒株双重实时荧光定量PCR方法的建立及应用

为了建立一种快速检测猪伪狂犬病病毒(PRV)经典毒株和变异毒株的双重实时荧光定量PCR方法,试验根据GenBank上收录的30株PRV设计gE基因和gC基因的特异性引物和探针,构建含有gE基因和gC基因的标准质粒,优化扩增体系建立双重实时荧光定量PCR方法,并检验该方法的特异性、敏感性和重复性,同时绘制标准曲线,最后采用该方法对临床样品进行检测。结果表明:试验建立的双重实时荧光定量PCR方法的最佳退火温度是60℃,最佳引物体积为0.8μL,最佳探针体积为0.4μL。该方法对猪场常见疫病病原猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪细小病毒(PPV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均无交叉反应,特异性强;对两种标准质粒pUC57-gE和pUC57-gC的最低检测限均为1×10^(1)copies/μL,gE基因和gC基因对应的标准曲线分别为y=-3.446x+41.920(R^(2)=0.998)和y=-3.255x+39.185(R^(2)=0.998);组内和组间变异系数均小于2%。临床样品检测结果的阳性率为10.53%,与《伪狂犬病诊断方法》(GB/T 18641—2018)的检测结果相同;变异毒株的阳性率为100%,扩增gC基因后的测序结果与GenBank中收录的PRV变异毒株一致。说明试验成功建立了可同时快速、准确鉴定PRV经典毒株和变异毒株的双重实时荧光定量PCR方法。

3种试剂检测新冠Delta变异毒株结果比较分析

目的通过对1例Delta新型冠状病毒变异毒株感染病例进行分析,对两种不同采样部位核酸阳性检测敏感性以及不同试剂对变异毒株的检测能力进行比较总结,为疫情防控工作和其他实验室核酸检测工作提供参考。方法连续多日进行鼻、咽双部位采样,使用达安新冠核酸检测试剂,明德新冠核酸检测试剂和卡尤迪新冠核酸快速检测试剂进行检测,比较分析检测结果。结果该病例入境14d后检测出阳性,鼻拭子和咽拭子两份样本3种检测试剂均能检出阳性,鼻拭子阳性检测敏感性高于咽拭子。快速核酸检测试剂阳性检测敏感性低于常规核酸检测试剂。结论目前的核酸检测试剂和技术仍能有效检出新型冠状病毒变异毒株,为了提高阳性检出率,应对高风险人群同时采集鼻拭子和咽拭子进行核酸检测。

新加坡推出检测禽流感变异毒株“广谱”试剂

新加坡两家机构于5月29日宣布,其研究人员合作研发出一种禽流感病毒快速检测试剂,能测出由H5N1亚型禽流感病毒基因组改变而生成的50多种变异毒株。这种新试剂只需从人的口腔和鼻腔提取样本,

关于“征集新冠病毒BA5.1.3新型变异毒株感染相关研究论文”的通知

当前,我国新型冠状病毒肺炎疫情形势虽然向好,但仍然十分严峻。近期,海南新冠疫情来势汹汹,而引发此次疫情的是首次在我国被检出的新冠病毒奥密克戎变异株BA5.1.3。在这场没有硝烟的战争中,广大医务人员不顾个人安危,英勇奋战,为人民群众筑起了一道防护屏障。在此,《海南医学》杂志社向广大医务工作者表示崇高的敬意和衷心的感谢!

Bartha K61株活疫苗对猪伪狂犬变异毒株和传统毒株的免疫保护效力分析

为了分析猪伪狂犬病活疫苗Bartha K61株预防流行变异毒株的效力。以经典PRV-EA株和变异PRV-XT株为攻毒毒株,评价Bartha K61活疫苗免疫仔猪对伪狂犬病病毒变异株的保护效力。用Bartha K61株活疫苗免疫4~5周龄断奶仔猪,免疫28 d后,分别用PRV-EA株和流行变异PRV-XT株攻毒,观察仔猪的临床症状和病理变化,检测鼻腔排毒情况。结果显示,Bartha K61株活疫苗可对经典PRV-EA株攻毒提供良好的免疫保护,但对变异毒株PRV-XT仅能提供部分保护。PRV-EA株攻毒组所有猪只未出现明显临床症状,而PRV-XT攻毒组出现较为明显的临床症状。表明Bartha K61株活疫苗对传统毒株有良好保护效果,而对流行变异毒株不能提供完全保护。