嵌合流行毒株G-H环基因重组口蹄疫病毒的拯救及其免疫原性分析

为了研究能有效免疫防控当前流行的O型3个拓扑型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)的疫苗候选株,本研究利用FMDV反向遗传操作技术,通过基因替换,构建同时含当前流行的O型三个拓扑型病毒株结构蛋白基因的重组全长克隆,转染表达T7RNA聚合酶的细胞后拯救重组FMDV,分析结构蛋白基因的重构对病毒生物学特性的影响;拯救病毒制备灭活疫苗,免疫猪和牛,用体外中和试验初步研究其作为O型FMD疫苗候选株的潜力。结果表明FMD流行毒株结构蛋白VP1 G-H环基因的替换没有明显影响重组病毒的噬斑表型和复制能力,但不同FMDV G-H环抗原表位对猪诱导机体产生交叉中和抗体水平影响较大,对牛诱导机体产生交叉中和抗体的影响较小,表明FMDV G-H抗原表位是猪免疫优势的表位。本研究为未来FMDV疫苗的设计提供了重要参考。

口蹄疫病毒感染后猪PD-1及其配体转录水平变化和免疫抑制机制分析

研究猪感染口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)后程序性死亡受体-1(Programmed death-1,PD-1)及其配体(PD-L1、PD-L2),细胞因子[IL-2(Interleukin-2)、IL-10(Interleukin-10)、IFN-γ(Interferon-γ)]mRNA转录水平和外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)增殖能力,探讨PD-1/PD-Ls通路在FMDV引起免疫抑制过程中的作用机制。结果表明,猪感染FMDV后3、7、14、17 d,PD-1的mRNA转录水平显著或极显著升高,感染后7 d达到峰值,之后逐渐降低;感染FMDV后3 d和7 d,PD-L1的mRNA转录水平极显著升高;感染FMDV后3 d,PD-L2的mRNA转录水平显著升高。感染FMDV后3、7 d,IL-2的mRNA转录水平显著下降;感染FMDV后1、3 d,IFN-γ的mRNA转录水平极显著下降,IL-2和IFN-γ的mRNA转录水平与PD-1及其配体mRNA转录水平变化趋势相反;感染FMDV后3、7、14 d,IL-10的mRNA转录水平显著或极显著升高,与PD-1及其配体mRNA转录水平变化趋势相同。感染FMDV后,全血中FMDV的病毒载量随着感染后时间的推进逐渐升高,感染后7 d达到峰值,与PD-1及其配体mRNA转录水平变化趋势总体上相同。感染后7 d,PBMCs的增殖能力明显降低。综上,FMDV感染猪后,总体上上调了PD-1及其配体的mRNA转录水平,是FMDV感染引起机体免疫抑制的重要致病机制。

口蹄疫病毒O型东南亚拓扑型抗原变异研究

【目的】O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)不断变异,易导致现用疫苗与流行毒株的抗原匹配性下降引起免疫效果不佳,疫情零星散发。近年来,O型FMDV中SEA(东南亚)拓扑型流行活跃且不断变异,持续对口蹄疫防疫产生压力。系统解析O型FMDV毒株特异性抗原位点以及不同拓扑型毒株的序列差异,明确抗原变异的关键氨基酸,可为FMD抗原分子设计提供依据,为FMD防控提供指导。【方法】利用10株(SEA拓扑型)毒株特异性牛源单克隆中和抗体,对毒株O/GSLX/2010(O/Mya/98谱系)进行抗体压力筛选逃逸突变株,鉴定这10株抗体所识别表位的关键氨基酸。利用牛源多抗血清样本(32份)与逃逸突变毒株进行病毒交叉中和试验,分析SEA拓扑型毒株的免疫优势表位;通过序列比对分析不同拓扑型毒株在该抗原表位上的差异。利用反向遗传技术将差异性抗原表位引入O型FMDV经典疫苗株O/HN/CHA/93(Cathay拓扑型),对拯救的点突变毒株测序分析后进行间接免疫荧光试验鉴定,并通过病毒蚀斑测定与一步生长曲线检测病毒的复制动力学。利用SEA拓扑型毒株特异性单克隆中和抗体,通过中和试验分析拯救突变株的抗原性,确定影响病毒抗原性的关键氨基酸,评估毒株特异性位点氨基酸的改变对抗原谱的影响。【结果】SEA拓扑型特异性抗原表位主要集中于结构蛋白VP1的B-C/C-D环,属于抗原位点3。10株抗体中多数抗体(8/10)识别的抗原表位在VP1上,其中有6株单抗(A19、B55、B74、C5、F53和F166)识别的关键氨基酸位于VP1 B-C环(T43、K45)及C-D环(P58),另外2株单抗(B66和F41)识别的关键氨基酸位于VP1 C末端。病毒交叉中和试验结果表明,VP1上43位和VP3上131位氨基酸的改变显著降低了牛源多抗血清的抗体效价。对O型FMDV不同谱系毒株(26株)序列进行分析,发现三种拓扑型毒株VP1 B-C/C-D环的28、47、56和58位氨基酸不同。利用反向遗传技术成功将毒株特异性抗原表位引入Cathay拓扑型毒株(O/HN/CHA/93),拯救出6株FMDV的点突变株:POZ-GSLX-M58、POZ-GSLX-M56/58、POZ-GSLX-M28/58、POZ-GSLX-M47/58、POZ-GSLX-M28/58/47和POZ-GSLX-M47/56/58。微量中和试验结果表明,VP1上56/58位对毒株抗原性起到关键作用;然而,进一步增加28位和47位突变会降低抗体B83的中和作用,影响毒株自身的抗原性。因此,VP1上56和58位氨基酸的改变可以扩展SEA拓扑型特异性中和mAbs对O/HN/CHA/93毒株的中和效力与广度。【结论】O型FMDV结构蛋白VP1上56和58位氨基酸是引起SEA拓扑型毒株抗原变异的关键位点,引入这些抗原决定簇可以拓展FMDV O/HN/CHA/93的抗原谱。研究为FMD防控及疫苗设计提供参考。

猪口蹄疫的流行及防控措施

猪口蹄疫俗称口疮,该疾病作为一种热性、急性、高接触性传染病。病原体的传播途径多样,呈现传播快、发病率高、流行性强的趋势。当前,猪口蹄疫呈高发趋势,该病具有较强的传染性,发病率、死亡率均较高。口蹄疫病毒是猪口蹄疫的致病原,患病猪、病毒携带猪均能够传播疾病,致病原广泛存在于患病猪与带病毒猪的分泌物、排泄物中,通过排出体外或是污染环境,威胁健康猪的生长。由于猪口蹄疫在当前依然无特效药物,所以还需从防控着手,掌握猪口蹄疫的流行病学特点,采取有效防控措施对该病做好控制。1流行病学1.1感染动物口蹄疫是由口蹄疫病毒感染所诱发的疾病,在牛、羊、猪等偶蹄类动物中高发,其中仔猪免疫力较弱,呈现较高的发病趋势。不同日龄阶段和不同品种、性别的猪均易感,仔猪不仅发病率高,同时患病后所表现出的临床症状更严重,死亡率更高。

四种口蹄疫分型试剂盒的检测效果比对

目前市场上销售的口蹄疫O型和A型双重荧光RT-PCR分型试剂盒比较多,为了找到一种效果理想的分型试剂盒,使用4个厂家(分别用A、B、C、D代替)的试剂盒对6份国家口蹄疫比对盲样(编号分别为S1、S2、S3、S4、S5、S6)进行检测效果比对。结果发现,不同厂家试剂盒的检测效果各不相同,且差别较大,D厂家试剂盒的检测结果与比对盲样的标准值完全吻合,A、B、C 3个厂家试剂盒的检测结果与比对盲样的标准值有不同程度的差异。

2019-2022年东营市利津县家畜口蹄疫抗体阳性率监测

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是目前危害较为严重的人畜共患病之一,传播迅速且流行广泛。为掌握和预测山东省东营市家畜口蹄疫发生的风险,本研究对2019-2022年东营市利津县口蹄疫抗体阳性情况进行监测。试验采用了口蹄疫A型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒和口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒对2019-2022年山东省东营市利津县的猪牛羊商品代养殖场和散养户共计725个养殖场点、11 267份猪牛羊的血清样本进行检测,并从不同年份、不同养殖场类型、不同畜群三个方面进行抗体水平比较分析。结果显示,2019-2022年利津县免疫O型抗体个体合格率和场点合格率分别为91.8%和97.2%,A型抗体个体合格率和场点合格率分别为90.5%和100%。研究表明,利津县口蹄疫整体免疫效果良好,已建立起有效的免疫保护屏障。本研究为评估东营市利津县FMD的防控状况提供了科学依据。

羊口蹄疫的流行特点与综合防控

1羊口蹄疫发病原因1.1口蹄疫病毒的感染口蹄疫病毒是口蹄疫的病原体,分为七个血清型,每个血清型又有不同的亚型。这种病毒对蹄类动物具有极强的感染性,尤其是在暖和湿润的气候条件下传播更为迅速。口蹄疫病毒通过空气飞沫、污染的水源、接触感染的动物等途径传播,从而引起疾病的暴发。

猪牛羊口蹄疫的发生、诊断及治疗措施

一、猪、牛和羊口蹄疫的发生口蹄疫,又被称为猪、牛、羊的“口疮病”或“五号病”,是一种由口蹄疫病毒引发的传染性疾病,属于一类动物疫病。它全年都有可能发病,但在冬季和春季时发病率最高。猪、牛和羊被认为是该病的主要传染源,传播主要通过消化道和呼吸道分泌物以及粪便。此外,犬、猫和鼠等动物也可能成为口蹄疫的主要传播媒介。

武威市肉牛口蹄疫三价苗抗体水平评估研究

本实验从甘肃省武威市4个县区(凉州区、古浪县、天祝县、民勤县)采集的320份牛血清样品效价进行了检测。O型抗体检测免疫合格率分别是71.00%,86.30%,80.00%,91.30%,平均合格率为82.15%。检测出亚洲Ⅰ型抗体免疫合格率82.30%,76.30%,70.00%,81.30%,平均合格率为77.23%;检测出A型抗体免疫合格率87.75%,93.50%,67.30%,76.30%,平均合格率为81.50%。四县区散户肉牛血清样品中O型抗体检测免疫合格率分别:58.80%,61.30%,63.80%,86.30%,平均合格率为67.55%;检测出亚洲Ⅰ型抗体免疫合格率81.00%,75.00%,71.30%,78.80%,平均合格率为76.30%;检测出A型抗体免疫合格率71.00%,77.50%,83.80%,85.00%,平均合格率为79.00%。通过检测结果可以发现武威市肉牛口蹄疫三价苗抗体合格率高于70%,且武威市规模养殖场肉牛口蹄疫三价苗抗体检测合格率高于散养牛的。

猪口蹄疫病原分析及防控措施

猪口蹄疫是一种极具破坏性的病毒性疾病,对全球养猪业构成了重大威胁。该病由多种血清型的口蹄疫病毒引起,各型之间几乎无交叉免疫性,且病毒易发生变异,增加了防控的难度。因此,制定并实施有效的防控策略至关重要。1病原1.1口蹄疫病毒的血清型与变异性口蹄疫病毒是微核糖核酸病毒科的一员,具有多种血清型,其中已知包括欧洲型C、欧洲型O、欧洲型A、亚洲型等,这些血清型在病毒学上呈现出显著的多样性。

猪口蹄疫的流行特征及防控措施

猪口蹄疫是一种由口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病,以其发病急、传播迅速、发病率高等显著特点,屡次在全球范围内肆虐,对畜牧业构成了重大威胁,同时也对全球公共卫生安全带来了严重挑战。笔者深入分析并总结了猪口蹄疫的流行特点,并在此基础上提出了针对性的防控措施,旨在为有效防控该病提供科学的参考和依据。

牛口蹄疫病的综合防控措施

口蹄疫是养殖牛群中常见的疾病,其危害性极大,容易在牛群中迅速传播。感染口蹄疫的牛会出现口腔、脚趾、乳房和舌面等部位的水疱症状,严重时甚至导致瘫痪和死亡,给养殖人员造成巨大损失。因此,养殖人员必须加强对口蹄疫的监测和防控。由于现阶段并没有治疗牛口蹄疫病的特效药,因此,相关人员应该做好对此病的防控工作,从根源上减少病毒在牛群中的传播。

牛口蹄疫的病理机制与防制

牛口蹄疫是一种具有高度传播性的疾病,主要对偶蹄动物如牛、猪、羊等产生影响。该病是由牛口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus)引发的,它的传播速度极快,病毒变异性高,不仅导致牲畜的死亡率增加,还会引起生产力下降和肉、奶等畜产品的质量下降。通过了解病毒与宿主细胞的相互作用,可以揭示疾病的发生和发展机制,为制定针对性的防制策略提供理论依据。同时,研究牛口蹄疫的防制策略可以帮助畜牧业提高疫情应对能力,降低养殖财产损失,确保牛场的长期稳定发展。1病理机制1.1病原体介绍1.1.1病毒属性:牛口蹄疫是一种由FMDV病毒所导致的紧急、高度传播的病症。

牛口蹄疫的诊断与防制技术

牛口蹄疫是牛养殖业中的常见传染性疾病,主要是由口蹄疫病毒引起,传播速度快和感染能力强,并且死亡率高。病毒会在淋巴液或者牛脓包中存活,在潜伏期和康复期都可能成为主要的传染源。,本文主要从病原、流行特点、症状、病理变化、防制技术等方面加以论述,以期为养殖户提供参考。1病原特点牛口蹄疫病是由口蹄疫病毒引起的一种人畜共患病,病毒类型是RNA病毒科口蹄疫病毒属,病毒的变异能力较强,O型病毒为我国传播范围广的病毒,并且一个血清型存在很多个亚型,或者感染多种不同型号的血清型的病毒,也可能同时感染多种不同型号的血清型的病毒。

牛口蹄疫的防疫要点

牛口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄类动物共患的急性、热性、接触性传染病,对牛群的健康和畜牧业产业威胁较大,该病的传染能力相对较强,冬、春季节发病率较高,所以在进行养牛过程中需要做好相关的防控工作。本文通过对牛口蹄疫的传播途径以及主要表现进行分析,提出相关防疫要点。

一例山羊口蹄疫免疫副反应的救治

动物防疫工作是保障养殖业健康发展和为养殖户保驾护航的重要举措之一,但在开展动物防疫过程中,因动物个体差异、健康状况等难免会出现不良反应,又称副反应。羊口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种高度接触性传染病,对偶蹄目家畜的生产性能造成严重损害。疫苗接种是控制此疾病的一项重要预防措施,但也有可能诱发免疫副反应,对接种动物构成潜在威胁。

口蹄疫病毒Asia1型猪源中和抗体的筛选与抗原表位鉴定

Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)仍然在我国周边国家存在,对我国畜牧业造成长期威胁。本研究旨在利用单个B细胞抗体技术研制Asia1型FMDV的中和性单克隆抗体,以此为工具,鉴定Asia1型FMDV的保护性抗原位点。以FMDV Asia1/JS/05为诱饵抗原,通过流式细胞术分选免疫猪PBMCs中的抗原特异性B细胞,通过巢式PCR扩增单个B细胞IgG抗体重链与轻链可变区基因序列,分别构建IgG抗体重链与轻链表达质粒,将其共转染CHO-S细胞进行抗体表达;通过间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)、病毒中和试验(VNT)验证抗体反应性和中和活性,利用免疫印迹、中和抗体逃逸突变株筛选鉴定中和抗体所识别的抗原表位类型和抗原表位关键氨基酸。结果显示:获得了5株反应性良好的Asia1型FMDV特异性抗体,其中PD3和PD7为中和抗体,两株中和抗体识别相同表位,关键氨基酸为VP2蛋白72位残基(D)。本研究首次获得Asia1型FMDV特异性猪源中和抗体,鉴定VP272D是中和表位的关键氨基酸,进一步丰富了Asia1型FMDV抗原位点信息,为FMDV Asia1型分子疫苗和新诊断检测技术研究的奠定了基础。

湖羊口蹄疫母源抗体消长及对疫苗免疫效果的影响

为评估湖羊口蹄疫母源抗体消长特点及其对羔羊首次疫苗免疫接种的影响,采用阻断ELISA检测了健康妊娠母羊产羔当天的母羊血、初乳和常乳、以及羔羊血中的口蹄疫抗体水平;选取未免疫接种口蹄疫疫苗羔羊,分别于羔羊21日龄和50日龄时,免疫接种口蹄疫灭活疫苗,并检测免疫后不同时间口蹄疫抗体水平。结果显示,羔羊出生0、21、50 d时体内口蹄疫抗体滴度(lb)分别为7.83±0.38、7.06±1.16、6.02±1.20,上述检测时间点的抗体阳性率分别为100%、70%、32%;母羊乳汁中口蹄疫抗体效价随时间缓慢下降,10 d内,平均抗体水平均保持在7以上,且阳性率亦均在80%以上;分析发现母羊血中口蹄疫抗体水平与产后乳汁中的抗体水平不相关,但其与羔羊血清中抗体水平显著相关;母源抗体严重干扰疫苗接种后的免疫抗体水平及持续时间,免疫日龄越早,干扰越严重。羔羊口蹄疫母源抗体水平至少可维持50 d以上,但在70%保护水平时间为21~28 d,且羔羊的母源抗体水平与其相应繁殖母羊生产当天的血清抗体水平呈正相关。

口蹄疫病毒O型全自动磁微粒CLIA抗体定量检测方法的建立

【背景】口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、烈性传染病,疫苗接种是预防临床口蹄疫的有效措施。免疫抗体水平监测则是评估疫苗免疫效果、制定免疫程序的重要依据,是免疫工作和疫情防控必不可少的关键环节,因此建立高效、快速、全自动的抗体检测方法具有重要意义。【目的】基于磁微粒(micromagnetic particles,MPs)化学发光免疫分析技术(CLIA),建立一种新型、全自动、可定量的口蹄疫病毒O型抗体检测方法,为口蹄疫免疫监测和疫情防控提供技术支撑。【方法】使用纳米材料磁微粒为固相载体和分离载体包被捕获抗体,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记检测抗体,经过条件优化建立了一种新型磁微粒CLIA检测方法(magnetic particle chemiluminescence immunoassay,MP-CLIA)。本方法首先加入磁微粒-兔抗偶联物(magnetic particle-polyclonal antibodies,MPs-p Abs)、待测样本、口蹄疫病毒O型抗原,37℃孵育;再加入适量酶标抗体(ALP-p Abs),37℃孵育;最后加入化学发光底物AMPPD,检测相对发光强度(relative light unit,RLU)。研究通过检测标准品拟合标准曲线,并应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)确定检测方法的判定标准;利用质控样本进行方法学评价,同时检测田间样本,并和液相阻断ELISA(LPB-ELISA)比对,验证临床检测效果。【结果】优化后最佳反应条件为磁微粒浓度0.25 mg·m L^(-1)、口蹄疫病毒O型抗原1﹕1000稀释、酶标抗体1﹕2000稀释、加样量20μL。整个检测过程均在全自动化学发光免疫分析仪中完成,反应时间20 min,在抗体含量0—1280 U(效价0—1﹕2048)范围内标准曲线R2>0.99,可进行定量检测。该方法敏感性为94.66%;特异性为97.10%,检测口蹄疫A型、Asia I型血清型特异性为97.14%,与塞内卡病毒(SVV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、牛流行热病毒(BEFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、羊痘病毒(QRFV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体阳性血清无交叉反应;重复检测变异系数CV值<10%;田间样本检测结果与LPB-ELISA符合率为94.69%,定量结果相关系数R2为0.8473,P<0.0001,相关性显著。【结论】建立的MP-CLIA方法耗时短、操作简便,配套国产全自动化学发光仪,可进行全自动化检测,是一种新型、高效的口蹄疫病毒O型抗体定量检测方法,本方法对应的试剂盒已经完成中试生产和临床检测试验,在全国不同区域试用效果较好,具有较高的临床应用价值。

口蹄疫病毒通用型RT-RAA-LFD快速检测方法的建立

为建立一种操作简便、有效的口蹄疫病毒(FMDV)核酸通用型检测方法,以FMDV 3D基因为靶基因,设计标记引物及探针,建立了一种新的检测FMDV的反转录-重组酶介导链置换核酸扩增结合侧流层析试纸检测(RT-RAA-LFD)方法。该方法操作简便,耗时短,40℃35 min内即可完成检测,通过肉眼观察可判定结果;具有较好的覆盖面,能够检出我国O型、A型FMDV主要流行拓扑型病毒,与猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)等其他猪病病原无交叉反应;对RNA标准品的最低检测限为10^(-7)拷贝/μL,敏感性较高。利用建立的FMDV RT-RAA-LFD方法对5份临床样品进行检测,其结果与RT-PCR结果一致。结果表明,本研究建立的FMDVRT-RAA-LFD方法具有快速、直观、特异强、重复性好等优点,适合在基层兽医防疫部门和养殖场推广应用。