RP-HPLC法测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸的含量

目的测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸(IsoAsp)含量。方法采用ISOQUANT誖异天冬氨酸检测试剂盒结合反相高效液相色谱法测定样品中IsoAsp含量,采用Phenomenex Synergi 4μm Hydro RP-80 C18色谱柱(150 mm×3 mm,4μm),以7.9 mmol/L磷酸二氢钾-1.1 mmol/L磷酸氢二钾-10%甲醇为流动相A,以甲醇为流动相B,梯度洗脱,流速为0.43 mL/min。结果对照品和3批原液中IsoAsp含量相近(0.30～0.32 mol/mol sCD95-Fc),3批成品中IsoAsp含量明显增高(0.51～0.53 mol/mol sCD95-Fc);25℃和37℃处理24 h后成品中IsoAsp含量无明显变化,60℃处理后明显增加。结论该法适用于可溶性CD95-Fc融合蛋白中IsoAsp含量检测,高温处理可加快样品中IsoAsp生成。

液质联用技术分析可溶性CD95-Fc融合蛋白N-糖组成

目的:分析鉴定可溶性CD95-Fc融合蛋白的N-糖组成。方法:采用Glyco Works Rapi Fluor-MS N-糖分析试剂盒酶解并标记、纯化N-糖基,糖基纯化产物经Waters BEH Glycan糖蛋白分析柱分离后,依次进入荧光检测器和飞行时间质谱仪检测。结果:结合荧光和质谱检测结果,鉴定出15种糖型:G0-GN,G0FGN,G0,G0F,Man5,G1F,G1F,G2F,G2F+SA,G2F+SA,G3F,G2F+2SA,G3F+SA,G3F+2SA和G3F+3SA;各糖型组分实测单同位素分子量与理论值差异均不足0.1Da;所占比例最高的糖型依次为G0F(30%),G1F(25%),G2F+SA(14%)和G2F(13%);不同批次相同糖基组分保留时间的RSD均低于0.2%,峰面积百分比的RSD均低于15%。结论:本研究成功鉴定出可溶性CD95-Fc融合蛋白的15种主要糖型,不同批次的糖型荧光图谱基本一致,可作为UPLC法对可溶性CD95-Fc融合蛋白N-糖定性定量的标准参考图谱。

多发性骨髓瘤患者血浆可溶性Fas水平检测及其临床意义

:目的 探讨多发性骨髓瘤患者血浆可溶性 Fas(s Fas)水平变化及其临床意义。方法 用酶联免疫吸附试验法 (EL ISA)检测 2 8例多发性骨髓瘤患者及 2 5例正常对照血浆 s Fas值 ,并与多发性骨髓瘤患者骨髓涂片中骨髓瘤细胞数作相关分析。同时测定其中 6例多发性骨髓瘤患者化疗前后 s Fas水平。结果 多发性骨髓瘤患者 s Fas水平显著高于正常对照组 [(10 .36± 6 .87)μg/L ,vs(5 .5 8± 2 .78)μg/L ,P<0 .0 1]。其中 6例多发性骨髓瘤患者化疗前 s Fas水平显著高于化疗后完全缓解时 (P<0 .0 1)。此外 ,骨髓涂片中骨髓瘤细胞数高者 (≥ 15 % ) s Fas水平显著高于骨髓瘤细胞数低者 (<15 % ) [(13.86± 7.10 )μg/L ,vs(6 .36± 3.34 )μg/L ,P<0 .0 1]。结论 提示血浆 s