硫酸右旋糖苷抑制人胃癌细胞粘附以及整合素β_1基因表达的机制研究

目的通过观察人胃癌MKN1细胞的粘附过程和测定整合素β1cDNA的表达水平,研究硫酸右旋糖苷(dextransulfate,DS)对人胃癌MKN1细胞粘附的抑制作用的机制。方法分别在培养液中加入DS或PBS对MKN1细胞进行培养,用荧光免疫细胞染色法和共聚焦显微镜对固定细胞和活细胞在培养盘上的贴壁过程及形态变化进行观察,用RT-PCR测定整合素β1的cDNA表达。结果MKN1细胞通过变形,形成伪足粘附到培养盘,并与其他细胞接触形成单细胞层。免疫染色可见整合素β1在细胞膜上有强烈的表达,并且形成整合素集落。DS抑制整合素β1的表达并使已经形成的整合素集落区域减少;使MKN1细胞的伪足缩短,表现出维持圆形的倾向。在使用DS培养4h后仍有部分细胞处于游离状态,分别收集游离细胞和贴璧细胞,用RT-PCR测定整合素β1的cDNA表达。实验组贴壁细胞和游离细胞内整合素β1的cDNA的表达水平分别减少到对照组细胞的74%和38%。结论DS对人胃癌细胞MKN1粘附过程的抑制与整合素β1表达的减弱有关。

右旋糖苷修饰酵母蔗糖酶条件的筛选及修饰酶性质的研究

以低分子右旋糖苷（Dextran）为修饰剂,选用L16（45）正交试验方案,研究了不同修饰条件对酵母蔗糖酶（Yeast invertase）化学修饰效果的影响以及修饰前后酶的性质变化.结果表明,pH 5.0、20℃、反应8 h为最佳的修饰条件.与天然酶相比,修饰酶的酶比活力、糖含量、酶活力回收率分别提高56.7%、35.05%和14.61%,蛋白含量下降22.66%,氨基修饰率为39.55%.酶学性质研究表明,修饰后酶的最适pH在4.0-5.0范围内,最适温度55-60℃,在pH 3.5缓冲液中稳定性上升,在pH 6.5缓冲液中稳定性下降,在60℃缓冲液中稳定性下降.动力学研究表明,修饰后酶的Km和vm ax均上升,光谱分析表明,修饰后酶的构型构象均发生变化.

右旋糖苷蔗糖酶的研究进展

右旋糖苷蔗糖酶(dextransucrase)是一种典型的葡萄糖基转移酶,可利用蔗糖为底物合成右旋糖苷,而后者在医药、食品等领域用途广泛。从酶的来源、产量优化、制备方法和活性检测的角度总结右旋糖苷蔗糖酶的研究进展,并对其发展趋势进行的展望。

一株产低温右旋糖苷酶海洋细菌的筛选和鉴定

从连云港海域筛选得到一株产低温右旋糖苷酶的菌株LP621,经形态特征、生理生化特征以及16S rDNA序列分析和鉴定,该菌株为Pseudoalteromonas tetraodonis。该菌产生低温右旋糖苷酶的最适作用温度为30℃,在80℃保温2.5 h后该酶仍具有40%以上的活性。目前尚无Pseudoalteromonas tetraodonis产生低温右旋糖苷酶的报道。菌株LP621产生的右旋糖苷酶作用温度低,耐热性好,有较大的潜在工业应用价值。

817例低分子右旋糖苷的不良反应

目的:探讨低分子右旋糖苷所致不良反应(ADR)的一般规律及特点。方法:对1994年～2006年低分子右旋糖苷不良反应13年间的国内文献源进行统计分析。结果:低分子右旋糖苷的不良反应主要发生在小于5min和大于3d两个时间段,不良反应以皮肤及附件、心血管系统为主,分别占不良反应的53.73%和23.13%,其次为泌尿系统(18.60%)的不良反应。在817例不良反应中可痊愈的为719例,占88.0%,33例患者中有严重后遗症的占4.04%,有62例因抢救无效死亡的占7.59%,另有3例病危自动出院的占0.37%。结论:低分子右旋糖苷不良反应涉及多个系统,应合理应用低分子右旋糖苷,尽量减少不良反应的发生。

右旋糖苷修饰玉米SOD研究

为提高玉米SOD的稳定性,利用右旋糖苷对玉米SOD进行修饰。在不同条件下测定玉米SOD的活力,比较修饰前后玉米SOD稳定性。结果表明:修饰后玉米SOD的活性保持率为83%,修饰后玉米SOD的温度稳定性、pH稳定性均有显著提高,半衰期延长,对胃蛋白酶、胰蛋白酶耐受性增强。说明右旋糖苷是一种较好的玉米SOD化学修饰剂。

交替假单胞菌LP621菌株产右旋糖苷酶的培养条件优化

从江苏连云港海域分离和筛选到1株产右旋糖苷酶的海洋细菌交替假单胞菌Pseudoalteromonas tetraodonis LP621,通过单因素试验和正交试验对该菌株产右旋糖苷酶培养条件进行优化。单因素试验结果表明,最佳培养时间为24 h,最适产酶温度为25℃;产酶pH范围为5.0~11.0,最适产酶pH为6.0;产酶NaCl浓度范围为1%~10%,NaCl浓度为4%时产酶较高;装液量在25%。麦芽糖、胰蛋白胨和酵母膏促进产酶。利用响应面方法对LP621产右旋糖苷酶的发酵条件进行优化。选择培养基pH、时间、麦芽糖浓度和装液量4因素进行优化,结果为pH 7.07,发酵时间21.94 h,麦芽糖浓度0.42%,装液量为21.88%,酶活为270.1U/mL。

右旋糖苷对生姜蛋白酶的化学修饰及其酶学性质影响

以NaIO4活化的右旋糖苷为修饰剂,研究修饰反应条件对生姜蛋白酶化学修饰效果的影响与修饰前后酶学性质及构型构象的变化。结果表明:较佳修饰条件为温度42℃、pH6.0、酶与活化右旋糖苷质量比1:22、修饰时间3h。与修饰前天然生姜蛋白酶相比,修饰酶的相对酶活力提高了2.0倍,酶蛋白氨基修饰率为57.8%。以酪蛋白为底物时,修饰酶的最适温度、最适pH值和酶反应动力学参数Km值较天然生姜蛋白酶均有所降低,热稳定性明显增强;修饰酶的紫外光谱吸收峰向长波长方向偏移,构型构象发生了变化。

硫酸右旋糖苷对人胃癌MKN1细胞的形态学影响

目的探讨硫酸右旋糖苷(DS)对人胃癌MKN1细胞株的形态学影响。方法用位相差显微镜、荧光免疫细胞染色法和共聚焦显微镜观察固定细胞和活细胞在培养盘上的附着过程及形态变化。结果MKN1细胞通过变形,形成伪足黏附到培养盘,并与其他细胞接触形成单细胞层。DS抑制了MKN1细胞的黏附,培养48h后仍有部分细胞处于游离状态。结论DS阻止人胃癌细胞株MKN1的黏附过程。

硫酸右旋糖苷对人胃癌细胞腹腔种植转移和整合素β1表达的影响

目的探讨硫酸右旋糖苷(DS)对人胃癌细胞腹腔种植转移整合素β1表达的影响。方法培养BGC-823细胞,构建裸鼠动物模型。将90只裸鼠,随机分为对照组(40只)与实验组(50只),对照组与实验组裸鼠在注射肿瘤细胞同时分别注射生理盐水与硫酸右旋糖苷。裸鼠剖腹行HE染色,观察癌结节的腹腔种植数量;应用免疫组化和RT-PCR方法检测整合素β1mRNA和蛋白表达。结果剖腹观察的瘤结节数经HE染色证实,实验组明显少于对照组的瘤结节数(P<0.01)。免疫组化和RT-PCR结果显示,实验组整合素β1的表达量明显小于对照组(P<0.01)。结论硫酸右旋糖苷可能通过下调整合素β1的表达抑制人胃癌细胞的腹腔种植转移,预防性使用大分子硫酸右旋糖苷能够抑制胃癌细胞的腹腔种植转移。

硫酸右旋糖苷对人胃癌细胞腹腔种植转移和VEGF表达的影响

目的通过观察人胃癌细胞在裸鼠大网膜上的种植转移情况和测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平,探讨硫酸右旋糖苷(dextran sulfate,DS)对人胃癌细胞腹腔种植转移和VEGF表达的影响。方法采用细胞培养,建立动物模型,将108只裸鼠随机分为对照组与实验组两组,在注射胃癌细胞的同时分别注射生理盐水与DS。剖腹观察腹腔种植的癌结节数量,应用免疫组化和RT-PCR法检测VEGF蛋白及mRNA的表达。结果实验组癌结节数明显少于对照组(P<0.001),免疫组化和RT-PCR检测结果均显示实验组VEGF蛋白及mRNA的表达量明显小于对照组。结论DS可以抑制VEGF的表达并有可能通过抑制其表达降低胃癌的腹腔种植转移。

^(99)Tc^m标记右旋糖苷衍生物的制备及其生物分布

采用Isolink药盒制备了羰基锝[99 Tcm(CO)3(H2O)3]+,用制备的羰基锝标记右旋糖苷衍生物;将标记物由小鼠的后足脚垫皮下注射,分别于给药后1、4h处死(处死前10min注入专利蓝溶液),取前哨淋巴结(Sentinel Lymph Node,SLN)、次级淋巴结(2LN)、注射点、肝、脾、血,分别测量其放射性计数,计算组织或器官的放射性摄取率,研究甘露糖基和右旋糖苷衍生物相对分子质量对小鼠淋巴结摄取及体内分布的影响。结果显示:当分子中不含甘露糖基时,SLN的摄取率很低,在注射点的摄取也相对较少,并且体内清除较快;而当分子中含有甘露糖基时,SLN的摄取率大幅提高,但在注射点的滞留也显著提高。以上结果表明,分子中的甘露糖基对淋巴结巨噬细胞表面受体具有亲和作用。另外,右旋糖苷衍生物相对分子质量的不同,也会造成不同的生物分布,相对分子质量较大的标记化合物,SLN提取更高,差异显著(P<0.005);此外,标记物的注射剂量和注射体积也会对SLN的摄取产生较大影响。99 Tcm标记的甘露糖基化右旋糖苷衍生物具有优良的淋巴结摄取及体内分布性质,作为潜在的SLN显像剂,值得进一步研究。

右旋糖苷代替人血白蛋白深低温保存外周血干细胞初探

目的 观察改良的外周血干细胞深低温保存方法的效果。方法 用右旋糖苷代替人血清白蛋白 ,与二甲基亚砜组成联合冷冻保护剂 ,复苏后加入 10 %体积的ACD A抗凝剂。通过测定冻存前后总有核细胞数、CD 34+ 细胞数、CFU GM、细胞活性率等评估该方法。结果 所冻存的 8例 19次外周血干细胞 ,复苏后活细胞回收率达 90 .8% ,有核细胞回收率达 89.1% ,CD34+ 细胞回收率达 85 .7% ,输注后全部获得造血重建。结论 右旋糖苷能有效深低温保存外周血干细胞。

硫酸右旋糖苷抑制人胃癌细胞HIF-1α和整合素β1表达及其相关性

目的培养人胃癌细胞株BGC-823,探讨硫酸右旋糖苷(dextran sulphate,DS)对人胃癌细胞整合素β1(Integrinβ1)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)的表达及其相关性。方法培养BGC-823细胞,分别在培养液中加入DS和磷酸缓冲液(phosphate buffered saline,PBS),低氧培养不同时间,应用免疫细胞化学、RT-PCR法检测细胞中HIF-1α、Integrinβ1的表达,并分析二者的相关性。结果实验组HIF-1α、Integrinβ1的表达水平明显低于对照组,且HIF-1α和Integrinβ1表达呈正相关。结论 DS可以抑制人胃癌细胞的黏附过程,减弱HIF-1α、Integrinβ1的表达。DS可能通过抑制HIF-1α降低Integrinβ1的表达,有利于抑制人胃癌细胞的腹腔种植转移。

海洋细菌LP621右旋糖苷酶分批发酵动力学研究

对海洋细菌Pseudoalteromonas tetraodonis LP621右旋糖苷酶进行了50L发酵罐分批发酵的代谢特性的研究。结果表明LP621右旋糖苷酶合成和菌体生长呈部分生长偶联型。据分批发酵试验结果采用Logistic方程、Luedeking-Piret方程建立了描述菌株生长、产酶以及葡萄糖底物消耗分批发酵动力学模型。动力学模型计算值结果与实验值拟合良好,较好反映了菌株右旋糖苷酶分批发酵过程的动力学特征。

右旋糖苷蔗糖酶基因的克隆及其序列分析

以筛选的肠膜明串珠菌的基因组为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增得到右旋糖苷蔗糖酶的基因片段dsr1和dsr2,将基因片段克隆到pUC19载体上并对基因片段组装得到完整基因序列dsrx,通过限制性酶切分析和核苷酸序列分析鉴定,dsrx的序列全长为4,566bp,编码1,522个氨基酸,与GenBank中已注册的U81374核苷酸序列同源性达99%,推导的氨基酸序列与其序列同源性达98.49%。

右旋糖苷-阿司匹林高分子挂接药物的体外释放

为了评价不同载药率的右旋糖苷-阿司匹林高分子挂接药物在人工胃液和人工肠液中的体外释药性能,首先选择阿司匹林(ASA)在不同条件下的测定波长,绘制ASA的紫外吸收标准曲线和线性回归方程,并进行加样回收实验。通过固定温度及转速,做不同释放介质中的体外释药实验,评价其药学性能。结果表明,此药物在人工胃液和人工肠液中均呈零级释放,释药开始阶段无"爆释"现象,累积释药量随挂接药物载药量的增高而增高;挂接药物在人工肠液中的释放速率较其在人工胃液中快。此药物具有均匀缓慢释药的特性,而且能减轻ASA对胃粘膜的刺激作用。

低分子右旋糖苷加止血敏治疗血液病血尿临床观察

低分子右旋糖苷加止血敏治疗血液病血尿14例,其中急性白血病骨髓抑制期9例,急性再障1例,特发性血小板减少性紫癜4例,结果全部病例均于用药1～3天肉眼血尿减轻或消失,镜下血尿2～10天(平均6天)消失.对皮肤、粘膜、消化道出血亦有治疗作用.提示低右加止血敏在血液病血尿的治疗中可起协同作用.