柚类、橘类叶肉原生质体分离方法研究

原生质体是植物遗传改良的重要实验体系之一,而原生质体的分离是该体系的基础.对柑橘叶肉原生质体来说,柠檬、橙类等品种的叶肉原生质体比较容易分离,而柚类、橘类等柑橘品种则相对困难.本研究采用椪柑、黄岩本地早、沙田柚、冰糖橘4个品种为试材,枳壳试管苗为对照,系统研究了不同基因型、不同叶龄、不同酶种类、不同酶液组合对叶肉原生质体分离的影响,探讨了影响柚类、橘类等柑橘叶肉原生质体分离的因素,从中找出了各品种较适宜的分离条件.在适宜条件下,4种供试品种的原生质体得率(FW)可达10×106～20×106 g-1.

影响马铃薯叶肉原生质体褐化的因素及AgNO_3对其褐化和分裂的作用

影响马铃薯叶肉原生质体褐化的主要因素是6-BA和基因型,还有NAA等其它因素。在相同浓度的6-BA下,同一材料的原生质体褐化率在NAA1 2mg/L时最高,在0 8和1 0mg/L时相近。在相同NAA浓度下,6-BA浓度越高,同一材料的原生质体越容易褐化。原生质体褐化率与基因型也有关。在相同的NAA和6-BA浓度配比下,6个材料的原生质体褐化难易顺序是CW-2-3>CW-1-4>CW-2-7,A-1>82-75>2-10,二倍体野生种的原生质体比双单倍体品系的更容易发生褐化。AgNO3可抑制马铃薯叶肉原生质体的褐化,从而提高细胞分裂频率。在本试验中,0 6mg/LAgNO3抑制效果最好,原生质体分裂频率最高。

二倍体马铃薯试管苗的培养及对叶肉原生质体融合的影响

以35份二倍体马铃薯试管苗为试验材料,对二倍体马铃薯试管苗培养的影响因素进行研究,目的是使试管苗的叶片增大,叶面积增加,并有利于进行叶肉原生质体的融合。结果表明:含有AgNO3的培养基(MS+0.5 mg/L NAA+1 mg/L AgNO3)适合22份供试二倍体马铃薯试管苗的培养;添加AgNO3比不添加AgNO3的试管苗的叶片明显增大,叶面积显著增加,添加2%蔗糖和2 mg/L AgNO3的培养基的试管苗叶面积最大;以二倍体野生种S.chacoense和二倍体材料DY4-5-10为亲本进行电融合,以添加2%蔗糖和1 mg/L AgNO3的培养基培养其试管苗,获得的融合产物可再生出完整植株,该培养基适合用于分离原生质体的二倍体马铃薯试管苗的培养。

叶片的生理状态及添加物对大麦叶肉原生质体培养的影响

作为原生质体源的叶片的生理状态及培养基中的添加物对大麦叶肉原生质体培养均有明显的影响。试验中观察到叶片中、上段的原生质体比基部的具较强的感应力。叶片经黑暗预处理后,其原生质体培养时呈较好的稳定状态,并观察到添加1.0,2.0m mol/L的抗坏血酸能提高原生质体的活力。在添加0.5mg/L2,4-D、1.0mg/LNAA及0.5mg/LZT的RMS培养基中,经微弱光照（150lx）诱导了细胞持续分裂并形成了小细胞团。

马铃薯叶肉原生质体碘乙酰胺、罗丹明6G失活研究

马铃薯生产种和野生种叶肉原生质体碘乙酰胺和罗丹明６Ｇ的失活浓度以及影响其失活的因素。结果表明：不同种（或品种）其碘乙酰胺和罗丹明６Ｇ失活浓度不一样，野生种失活浓度普遍较生产品种高。影响失活的主要因素包括：材料的基因型，失活剂处理时间，处理液的ｐＨ和成份等。

大白菜无菌苗叶肉原生质体培养

芸苔属植物是原生质体培养研究采用较多的材料。其中以甘蓝和油菜原生质体培养的研究最多,已分别从叶片、子叶、下胚轴等的原生质体获得了再生植株。但白菜原生质体培养仍然存在很大问题,迄今仅有Glimelius(1984)一例成功的报道,目前,国内在这一问题上的研究尚属空白。

烟草叶肉原生质体再生壁形成中的呼吸途径 Ⅱ.TCA途径

壁的再生是原生质体生命活动中最重要的行为之一。这种行为是建立在代谢基础上的。前文我们已报道了再生壁形成中,EMP(糖酵解)和HMP(戊糖支路)呼吸途径起了重要作用,但对于TCA(三羧酸循环)途径尚未研究。本文系报道应用TCA呼吸途径的抑制剂丙二酸钠对烟草叶肉原生质体再生壁形成中的作用进行的研究结果。

水稻叶肉原生质体培养研究的回顾和展望

本文综述了水稻叶肉原生质体培养研究迄今的主要成绩和新的进展，并提出了建立水稻等禾谷类作物叶肉原生质体培养成株体系的见解。

马铃薯叶肉原生质体再生植株的研究

马铃薯两个品系小叶子 x 多子白和乌盟601的叶肉原生质体在原生质体培养基中诱导出愈伤组织。叶肉原生质体来源的愈伤组织转移到 MS+2mg/l ZT+0.1mg/l IAA 培养基中,培养至70天以后,开始发生芽的分化。待芽生长到2—3cm 高度时,转入 MS+0.05mg/lNAA 培养基中,很快出根长成完整植株。带1—2片叶的茎段移栽入灭菌的混合土壤中生长并结出薯块。

番茄叶肉原生质体培养的研究

适合番茄叶肉原生质体培养的材料是３～４周龄无菌苗顶端开展的叶片，在２７℃下，采用１０ｇ／Ｌ纤维素酶“Ｏｎｏｚａｋａ”Ｒ－１０、５ｇ／Ｌ果胶酶Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ、５ｍｍｏｌ／ＬＭＥＳ、９０ｇ／Ｌ甘露糖醇、ＣＰＷ盐的酶液游离撕去下表皮的嫩叶，１４～１６ｈ，效果最好。研究表明，“红玫瑰”番茄和Ｌ．ｅｓｃ．×（Ｌ．ｅｓｃ．×Ｓ．ｌｙ．，Ｆ１），ＢＣ１Ｆ１的酶解效果最好，原生质体的产量和活力都最高；秘鲁番茄和Ｌ．ｅｓｃ．×Ｓ．ｌｙ．，Ｆ１次之；而潘那利番茄酶解效果最差，产量依次为：４８３×１０６、４５５×１０６、４３７×１０５、２１２×１０５和３０３×１０４个／ｇ。试验中，对多种培养基及培养方法进行对比研究，结果表明，Ｄ２培养基液体浅层法培养效果最好，ＴＭ－２液体浅层培养和Ｍ８Ｅ琼脂包埋漂浮法次之。在所采用的５种试材中，从“红玫瑰”番茄和Ｌ．ｅｓｃ．×（Ｌ．ｅｓｃ．×Ｓ．ｌｙ．，Ｆ１），ＢＣ１Ｆ１的叶肉原生质体获得了愈伤组织。

大麦叶肉原生质体的分离与培养初报

本实验以大麦叶肉原生质体为材料,采用常规原生质体分离培养方法,在含有1.5mg/l2,4-D、0.5 mg/l 6-BA和0.2 mg/l IAA的D_(2α)培养基中诱导了原生质体持续分裂,形成了小愈伤组织,但它未能进一步发育分化产生绿苗。通过对原生质体分离、分裂影响因素的探讨,我们认为材料的生理状态以及遗传背景在培养中起了关键作用。

柱花草叶肉原生质体提取与瞬时表达体系构建

柱花草(Stylosanthes guianensis)是一种重要的热区豆科牧草,为利用原生质体瞬时表达体系开展柱花草基因功能研究,以20 d龄期‘热研5号’柱花草子叶为试验材料,通过正交试验考察不同因素对原生质体分离及转化效率的影响。结果表明:采用1.5%纤维素酶、1.25%离析酶、0.5 mol·L^(-1)甘露醇和4 mmol·L^(-1)MES酶解液组合,酶解时间为16 h时,原生质体的产量和活性均达到最佳,分别为(4.567×10^(6))个·g^(-1)和92.271%;原生质体浓度为(6×10^(5))个·mL^(-1)、质粒浓度为0.6μg·μL^(-1),PEG-4000浓度为50%、转化时间为5 min时,转化效率最高,可达52.524%。构建了目标蛋白SgRKL1表达载体pA7-BIUTNT::SgRKL1-GFP,利用PEG介导法将其转入柱花草原生质体,激光扫描共聚焦显微镜检测结果显示SgRKL1蛋白定位于细胞膜上,说明所建立的柱花草叶肉原生质体瞬时表达体系可应用于目标基因的瞬时表达和亚细胞定位研究。

一种更适合培养的番茄叶肉原生质体

一种更适合培养的番茄叶肉原生质体杨华杰吴定华（华南农业大学园艺系，广州，５１０６４２）ＡＫＩＮＤＯＦＭＯＲＥＳＵＩＴＡＢＬＥＭＥＳＯＰＨＹＬＬＰＲＯＴＯＰＬＡＳＴＦＯＲＣＵＬＴＵＲＩＮＧＯＦＴＯＭＡＴＯＳＰＥＣＩＥＳＹａｎｇＨｕａｊｉｅＷｕＤｉｎｇｈ...

大麦叶肉和叶肉原生质体间若干性状的比较

和叶肉相比,叶肉原生质体的K含量下降,Fe、Zn、Mn、Cu等元素的含量则显著升高;游离ABA水平显著较高;碱性过氧化物酶活性明显下降.以上事实表明,叶肉细胞的脱壁措施会使细胞原生质体的生理、生化状况产生显著变化.

抗旱性不同的小麦叶肉原生质体表面性质的研究初报

本试验以小麦叶肉原生质体在外加电场作用下的行为比较,证明了抗旱性不同的小麦品种叶肉原生质体在电泳率上的差别与细胞膜组成成分上的差别有关。

‘石牌’广藿香叶肉原生质体的分离及纯化

以‘石牌’广藿香无菌苗叶片为材料,对原生质体分离、纯化方法以及影响因素进行了研究。结果表明:以继代培养12～22 d的无菌苗顶芽下第3对展开叶片为材料,用0.5%果胶酶、0.2%离析酶和1.5%纤维素酶作用8 h,渗透压调节剂为11%甘露醇,‘石牌’广藿香叶肉原生质体产量达1.85×107个/g fw,活力达89%;原生质体纯化以12%聚蔗糖(Ficoll)漂浮法效果最佳。

大麦叶肉原生质体的培养和再生细胞的分裂

有效地利用原生质体系统作为作物改良的技术,已吸引许多研究者致力于禾本科作物原生质体的培养。近年来,在禾谷类作物上已有一些报道,但仍然存在着很大困难;特别是从禾谷类作物叶片分离的原生质体,更不易进行有规则的持续分裂。正如一些研究者所指出的,禾谷类的叶细胞缺少分裂的潜力,或者需要特殊生长因子。本文简要报道大麦叶肉原生质体在马铃薯简化培养基中培养能有规则地进行分裂的一些结果。

培养基及植物激素对烟草原生质体再生植株的影响

本文研究了不同基本培养基、培养方法及培养基中不同激素浓度配比对烟草叶肉细胞细胞原生质体再生植株的影响。结果表明,利用MS基本培养基进行琼脂糖固体平板培养,对烟草叶肉原生质体的发育速度、分裂频率及愈伤组织形成效果最佳;培养基(1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA0.5 mg/L+1.2%LMA)+(1/2MS+2,4-D 2.5 mg/L+KT 0.5mg/L)的培养效果最好,再生细胞团的数目及愈伤组织最多;用1/2 MS+IAA 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L和1/2 MS+IAA0.5 mg/L+KT 2 mg/L两种培养基对愈伤组织诱导分化时出芽率高;在再生芽诱导生根时直接用不含任何激素的MS基本培养基效果最理想。

软化菊苣高效原生质体培养及植株再生

为了进行体细胞杂交和基因工程改造的尝试,采用10mL酶解液处理12h,1g鲜重叶片游离出4.5~5.9×106个原生质体,生活率达78%~85%。原生质体分别用3种培养基进行培养,以软化菊苣种子无菌苗的叶片为起始材料进行了叶肉原生质体分离、培养和植株分化的研究,并建立高频率的植株再生系统。结果表明:最适合培养基为改良KMP,原生质体的分裂率和植板率分别达到48.0%和27.5%。同时对原生质体培养的时间长度与愈伤组织的胚胎发生能力及植株分化频率进行了试验比较,培养时间28~41d为最佳时间,愈伤组织的胚性(81.2%)和分化率(70.9%)最高;培养时间42~55d,胚性愈伤及植株分化的比例分别为55.0%和45.2%;培养时间56~69d,愈伤组织的胚性(22.5%)和分化率(16.5%)较差。原生质体再生植株在不含激素的1/2MS培养基上,部分植株直接生根,未生根植株转至1/2MS+IBA 0.3mg·L^(-1)+0.1%活性碳可以生根。

二倍体马铃薯体细胞电融合参数的优化

以有性杂交不亲和的抗虫、抗晚疫病的野生二倍体马铃薯Solanum pinnatisecta(2 n=2x=24)和抗晚疫病的二倍体材料DY4-5-10(2n=2x=24)的无菌苗叶片为原生质体来源,进行了电融合的研究,以优化马铃薯高效融合的参数。研究结果表明:其最佳的电融合参数为预融合电压1.0×105V/m,时间60 s,脉冲强度1.8×106V/m,脉冲宽幅20μs,脉冲次数1次。其有效融合率为28.89%,破损率为13.33%。