叶酸缺乏影响胚胎干细胞H3K9巴豆酰化和神经发育相关基因表达

目的采用染色质免疫共沉淀测序技术(chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-seq)分析叶酸正常小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)与叶酸缺乏mESCs组蛋白H3K9巴豆酰化(H3K9cr)修饰的全基因图谱,以期探究叶酸缺乏条件下mESCs中H3K9cr全基因组状态变化以及受到调控的通路基因。方法mESCs分为叶酸正常组(FA=4 mg/L,FA4)和叶酸缺乏组(FA=0 mg/L,FA0),利用Western blot和免疫组织化学染色分别检测叶酸缺乏mESCs和神经管畸形(neural tube defects,NTDs)小鼠胚脑组织中H3K9cr蛋白表达水平;利用ChIP-seq技术对获得的特异性结合的DNA片段展开序列鉴定,对差异表达基因进行基因本体论(gene ontology,GO)以及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析并可视化,分析叶酸缺乏条件下mESCs全基因组并对受调控基因进行验证。结果叶酸缺乏mESCs和NTDs小鼠胚脑组织中整体H3K9cr水平降低(P<0.05),叶酸缺乏mESCs中Bdnf、Pax6、App等神经发育相关基因下调(P<0.05),FA4与FA0两组差异富集基因的KEGG通路富集于轴突引导、神经活性配体-受体相互作用、谷氨酸能突触等与神经系统相关的通路。结论胚胎干细胞中叶酸缺乏通过H3K9cr修饰参与调控神经发育相关基因,提示组蛋白巴豆酰化修饰可能参与叶酸缺乏引起的神经发育类疾病。

叶酸缺乏与肿瘤发生

叶酸又称蝶酰谷氨酸、维生素M,是蔬菜和水果的重要营养成分之一。叶酸的生物活性形式为5-甲基四氢叶酸,它是体内一碳单位代谢的载体,参与体内许多生物学过程,包括核酸和蛋白质的合成及其表观遗传修饰。表观遗传修饰在肿瘤的发生中起着很重要的作用。流行病学研究资料表明,叶酸缺乏可能与人类肿瘤的发生有关。叶酸的缺乏可导致基因组DNA的低甲基化及核苷酸内部特定位点的高甲基化从而引起肿瘤的发生。本文主要简述叶酸摄入不足与肿瘤发生之间的关系。

叶酸缺乏孕鼠子代脑组织DNA甲基化变化

目的: 从分子水平探讨叶酸缺乏(FD)对胎鼠脑发育的影响。方法: 雌性SD大鼠实验组30只、对照组20只,分别饲以不含叶酸和含叶酸2 mg/kg的纯合饲料,2w后与雄鼠交配,于孕D20将孕鼠剖腹取胎,观察FD对胎鼠发育的影响,HPLC法检测孕鼠妊晚期末血清叶酸、胎鼠血清叶酸及胎鼠脑组织DNA甲基化水平。结果: (1)实验组孕鼠交配前及妊晚期末血清叶酸均明显低于对照组(P<0.01),外周血出现多分叶核粒细胞。实验组胎鼠血清叶酸也明显低于对照组(P<0.01),出现巨幼红细胞,RBC和Hb均低于对照组(P<0.01),且伴宫内生长迟缓。(2)实验组胎鼠脑组织DNA甲基化水平低于对照组(P<0.05),且与孕鼠及胎鼠的血清叶酸浓度呈正相关。结论: 母体FD时胎鼠的脑组织DNA甲基化水平降低,可能是胎鼠脑发育障碍的机制之一,受孕前后增补叶酸宜延长至妊娠结束。

叶酸缺乏与学习记忆及海马突触体膜流动性相关性研究

目的 : 探索叶酸缺乏对离乳大鼠学习记忆能力与海马突触体膜流动性的影响。方法 : 5 4只刚离乳的健康雄性 SD大鼠 ,随机分成三组 :实验组 (FD)、对饲组 (PF)和对照组 (AL)。实验组饲去叶酸的 RHAA配方饲料 ,另二组饲以添加叶酸 8mg/ kg的 RHAA饲料 ,对饲组按实验组的进食量加以控制 ,对照组不控制进食。分别于饲养第 2和第 6 w末测定血清叶酸 (SFA)浓度和进行 Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力 ,记录平均逃避潜伏期和分析原平台象限游泳距离占游泳总距离的百分比 ,分离海马突触体 ,透射电镜作形态学证实 ,用荧光物质 DPH标记突触体后测定荧光强度 ,后者反映突触体膜流动性。结果 : 实验第 2 w FD血清叶酸浓度降低 (P<0 .0 1 )。FD及 PF第 6 w时 SFA浓度明显低于 AL和 PF(P<0 .0 1 ) ,平均逃避潜伏期明显延长 ,原平台象限游泳距离百分比及海马组织突触体膜流动性均明显下降。与对照组比较 ,对饲组上述指标的改变不明显 (P>0 .0 5 )。相关分析结果 :海马结构分离突触体膜 r值与血清叶酸浓度、平均逃避潜伏期及原平台象限游泳距离百分比显著相关 (r=- 0 .5 2 7,P<0 .0 5 ;r=- 0 .45 1 ,P<0 .0 5 ;r=- 0 .5 79,P<0 .0 5 )。结论 : 1 .叶酸缺乏可损害离乳大鼠的空间学习记忆能力和降低海马突触体膜?

叶酸缺乏的离乳大鼠模型建立和评价

初次探讨在国内尝试用RHAA配方建立离乳大鼠的FD模型 ,并对该模型进行评价 ,以期今后对叶酸缺乏 (FolatesDeficiency ,FD)影响离乳大鼠学习记忆的观察和可能机制的分析有一更可信的基础。选择 5 4只刚离乳的健康雄性SD大鼠 ,随机分成实验组、对饲组和对照组三组。实验组饲以去叶酸的RHAA配方饲料 ,另二组饲以添加了 8mg叶酸 /kg膳食的RHAA饲料 ,对饲组按实验组的进食量加以控制 ,对照组不控制进食。每周记录体重和摄食量两次。分别于饲养第 2和第 6周末测定血清叶酸浓度。结果 :实验第 2周除实验组血清叶酸浓度降低外 (P <0 .0 1) ,其余各指标在三组间无明显差异 (P >0 .0 5 )。实验组从第 3周、对饲组从第 4周开始摄食量减少 ,生长速度减慢 (P <0 .0 5 )。第 6周实验组的平均体重、血清叶酸浓度明显低于对照组和对饲组 (P <0 .0 1)。结论显示 :用RHAA配方饲料饲养 6周可建成较重的离乳大鼠的叶酸缺乏模型 ,并最大限度地促进其生长 。

叶酸缺乏对肝细胞和肝癌细胞生长影响的实验研究

目的:探索叶酸缺乏状态对人肝癌细胞株BEL7402、肝细胞株L02生长状况的影响。方法:将BEL7402、L02分别置于正常培养液和叶酸缺乏培养液中培养30d,利用细胞计数和流式细胞仪检测各组细胞增殖和凋亡状态。结果:L02在叶酸缺乏状态下凋亡率增加,生长旺盛,表现为细胞总数增多,G0、G1期细胞比例下降。BEL7402在叶酸缺乏状态下生长正常,细胞总数、细胞周期比例和凋亡率未受影响。结论:叶酸缺乏状态刺激人肝细胞株L02生长旺盛、凋亡率增加,而对人肝癌细胞株BEL7402则作用不明显。叶酸缺乏可使L02细胞凋亡率明显增加,若凋亡机制未能清除那些不发生G1期阻滞的细胞,则可能发生癌变。

叶酸缺乏对HBL-100和MCF-7细胞凋亡的影响

目的:测定叶酸缺乏对人乳腺细胞HBL-100和乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法:将HBL-100和MCF-7细胞在叶酸缺乏的培养液(实验组)和正常培养液(对照组)中培养30 d,用电镜和流式细胞仪测定叶酸缺乏对HBL-100和MCF-7细胞凋亡的影响。结果:HBL-100细胞在两种培养液中生长30 d后,观察结果显示叶酸缺乏可引起HBL-100细胞凋亡增高,而对MCF-7细胞凋亡率则无影响。结论:叶酸缺乏可增加HBL-100细胞的凋亡率。

叶酸缺乏的离乳大鼠学习记忆能力与海马突触体膜流动性改变的相关性研究

初步探索叶酸缺乏的离乳大鼠学习记忆能力的改变与海马突触体膜流动性之间的关系,从膜功能的角度为叶酸缺乏影响学习记忆能力提供动物学方面的依据。对５４只刚离乳的健康雄性ＳＤ大鼠,随机分成实验组(ＦＤ)、对饲组(ＰＦ)和对照组(ＡＬ)三组。实验组饲以去叶酸的ＲＨＡＡ配方饲料,另二组饲以添加了８ｍｇ叶酸/ｋｇ膳食的ＲＨＡＡ饲料,对饲组按实验组的进食量加以控制,对照组不控制进食。每周记录体重和摄食量两次。分别于饲养第２和第６周末测定血清叶酸浓度和进行Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫测试大鼠的学习记忆能力,记录平均逃避潜伏期和分析原平台象限游泳距离占游泳总距离的百分比;分离海马突触体,透射电镜作形态学证实,用荧光物质ＤＰＨ标记突触体后测定荧光强度,后者反映突触体膜流动性。对血清叶酸浓度、平均逃避潜伏期及原平台象限游泳距离百分比、膜流动性作相关分析。结果显示:实验第２周除实验组血清叶酸浓度降低外(Ｐ＜０．０１),其余各指标在三组间无明显差异(Ｐ＞０．０５);实验组(ＦＤ)从第３周、对饲组(ＰＦ)从第４周开始摄食量减少,生长速度减慢(Ｐ＜０．０５)。第６周实验组(ＦＤ)的平均体重、血清叶酸浓度明显低于对照组(ＡＬ)和对饲组(ＰＦ)(Ｐ＜０．０１),平均逃避潜伏期明显延长。

神经管畸形不同发病区婚检妇女叶酸缺乏率的研究

在我国神经管畸形(NTDs)高发的北方和低发的南方城乡地区,分别进行了婚检妇女的叶酸营养状况监测,结果发现妇女血清叶酸总缺乏率为23.6‰,红细胞叶酸总缺乏率为298.1‰。红细胞叶酸缺乏率高于血清叶酸缺乏率。南方妇女叶酸缺乏率低于北方妇女,城市妇女叶酸缺乏率低于农村。夏、秋、冬、春季妇女的叶酸缺乏率不同。叶酸营养状况与神经管畸形发病率存在着负相关。

叶酸缺乏对HBL-100和MCF-7细胞株p53外显子6、7、8甲基化水平的影响

目的测定叶酸缺乏对p53外显子6、7、8甲基化水平的影响。方法将人正常乳腺细胞株HBL-100和人乳腺癌细胞株MCF-7在叶酸缺乏的培养基(实验组)和正常培养基(对照组)中培养30天,用半定量PCR的方法,测定叶酸缺乏对HBL-100细胞株p53和MCF-7细胞株p53外显子6、7、8甲基化水平的影响。结果叶酸缺乏可引起HBL-100细胞株p53外显子6、7和8甲基化程度降低,实验组DNA相对含量分别为0.91±0.04、2.73±0.18和3.28±0.30,与对照组1.14±0.07、3.36±0.24和4.36±0.23比较差异有显著性(P=0.0021,0.0061,0.0031);但不影响MCF-7细胞株p53外显子6、7和8甲基化程度。结论叶酸缺乏所致p53外显子6、7和8的DNA甲基化程度降低可能与乳腺癌发生有一定的相关性。

叶酸缺乏的离乳大鼠空间学习记忆能力的检测及意义

探讨叶酸缺乏时离乳大鼠学习记忆能力的改变 ,应用 54只刚离乳的健康雄性SD大鼠 ,随机分成实验组、对饲组和对照组三组。实验组饲以去叶酸的RHAA配方饲料 ,另二组饲以添加了 8mg叶酸 /kg膳食的RHAA饲料 ,对饲组按实验组的进食量加以控制 ,但对照组不控制进食。每周记录体重和摄食量两次。分别于饲养第 2和第 6周末测定血清叶酸浓度和进行Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力 ,记录平均逃避潜伏期和分析原平台象限游泳距离占游泳总距离的百分比 ;对血清叶酸浓度、逃避潜伏期及原平台象限游泳距离百分比做相关性分析。结果显示实验第 2周除实验组血清叶酸浓度降低外 ( p <0 0 1 ) ,其余各指标在三组间无明显差异 ( p >0 0 5)。实验组从第 3周、对饲组从第 4周开始摄食量减少 ,生长速度减慢 ( p <0 0 5) ;第 6周实验组的平均体重、血清叶酸浓度明显低于对照组和对饲组 ( p <0 0 1 ) ,平均逃避潜伏期明显延长 ,原平台象限游泳距离百分比明显下降。与对照组比较 ,对饲组上述指标的改变不明显 ( p >0 0 5)。相关分析结果表明 ,血清叶酸浓度与逃避潜伏期及原平台象限游泳距离百分比非常显著相关 (r =- 0 0 546 ,p <0 0 1 ;r =0 86 ,p <0 0 1 )。因此 ,可以结论

胎儿生长受限与孕妇红细胞叶酸缺乏的相关性研究

目的:研究胎儿生长受限与孕妇红细胞叶酸缺乏之间存在的相关性。方法:将150例胎儿生长受限的孕妇作为试验组,将150例正常孕妇作为对照组,采用电化学发光法,对两组孕妇,以及由处于孕晚期孕妇分娩的100例新生儿的红细胞叶酸含量进行测量。结果:在试验组中,孕中期及孕晚期孕妇的红细胞叶酸含量明显低于对照组;同新生儿相比,母体的血红细胞叶酸含量发生明显升高;新生儿脐血叶酸含量与孕妇红细胞叶酸含量具有正相关性;新生儿的体重与其红细胞内叶酸含量呈现出正相关趋势。结论:当孕妇血红细胞中的叶酸发生缺乏时,极有可能出现胎儿生长受限的情况,因此,孕妇在妊娠期间,应及时将自身红细胞叶酸的含量测定出来,对叶酸缺乏与否以及腹中胎儿的生长情况进行准确了解和掌握,从而尽早采取有效对策防止胎儿生长受限的发生。

胎儿生长受限与孕妇红细胞叶酸缺乏的相关性分析

目的分析胎儿生长受限和孕妇红细胞叶酸缺乏相关性。方法选择经超声诊断为胎儿生长受限60例孕妇(观察组),并选取同期的60例正常孕妇(对照组),分别测定静脉血红细胞叶酸含量,分析与胎儿生长受限相关性。结果观察组孕中期母血红细胞叶酸水平(3201.86±141.43)mmol/L与对照组的(3335.43±217.49)mmol/L比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察组孕晚期(2277.64±498.53)mmol/L与对照组(2655.35±546.41)mmol/L比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组胎儿窘迫、新生儿窒息、新生儿低体质量、早产发生率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组围产儿死亡率与对照组差异无统计学意义。结论胎儿生长受限和孕妇红细胞叶酸缺乏呈正相关,妊娠期对红细胞叶酸含量进行测定,能判定孕妇有无红细胞叶酸缺乏,掌握胎儿生长与营养情况,及时诊断与治疗。

叶酸缺乏孕鼠子代脑组织超微结构的变化

目的:观察叶酸缺乏孕鼠子代胎鼠脑组织超微结构的改变,为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供细胞水平的依据。方法:雌性SD大鼠实验组30只、对照组20只,分别饲以不合叶酸和含叶酸2 mg/kg的纯合饲料,2 w后与雄鼠交配,于怀孕第20 d将孕鼠剖腹取胎。用透射电镜观察胎鼠额区皮层超微结构的改变。结果:实验组胎鼠额区皮层神经元出现核切迹、局灶性核周腔扩张、异染色质减少、胞质内细胞器肿胀、核糖体减少;某些胶质细胞亦见类似改变;神经毡膜性结构不完整。结论:母体叶酸缺乏能造成其子代胎鼠皮层脑组织超微结构的变化,可能导致神经元功能的紊乱和丧失,以致防碍脑结构和功能的正常发育。

叶酸缺乏对乳腺癌化疗疗效和毒性的影响

目的 :检测叶酸缺乏时化疗药物对人乳腺细胞株HBL 1 0 0和人乳腺癌细胞株MCF 7敏感性的影响。 方法 :将HBL 1 0 0和MCF 7在正常培养液和叶酸缺乏培养液中加入化疗药物 ,培养 3天 ,用四唑蓝 (MTT)法检测化疗药物对HBL 1 0 0和MCF 7的杀伤作用。 结果 :MCF 7对阿霉素 (ADM)、顺铂 (DDP)、氟尿嘧啶 (5 FU)、丝裂霉素(MMC)和甲氨蝶呤 (MTX)等化疗药物均不敏感。将 5 FU、MMC和MTX分别加入实验组和对照组培养液后 ,对照组中MCF 7细胞数减少 ,光密度值降低。ADM和DDP对MCF 7生长的抑制作用在两种培养液中无显著差异。ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX等化疗药物 ,在两种培养液中 ,对HBL 1 0 0光密度值的影响无显著差异。 结论 :叶酸缺乏可以降低某些化疗药物如 5 FU、MMC和MTX对MCF 7的杀伤作用 ,但不改变ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX等化疗药物对HBL 1 0

叶酸缺乏对大隐静脉内皮细胞增殖的影响

目的测定叶酸缺乏对人大隐静脉内皮细胞(HSVECs)增殖的影响。方法将HSVECs在叶酸缺乏的培养液(实验组)和正常培养液(对照组)中培养30d,用细胞培养和流式细胞仪(FCM)测定叶酸缺乏对HS-VECs细胞增殖数量、细胞周期分布和凋亡的影响。结果 HSVECs在2种培养液中生长30d后,观察结果显示叶酸缺乏可引起HSVECs细胞数量减少、增殖周期细胞比例减少、凋亡增高(P<0·01)。结论叶酸缺乏可抑制HSVECs细胞的增殖生长。