产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌合成培养基筛选与优化

该研究对于产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的合成培养基进行了系统的筛选与优化。基于豆粕成分分析及文献报道构建初始化学合成培养基CDM_(0),并通过单一组分移除实验,初步确定对菌体生长有显著影响(生长降低20%以上)的组分,包括3种碱基、4种维生素、11种氨基酸以及一些金属离子和无机盐。在此基础上进行了组分添加实验,分别添加单一组分移除实验从CDM_(0)中剔除的组分,进而筛选出对菌体生长具有20%以上促进作用的5种关键营养物质,并用全排列方法得到了26种组合添加方式,经实验确定了添加的最佳组合为(NH_(4))_(2)SO_(4)、腺嘌呤和天冬酰胺。此外,还研究了甘油、5种单糖和3种双糖对菌体生长及碱性蛋白酶合成的影响,最终以半乳糖为碳源确定了一种优化后的化学全合成培养基CDM_(3)。实验结果表明,与CDM_(0)相比,CDM_(3)显著提高了菌体的生长速率和碱性蛋白酶的产量,其中酶活力提升至10300.7 U/mL,提高了约2.5倍。该实验结果为今后研究该菌株的代谢特性奠定了基础。

有机酸在合成培养基中对木醋杆菌合成纤维素的影响

在合成培养基中分别添加0.1%柠檬酸、苹果酸、丁二酸、乳酸、乙酸、丙酮酸,发现只有乳酸、乙酸、丙酮酸能使木醋杆菌在合成培养基中繁殖且产生纤维素。当0.4%丙酮酸加入时,纤维素产量最高,达到2.02g/L;0.3%乳酸加入时,纤维素产量最高,达到2.16g/L;0.4%乙酸加入时,维素产量最高,达到2.80g/L。当0.4%乙酸、0.3%乳酸、0.4%丙酮酸同时加入,纤维素产量可达4.45g/L。

β-胡萝卜素降解葡萄球菌化学合成培养基营养素的研究

目的:探索适于β-胡萝卜素降解葡萄球菌生长的最佳化学合成培养基配方。方法:先确定培养基成分,再利用单一成分缺失方法确定β-胡萝卜素降解葡萄球菌的必需营养素。结果:K2HPO4、NaNO3、Pro、Arg、Val、Gly、Try等物质是此菌体生长必需的营养素。结论:经筛选合成的完全化学合成培养基可以用于此β-胡萝卜素降解葡萄球菌的培养,培养物具有降解类胡萝卜素能力。

拟干酪乳杆菌发酵L-乳酸合成培养基的优化

为开发一种适合于乳酸发酵过程代谢流分析(MFA)的合成培养基,以拟干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei为对象,考察主要营养成分对其生长和乳酸合成的影响。在合成培养基的优化过程中,先确定了影响菌体生长和乳酸合成的主要营养物质及其浓度范围,针对葡萄糖、混合氨基酸、核苷类物质、维生素等生长因子、混合磷源、CaCO3六大类营养成分,使用正交试验法先后设计了六因素五水平和四因素三水平正交试验以及氨基酸梯度试验和氨基酸缺失试验,得到了最佳培养基组成(1 L):葡萄糖80 g、醋酸钠2 g、吐温-80 1 mL、柠檬酸氢二铵1 g、金属离子0.72 g、混合氨基酸3.925 g、核苷类物质0.15 g、维生素等生长因子0.075 g、混合磷源0 g、CaCO3 35 g。以半合成培养基为对照,考察优化后的合成培养基对菌体生长和乳酸合成的影响。结果表明,菌体在合成培养基中的乳酸产量、产率均比半合成培养基中高。这些结果为L.paracasei的代谢流定量研究奠定了基础。

仔猪副伤寒活疫苗合成培养基发酵工艺应用研究

为确定仔猪副伤寒活疫苗合成培养基发酵参数,根据发酵过程中的关键技术,设计3种不同工艺,分别发酵培养21 h,每隔3 h取样进行活菌计数表明,培养15~21 h均可达细菌稳定期,工艺3培养菌数高于其余2种,其最适培养时间为18 h;将合成培养基以1%、2%和3%的接菌量按工艺3分别发酵18 h,发现3者培养菌数基本一致。进一步比较4批合成培养基和普通肉汤发酵18 h的培养效果,期间15、18 h抽样的合成培养基培养菌数分别比普通肉汤高12%和25%;发酵18h的菌液对小鼠安全性及对兔的免疫原性,两者基本一致,接种小鼠均10/10健活,免疫攻毒兔均达4/5~5/5保护,对照攻毒兔5/5死亡。结果表明,发酵培养工艺3可行,可实现仔猪副伤寒活疫苗合成培养基高密度培养,且发酵菌体安全性及免疫原性良好。

中生菌素产生菌发酵合成培养基的设计优化

目的针对目前没有适合中生菌素产生菌的合成培养基的现状,进行中生菌素产生菌发酵合成培养基的设计,并对其进行优化,以期为以后中生菌素产生菌发酵生产、营养生长、代谢、遗传育种和产素机制的研究提供基础。方法顺序通过无机氮源和有机氮源的筛选、正交试验,并利用统计学软件SPSS V13.0对实验数据进行分析,确定并优化中生菌素产生菌发酵合成培养基的组成成分。结果最终确定了中生菌素产生菌发酵合成培养基,该培养基在定量加入微量元素的基础上,组成成分为谷氨酸钠0.5%,葡萄糖1.5%,可溶性淀粉1.5%,NH4Cl 0.3%,KH2PO4 0.02%,MgSO4 0.025%,NaCl 0.5%,CaCO3 0.3%。结论经过发酵验证,该培养基的产素能力可达到2000μg/mL左右,虽然比天然成分培养基低,但可以满足以后营养生长、代谢、遗传育种和产素机制等的研究。

木醋杆菌合成培养基探索

通过逐一删减法对参考合成培养基进行简化,结果显示2%葡萄糖,0.3%Na2HPO4、0.1%NH4Cl、0.1%柠檬酸、0.025%MgSO4适合木醋杆菌HN001,再进一步对该培养基进行优化,实验结果显示3%蔗糖、0.1%乙酸、0.1%乙酸铵(或柠檬酸铵)、0.1%Na2HPO4、0.025%MgSO4为最佳合成培养基组成,而KCl和烟酰胺对纤维素的产生有抑制作用。

仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线的建立及合成培养基初步应用

建立了仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线,获取菌株培养参数,从而实现合成培养基初步应用。将猪霍乱沙门氏菌（CVCC79500株）运用试管和三角瓶分别静置和振荡培养30 h,期间取4、8、12、18、24、30 h等6个点进行活菌计数并建立生长曲线,确定37℃静置培养18-24 h,37℃、200 r/min振荡培养8-24 h为培养稳定期。不同接菌量比较结果表明,37℃静置培养24 h,37℃、200 r/min振荡培养12 h均可达到菌体稳定期。在稳定期参数条件下,比较合成培养基与常规普通肉汤培养基对该菌的增殖效果,结果表明,37℃静置培养24 h,试管及三角瓶培养菌数分别为27×108-31×108、33×108-41×108CFU/m L;37℃、200 r/min振荡培养12 h,试管及三角瓶培养菌数分别为58×108-66×108、78×108-88×108CFU/m L。而同条件3批普通肉汤培养菌数均低于合成培养基,且批次间稳定性较合成培养基差。将合成培养基振荡培养12 h的菌液接种小鼠均10/10存活;免疫后攻毒家兔达4/5-5/5保护,与普通肉汤基本一致。合成培养基保存期试验表明,25℃避光保存28 d与当天配制的液体合成培养基,振荡培养菌数基本一致。获取的培养参数适合用于合成培养基的初步评价,研制的合成培养基培养菌数优于普通肉汤,且不影响菌体安全性及免疫原性,室温保存期可达28 d。

氨基酸在合成培养基中对木醋杆菌合成纤维素的影响

18种氨基酸被作为唯一氮源添加到木醋杆菌合成培养基中检验其对纤维素产量的影响。根据产纤维素的情况将氨基酸分为产量较多类、产量较少类及不产类,再通过正交试验检验产量较多类及较少类氨基酸的组合效应。结果表明,只有组氨酸适合于作为氮源物质添加到木醋杆菌合成培养基中,但组氨酸的效果不及硫酸铵的效果显著,通过定量测定组氨酸及硫酸铵在培养基中的含量变化,表明二者共同存在时,都被木醋杆菌利用,利用率并不互相影响。

紫丁香蘑原基诱导合成培养基初探

通过正交实验筛选了一种用于紫丁香蘑原基诱导的合成培养基。合成培养基由复合碳源(木糖+糊精)、复合氨基酸氮源、无机盐、MS培养基中的微量元素及铁盐、生长因子、出菇刺激物等6部分构成,以珍珠岩为支持物。优化后培养基中含有5 g.L-1木糖、25 g.L-1糊精、0.1 g.L-1乙酸钠。在此培养基上,紫丁香蘑菌丝经24℃无光培养30d、再经16℃弱光刺激15 d后可产生83个原基。

降解β-胡萝卜素葡萄球菌的化学合成培养基研究

以沙棘汁中分离的降解β胡萝卜素葡萄球菌为材料,在完全合成培养基中采用单一成分缺失的方法确定了菌体生长的营养需求,试验结果表明,精氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸、丰胱氨酸、脯氨酸6种氨基酸和K2HPO4和NaNO3两种无机盐是必需营养素,其他组分或是对菌体生长没有作用,或是尽管对菌体生长有一定的作用,但缺失时对菌体生长不会受到较大影响。

仔猪副伤寒活疫苗半合成培养基的配方筛选试验

研制了一种适用于仔猪副伤寒活疫苗生产的半合成培养基,解决了培养基质量不稳定的问题。选用几种营养成分配比,制成半合成培养基进行细菌培养并冻干,结果冻前菌数超过普通肉汤培养基,冻干存活率略低于普通肉汤培养基,安全性检验合格,证明该培养基替代现用培养基生产疫苗是可行的。

A型产气荚膜梭菌合成培养基使用参数及培养毒素浓缩工艺研究

经过对A型产气荚膜梭菌合成培养基pH值、灭菌方式和配制用水进行优化,确定最适pH值为8.0～8.5,灭菌方式为116℃30 min,配制用水为去离子水。合成培养基培养产气荚膜梭菌CVCC37株6 h后毒力达50～100 MLD/mL,随着时间的延长,毒力不再增强;培养温度为36℃或37℃时,产毒效果最佳。比较不同截留分子量的超滤膜浓缩效果,10 ku截留分子量的收获率为40%,其透出液静脉接种0.2 mL,小鼠2/2死亡;而8 ku收获率达75%,其透出液静脉接种0.2 mL,小鼠0/2死亡。因此,8 ku截留分子量膜包适宜对A型菌培养毒素的浓缩。

发酵法生产丁二酸的化学合成培养基的筛选

以产琥珀酸放线杆菌Actinobacillus succinogenes NJ113为出发菌株,针对该菌株筛选出含有关键生长因子的化学合成培养基,其关键因子为谷氨酸(Glu)、蛋氨酸(Met)和生物素(V H)和烟酸(V PP)。结合原发酵培养基中的磷酸缓冲盐成分,最终得到的化学合成培养基配方(g/L):CH3COONa 1.36,NaCl 1.0,MgCl20.2,CaCl20.2,Na2HPO40.31,NaH2PO41.6,KH2PO43,NH4HCO31.57,Glu 0.87,Met 0.11,V H0.010,V PP0.025。在3 L发酵罐上进行验证实验,50 g/L初始葡萄糖发酵70 h,丁二酸的质量浓度为45.2 g/L,丁二酸收率达到90.4%。与之前的半合成培养基发酵制备丁二酸相比,丁二酸的收率提高了25.2%,副产物也有很大幅度的减少。

天然培养基与合成培养基灭菌方式的研究

试验选择5种天然培养基和5种合成培养基。每类培养基分装到20个三角瓶中,天然培养基分为2组(天然培养基Ⅰ组和Ⅱ组),合成培养基分为2组(合成培养基Ⅰ组和Ⅱ组)。天然培养基Ⅰ组、合成培养基Ⅰ组和天然培养基Ⅱ组、合成培养基Ⅱ组,在高压灭菌15min后,分别自然冷却降至压力为0和慢慢放气降至压力为0,然后放置培养箱中培养,并记录污染情况。结果显示,天然培养基适合自然降压灭菌,而合成培养基适合慢慢放气降压灭菌。

C型产气荚膜梭菌合成培养基使用参数及培养毒素浓缩工艺优化

确定C型产气荚膜梭菌合成培养基使用参数及建立配套的毒素浓缩工艺。比较不同pH值、灭菌温度、配制用水的合成培养基及其不同培养时间和温度下培养产气荚膜梭菌CVCC60102株的毒力;按毒素的分子量及超滤膜的截留分子量设计并比较2种不同浓缩工艺的毒素收获率及透出液的毒力。结果表明,pH值为8.0～8.4、灭菌方式为116℃30 min、配制用水为去离子水时产毒最佳,毒力达到500～1000 MLD/mL;合成培养基培养产气荚膜梭菌CVCC60102株18h后毒力达500～1000 MLD/mL,随着时间的延长,毒力不再增强;培养温度为36℃或37℃时,产毒效果最佳;不同截留分子量的超滤膜浓缩,10 ku截留分子量的收获率为68%,其透出液静脉接种0.2 mL,小鼠2/2死亡;而8 ku收获率达80%,其透出液静脉接种0.2 mL,小鼠0/2死亡。因此8 ku截留分子量膜包适宜对C型菌培养毒素的浓缩。上述结果为C型产气荚膜梭菌合成培养基的应用提供了数据支撑。

几种合成培养基应用效果的观察

几种合成培养基应用效果的观察杜春明，刘秀梅，孟昭赫中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所（１０００５０）合成培养基在国外已普遍应用于医学、生物学等领域。我国近年来陆续有一些厂家生产，但其产品质量能否达到国家级标准，是今后推广使用的主要问题。为此我们把...

在合成培养基上诱导香菇快速形成子实体

1987年上半年,我们研究出一种能快速产生香菇子实体的合成培养基。此化学合成培养基是由几种化学药品和一定数量燕麦粉制成的。在此培养基上接种香菇 Cr—02菌株和平菇(紫孢侧耳),进行二次短时间的低温刺激(13℃)。经过多次实验,香菇20天显蕾并出菇,培养35天时诱导显蕾率96.7—100%,成菇率平均79.3%,开伞率平均60%,平均每瓶出菇6.2个。此培养基接平菇无诱导作用。经过多次实验表明,刺激形成香菇子实体的主要诱导因子是燕麦粉。

大豆花药培养的研究 第二报:合成培养基的选择

在大豆花药培养研究中,国外至今还未见获得大豆花粉植株的报道,美国 Ivers.D.R.1974年发表“大豆花药培养”一文中也没有发现胚状体或植株,同时认为愈伤组织是由二倍体的组织形成的。1977年我们在全国第二次花药培养会上报导了1976年、1977年大豆花药培养获得了芽状体,从离体的花药中观察到花粉细胞均等分裂以至形成圆球胚一系列变化。

利用响应面方法优化产L-乳酸的合成培养基

采用响应面方法对拟干酪乳杆菌Lactobacillus paracase(iL.paracasei)的一种产乳酸的合成培养基进行了优化。该文将培养基中的混合氨基酸、核苷类物质和混合维生素看作3大类营养成分。首先利用Plackett-Burman实验设计考察了培养基中包括该3类营养物质在内的8种营养成分对菌体生长和乳酸合成的影响,筛选出了影响菌体生长和乳酸合成的3个主要因素,即混合氨基酸、KH2PO4和CaCO3;在此基础上利用最陡爬坡实验逼近最大响应区域;然后利用Box-Behnken实验设计及响应面分析法确定了最佳培养条件。经过3次实验验证,乳酸实际浓度与预测浓度十分接近,已经超过了在复合培养基中培养的水平。这些结果为L.paracasei的代谢流定量研究奠定了基础。