PRRSV非结构蛋白Nsp1α合成肽多克隆抗体的制备及应用

本研究尝试利用PRRSV Nsp1α合成肽进行多克隆抗体的制备,并对抗体的特性进行了分析。首先,利用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp1α的抗原肽序列;随后,按照此序列合成获得抗原肽,并将其与KLH载体蛋白进行偶联;接下来,将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合,通过免疫大白兔制备针对Nsp1α合成肽的多克隆抗体;最后,利用ELISA、Western blot及间接免疫荧光法对多克隆抗体的特性进行了分析。结果显示:该多克隆抗体ELISA的效价超过105;利用Western blot可以检测到特异的Nsp1α表达条带,包括瞬时转染的样品和不同毒株病毒感染的样品;利用间接免疫荧光法分析,该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。结果表明,PRRSV Nsp1α合成肽多克隆抗体可以有效地应用于PRRSV Nsp1α表达检测,为进一步研究PRRSV Nsp1α的功能提供了一个有效的工具。

猪口蹄疫二价合成肽疫苗抗体免疫评估检测

猪口蹄疫作为一种高度传染性疾病,严重威胁了猪、牛、羊和其他偶蹄类动物的健康和畜牧业发展。该病毒的传播迅速,引起的猪口蹄疫症状包括口腔和蹄部的溃疡,严重影响动物的生产性能和福利,导致经济损失和农业灾害。为控制猪口蹄疫的传播,疫苗是最有效的手段之一。近年来,二价合成肽疫苗作为一种新型疫苗备受瞩目。

合成肽类药物的质量控制

目的:为合成肽类药物的研究和质量控制提供参考。方法:从合成肽类药物的定义和分类入手,分析梳理合成肽类药物相关指导原则及不同药典中与其相关的通用技术要求现状。结果与结论:与传统药物相比,合成肽类药物结构复杂,质量属性分析方法的建立具有更大的难度和特殊性,质量控制的要点在于药物活性成分的结构表征、肽相关杂质的控制与分析和质量控制用标准物质的研制。

猪圆环病毒2型合成肽疫苗佐剂筛选与免疫保护性研究

【目的】筛选更安全高效的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)合成肽疫苗佐剂。【方法】将IMS 251C VG、GEL 02 PR、ISA 15A VG、ISA 206 VG、ISA 61 VG、台湾细菌鞭毛、卡波姆、多糖共8种佐剂与适量PCV2多肽抗原按照特定方法配制成不同疫苗,并验证其物理性状,采用小鼠试验初步检验疫苗安全性及免疫效果,筛选出较优的佐剂进行仔猪免疫攻毒保护试验,进一步评估各疫苗的免疫保护效果。【结果】物理性状显示,所有疫苗稳定性均较好,4℃保存期均超过12个月。ISA 61 VG油佐剂黏度较高且乳滴粒径较大,ISA 15A VG、ISA 206 VG双相佐剂次之,其余水佐剂均较低较小。小鼠试验结果显示,除台湾细菌鞭毛佐剂外其他佐剂安全性均良好;小鼠ELISA抗体水平检测结果显示,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组免疫效果明显高于其余疫苗组;综合评定安全性和免疫效果,筛选ISA 61 VG、GEL 02 PR、卡波姆、多糖、ISA 206 VG共5个佐剂组进行仔猪免疫攻毒保护试验。仔猪免疫攻毒保护试验结果显示,免疫后,ISA 61 VG和GEL 02 PR组保护效果明显优于其他佐剂,其制备的疫苗产生的ELISA抗体和中和抗体水平均明显高于其他组,同时还可刺激产生更高水平的细胞因子γ-干扰素(IFN-γ);攻毒后,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组疫苗的仔猪相对日增重显著高于其他佐剂组(P<0.05),且实时荧光定量PCR和免疫组化结果显示,上述疫苗组可显著降低仔猪体内病毒载量(P<0.05)。临床症状观察显示,ISA 61 VG和GEL 02 PR疫苗组无体温升高或被毛粗乱等现象,病理切片表明这2个疫苗组组织病变较轻。【结论】油佐剂ISA 61 VG佐剂和水佐剂GEL 02 PR制备的PCV2合成肽疫苗对预防PCV2感染具有较好的免疫保护作用,试验结果为PCV2合成肽疫苗的研究提供了数据基础。

烫伤大鼠肝组织糖皮质激素受体的变化及α-MSH、合成肽KPV的调节作用

目的 探讨烫伤所致的病理性应激时大鼠肝胞液糖皮质激素受体的变化及可能的调节机制。方法 以 [3H]地塞米松为配体 ,用放射性配基 受体结合分析法测定了正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠肝胞液糖皮质激素受体的结合容量(Receptorcapacity ,R0 )和表观解离常数 (Kd)。采用体内注射TNFα、IL 1 β中和抗体和α 促黑色素细胞刺激激素 (α melanocyte stimulatinghormone ,α MSH)和合成肽KPV(Ac D Lys L Pro D Val)等措施调节其改变。结果 与正常组的R0 [Massactionrobust:(30 7.86± 2 4.2 2 )fmol/mg ;Scatchard :(30 6 .71± 2 7.96 )fmol/mg]相比 ,烫伤后 1 2h ,轻烫组的R0 [MassActionRobust:(2 85 .1 9± 1 6 .6 2 )fmol/mg ;Scatchard :(2 96 .6 4± 1 6 .0 6 )fmol/mg]差异不显著 ;重烫组的R0 [Massactionrobust:(2 0 5 .5 2± 30 .41 )fmol/mg ;Scatchard :(2 0 8.45± 30 .78)fmol/mg]则显著下降 (P <0 .0 5 )。用体内注射TNFα、IL 1 β中和抗体和α MSH和KPV均能明显改善重烫组R0 的降低。结论 TNFα、IL 1 β中和抗体、α

烫伤大鼠血浆TNF-α水平的变化及α-MSH和合成肽KPV的调节作用研究

目的 :观察烫伤对大鼠血浆肿瘤坏死因子 α(TNFα)水平的变化及 α 黑色素细胞刺激激素(α MSH)和 KPV合成肽的调节作用。方法 :用酶联免疫吸附 (EL ISA )法检测正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠血浆 TNFα的水平 ,用烫伤前大鼠尾静脉注射 TNFα和白介素 1β(IL 1β)中和抗体及腹腔注射α MSH和 KPV等调节重度烫伤大鼠血浆 TNFα的水平。结果 :与正常对照组血浆 TNFα水平相比 ,烫伤后 12小时 ,轻度烫伤组大鼠血浆 TNFα水平显著升高 (P<0 .0 1) ;与轻度烫伤组相比 ,重度烫伤组大鼠血浆 TNFα水平升高更加明显 (P<0 .0 1)。体内注射 TNFα和 IL 1β中和抗体及 α MSH和 KPV均能明显减轻重度烫伤组大鼠血浆高 TNFα血症状态。结论 :烫伤可使大鼠血浆 TNFα的水平明显升高 ;体内注射TNFα、IL 1β中和抗体及 α MSH和 KPV均可在一定程度上减轻重度烫伤所致的血浆

以合成肽为抗原检测O型口蹄疫病毒抗体ELISA方法的建立和评价

作者以固相法合成特异性FMDV主要保护性抗原VP1上的表位肽,将其与载体蛋白BSA偶联,作为包被抗原,制备检测抗O型口蹄疫病毒(FMDV)抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。结果表明该方法的敏感性为95.12%,特异性为100%。检测199份血清标本,与UBI FMD VP1试剂盒的符合率达到98.49%,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率达到96.98%。该多肽ELISA试剂盒特异、敏感、稳定、操作简便,可用来监控口蹄疫抗体水平。

猪O型口蹄疫合成肽疫苗及猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫效果对比试验

使用猪O型口蹄疫合成肽疫苗与猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫30-40日龄商品猪,免疫采用正向间接血凝试验、液相阻断ELISA及VP1结构蛋白抗体ELISA检测免疫前和首次免疫后14d、28d、35d、42d、56d及二次免疫后7d、14d、28d抗体水平。同时,对接种疫苗的实验猪进行免疫应激观察。结果显示:注射合成肽疫苗试验猪未出现不良免疫副反应;采用正向间接血凝试验检测,两种疫苗免疫抗体合格率差异不显著;运用液相阻断ELISA及VP1结构蛋白抗体ELISA进行检测,注射合成肽疫苗试验猪二免7d后抗体水平快速上升,抗体检测合格率达到73%-100%。与注射高效灭活苗组比较表明:合成肽疫苗临床使用的安全性较高,免疫抗体合格率明显优于猪O型口蹄疫高效灭活苗。

以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒

【目的】建立合成多肽抗原检测FMD NSP抗体的ELISA方法。【方法】固相法合成特异性FMDV NSP B细胞表位肽,将其偶联在BSA载体蛋白上,作为抗原包被在ELISA板上,制备检测抗FMDV NSP抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。【结果】抗原包被浓度选择2.5μg·mL-1;检测199份血清标本,与美国UBI商品试剂盒符合率达到96.48%,与国产3ABC ELISA比较,符合率为97.48%,显示极好的一致性。【结论】该合成肽ELISA试剂盒可以用以检测NSP抗体,从而鉴别FMD的自然感染与疫苗免疫,试剂盒特异性强,重复性好、稳定性高,操作简便。

猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测

为了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果,选用了两个厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗,对80头试验仔猪进行了免疫注射,并在6、7、8、9、11、13、20周龄采血,通过ELISA检测抗体水平的变化。结果显示,猪口蹄疫O型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体;疫苗的免疫副作用小;使用VP1ELISA和LPB-ELISA检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体试验相关性较好。

抗人血管内皮生长因子合成肽mAb杂交瘤细胞株的建立

血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）是１９８９年Ｆｅｒｒａｒａ等［１］从牛垂体滤泡星状细胞的体外培养液中首先纯化出来并命名的。经测序及基因分析发现，与血管通透因子（ｖａｓｃｕｌａｒｐｅｒｍｅａｂ...

抗HCV HVR1模拟合成肽单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗-HCV高变区1(HVR1)合成肽单克隆抗体(mAb),并对其特性进行鉴定。方法:以固相合成的HCV HVR1合成肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联后,免疫8周龄的BALB/c小鼠。采用杂交瘤技术,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,制备抗-HCV HVR1 mAb。经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后,用相关的试剂盒鉴定小鼠mAb的Ig亚类;经中和抑制后用ELISA法检测mAb的特异性;用间接ELISA法检测mAb腹水的效价及相对亲和常数。结果:获得1株可分泌抗-HCV HVR1合成肽特异性mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11。该株mAb的Ig亚类为IgG3;腹水效价为3.125×10-5;相对亲和常数为1.0×106L/mol。该株mAb与HBsAg、HBeAg、HBcAg、HAAg、牛血清白蛋白、酪蛋白和胸腺5肽均无交叉反应,与HCV HVR1合成肽-牛血清白蛋白出现特异性反应。结论:成功地建立了1株可分泌抗-HCV HVR1 mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11,为进一步的实验研究提供了重要的制剂。

重组亚单位和合成肽防龋疫苗的免疫效能

目的:比较重组亚单位rPAc防龋疫苗和合成肽疫苗诱导小鼠特异性体液免疫和黏膜免疫水平。方法:以rPAc疫苗和合成肽疫苗分别滴鼻免疫小鼠,2、4周后加强免疫,分别收集0、2、4、6、8、10、12周的血清和唾液,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清和唾液中特异性抗体的水平。结果:以rPAc防龋疫苗免疫小鼠可产生较合成肽疫苗免疫小鼠更显著的黏膜免疫反应,两组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:重组亚单位rPAc防龋疫苗相对于合成肽疫苗具有更明显的黏膜免疫效果。

用单表位合成肽抗原荧光偏振免疫法检测抗幽门螺旋杆菌尿素酶的抗体

目的:应用单表位合成肽抗原,建立一种新的基于荧光偏振技术(fluorescencepolarization,FP)的抗体检测方法。方法:用幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B(UreB)的单表位合成分支肽抗原免疫小鼠,以ELISA法分析免疫的效果。分析FITC标记的合成肽抗原在不同浓度时的FP值,用FP技术分析抗原表位的抗原性以及不同稀释比例的血清样品对FP检测的影响。分别应用FPIA法和ELISA法,对126例样品进行Hp感染检测,对FPIA的检测数据进行受试者工作特征曲线(receiveroperatingcharacteristiccurve,ROC)分析。结果:UreB的单表位抗原肽具有较强的抗原性和免疫原性;1.0nmol/L的FITC标记肽可用于FPIA检测,血清样品做1∶25稀释时可明显区分阳性和阴性检测结果。与ELISA方法检测的结果相比较,用基于UreB单表位合成肽抗原的FPIA法检测Hp感染的灵敏度为85.7%,特异度为98%。结论:应用UreB单表位合成肽抗原,可对抗UreB的抗体进行快速FPIA检测,用此法检测抗体在疾病的临床诊断中具有广阔的应用前景。

α-MSH和合成肽KPV对病理性应激大鼠血浆皮质酮的调节作用

目的 观察不同程度烫伤大鼠血浆中皮质酮的水平及α -MSH和合成肽KPV对它的调节作用。方法 采用放射免疫法检测正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠血浆皮质酮的浓度 ;采用体内放射TNF -α、IL - 1β中和抗体和α -促黑色素细胞刺激激素 (α-melanocyte-stimulatinghormone ,α -MSH)和合成肽KPV(Ac -D -Lys -L -Pro -D -Val)等措施调节其改变。结果 与正常对照组的血浆皮质酮水平 (15 4 32± 5 9 12ng/mL)相比 ,烫伤后 12h轻烫组的血浆皮质酮浓度 (134 4± 376 47ng/mL)显著升高 (P <0 0 1) ;与轻烫组相比 ,重烫组大鼠血浆皮质酮水平 (2 6 80± 44 3 2 3ng/mL)升高更加明显 (P <0 0 1)。体内注射TNFα、IL - 1β中和抗体和α-MSH及KPV均能明显降低重烫组动物血浆皮质酮水平。结论 重度烫伤可使大鼠血浆出现高皮质酮血症 ,体内注射TNFα、IL - 1β中和抗体及α

以合成肽为抗原检测人巨细胞病毒抗体的酶联免疫吸附试验的建立及评价

目的以合成多肽为抗原建立用于人巨细胞病毒(HCMV)抗体检测的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法以固相多肽合成技术合成了HCMV 7个抗原性肽段,并对其抗原性进行了初步评价,选择高抗体反应的肽段为抗原,建立检测HCMV特异性抗体的间接ELISA。结果7个肽段中,抗体反应性较高肽段有4个;以合成多肽为抗原的间接ELISA对HCMV IgG抗体检测的敏感性和特异性分别为90.9%和100.0%,对于IgM抗体检测的敏感性和特异性分为90.0%和100.0%;与国外试剂盒测定结果有良好的符合性;该方法的精密度及稳定性良好。结论合成的HCMV多肽片段可作为抗原用于HCMV的检测,以此多肽为抗原建立的间接ELISA可用于临床HCMV特异性抗体的检测。

兔抗人细胞色素P4504A11合成肽抗体的制备与鉴定

目的制备兔抗人细胞色素P4504A11(CYP4A11)抗体,并对其特性进行初步鉴定。方法利用生物信息学方法分析CYP4A11蛋白的序列,根据亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择多肽序列、合成CYP4A11多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,免疫大耳白兔制备抗CYP4A11抗体。辛酸-硫酸铵法纯化抗体,对纯化的抗体进行ELISA、Westernblot、免疫组化等鉴定。结果获得抗CYP4A11合成肽的抗体。该抗体效价为1∶32000。可与CYP4A11合成肽及天然CYP4A11出现特异性反应,该抗体识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为53000,可识别正常肝脏的CYP4A11。结论合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP4A11合成肽抗体可应用于ELISA、Westernblot、免疫组化等实验。

人血管内皮生长因子合成肽的设计与合成

目的：预测血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）连续性表位，利用ＶＥＧＦ合成肽制备抗ＶＥＧＦ合成肽单克隆抗体。方法：根据ＶＥＧＦ１８９氨基酸序列，采用抗原指数方案及Ｇｏｌｄｋｅｙ软件，预测ＶＥＧＦ表位，确定合成肽序列，在４３０Ａ固相自动肽合成仪上合成。结果：ＶＥＧＦ氨基端１～２６残基被确定为合成肽序列并合成。结论：ＶＥＧＦ抗原表位的预测与合成，为利用ＶＥＧＦ合成肽制备抗ＶＥＧＦ合成肽单克隆抗体提供了一条有效的途径。

大鼠阴离子交换蛋白合成肽抗体制备及鉴定

根据带 3蛋白 (阴离子交换蛋白 )拓扑学模式、氨基酸保守片段、功能片段、天然抗原表位 ,设计大鼠带 3膜外侧片段合成肽 ,制备抗合成肽 ( 1 2肽 )抗体 ,同时制备抗大片段带 3抗体加以印证 .多项免疫学实验鉴定结果表明 ,该 1 2肽是带 3抗原决定簇之一 ,也是带 3发挥阴离子转运功能的关键肽段 ;1 2肽的氨基酸组成与序列在各种属间高度保守 .免疫金银显色———扫描电镜结果给出该 1 2肽为带 3蛋白膜外侧区片段的最直接证据 .制备的抗带 3抗体可作为研究带 3结构与功能、探讨与带

拟Smac合成肽羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物的制备及体外抗肿瘤性能研究

目的:探讨拟Smac合成肽羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物的制备及联合恒定外磁场体外对膀胱癌细胞的凋亡促进作用。方法:以羧甲基壳聚糖为骨架与具有超顺磁性的Fe3O4纳米粒合成纳米载体粒子,将拟Smac合成肽SmacN7与其结合,制备拟Smac合成肽羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物,并通过透射电镜、振动样磁强计等考察其理化性质;Hoechst33258染色观察外加磁场下纳米复合物诱导膀胱癌T24细胞凋亡的形态,MTT比色分析法观察其对肿瘤细胞的生长抑制作用。结果:拟Smac合成肽羧甲基壳聚糖磁性纳米粒子的粒径约为46.2nm;磁化曲线提示具有超顺磁性;载药量和包封率分别为(31.8±3.6)%和(65.2±2.4)%并具有良好的药物控释性能;外加磁场下磁性纳米粒子能使肿瘤细胞呈现明显的凋亡形态改变并表现出显著的生长抑制活性。结论:拟Smac合成肽羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物具有粒径小、较强的磁响应性、载药量和包封率高和良好的药物缓释性能,联合恒定外磁场具有明显的促进肿瘤细胞凋亡的作用,为膀胱肿瘤的生物治疗提供了新的切入点。