同源物2增强子在喉癌细胞上皮-间充质转化中的作用

目的同源物2增强子(EZH2)在喉癌组织上皮-间充质转化(EMT)中的作用尚不清楚。文中旨在探讨EZH2在喉癌细胞EMT中的作用。方法根据喉癌细胞系分为:TU177、SNU46、M4E、Tu686)和人类鼻咽上皮细胞(HNPECs)NP69。选取EZH2蛋白表达较高的TU177和Tu686细胞系转染EZH2si-RNA,其中转染效果高的为EZH2-1组,转染效果较低(沉默EZH2)的为EZH2-2组,对照为转染空载体的si-NC组。通过qRT-PCR和Western blot检测喉癌组织和细胞中EZH2、分泌的卷曲相关蛋白1(SFRP1)及组蛋白H3(H3K27me3)上赖氨酸27的三甲基化的表达。转染si-EZH2、si-SFRP1、oe-SFRP1或H3K27me3上调后,通过CCK-8检测细胞活力,免疫印迹法检测E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白、β-连环蛋白、c-Myc和CyclinD1的蛋白水平,免疫荧光法检测波形蛋白的表达。通过qPCR检测SFRP1启动子中H3K27me3的富集水平。结果与癌旁组织相比,癌组织中EZH2的mRNA及蛋白水平升高(P<0.05)。细胞活力结果显示,si-EZH2-1组细胞活力较si-NC组有所下降(P<0.05)。Western blot和免疫荧光法检测结果显示,si-EZH2-1组E-钙粘蛋白的表达明显增加,而N-钙粘蛋白的表达明显降低(P<0.05),波形蛋白的荧光强度减弱。与si-NC组相比,si-EZH2-1组的H3K27me3蛋白水平明显降低(P<0.05)。ChIP-qPCR检测结果显示,si-EZH2-1组SFRP1启动子中H3K27me3的富集水平较si-NC组显著降低(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot检测结果显示,si-EZH2-1组中SFRP1的表达明显高于si-NC组(P<0.05)。结论EZH2可以促进喉癌细胞的EMT发生,为喉癌临床管理提供了一种全新的策略。

膀胱癌100例血清Zeste基因增强子同源物2和信号传导蛋白3表达水平及诊断价值分析

目的探讨膀胱癌病人血清Zeste基因增强子同源物2(EZH2)和信号传导蛋白3(SMAD3)表达水平及临床意义。方法纳入江苏省人民医院宿迁医院于2021年1月至2022年12月收治的膀胱癌病人进行研究(100例),另选取同期于该院就诊的泌尿系统良性疾病病人作为良性疾病组(93例)以及健康体检者作为对照(100例)。采用Pearson相关性分析法分析膀胱癌病人血清中EZH2和SMAD3表达水平的相关性;采用logistic多因素回归分析法分析膀胱癌发生的影响因素;采用ROC曲线分析EZH2和SMAD3对膀胱癌的诊断效能。结果膀胱癌病人血清中EZH2(101.34±15.09)ng/L和SMAD3(226.53±25.94)ng/L表达水平均高于良性疾病组(85.96±11.23)ng/L、(203.11±22.18)ng/L和对照组(83.91±9.14)ng/L、(198.03±20.30)ng/L(均P<0.001);膀胱癌病人血清EZH2和SMAD3表达水平呈正相关(r=0.72,P<0.001);膀胱癌组年龄≥60岁(74/187)、有吸烟史的病人(76/166)所占比例均高于良性疾病组(65/187、55/166)及对照组(48/187、35/166)(均P<0.05);年龄、吸烟史、EZH2、SMAD3为发生膀胱癌的危险因素(P<0.05);以良性疾病组为对照,血清EZH2和SMAD3单独检测诊断膀胱癌的曲线下面积(AUC)分别为0.78、0.78,二者联合检测的AUC为0.85,优于各自单独检测(Z_(二者联合-EZH2)=2.81、Z_(二者联合-SMAD3)=2.68,P=0.009、0.007)。结论血清EZH2和SMAD3与膀胱癌的发生有关,二者联合对膀胱癌具有一定的诊断价值。

急性缺血性脑卒中患者血清长链非编码RNA母系表达基因3和Zeste同源物增强子-2表达与神经功能损伤的相关性分析

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)与Zeste同源物增强子-2(EZH2)在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中的表达水平及其与神经功能损伤之间的关系。方法选取延安市人民医院2021年1月至2022年11月收治的92例AIS患者为脑卒中组,92例健康体检者为对照组,根据NIHSS评分将脑卒中组患者分为致残性损伤组19例,非致残性损伤组73例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应、酶联免疫吸附法分别检测血清lncRNAMEG3、EZH2水平。采用Spearman相关分析法进行AIS患者血清lncRNAMEG3、EZH2表达水平与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分之间的相关性分析;采用多因素Logistic回归分析AIS患者合并神经功能致残性损伤的影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA MEG3、EZH2水平对AIS患者合并神经功能致残性损伤的诊断价值。结果脑卒中组患者血清lncRNA MEG3、EZH2表达水平均高于对照组(t=11.817、11.542,P<0.05)。Spearman相关分析显示,AIS患者血清lncRNA MEG3、EZH2水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.540、0.603,P<0.01)。致残性损伤组体质量指数、吸烟史占比、甘油三酯、总胆固醇、同型半胱氨酸、发病-到院时间(ODT)、lncRNAMEG3、EZH2水平均高于非致残性损伤组(t/χ2=2.103、5.050、9.121、5.585、2.276、5.448、4.638、4.682,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,甘油三酯、总胆固醇、lncRNA MEG3、EZH2以及ODT均是AIS患者合并神经功能致残性损伤的影响因素(OR=4.853、4.277、2.674、3.052、3.901,P<0.05)。lncRNA MEG3、EZH2联合诊断AIS患者合并神经功能致残性损伤的曲线下面积(AUC)大于lncRNAMEG3以及EZH2单独诊断的AUC(Z=2.626、2.954,P<0.01),敏感度、特异度分别为94.74%、82.15%。结论AIS患者血清lncRNA MEG3、EZH2水平均上升,与AIS患者神经功能损伤程度均正相关,可用作AIS患者合并神经功能致残性损伤的诊断指标,且联合诊断效果更好。

沉默信息调节因子1调控Zeste同源物2增强子对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质转化影响的研究

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)通过调控Zeste同源物2增强子(EZH2)表达影响肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程及DKD肾纤维化发病机制。方法12只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常对照(NC)组、DKD组,各6只,检测各组BG、BUN和24 h尿白蛋白(24 hUAlb)。培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),分为正常对照组(Con)、高糖组(HG)和高渗组(HM)。在无血清条件下用脂质体2000(Lip2000)转染法,将空载质粒(Vector)、敲低及过表达SIRT1和EZH2质粒分别转染细胞,将细胞分为正常空载组(Con+Vector)、正常敲低EZH2转染组(Con+sh-EZH2)、正常敲低SIRT1转染组(Con+sh-SIRT1)、正常过表达EZH2转染组(Con+oe-EZH2)、正常过表达SIRT1转染组(Con+oe-SIRT1)、高糖空载组(HG+Vector)、高糖敲低EZH2转染组(HG+sh-EZH2)、高糖敲低SIRT1转染组(HG+sh-SIRT1)、高糖过表达EZH2转染组(HG+oe-EZH2)、高糖过表达SIRT1转染组(HG+oe-SIRT1)、高糖双转过表达组(HG+oe-EZH2+oe-SIRT1)。HE、Masson染色观察肾组织病理形态改变,免疫荧光化学染色观察NRK-52E细胞中SIRT1和EZH2表达,Western blot和qRT-PCR检测肾组织和NRK-52E细胞SIRT1、EZH2、E-cadherin、α-SMA和CollegenⅢ蛋白和mRNA表达。结果DKD组BG、BUN、24 h UAlb高于NC组(P<0.05),HE、Masson染色观察到DKD组肾小管管腔扩张,肾小球和肾间质有蓝紫色胶原纤维沉积;DKD组较NC组α-SMA、CollagenⅢ、EZH2蛋白表达升高(P<0.05),E-cadherin、SIRT1蛋白表达降低(P<0.05)。培养的细胞中,HG组较Con组α-SMA、CollagenⅢ、EZH2蛋白表达升高(P<0.05),E-cadherin、SIRT1蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+Vector组比较,HG+sh-EZH2组E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),EZH2、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达降低(P<0.05),HG+oe-EZH2组EZH2、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);HG+sh-SIRT1组较HG+Vector组EZH2、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达升高(P<0.05),SIRT1、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05),HG+oe-SIRT1组SIRT1、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),EZH2、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达降低(P<0.05);HG+oe-EZH2+oe-SIRT1组较HG+oe-EZH2组α-SMA、CollagenⅢ、EZH2蛋白表达升高(P<0.05)。无论是敲减内源性SIRT1或过表达SIRT1,对EZH2 mRNA表达均无影响。免疫共沉淀研究结果显示,在肾小管上皮细胞中SIRT1蛋白与EZH2蛋白存在体内互作关系。结论SIRT1可负调控EZH2蛋白表达抑制肾小管上皮细胞EMT过程,抑制DKD肾纤维化以发挥肾脏保护作用。

Zeste基因增强子同源物2抑制剂减轻氧糖剥夺/再灌注诱导的神经元氧化应激和铁死亡

目的探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126在神经元缺血-再灌注损伤中的作用及机制。方法采用海马神经元HT22细胞制备氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型。细胞分为正常对照组(Control组)、OGD/R模型组(OGD/R组)和OGD/R模型+低、中、高浓度EZH2抑制剂组(OGD/R+GSK1260.5、1、5μmol/L组)。采用CCK-8法、流式细胞术检测各组HT22细胞损伤,相应试剂盒检测细胞氧化应激指标活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比值。通过荧光探针C11 BODIPY 581/591和FerroOrange检测细胞内铁死亡指标脂质过氧化物(Lipid ROS)和Fe^(2+)含量。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印记法(Western blot)实验检测细胞EZH2、NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达。结果与Control组比较,OGD/R组HT22细胞活力降低,细胞死亡率升高,细胞内ROS水平升高,MDA含量增加,GSH/GSSG比值减少,Lipid ROS、Fe^(2+)含量增加,EZH2的mRNA和蛋白表达升高,NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达均降低(P值均<0.05)。与OGD/R组比较,OGD/R+GSK1260.5、1、5μmol/L组HT22细胞活力均升高,细胞死亡率均下降,细胞内ROS水平均下降,MDA含量均减少,GSH/GSSG比值均增加,Lipid ROS、Fe^(2+)含量均减少,EZH2的mRNA和蛋白表达均降低,NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达均升高(P值均<0.05)。结论EZH2抑制剂GSK126可减轻OGD/R诱导的神经元细胞损伤,其机制可能与NRF2/HO-1通路抑制氧化应激和SLC7A11/GPX4通路抑制铁死亡有关。

果蝇zeste基因增强子的人类同源物2促进小细胞肺癌化疗耐药的作用及其分子机制

目的:观察果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)对小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)化疗耐药的影响并研究其潜在分子机制。方法:首先使用RT-PCR和蛋白印迹方法检测SCLC初治和耐药患者组织标本、敏感细胞株(H446)和耐药细胞株(H446DDP)的EZH2表达差异;再通过CCK8方法检测敲低EZH2后的耐药SCLC细胞株对化疗药物半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)值变化;最后通过RNA测序和验证方法筛查EZH2的下游靶基因以及CHIP-qPCR方法检测EZH2敲低后其靶基因启动子区的EZH2表达变化。结果:SCLC化疗耐药患者EZH2阳性表达水平(80%)高于化疗敏感患者,耐药细胞株(H446DDP)的EZH2 mRNA和蛋白表达水平均高于敏感细胞株(H446)(P<0.01,P<0.001);敲低EZH2表达后,耐药SCLC细胞株对化疗药物IC50值降低;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor 1A,CDKN1A)表达增加,且CDKN1A基因启动子EZH2蛋白沉积显著减少。结论:EZH2促进SCLC化疗耐药,其分子机制与EZH2靶向调控CDKN1A基因表达相关。

zeste基因增强子同源物2与卵巢癌关系的研究进展

zeste基因增强子同源物2(EZH2)通常在实体瘤中过表达,因此成为肿瘤的治疗靶点,其经典促肿瘤机制是催化组蛋白3上赖氨酸27的三甲基化,形成H3K27me3,从而诱导靶基因的转录抑制。EZH2已被证明在肿瘤细胞增殖、侵袭、转移、血管生成和化疗耐药过程中发挥关键作用。近年来,关于EZH2的研究不断增多,其介导细胞代谢新途径、与微小RNA(miRNA)和长链非编码RNA(lncRNA)的相互作用、诱导铂类耐药及与多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂的相互作用被陆续发现。靶向EZH2很可能是一种有效的卵巢癌治疗策略。本文对EZH2与卵巢癌发生发展及耐药的关系进行综述,旨在为研发卵巢癌治疗新策略提供新思路。

子宫内膜腺癌组织中人类RUNT相关转录因子3与果蝇zeste基因增强子同源物2的表达

目的:检测子宫内膜腺癌组织中人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)和果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)的表达。方法:采用免疫组化SP法检测60例子宫内膜腺癌、40例子宫内膜增殖症和20例正常增生期子宫内膜组织中RUNX3与EZH2蛋白的表达。结果:子宫内膜腺癌、子宫内膜增殖症与正常增生期子宫内膜组织RUNX3蛋白的阳性表达率分别为43.3%(26/60)、67.5%(27/40)与95.0%(19/20),3组间相比,差异有统计学意义(χ2=18.090,P<0.001);上述3种组织中EZH2蛋白的阳性表达率分别为75.0%(45/60)、42.5%(17/40)与15.0%(3/20),3组间相比,差异有统计学意义(χ2=25.041,P<0.001)。RUNX3蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组织分化程度、TNM分期及浸润深度有关(χ2=-3.561,-2.367,5.370,P均<0.05),EZH2蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组织分化程度及浸润深度有关(χ2=-3.084,5.568,P均<0.05)。子宫内膜腺癌组织中RUNX3和EZH2蛋白的表达相关(rP=0.330,P=0.007)。结论:RUNX3蛋白表达缺失和EZH2蛋白过度表达在子宫内膜腺癌的发生与发展中起重要作用,高表达的EZH2可能在一定程度上参与调控RUNX3基因的表达下调。

小分子干扰RNA沉默果蝇zeste基因增强子同源物2对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响。方法培养宫颈癌Hela细胞,收集对数生长期Hela细胞继续培养,待贴壁细胞长满底部面积80%～90%时进行转染。将Hela细胞随机分为空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组,空白对照组Hela细胞不作处理,control siRNA组Hela细胞转染control siRNA,EZH2 siRNA组Hela细胞转染EZH2 siRNA。收集3组转染后Hela细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Hela细胞中EZH2 mRNA表达,Western blot法检测Hela细胞中EZH2蛋白表达,流式细胞术检测Hela细胞的细胞周期。收集3组转染后Hela细胞,分别加入不同质量浓度(0. 0、12. 5、25. 0、50. 0、100. 0、200. 0 g·L^(-1))的顺铂,48 h后采用四甲基偶氮唑蓝法检测Hela细胞在顺铂作用下的体外存活率。结果 Control siRNA和EZH2 siRNA可高效转染Hela细胞,转染率均达90%以上。空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量分别为396. 7±88. 4、389. 2±70. 6和98. 5±20. 3,EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量显著低于空白对照组和control siRNA组(t=2. 057、2. 015,P <0. 01),空白对照组与control siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(t=1. 476,P> 0. 05)。空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量分别为509. 4±110. 7、497. 5±80. 4和120. 4±31. 3,EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量显著低于空白对照组和control siRNA组(t=2. 682、2. 597,P <0. 01),空白对照组与control siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(t=1. 943,P> 0. 05)。EZH2 siRNA组G_0/G_1期细胞比例显著高于空白对照组和control siRNA组(t=2. 893、3. 087,P <0. 05),EZH2 siRNA组S期、G_2/M期细胞比例显著低于空白对照组和control siRNA组(EZH2 siRNA组与空白对照组比较:t=2. 526、5. 462,P <0. 05; EZH2 siRNA组与control siRNA组比较:t=2. 498、5. 417,P <0. 05),空白对照组与control siRNA组G_0/G_1期、S期及G_2/M期细胞比例比较差异均无统计学意义(t=0. 926、1. 017、0. 947,P> 0. 05)。不同质量浓度顺铂作用48 h后,同一质量浓度下EZH2 siRNA组Hela细胞的存活率明显低于空白对照组及control siRNA组(P <0. 05),且随着顺铂浓度的增加,3组Hela细胞的存活率均呈逐渐下降趋势。结论沉默EZH2表达可提高宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性,而阻滞细胞周期可能是其主要作用机制之一。

Zeste基因增强子同源物2通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响脑胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨zeste基因增强子同源物2(EZH2)通过调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:以RT-q PCR和Western blot检测胶质瘤U87、H4和U251细胞及正常人脑星形细胞(NHA)中EZH2的表达水平。在H4细胞中转染EZH2 siRNA和siRNA control,MTT测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,分光光度计法检测caspase-3的活性,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)和下游靶分子c-Myc的蛋白表达。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理转染EZH2 siRNA的H4细胞,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定β-catenin和c-Myc的表达。结果:胶质瘤U87、H4和U251细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平均明显高于NHA(P<0.05),并且H4细胞中EZH2 mRNA和蛋白水平高于U87和U251细胞(P<0.05)。EZH2 siRNA可以明显下调H4细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平。EZH2表达下调后的H4细胞从48 h开始细胞活力降低,并且细胞凋亡率也明显升高,细胞中caspase-3活性也明显升高(P<0.05),同时EZH2表达下调还可以抑制β-catenin和c-Myc的表达。Wnt/β-catenin信号通路的激活剂可以减少EZH2诱导的H4细胞凋亡,降低细胞中caspase-3的活性。结论:EZH2在脑胶质瘤细胞中过度表达,下调其表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而诱导胶质瘤细胞凋亡。

烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

目的探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制。方法以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用Lipofectamine;2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染pcDNA3.1)、ALKBH5-WT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组。采用比色法检测细胞中N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平。结果与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响。与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD_(450nm)值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响。结论沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性。

人Runt相关转录因子3、zeste基因增强子同源物2蛋白表达与局部进展期直肠癌新辅助化疗敏感性的关系

目的探究人Runt相关转录因子3(RUNX3)和zeste基因增强子同源物2(EZH2)在直肠癌中的表达情况和相关性,探究RUNX3和EZH2蛋白表达与局部进展期直肠癌患者XELOX方案新辅助化疗敏感性的关系。方法31例术前未经抗肿瘤治疗的直肠腺癌患者的癌组织和癌旁组织作为癌组和癌旁组,实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应检测两组中RUNX3和EZH2 mRNA相对表达量,同时采用免疫组织化学法检测两组中RUNX3和EZH2的蛋白表达情况,分析RUNX3和EZH2在癌组织和癌旁组织中的表达差异;将26例术前行3周期XELOX方案新辅助化疗的局部进展期直肠癌患者的治疗前活检蜡块作为治疗前组,其术后病理蜡块作为治疗后组,病理肿瘤缩退学分级评估患者新辅助化疗疗效,采用免疫组织化学法检测两组中RUNX3和EZH2的蛋白表达情况,分析两基因蛋白表达模式与新辅助化疗疗效的关系。结果与癌旁组相比,癌组RUNX3 mRNA的表达下调,蛋白的阳性表达率降低(P=0.001),EZH2 mRNA的表达上调,蛋白的阳性表达率升高(P=0.022);癌组中RUNX3和EZH2的mRNA表达呈负相关(r=-0.599,P=0.000);12例接受新辅助化疗的患者达到TRG0~TRG2级,新辅助化疗总体有效率为46.15%(12/26);与治疗前组相比,治疗后组RUNX3蛋白阳性表达率有上升趋势,但差异无统计学意义(P=0.163),EZH2蛋白阳性表达率有下降趋势,但差异无统计学意义(P=0.095);治疗前组RUNX3阳性表达的患者新辅助化疗有效率为75.00%(9/12),EZH2阴性表达的患者新辅助化疗有效率为77.78%(7/9),RUNX3+/EZH2-的患者新辅助化疗有效率为100%(7/7),高于其他蛋白表达模式(P=0.019),多因素Logistic回归显示RUNX3蛋白的表达情况是患者新辅助化疗疗效的影响因素。结论RUNX3在直肠癌组织中阳性表达率低于癌旁组织,EZH2在直肠癌组织中阳性表达率高于癌旁组织,二者在直肠癌中的表达呈负相关;XELOX方案新辅助化疗可能会对直肠癌中RUNX3和EZH2的表达产生影响;RUNX3高表达和EZH2低表达的局部进展期直肠癌患者XELOX方案新辅助化疗更敏感。

清毒栓提取物通过调节Zeste基因增强子同源物2抑制SiHa细胞活性的研究

目的研究清毒栓提取物对人子宫颈鳞癌(SiHa)细胞活性的影响,并基于Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)探讨其可能的作用机制。方法取稳定并进入对数生长期的SiHa细胞,采用血清药理学方法制备的清毒栓含药血清和EZH2抑制剂GSK126进行干预,使用八肽胆囊收缩素、实时荧光定量PCR法、蛋白免疫印迹法、染色质免疫沉淀技术等技术,研究清毒栓含药血清对SiHa细胞活性、增殖与凋亡、叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Forkhead box P3,Foxp3)表达与其组蛋白甲基化水平、β-连环蛋白通路、EZH2表达影响。结果清毒栓含药血清促进Foxp3启动子区组蛋白甲基化水平,并可增加EZH2含量;而Foxp3过表达质粒和EZH2抑制剂GSK126可以逆转清毒栓含药血清诱导的Foxp3表达下调,增殖凋亡相关蛋白表达改变以及SiHa细胞活性下调。结论清毒栓对SiHa细胞的抑制作用是通过增加EZH2含量促进Foxp3启动子组蛋白甲基化来改变Foxp3表达,从而抑制SiHa细胞中β-连环蛋白通路实现的。

Zeste增强子同源物2与肿瘤转移的研究进展

转移是癌症患者死亡和预后不良的主要原因,阐明肿瘤转移机制对改善患者预后至关重要。Zeste增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是多梳蛋白家族(Polycomb group,PcG)的重要成员,其广泛参与调节多种细胞生理过程,如细胞迁移、细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡、DNA损伤修复以及细胞自我更新等。EZH2能同时通过PRC2依赖的转录调控和PRC2不依赖的翻译调控,决定下游基因的表达水平。此外,EZH2既可以甲基化组蛋白H3赖氨酸27或非组蛋白,抑制多个肿瘤抑制基因,又能以不依赖甲基转移酶活性的方式与其他蛋白发生相互作用,促进肿瘤侵袭转移,在肿瘤发生发展过程中起着重要作用。多项研究表明,EZH2与肿瘤转移密切相关,能通过多种途径促进肿瘤侵袭转移,如上皮间质转化、肿瘤干性细胞、血管生成、非编码RNA、翻译后修饰等。本文结合国内外文献报道,对EZH2在肿瘤转移中的作用机制进行总结阐述,为肿瘤转移提供新的治疗思路。

Zeste基因增强子同源物基因2与肿瘤发展的研究进展

多聚梳抑制复合体2作为一种表观遗传调节因子可选择性催化组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化,从而诱导靶基因转录抑制。Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是多聚梳抑制复合体2中具有酶活性的亚基,在肿瘤触发、进展、转移及耐药性方面有重要作用。EZH2与其他表观遗传修饰酶相互协调介导基因沉默,EZH2超表达是多种实体肿瘤晚期和转移性的标志,EZH2的表达与活性受多种肿瘤相关转录因子的调节,各位点氨基酸残基的磷酸化状态可影响EZH2的催化活性,EZH2基因突变在血液系统恶性肿瘤中频繁发生,除通过经典作用即催化抑癌基因启动子区组蛋白H3第27位赖氨酸甲基化来抑制转录外,EZH2还具有诱导基因活化功能。因此,EZH2成为肿瘤治疗的一个理想靶点,其特异性抑制剂EPZ6438正处于临床Ⅰ/Ⅱ期试验阶段。

胶质瘤大鼠胶质瘤组织中果蝇zeste基因增强子的人类同源物2的表达及意义

目的探讨果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(EZH2)在胶质瘤大鼠胶质瘤组织中的表达及意义。方法将48只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为对照组(n=24)和模型组(n=24)。模型组大鼠颅内注射10μL C6胶质瘤细胞悬液(1×10^(9) L^(-1))制备胶质瘤模型,对照组大鼠注射等量的磷酸盐缓冲液。造模后2周通过测量肿瘤体积、观察肿瘤细胞形态来判断造模是否成功。应用蛋白质印迹和免疫组织化学法检测对照组大鼠脑组织和模型组大鼠肿瘤组织中EZH2蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应技术检测对照组大鼠脑组织和模型组大鼠肿瘤组织中EZH2 mRNA表达。结果模型组22只大鼠造模成功。模型组大鼠肿瘤组织中EZH2 mRNA和蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论胶质瘤大鼠肿瘤组织中EZH2的表达增加,EZH2可能参与胶质瘤的发生、发展过程。

EZH2调控卵巢癌细胞生物学行为的机制研究

目的探讨组蛋白甲基化转移酶Zeste同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)调控卵巢癌(ovarian cancer,OC)生物学行为的机制,为寻找OC治疗的新靶点提供实验支持。方法采用EZH2小干扰RNA(small interfered RNA,siRNA)在不同OC细胞系中敲减EZH2,并使用qRT-PCR、Western blot分析干扰siEZH2 mRNA和蛋白质的效率。进一步采用CCK-8法、细胞划痕试验、Transwell试验以及流式细胞术检测干扰EZH2后对OC细胞增殖、迁移及侵袭能力和凋亡水平等生物学行为的影响。采用Western blot分析干扰EZH2后,早期生长反应因子1(early growth response 1,EGR1)和H3K27me3蛋白的表达水平,并分析EZH2调控OC细胞生物学行为的机制。结果转染siEZH2后,OC细胞系中EZH2 mRNA的表达水平显著低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且A2780细胞中EZH2蛋白的表达水平亦明显下调(P<0.05)。Western blot检测结果表明,EGR1以及H3K27me3蛋白水平出现了不同程度地降低。转染siEZH2-1后,转染组A2780细胞的增殖能力显著低于阴性对照组(P<0.05);细胞划痕试验和Transwell试验结果显示,转染siEZH2-1后细胞的迁移和侵袭能力显著减弱(P<0.05);流式细胞术结果显示,转染siEZH2-1后细胞凋亡水平显著增强(P<0.05)。结论EZH2在OC细胞系中高表达,并促进A2780细胞的增殖、迁移、侵袭和抗凋亡。但EZH2并非通过其H3K27me3转移酶功能调控EGR1的表达而调控影响OC的生物学行为。

EZH2在前列腺癌中表达及其抑制剂对前列腺癌细胞生物行为学的影响

目的 探究zeste基因增强子同源物(EZH)2在前列腺癌中表达及其抑制剂对前列腺癌细胞生物行为学的影响。方法 荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测前列腺癌组织(20例)、癌旁组织(20例)及前列腺正常上皮RWPE-1细胞、前列腺癌细胞PC-3、LNCaP和DU145中EZH2的表达,将PC-3细胞随机分为4组,对照组不做处理,低、中、高剂量GSK126组细胞分别应用EZH2甲基转移酶抑制剂(GSK126),浓度5、25、50μmol/L溶于培养基中进行传代培养,通过噻唑蓝(MTT)法进行各组细胞增殖情况检测,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western印迹检测凋亡相关蛋白及信号通路相关蛋白表达。结果 前列腺癌组织EZH2的相对表达量较癌旁组织明显升高(P<0.05)。与对照组相比,低、中、高剂量GSK126组前列腺癌PC-3细胞中EZH2的相对表达水平均降低,中剂量GSK126组降低较其他两组更为明显,具有统计学差异(P<0.05)。转染12、36和72 h后,与对照组相比,低、中、高剂量GSK126组B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白均降低,OD值、凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3均升高,中剂量GSK126组较其他两组效果更为明显,具有统计学差异(P<0.05)。结论 EZH2在前列腺癌组织及细胞中呈高表达,EZH2抑制剂GSK126可有效降低前列腺癌细胞中EZH2表达,抑制增殖并诱导细胞凋亡。

Zeste增强子同源物2对乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响

目的探讨Zeste增强子同源物2(EZH2)对乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响。方法选取2022年1月至2023年5月河南省人民医院收治切除的203例乳腺癌组织和癌旁组织作为研究对象,采用免疫组织化学分析肿瘤组织EZH2表达水平。采用对照短发卡RNA(shRNA)和EZH2 shRNA慢病毒感染MDA-MB-231细胞,建立对照组和EZH2 KD组细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色和体外移植瘤实验分析两组细胞的增殖能力;采用Transwell和蛋白质免疫印迹分析两组细胞的迁移和上皮-间充质转化能力;荧光定量分析EZH2下游基因表达情况。组间计量数据比较采用t检验。结果癌旁组织EZH2蛋白表达阳性率[(30.17±7.84)%]明显低于乳腺癌组织表达阳性率[(75.08±11.16)%],差异有统计学意义(t=33.080,P<0.05)。对照组细胞CCK-8吸光度(A)值(2.01±0.09)明显高于EZH2 KD组(1.44±0.19),差异有统计学意义(t=6.754,P<0.05)。对照组细胞EdU阳性率[(78.30±4.83)%]明显高于EZH2 KD组[(61.4±9.24)%],差异有统计学意义(t=5.694,P<0.05)。对照组细胞体内成瘤体积[(830.32±64.54)mm3]明显高于EZH2 KD组[(642.83±55.71)mm3],差异有统计学意义(t=6.754,P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(135.33±11.99)个]明显高于EZH2 KD组[(103.83±8.40)个],差异有统计学意义(t=4.400,P<0.05)。对照组细胞上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平(0.74±0.08)明显低于EZH2 KD组(1.44±0.19),差异有统计学意义(t=6.754,P<0.05)。对照组细胞间质细胞标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Snail蛋白表达水平(1.34±0.07、1.52±0.14、1.17±0.13)明显高于EZH2 KD组(0.87±0.08、0.95±0.10、0.74±0.07),差异有统计学意义(t=11.030、8.270、7.079,P<0.05)。对照组细胞抑癌基因p21和第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)mRNA表达水平(1.16±0.11、1.00±0.09)明显低于EZH2 KD组(1.77±0.13、1.72±0.14),差异有统计学意义(t=8.858、10.760,P<0.05)。结论EZH2在乳腺癌组织中呈高表达,通过甲基化修饰组蛋白,抑制抑癌基因的表达,进而促进乳腺癌细胞的增殖和转移能力。

lncRNA-MIAT通过靶向调控miR-584/EZH2轴促进DLBCL细胞的自噬

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)-MIAT通过调控微小RNA(miR)-584/ZESTE同源物增强子2(EZH2)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞自噬的影响。方法将DLBCL细胞系Raji分为siMIAT组[lncRNA-MIAT的小干扰RNA(siRNA)构建沉默组]、沉默阴性对照组(siNC组)、miR-584的模拟物组(mimic组)、模拟物阴性对照组(mimic-NC组)。将siMIAT组的Raji继续分为miR-584的inhibitor组(inhibitor组)、inhibitor的阴性对照组(inhibitor-NC组)、EZH2过表达组(pcDNA-EZH2组)以及过表达空载体组(pcDNA-null组)。用实时定量PCR法(qRT-PCR)检测lncRNA-MIAT和miR-584的表达,用荧光原位杂交(FISH)实验检测lncRNA-MIAT在Raji中的定位。用Western blot法检测EZH2和细胞自噬标志物LC3-I、LC3-II、Atg5、Beclin-1和p62的表达。CCK-8法检测细胞的增殖活性。用双荧光素酶报告基因分析miR-584与EZH2的靶向调控作用以及miR-584与lncRNA-MIAT的靶向调控作用。结果与B淋巴细胞系MAO比,lncRNA-MIAT在Raji中高表达(P<0.05),lncRNA-MIAT的表达主要定位在MAO和Raji的细胞质中。沉默lncRNA-MIAT抑制细胞的增殖活性并抑制细胞的自噬(均P<0.05),沉默lncRNA-MIAT还抑制EZH2的表达并促进miR-584的表达(均P<0.05)。生信分析预测lncRNA-MIAT与miR-584具有多个结合位点,以及EZH2与miR-584也具有多个结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实EZH2是miR-584的靶基因,且miR-584与lncRNA-MIAT也具有靶向调控作用。在沉默lncRNA-MIAT的细胞中,与inhibitor-NC组比,inhibitor组中细胞的增殖活性以及细胞的自噬均增加(P<0.05)。在沉默lncRNA-MIAT的细胞中,与pcDNA-null组比,pcDNA-EZH2组中细胞的增殖活性以及细胞的自噬均增加(P<0.05)。结论lncRNA-MIAT通过靶向调控miR-584/EZH2轴促进DLBCL的增殖,增强DLBCL细胞的自噬。