胃癌组织hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化状态研究

目的 探讨hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态与微卫星DNA不稳的关系。方法 采用甲基化特异性PCR方法检测hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态 ,采用PCR为基础的方法检测微卫星DNA不稳。结果 正常胃粘膜未见hMLH1和hMSH2基因启动子区的高甲基化。 6 8例胃癌中检出hMLH1高甲基化 11例 ,占 16 .2 % ,而且均为去甲基化和高甲基化并存 ,未见有hMSH2高甲基化者。将MSI分为高频率MSI(MSI H ,≥ 2个位点 ) 8例、低频率MSI(MSI L ,仅为 1个位点 ) 9例和MSI阴性(MSS) 5 1例 3组 ,结果MSI H组hMLH1高甲基化的检出率显著高于MSI L和MSS组 (P <0 .0 1)。结论 hMLH1高甲基化可能参与了MSI病理途径 ,而hMSH2甲基化状态可能与MSI途径无关。

急性白血病LRP15基因启动子区甲基化及其表达分析

为了探讨LRP15基因在急性白血病(AL)患者中的表达情况及其与启动子区CpG岛甲基化的关系,采用甲基化特异PCR(MSP)方法检测AL患者LRP15基因启动子区甲基化状态,并用RT-PCR方法检测该基因在这些患者中的表达情况。结果发现,LRP15基因在缓解与非缓解状态白血病患者中的表达分别为47.6%和16.7%,其启动子区甲基化比例分别为38.1%和72.2%。LRP15基因的表达与其启动子区甲基化之间无相关(P=0.0087)。结论:AL患者LRP15基因启动子区的甲基化不完全是导致LRP15基因表达沉默的原因。

肾细胞癌组织中RASSF10基因表达及其启动子区甲基化变化的意义

目的观察肾细胞癌(RCC)组织中RASSF10基因表达及其启动因子区甲基化的变化,并探讨其意义。方法采用RT-PCR技术、甲基化特异性聚合酶链反应检测52例RCC组织及其相应癌旁组织、正常组织中RASSF10 mRNA相对表达量及其甲基化率,并分析RASSF10基因表达变化、启动子区甲基化与RCC患者病理特征的关系,分析RASSF10基因启动子区甲基化与其表达的关系。结果 RCC组织中RASSF10 mRNA相对表达量、甲基化率与癌旁及正常组织比较,P均<0.05。RASSF10基因表达及其启动子区甲基化率与患者年龄、病理类型、肿瘤大小、Fuhrman分级无关(P>0.05),与肿瘤TNM分期有关(P均<0.05)。RASSF10基因启动子区甲基化的RCC患者RASSF10 mRNA相对表达量与未甲基化患者比较,P<0.05。结论 RCC组织中RASSF10基因低表达可能与其启动子区高甲基化有关;RASSF10基因低表达及其启动子区甲基化可能参与了RCC的发生发展。

乳腺癌BRCA1-mRNA表达及启动子区甲基化状态与临床病理特征的相关性

目的探究乳腺癌易感基因1-mRNA(BRCA1-mRNA)水平及启动子区甲基化状态与乳腺癌患者临床病理特征的相关性。方法选取2016年2月至2018年2月于西安交大一附院确诊为乳腺癌的350例患者为实验组,另选取同期行体检的50例健康女性为对照组,分别检测两组受检者的BRCA1-mRNA水平、启动子区甲基化状态,分析BRCA1-mRNA水平与启动子区甲基化状态相关性。结果实验组BRCA1-mRNA水平低于对照组,启动子区甲基化阳性状态比率显著高于对照组(P <0.05);实验组患者BRCA1-mRNA水平、启动子区甲基化状态与其年龄、TNM分期无相关性,前者与肿瘤大小存在相关性(P <0.05);后者与组织学分级存在相关性(P <0.05)。结论乳腺癌患者BRCA1-mRNA水平与肿瘤大小有关,启动子区甲基化状态与其组织学分级有关,可以作为判断乳腺癌肿瘤状态的实验室指标。

FOXP3基因启动子区甲基化与肾移植术后Th1/Th2水平和排斥反应的相关性分析

目的:分析FOXP3基因启动子区甲基化与肾移植术后Th1/Th2水平及排斥反应的相关性。方法:将2010年至2019年12月于新疆医科大学第一附属医院行肾脏移植治疗的120例患者纳入研究,根据患者术后3个月是否出现急性排斥反应(AR)将其分为AR组及Non-AR组,比较两组患者基线临床资料,辅助性T细胞1(Th1)、Th2、Th/Th2及FOXP3基因启动子区甲基化水平,采用多因素Logistic回归模型对影响AR的因素进行分析,并采用Pearson相关性模型分析FOXP3基因启动子区甲基化水平与Th1/Th2水平的相关性。结果:AR组患者Th1、Th1/Th2及FOXP3基因启动子区甲基化水平明显高于Non-AR组(t=2.888,2.055,2.984,均P<0.05),Th2及FOXP3蛋白水平明显低于Non-AR组(t=2.665,2.155,均P<0.05);多因素Logistics回归分析示高Th1及FOXP3基因启动子区甲基化水平是AR的独立危险因素(OR=1.390,1355.480,均P<0.05),而高Th2水平是AR的保护因素(OR=0.560,P=0.001);相关性分析显示,FOXP3基因启动子区甲基化水平与FOXP3蛋白呈负相关关系(r=-0.879,P<0.001),与Th1/Th2水平呈正相关关系(r=0.810,P<0.001),而FOXP3蛋白与Th1/Th2水平呈负相关关系(r=-0.881,P<0.001)。结论:FOXP3基因启动子区甲基化水平升高后,FOXP3基因蛋白表达水平降低,影响患者体内Th1/Th2细胞表达,从而使患者体内免疫状态发生变化,进而可能诱发排斥反应。

帕金森病患者时钟基因启动子区甲基化分析

目的分析帕金森病(Parkinson's disease,PD)患者和正常老年对照组时钟基因启动子区甲基化水平,探讨帕金森病患者时钟基因异常表达的机制。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)法,检测206例帕金森病患者和181例正常老年对照者的7种时钟基因启动子甲基化水平。结果 7种时钟基因中,cry1和npas2启动子区存在明显甲基化。另5种时钟基因启动子(per1、per2、cry2、clock、bmal1)未发现明显甲基化。PD患者中npas2甲基化频率明显下降。结论 PD患者时钟基因的异常表达可能与时钟基因启动子区甲基化的改变有关。

抑癌基因的启动子区甲基化与胰腺内分泌肿瘤的发生

胰腺内分泌肿瘤（pancreatic endocrine tumors，PETs），亦称为胰岛细胞瘤，是一类少见或罕见的肿瘤，美国每年新诊断的PETs病例数大约2000例。PETs是一类在临床、生化、病理等方面颇有特色的肿瘤，绝大多数PETs可分泌多种胃肠激素，但通常有一种主要激素导致特定的临床综合征。根据PETs的临床表现可将其分为功能性PETs和无功能性PETs两大类，其中功能性PETs分为10种。

蒙古族结核病患者CYP2E1基因多态性及其启动子区甲基化水平与抗结核药物致肝损伤的关系

目的抗结核药物致肝损伤(ADIH)的发生与CYP2E1基因多态性及甲基化水平是否相关的研究甚少。文中旨在探讨蒙古族结核病患者CYP2E1基因多态性及启动子区甲基化水平与ADIH的关系。方法选取2015年11月至2018年6月于内蒙古通辽市结核病防治所标准化治疗的135例蒙古族结核病患者。根据ADIH判定标准选取发生肝损伤的蒙古族结核病患者为ADIH组(n=45),按照1∶2比例匹配未发生肝损伤的蒙古族结核病患者为对照组(n=90)。进行DNA提取,聚合酶链反应(PCR)扩增CYP2E1基因,确定CYP2E1 rs2031920基因型,分析CYP2E1基因多态性及启动子区甲基化水平与ADIH之间的关系。结果CYP2E1 rs2031920基因型、C1和C2基因频率在ADIH组和对照组中分布差异无统计学意义(P>0.05)。ADIH组CYP2E1基因启动子区总体甲基化水平较对照组明显降低[(0.711±0.085)vs(0.759±0.062)],差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归显示CYP2E1基因启动子区总体甲基化水平是ADIH发生的影响因素(P<0.005),甲基化水平每升高0.1个单位,ADIH发生风险降低0.388倍,其OR(95%CI)值为0.388(0.204~0.739)。结论蒙古族ADIH患者的CYP2E1基因启动子区总体甲基化水平降低,但CYP2E1基因多态性与ADIH的发生无关,提示CYP2E1基因甲基化可应用于结核病患者ADIH的预防和治疗。

子痫前期患者血清miR-195及其启动子区甲基化水平观察

目的观察子痫前期患者血清miR-195及其启动子区甲基化水平变化,并分析其与子痫前期临床特征的关系。方法选择子痫前期孕妇30例为病例组,健康无合并症的孕妇30例为对照组。收集两组血清标本,采用qRT-PCR法检测血清miR-195,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测miR-195启动子区甲基化水平,分析miR-195及其启动子区甲基化水平与子痫前期临床病理参数的关系。结果病例组血清miR-195水平低于对照组(P<0.01)。病例组miR-195启动子区甲基化阳性率高于对照组(P<0.05)。脐动脉S/D≥2.6的子痫前期患者血清miR-195水平高于S/D<2.6者,miR-195启动子区甲基化阳性率低于S/D<2.6者(P均<0.05)。结论子痫前期患者血清miR-195水平下降,其启动子区甲基化水平升高;miR-195表达变化可能参与子痫前期的发病。

RNF180启动子区甲基化在前列腺癌中的作用机制

目的通过检测RNF180启动子区甲基化改变来阐明前列腺癌发生和演进过程中RNF180表达的意义。方法分别采用Western blotting、RT-PCR、甲基化特异性PCR(MSP)及亚硫酸氢盐测序(BSP)法检测人前列腺癌细胞系(PC3、LNCap和DU145)与人正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)中RNF180的表达情况;采用免疫组化法检测人前列腺癌组织芯片上前列腺癌及癌旁组织中RNF180蛋白的表达。结果前列腺癌细胞中RNF180基因的m RNA及蛋白的表达量明显低于正常前列腺上皮细胞(P<0.05),而前列腺癌细胞中RNF180启动子区的甲基化水平却明显高于正常前列腺上皮细胞;RNF180蛋白在前列腺癌组织中的表达量明显低于相应的癌旁组织。结论 RNF180启动子区在前列腺癌细胞中呈高度非完全性甲基化状态,这也可能是RNF180在癌细胞和癌组织中表达下降或沉默的原因之一。

氟斑牙患儿ERα启动子区甲基化率与血钙和尿氟的相关性

目的探讨氟斑牙患儿ERα启动子区甲基化水平与病情及血清钙和尿氟水平的相关性。方法选择本地区饮水型地方性氟中毒流行区2个调查点的儿童作为研究对象,根据氟斑牙病情分为正常组、轻度组和中重度组,对3组ERa启动子区甲基化水平以及血清钙水平和尿氟含量进行分析。结果中重度组女患者比例较其他组高(P<0.05),中重度组男童ERα启动子区甲基化率显著高于女童(P<0.05);中重度组和轻度组ERα基因启动子区甲基化率均显著高于正常组(P<0.05),中重度组与轻度组的甲基化率差异不显著(P>0.05);轻度组血清钙水平较正常组显著偏低(P<0.05),重度组与轻度组比较差异不显著(P>0.05);轻度组和中重度组尿氟含量均显著高于正常组(P<0.05),重度组尿氟含量显著高于轻度组(P<0.05)。氟斑牙患儿的ERα启动子区甲基化率与血清钙水平呈显著负相关(r=-0.183,P<0.05),与尿氟水平呈显著正相关(r=0.331,P<0.05)。结论氟斑牙患儿ERα启动子区甲基化率与患儿血清钙水平呈显著负相关,与尿氟水平呈显著正相关,而与病情的关系需要进一步的研究证实。

启动子区甲基化对miRNA-122表达及肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 综合分析启动子区甲基化对miRNA-122表达及肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 选取23例肝癌细胞者作为实验组,选择同期收治的23例肝外肿瘤肝转移手术者作为对照组.采用甲基化测序检测肝癌细胞中miRNA-122的启动子区甲基化状态,采用PCR测量肝癌细胞中的miRNA-122,采用流式细胞仪、CCK8检测甲基化对于肝癌细胞的增殖状况和凋亡状况,分析两组miRNA-122启动子区的甲基化程度.结果 实验组miRNA-122启动子区甲基化显著高于对照组(P<0.05),5μmol/L5-氮杂-2-脱氧胞苷 对Huh7、HepG2、QSG-7701细胞增殖影响显著高于0μmol/L、10μmol/L(P<0.05),实验组患者细胞凋亡数显著高于对照组(P<0.05).结论 miRNA -122的表达受启动子区甲基化的影响,与肝癌细胞的凋亡密切相关, miRNA-122启动子区甲基化可能参与到了肝癌的增殖和凋亡.

妊娠期高血压疾病孕妇血清miR-21、miR-122及其启动子区甲基化水平变化

目的探讨妊娠期高血压疾病(HDP)孕妇血清miR-21、miR-122及其启动子区甲基化水平变化及其临床意义。方法选择HDP孕妇142例(观察组),其中妊娠期高血压80例、子痫前期62例,同期选择正常妊娠孕妇50例作为对照组。采集所有研究对象空腹外周静脉血,离心留取血清,分别采用RT-qPCR法和甲基化特异性聚合酶链反应法检测血清miR-21、miR-122及其启动子区甲基化,分析HDP孕妇血清miR-21、miR-122及其启动子区甲基化水平与临床特征的关系。结果观察组血清miR-21、miR-122水平均显著高于对照组(P均<0.05);子痫前期孕妇血清miR-21、miR-122水平均显著高于妊娠期高血压孕妇(P均<0.05)。观察组miR-21、miR-122启动子区甲基化阳性率均显著低于对照组(P均<0.05);子痫前期孕妇血清miR-21、miR-122启动子区甲基化阳性率均显著低于妊娠期高血压孕妇(P均<0.05)。HDP孕妇血清miR-21、miR-122及启动子区甲基化阳性率均与收缩压、舒张压、24 h尿蛋白量有关(P均<0.05),而与年龄、孕周、孕前BMI无关(P均>0.05)。结论HDP孕妇血清miR-21、miR-122水平显著升高,其启动子区甲基化阳性率显著降低;血清miR-21、miR-122及其启动子区甲基化水平与HDP的发生、发展有关。

RELN基因启动子区甲基化及其多态性改变与精神分裂症的相关性研究进展

精神分裂症的发病机制至今尚未明确。研究表明,精神分裂症的发生、发展与大脑神经系统功能异常相关。RELN编码的Reelin可通过分子信号通路调节神经元的正确定位和突触的可塑性参与精神分裂症的发生、发展。本文综述了RELN基因和Reelin蛋白的结构及在神经系统中的作用以及RELN基因与精神分裂症的关系,以期为深入研究精神分裂症的发病机制及临床治疗提供更多思路。

胶质瘤患者RASSF1A基因转录表达和启动子区甲基化的研究

目的 探讨RASSF1A(RAS association domain family 1A)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与启动子甲基化的关系。方法 用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测28份胶质瘤组织和4份正常脑组织中RASSF1A基因mRNA相对表达水平;用甲基化特异性PCR方法研究胶质瘤组织、正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果 RASSF1A mRNA在4份正常脑组织中全部表达;在脑胶质瘤中表达缺失率为21.4％(6/28),且表达量低于正常脑组织,但与患者年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度间的差异无显著意义(P>0.05)。按病理学分类,胶质母细胞瘤与少突胶质肿瘤的差异有显著意义(P=0.011)。脑胶质瘤中RASSF1A基因启动子发生甲基化的频率为39.3％(11/28),正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动了未发生甲基化。11份启动子区甲基化的胶质瘤标本中,5份同时伴mRNA表达缺失(P=0.022)。结论 RASSF1A基因启动了在胶质瘤中发生异常甲基化。尽管RASSF1A mRNA在脑胶质瘤中表达缺失并不广泛,但其表达普遍下调。推测启动子区CpG岛甲基化可能是导致RASSF1A基因在胶质瘤中表达缺失或表达水平下调的一种机制。

肿瘤抑制基因启动子区甲基化在胃癌中的功能意义及临床价值

西方国家胃癌发病率相对较低[1],中国胃癌发病率相对较高[2].胃癌的发生发展是一个多阶段的过程.早期发现、早期诊断和早期治疗可明显改善患者预后.表观遗传学和遗传学机制均参与胃癌的发生过程.基因甲基化是常见的表观遗传学改变[3].

卵巢上皮性癌组织中E钙黏素基因启动子区甲基化及其表达

卵巢上皮性癌（卵巢癌）是一种常见的、高病死率的女性生殖系统恶性肿瘤，大多数患者死于肿瘤盆腹腔种植转移引起的并发症，多种黏附分子参与上述过程。E钙黏素（E—cadherin，E—cad）是钙依赖性上皮细胞黏附分子，以同种亲和的方式与邻近上皮细胞相互作用，其基因的失活会导致细胞间黏附力下降，癌细胞易于从原发灶脱落，进而向周围、远处组织浸润转移。研究表明，在卵巢癌组织中E-cad表达降低；临床分期越高，表达降低越明显；且其表达与生存时间有关。引起E—cad表达降低的机制主要有：基因突变、杂合性缺失、甲基化等。DNA甲基化作为转录水平的DNA修饰方式之一，在调节基因表达中起了重要的作用。本研究检测了卵巢癌组织中E．cad基因的启动子区5’胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸（cytosine phosphate guanosine，CpG）岛甲基化状况及其蛋白的表达，并结合临床病理特征进行分析，以探讨卵巢癌浸润转移的机制。

新疆哈萨克族食管癌中Cdc42基因启动子区甲基化与其mRNA表达改变的研究

目的研究新疆哈萨克族食管癌中Cdc42基因启动子区甲基化状态与其mRNA表达改变的关系。方法用RT-PCR方法测定mRNA表达,甲基化特异PCR方法检测DNA启动子区甲基化状态。结果在20例癌组织中,有16例表达阳性,占80%,20例癌旁组织中有13例表达,占65%,其中癌组织表达量明显高于癌旁组织的有10例,占50%,癌旁组织表达量高于癌组织的有5例,占25%。肿瘤组织和正常组织该基因启动子区见甲基化条带,未见非甲基化条带。结论Cdc42基因在肿瘤组织和正常组织均表现为高甲基化状态,新疆哈萨克族食管癌中Cdc42基因mRNA表达增强可能与该基因的甲基化状态没有直接关系,另存在其他机制,有待进一步研究。

多发性骨髓瘤患者p16基因结构改变及启动子区甲基化的研究

目的 探讨p16基因结构及启动子区CPG岛甲基化在多发性骨髓瘤 (MM)发病中的作用。方法 利用PCR 单链构象多态性、甲基化特异性PCR(MSP)技术研究骨髓瘤细胞株U2 66、LP1、KM3及MM患者p16基因结构改变及启动子区CPG岛甲基化状态。结果 KM3细胞株为p16基因外显子 2的同源缺失 ;U2 66、LP1细胞株及 5 5 .5 6%MM患者的p16基因启动子区存在CPG岛甲基化现象 ,p16基因甲基化与MM分期无关 (P >0 .0 5 )。结论 p16基因甲基化在MM中较为常见 ,这可能为MM的治疗提供借鉴。

脑胶质瘤Apaf-1基因表达及启动子区甲基化的研究

胶质瘤是一种最常见的颅内肿瘤，其发生率占全部颅内肿瘤的40％，即便采取手术切除、放化疗等综合治疗，仍预后不良。近年来已经有相当多的研究发现胶质瘤细胞存在多种凋亡基因异常，提示胶质瘤细胞存在凋亡通路功能异常，研究有关凋亡的变化可能为探讨胶质瘤的发生提供线索。人凋亡蛋白酶活化因子-1（apoptotic protease activating factor-1，Apaf-1）基因位于染色体12q23，Apaf-1和Caspase-9是c-Myc诱导细胞凋亡中p53的下游成分，是线粒体凋亡途径的一个关键调节因子。我们研究Apaf-1基因在胶质瘤中的表达及启动子甲基化情况，探讨该基因与胶质瘤发生和发展的关系。为研究颅内肿瘤的基因诊断和基因治疗提供依据。