基于网络药理学和分子对接技术的2,3-吲哚醌抗少弱精症机制研究

为研究2,3-吲哚醌(isatin, ISA)治疗少弱精症的可能作用靶点和作用机制,基于公共数据库分别获取ISA作用靶点和少弱精症相关疾病靶点,确定交集靶点,采用Cytoscape软件获取核心靶点。通过GO功能富集和KEGG通路分析交集靶点,采用分子对接预测ISA与靶点蛋白的结合能力。研究结果显示,ISA干预少弱精症主要涉及氧化应激、细胞凋亡和炎症等生物学过程,并与p53信号通路、细胞衰老通路和IL-17信号通路密切相关;经筛选确定8个核心靶点,ISA与其中6个核心靶点稳定结合。这表明,ISA可能通过作用于核心靶点CASP3、TP53、ESR1、PTGS2、TNF和ANXA5,调控p53信号通路和IL-17信号通路发挥抗少弱精症作用。

吲哚醌对大鼠杏仁核点燃的抑制作用

目的：研究吲哚醌对大鼠杏仁核点燃发作的影响及其抗惊厥作用。方法：建立大鼠杏仁核点燃模型，观察发作的电生理指标和行为学变化；在小鼠最大电休克惊厥、戊四唑惊厥和氨基脲惊厥模型计数惊厥发生率。结果：ｉｐ吲哚醌５０～２００ｍｇ·ｋｇ－１均可升高杏仁核点燃大鼠的局灶性后放电阈值，降低发作强度和全身性发作（ｓｔａｇｅ５）百分率；可剂量依赖性地对抗小鼠最大电休克发作，并能取消戊四唑惊厥和氨基脲惊厥的强直相，降低戊四唑惊厥的死亡率。结论：吲哚醌对癫痫发作有抑制作用，其机制与抑制ＭＡＯＢ活性。

2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响

目的研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,ISA)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(0、100、200、400μmol·L-1)处理组,采用Hochest33258荧光染色和琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡;采用Western blot检测凋亡抑制基因bcl-2、凋亡基因bax蛋白表达的变化;采用RT-PCR检测加药后SH-SY5Y bcl-2,bax及端粒酶逆转录酶(hTERT) mRNA表达水平的变化。结果100、200、400μmol·L-1ISA处理SH-SY5Y细胞48h后,荧光染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核碎裂形态;bcl-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax mR-NA及蛋白表达水平未见变化(P>0.05);hTERT mRNA表达水平降低(P<0.05),各组间差异比较有统计学意义;200、400μmol·L-1ISA处理SH-SY5Y细胞48h,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。结论2,3-吲哚醌可能通过下调bcl-2和hTERT表达诱导SH-SY5Y细胞凋亡,并在一定浓度范围内呈浓度依赖关系。

2,3-吲哚醌抗肿瘤作用研究

目的研究2,3-吲哚醌的抗肿瘤作用及机制。方法观察2,3-吲哚醌对小鼠肉瘤(S180)、小鼠肝癌(H22)、小鼠艾氏腹水瘤实体型(EC)和腹水型(EAC)的抗肿瘤作用;免疫组化法测定药物对S180肿瘤组织中PCNA、Bcl-2蛋白表达的影响;核染色法(Hoechst33258染色)和MTT法观察2,3-吲哚醌对人神经母瘤(SH-SY5Y)细胞体外促凋亡和抗增殖作用。结果2,3-吲哚醌对3种小鼠移植性肿瘤有抑制作用,对荷瘤鼠血液白细胞水平无影响;2,3-吲哚醌可抑制S180肿瘤组织中PCNA,Bcl-2蛋白表达;2,3-吲哚醌可促进人神经母瘤细胞凋亡并抑制其增殖。结论2,3-吲哚醌有抗肿瘤作用,其机制与抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡有关。

2,3-吲哚醌对血管内皮细胞生长因子的影响及作用机制研究

目的:研究2,3-吲哚醌在体外对人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,探讨其作用机制。方法:采用酶联免疫吸附测定法检测VEGF蛋白分泌水平;反转录-聚合酶链反应测定VEGF信使核糖核酸(mRNA)的相对表达水平;Western-blot测定磷酸化的有丝分裂原激活的蛋白激酶(pp42/pp44)的相对表达量。结果:2,3-吲哚醌作用细胞24h后,VEGF分泌量明显降低,mRNA相对表达水平下降,pp42/pp44的相对表达量降低。结论:2,3-吲哚醌能抑制SH-SY5Y细胞分泌VEGF蛋白和mRNA的表达,其作用可能与改变有丝分裂原激活的蛋白激酶磷酸化水平有关。

尿中2,3-吲哚醌作为帕金森病预警标志物的研究

目的 通过对2,3-吲哚醌的测定,提出将其作为帕金森病预警标志物的依据。方法 采用高效液相色谱法对健康人和帕金森尿液中2,3-吲哚醌排泄量进行测定。结果 不同年龄组的健康人尿中2,3-吲哚醌的含量随增龄增加明显,各年龄组间测得数据有显著性差异(P<0.05),健康人与帕金森患者尿中2,3-吲哚醌含量有极显著性差异(P<0.01),严重程度不同的帕金森患者尿中2,3-吲哚醌的排泄量无显著性差异。结论2,3-吲哚醌尿排泄量随增龄增加,帕金森患者尿中2,3-吲哚醌的含量明显高于健康人。结果表明尿中2,3-吲哚醌可以作为帕金森病预警标志物。

天然产物吲哚醌及其衍生物的合成

目的对天然产物吲哚醌及其衍生物的合成方法进行研究和改进。方法用苯胺及其衍生物和水合三氯乙醛、盐酸羟胺在盐酸水溶液中反应生成中间体异亚硝基乙酰苯胺及其衍生物,然后再在浓硫酸作用下关环合成出了吲哚醌及其衍生物。结果筛选出合成天然产物吲哚醌及其衍生物的最佳条件:第一步反应回流1 h,第二步反应,温度为65℃,反应时间1 h。结论反应步骤简单、条件温和、产率较高,是合成天然产物吲哚醌及其衍生物的理想方法。

2,3-吲哚醌对二甲基苯蒽诱导的大鼠乳腺癌的预防作用

目的探讨2,3-吲哚醌(ISA)对二甲基苯蒽(DMBA)诱导的大鼠乳腺癌的化学预防作用。方法♀SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、ISA低、中、高剂量给药组,一次性皮下给予DMBA诱导大鼠乳腺癌模型发生,观察ISA对DMBA诱导的乳腺癌模型大鼠肿瘤抑制率,脏器指标,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)活性,肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,肿瘤组织病理学检查结果。结果 ISA能推迟大鼠乳腺癌的发生时间,降低肿瘤发生率;与模型组相比,低、中、高剂量组大鼠的脾指数及胸腺指数升高;低剂量组GSH-Px及SOD均明显升高,而MDA活性降低(P<0.05);ISA低、高剂量组TNF-α浓度较模型组有明显降低。结论 ISA对DMBA诱发的大鼠乳腺癌有预防作用,其机制可能为:增强荷瘤大鼠免疫系统的抵抗力,清除血中氧化应激产生的氧自由基,抑制肿瘤细胞的增殖。

2,3-吲哚醌对多巴胺能细胞氧化损伤的保护作用

目的采用过氧化氢(H2O2)作为损伤因素,检测2,3-吲哚醌(isatin,ISA)对MES 23.5细胞的保护作用及其机制。方法 MTT比色法检测H2O2的毒性作用及ISA的保护作用。细胞分为:对照组,H2O2 20μmol.L-1组,和ISA 100μmol.L-1+H2O2 20μmol.L-1组,采用流式细胞技术(FCM)检测线粒体膜电位(△ψm)的变化;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化。结果 H2O2组细胞存活率明细降低。ISA 100μmol.L-1及以上浓度处理的细胞存活率均高于H2O2组(P<0.05)。H2O2组细胞内R123平均荧光强度较对照组明显降低而ISA组明显增强(P<0.01)。H2O2组细胞内Fluo-3荧光强度明显高于对照组(P<0.01),而ISA组细胞内荧光强度明显低于H2O2组(P<0.01)。结论 ISA可减轻H2O2导致的DA能MES 23.5细胞损伤,其机制与减轻△ψm异常,降低[Ca2+]i水平有关。

癌症患者尿液2，3-吲哚醌含量的测定及其临床意义

目的探讨癌症患者尿液2,3-吲哚醌含量测定的临床意义。方法采用高效液相色谱法测定健康志愿者及不同系统癌症患者尿液2,3-吲哚醌的含量。结果健康志愿者与胸部、泌尿系统恶性肿瘤患者尿液中2,3-吲哚醌含量有显著性差异(P<0.05);与腹部恶性肿瘤患者之间有极显著性差异(P<0.001);腹部恶性肿瘤患者分别与胸部、泌尿系统恶性肿瘤患者之间有显著性差异(P<0.05);胸部恶性肿瘤患者术前和术后7 d之间,以及不同TNM分期之间无显著性差异(P>0.05)。结论尿液2,3-吲哚醌含量可能为临床诊断癌症的检测指标。

2,3-吲哚醌诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及周期阻滞

背景与目的:2,3-吲哚醌(isatin,ISA)是存在于哺乳动物体液及组织中的一种天然物质,已发现其对肿瘤细胞的生长有抑制作用,但具体作用机制尚不明。本研究以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为靶细胞,观察ISA对SH-SY5Y细胞的作用及其机制。方法:采用荧光染色、流式细胞术(flow cytometry,FCM)及Western blot等方法检测不同浓度ISA(0、100、200、400μmol/L)诱导SH-SY5Y细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用机制。结果:400μmol/L ISA作用48h后,在荧光显微镜下观察到SH-SY5Y细胞出现核固缩、DNA断裂等典型的凋亡形态学改变。Western blot结果显示,随ISA浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达无明显改变,Bcl-2/Bax下降。100、200、400μmol/L ISA处理SH-SY5Y细胞48h,活化Caspase-3的表达率分别为19.28%、25.88%、33.43%,明显高于对照组(P<0.05)。Western blot进一步检测到其下游底物Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂(inhibitor of caspase-activated DNase,ICAD)被降解。细胞周期分析表明,经100、200、400μmol/L ISA处理48h后,G1期SH-SY5Y细胞数明显增加,呈明显的G1期阻滞;磷酸化的ERK蛋白及Cyclin D1(CDK1)蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论:ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡和细胞周期G1期阻滞,该作用可能与Bcl-2/Bax降低、Caspase-3激活,以及下调磷酸化ERK和细胞周期因子CDK1表达有关。

2,3-吲哚醌抑制人神经母瘤细胞增殖及诱导其凋亡作用的研究

运用台盼蓝拒染法测定人神经母瘤细胞(SH-SY 5Y细胞)生长曲线,Hoechst33258核染色形态学检测细胞凋亡,流式细胞仪检测2,3-吲哚醌对SH-SY 5Y细胞凋亡率的影响。结果2,3-吲哚醌作用48 h后开始抑制SH-SY 5Y细胞生长,并且细胞核出现核裂解、浓缩等典型凋亡形态学改变,凋亡率升高,诱导细胞凋亡呈现时间和剂量依赖关系。提示2,3-吲哚醌可用于肿瘤的治疗。

2，3-吲哚醌对肿瘤凋亡抑制因子survivin的影响及作用机制

目的研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,isatin,ISA)在体外对人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)分泌肿瘤凋亡抑制因子survivin的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(100、200、400μmol.L-1)处理组,采用荧光染色、DNA Ladder分析细胞凋亡,RT-PCR及Westernblot等方法检测不同浓度ISA作用后survivin及p53在mRNA和蛋白水平的变化,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测Caspase-3蛋白水平的变化。结果ISA(100、200、400μmol.L-1)作用SH-SY5Y细胞48h后,在荧光显微镜下观察到400μmol.L-1ISA组细胞出现典型的凋亡形态学改变:核染色质聚集、核碎裂、胞质浓缩;琼脂糖凝胶电泳显示400μmol.L-1ISA处理组细胞出现明显的梯形条带;RT-PCR及Western blot显示:随着ISA药物浓度的增加,survivin mRNA及蛋白表达逐渐减少(P<0.05),野生型p53mRNA及蛋白表达水平逐渐增加,各用药组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),并呈现浓度依赖关系;FCM结果显示随着ISA药物浓度的增加,活化Caspase-3的表达率分别为18.38%、26.93%、35.66%,明显高于对照组(11.23%,P<0.05)。结论ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡,可能机制是抑制凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的生存蛋白(survivin)表达继而增加活化Caspase-3水平来实现的,而这一过程可能与ISA上调野生型p53的表达有关。

2，3-吲哚醌的抗衰老作用及机制研究

目的研究2，3-吲哚醌（2，3-indolinedione，inatin，ISA）的抗衰老作用及其机制。方法昆明种小鼠随机分为6组：空白对照组，模型组，卵磷脂组（阳性对照组），ISA低、中、高剂量组。用Y型电迷宫法，测定小鼠的学习记忆能力；测定胸腺指数、脾指数和脑指数；测定脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性，活性氧（ROS）和脂褐素（LF）含量。结果ISA中、高剂量组和卵磷脂组学习次数[分别为（14．33±4．32）次和（16．33±5．36）次]低于模型组（21．71±7．04）次（P〈0．05）；反应正确率[分别为（90．00±11．55）％和（87．14±11．38）％]高于模型组（69．29±12．72）％，P〈0．05）；胸腺指数、脾指数和脑指数明显增高（P〈0．01）；与模型组比较，ISA提高SOD活性[（65．64±14．49）μmg^-1 protein vs（50．23±15．88）μmg^-1 protein，P〈0．05]，降低ROS[（442．59±97．92）μmg^-1 proteinvs（540．20±89．02）μmg^-1 protein]和LF含量[（0．96±0．26）μmg^-1 proteinvs（1．31±0．23）μmg^-1 protein，P〈0．01]。结论ISA具有抗衰老作用，与其增强免疫功能和抗氧化有关。

2,3-吲哚醌对大鼠脑内单胺类神经递质含量与释放的影响

目的研究2,3-吲哚醌对大鼠脑内单胺类神经递质含量与释放的影响。方法给予Wistar大鼠2,3-吲哚醌(50,200 mg.kg-1,ip),2h后测定其纹状体Ach,DA含量;在脑片灌流液中加入2,3-吲哚醌(50,200μmol.L-1),测定其对纹状体及皮质脑片DA,5-HT,NE释放的影响。结果大鼠腹腔给予2,3-吲哚醌,其纹状体Ach和DA的浓度均有增加(P<0.05和P<0.01);脑片灌流液中加入2,3-吲哚醌促进皮质和纹状体内DA释放(P<0.01)。结论2,3-吲哚醌具有调节脑内DA和Ach两种神经递质功能平衡的作用。

内源性活性物质2,3-吲哚醌抗前列腺增生作用

目的观察2,3-吲哚醌对前列腺增生的影响。方法健康雄性小鼠60只,随机分为6组(n=10):正常对照组,灌胃0.9%氯化钠溶液0.2 m L·d^(-1);模型对照组,皮下注射丙酸睾酮5 mg·kg^(-1),造模;前列康组,造模同时灌胃前列康5 mg·kg^(-1);2,3-吲哚醌小、中、大剂量组,造模同时分别灌胃2,3-吲哚醌25,50,100 mg·kg^(-1)。每天给药1次,连续15 d。末次用药后测定前列腺质量、前列腺指数,观察苏木精-伊红(HE)染色结果。结果 2,3-吲哚醌小、中、大剂量组小鼠前列腺指数分别为(61.04±0.96),(52.53±1.71),(43.78±2.08),均低于模型对照组(76.23±2.47)(P<0.05),上皮增生受到抑制。结论 2,3-吲哚醌可抑制丙酸睾酮诱发的小鼠前列腺增生。

海洋活性物质2,3-吲哚醌抗鹌鹑实验性动脉粥样硬化作用及其机制

目的研究2,3-吲哚醌对实验性动脉粥样硬化的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法取雄性鹌鹑随机分为空白对照组、高脂组、洛伐他汀组、2,3-吲哚醌小剂量组、中剂量组和高剂量组。除空白组喂饲基础饲料外,其余组均喂饲高脂饲料,各用药组同时灌胃给药,连续用药8周。于用药第5周和8周末测定血清及组织中脂质含量,对主动脉、冠状动脉、肝脏进行肉眼及光镜组织学检查,检测2,3-吲哚醌对血清总超氧化物歧化酶、血清谷胱甘肽过氧化物酶、血清总抗氧化能力及脂质过氧化物丙二醛含量的影响。结果连续灌胃给药8周末时,与高脂组比较3种剂量的2,3-吲哚醌均可降低血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白B的水平(P<0.05,P<0.01),升高高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白A的水平(P<0.05,P<0.01);2,3-吲哚醌组主动脉壁、肝脏及心肌中胆固醇和甘油三酯含量也明显降低(P<0.05,P<0.01);病理检测结果发现,2,3-吲哚醌组冠状动脉和主动脉内膜粥样硬化斑块的病变程度较高脂组明显减轻;2,3-吲哚醌可升高血清总超氧化物歧化酶、血清谷胱甘肽过氧化物酶的含量和血清总抗氧化能力,降低脂质过氧化物丙二醛的含量(P<0.05,P<0.01)。结论2,3-吲哚醌预防性用药可抑制动脉粥样硬化形成,其作用机制与其降血脂和抗氧化作用有关。

2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖影响

目的研究2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响。方法应用MTT比色法观察2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞生长的抑制情况;流式细胞仪检测2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞周期分布的影响;Western blot方法观察其对细胞信号传导通路蛋白有丝分裂原激活的蛋白激酶(ERK)的作用,同时结合免疫细胞化学方法检测2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞caspase-3的影响。结果2,3-吲哚醌能显著抑制SH-SY5Y细胞增殖,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;caspase-3蛋白表达随着药物浓度的升高逐渐增加;加2,3-吲哚醌后磷酸化的有丝分裂原激活的蛋白激酶蛋白(ERK1/2)相对表达量降低。结论2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞具有抗增殖作用,其作用可能是通过诱导细胞凋亡、改变细胞周期以及作用于细胞通路而实现的。

海洋活性物质2,3-吲哚醌对实验性高脂血症的预防作用

目的通过实验性动脉粥样硬化动物模型,观察2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,MW147)预防用药时的调血脂作用。方法雄性鹌鹑喂饲高脂饲料,各用药组药物同时灌胃给药,连续用药8周,于用药第2,5,8周末测定血清脂质含量。结果MW14720,60,120mg·kg-1均可显著降低鹌鹑血清胆固醇、甘油三酯水平(P<0.05,P<0.01),对血清低密度脂蛋白和载脂蛋白B的升高也有程度不等的抑制作用(P<0.05,P<0.01)。MW147也可提高血清高密度脂蛋白和载脂蛋白A的水平(P<0.05,P<0.01)。结论MW147对实验性高脂血症有预防作用。