基于生物碱指纹图谱和多组分定量分析的吴茱萸质量评价

目的建立吴茱萸生物碱类成分HPLC指纹图谱,测定其中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸新碱3个生物碱的含量,并结合聚类分析对不同产地吴茱萸进行质量评价。方法采用HPLC法,以吴茱萸碱为参照,绘制11批吴茱萸的指纹图谱,并进行相似度评价、聚类分析;采用HPLC测定3个生物碱类成分的含量。结果建立了吴茱萸HPLC指纹图谱,确定了11个共有峰,指认出4个峰,与对照指纹图谱的相似度在0.898~0.996之间,不同产地的吴茱萸所含生物碱类成分种类和数量基本一致,3个生物碱类成分的含量在较大范围内波动较大。11批样品可聚为3类。结论该方法简单、可靠、重复性良好,可有效、全面用于吴茱萸质量的评价。

基于化学指纹图谱和多成分含量测定的吴茱萸质量评价

目的建立吴茱萸药材的HPLC指纹图谱,并同时测定其中去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的含量。方法采用phenomenex luna C_(18)色谱柱(250×4.6 mm,5μm),乙腈-0.02%磷酸水二元梯度流动相,检测波长225 nm。对10批吴茱萸药材进行了指纹图谱和含量测定研究。结果建立了吴茱萸的HPLC指纹图谱,标定了19个共有峰,并对其中4个成分进行了含量测定。去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯分别在相应的浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.9%,98.9%,97.0%和98.8%。结论该方法所建立的吴茱萸指纹图谱特征性强、方法简便,结合4种主要成分的含量测定可更好的控制其质量,为吴茱萸药材的质量控制提供科学依据。

HPLC法测定泡吴茱萸中柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量

目的:建立用高效液相色谱法(HPLC)测定泡吴茱萸中柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱三种成分的含量。方法:色谱柱为Eclipse XDB C18(4.6×250mm,5μm),流动相:A乙腈,B甲醇,C 0.05%磷酸溶液,各流动相配比为30∶20∶50,流速:1.000mL·min^(-1),检测波长:215nm,柱温:30℃。结果:柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱三者依次在0.1303~1.6291μg(r=0.9995)、0.0500~0.6251μg(r=1.0000)、0.0354~0.4429μg(r=0.9999)范围内与其峰面积有良好的线性关系,且三者的平均加样回收率和RSD值分别为100.11%(RSD=0.7%)、100.74%(RSD=1.4%)和99.39%(RSD=1.3%)。结论:该方法操作简单,结果稳定,有着高准确度,适用于泡吴茱萸中柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱含量的测定。

吴茱萸碱对哮喘模型大鼠炎症及上皮细胞凋亡的影响及机制

目的 探究吴茱萸碱对哮喘模型大鼠炎症反应及上皮细胞凋亡的影响及潜在机制。方法 将SD大鼠分为对照组、模型组、吴茱萸碱低剂量组(10 mg/kg)、吴茱萸碱高剂量组(20 mg/kg)、地塞米松组(阳性对照,0.5 mg/kg)、表皮细胞生长因子(EGF)组[丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激活剂,10μg]、吴茱萸碱高剂量+EGF组(20 mg/kg吴茱萸碱+10μg EGF),每组10只。除对照组外,其余各组大鼠以10%卵白蛋白(OVA)-氢氧化铝混合液3点注射致敏联合2%OVA雾化液吸入激发的方式建立哮喘模型。检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞(巨噬细胞、淋巴细胞)数,观察大鼠肺组织的病理变化,检测大鼠肺组织中气道上皮细胞凋亡情况、血清炎症因子(肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素4)水平、通路相关蛋白[p38 MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38 MAPK)、信号转导及转录激活因子1(STAT1)]及凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠肺组织可见支气管黏膜水肿、肺泡间隔增厚和大量炎症细胞浸润,炎症细胞数显著增多;气道上皮细胞凋亡率、炎症因子水平、p-38 MAPK/p-38 MAPK和Bax、STAT1蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2蛋白表达水平和Bcl-2/Bax均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,吴茱萸碱低、高剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理改变均有不同程度缓解,上述各指标均显著逆转,而EGF组上述指标的变化趋势则相反(P<0.05);EGF能显著减弱高剂量吴茱萸碱对哮喘大鼠炎症反应的改善作用(P<0.05)。结论 吴茱萸碱可减轻哮喘大鼠炎症反应并减少气道上皮细胞凋亡,其作用机制可能与抑制p38 MAPK/STAT1信号通路有关。

基于物质基础研究甘草用量对吴茱萸和制吴茱萸煎出率的影响

目的:考察吴茱萸用甘草炮制前后,其有效成分含量以及水煎出率的差异,探索甘草与吴茱萸配伍比例与煎出率的关系。方法:以吴茱萸有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱为研究对象,采用HPLC-DAD检测吴茱萸用甘草炮制前后有其效成分含量变化,以及不同比例甘草与吴茱萸同煎有效成分煎出率,并绘制有效成分煎出量与甘草比例的关系曲线。结果:甘草制吴茱萸后,有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱含量均有下降,但煎出率显著升高;吴茱萸和制吴茱萸水煎液中吴茱萸内酯煎出率分别为5.317和6.451%,吴茱萸碱煎出率分别为0.166%和0.437%,吴茱萸次碱煎出率均为0;甘草与吴茱萸同煎组,甘草比例小于1∶3时,吴茱萸内酯煎出率较不加甘草组高,比例在小于1∶2时,吴茱萸碱煎出率较不加甘草组高;而制吴茱萸各组,加入甘草组吴茱萸内酯和吴茱萸碱煎出率均小于不加甘草组。结论:甘草炮制吴茱萸有利于有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱的煎出;吴茱萸次碱水煎不能煎出,可能为"外用吴茱萸有降压作用,而水煎内服无此作用"的科学解释;制吴茱萸与甘草配伍会降低吴茱萸有效成分的煎出,建议临床配伍慎用。

吴茱萸化学成分研究

目的 研究吴茱萸的活性成分。方法 用硅胶色谱技术和重结晶等方法分离化学成分,用IR、NMR和MS 等波谱方法确定其结构。结果 获得4个化合物,分别鉴定为吴茱萸碱(Ⅰ)、吴茱萸次碱(Ⅱ)、吴茱萸内酯 (Ⅲ)和羟基吴茱萸碱(Ⅳ)。结论

HPLC测不同产地吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯的含量

目的:对不同产地吴茱萸药材的质量进行客观评价。方法:采用高效液相色谱法,十八烷基键合硅胶柱,流动相乙腈-水-四氢呋喃-冰醋酸(41∶59∶1∶0.2),流速为1.0mL.min,检测波长:225nm,结果:不同产地药材其吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯含量有一定差异。结论:该方法为吴茱萸药材中三种成分的同时测定及质量控制提供了一定的参考。

基于“质-量”双标的吴茱萸质量分析方法研究

目的建立以对照药材为对照物质的定性和不依赖多种对照品定量的吴茱萸药材“质-量”双标控制方法。方法采用高效液相色谱(HPLC)技术,以对照药材为对照物质,建立吴茱萸特征图谱,并通过质谱技术鉴定共有峰化学成分,通过评价对照药材与供试药材特征图谱相似度,判别药材真伪,即“质”;以吴茱萸碱作为基准物质进行准确定量,以吴茱萸碱为基准,计算其余特征峰相对含量,并采用特性峰的相对含量下限来判定吴茱萸药材优劣,即“量”。结果建立的吴茱萸特征图谱以及吴茱萸含量测定的方法符合方法学考察要求;鉴定3个共有色谱峰,分别为柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱;不同产地供试药材与吴茱萸对照药材相比相似度均大于0.970;规定了吴茱萸特征峰化学成分相对含量下限。结论该方法不依赖多种对照品,可以快速简便的判别药材真伪,同时达到全面控制吴茱萸药材质量的目的。

不同炮制方法对吴茱萸生物碱类有效成分含量的影响

目的比较不同炮制方法对吴茱萸生物碱类有效成分含量的影响。方法采用高效液相色谱法测定吴茱萸生品及其炮制品黄连水炒吴茱萸、热水浸吴茱萸、黄连制吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、吴茱萸卡品碱的含量。色谱柱为Agilent Poroshell120 EC-C_(18)柱(100 mm×4.6 mm,2.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(梯度洗脱),流速为0.8 m L/min,进样量为10μL,检测波长为330 nm,柱温为30℃。结果吴茱萸生品中去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸卡品碱的含量分别在1.05~20.96μg、1.35~27.05μg、0.20~4.08μg、0.51~10.21μg范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%(n=6);检测限分别为8.62,13.70,4.64,7.31 ng,定量限分别为26.82,46.78,14.20,23.54 ng;平均加样回收率介于98.29%~99.06%,RSD值介于1.96%~2.79%(n=6)。吴茱萸的生品及其炮制品中,黄连水炒吴茱萸的生物碱类成分含量最高(13.643 mg/g),热水浸吴茱萸最低(11.202 mg/g)。结论黄连水炒吴茱萸是吴茱萸留存生物碱发挥药理作用的最佳炮制工艺,可为其产地加工和进一步完善质量标准提供参考。

高效液相色谱法波长切换法同时测定吴茱萸中3组分含量

目的建立同时测定吴茱萸中吴茱萸内酯、吴茱碱和吴茱萸次碱含量的高效液相色谱(HPLC)波长切换法。方法色谱柱为C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(35∶65),流速为2.0 m L/min,柱温为30℃,波长切换(0~15 min,205 nm;15.01~28 min,225 nm)。结果吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱进样量分别在0.186~3.72μg,0.040 24~0.804 8μg,0.040 08~0.801 6μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 7,0.999 9,0.999 9),平均回收率分别为96.30%,97.66%,97.46%,RSD分别为1.43%,1.32%,1.80%(n=6)。结论该法简便,快速准确,灵敏度高,重复性好,可用于吴茱萸药材的质量控制。

高效液相色谱法测定吴茱萸提取物中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯的含量

目的 :建立以高效液相色谱法测定吴茱萸提取物中吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱含量的方法。方法 :十八烷基键合硅胶柱 ,流动相乙腈 -水 -四氢呋喃 -乙酸 (5 1∶4 8∶1∶0 .1)。检测波长 2 10nm。结果 :3种成分能很好的分离。吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的线性范围分别为 :0 .86 6～ 2 .5 99μg·ml- 1(r =0 .9999)、0 .4 19～ 1.2 5 8μg·ml- 1(r =0 .9999)、0 .4 0 7～ 1.70 7μg·ml- 1(r =0 .9995 )。平均回收率吴茱萸内酯 (% )为97.0 1(n =5 ) ,RSD(% )为 1.6 8;吴茱萸碱 (% )为 99.74 ,RSD(% )为 0 .17;吴茱萸次碱 (% )为 99.0 1(n =5 ) ,RSD(% )为 0 .2 4。结论 :方法简便快速 ,重现性好。

吴茱萸粉末醋调敷小鼠皮肤体外透皮吸收研究

目的:考察吴茱萸粉末醋调敷小鼠皮肤的体外透皮吸收特性。方法:采用改良的Franz扩散池,以离体小鼠皮肤为透皮屏障,通过体外透皮吸收实验,用高效液相色谱法检测接收液和皮肤中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的质量浓度,拟合渗透曲线方程,计算累积透过量、渗透速率、皮肤滞留量。结果:吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的透皮吸收速率分别为0.64、0.44、4.91μg/(cm2·小时),24小时累积透过量分别为15.05±2.40、10.69±1.04、114.16±6.83μg/cm2,24小时滞留量分别为0.77±0.42、1.66±0.81、4.97±0.69μg/cm2。结论:吴茱萸粉末醋调敷小鼠皮肤,吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯均可透皮吸收,为吴茱萸醋调敷外治法的研究提供了实验依据。

吴茱萸的活性成分和抗炎作用的研究进展

吴茱萸最先记载于《神农本草经》,被列为中品,该药用植物的药用部位是果实,其中的活性成分包括生物碱、黄酮、萜类、酚酸等,药理学研究发现吴茱萸在抗炎方面具有明显的效果,存在一定的研究价值。本文按其化学成分类别整理了吴茱萸成分抗炎机制的研究进展,为今后吴茱萸治疗炎症性疾病方面的临床研究提供参考。

静脉注射吴茱萸碱-甘草酸纳米胶束后吴茱萸碱在大鼠体内药代动力学研究

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定大鼠血浆中的吴茱萸碱,研究大鼠尾静脉注射吴茱萸碱-甘草酸纳米胶束后的药代动力学情况。方法 大鼠尾静脉注射吴茱萸碱-甘草酸纳米胶束和吴茱萸碱溶液后,采用HPLC测定大鼠血浆中吴茱萸碱的含量,绘制血药浓度-时间曲线,以DAS 2.0软件分析处理药代动力学参数。结果 吴茱萸碱-甘草酸纳米胶束和吴茱萸溶液的Cmax分别为(1.61±0.19)和(0.92±0.11)μg·mL^(-1),AUC_(0~t)分别为(4.76±1.41)和(2.07±0.22)mg·L^(-1)·h,CL分别为(0.67±0.21)和(1.38±0.14)L·h^(-1)·kg^(-1),吴茱萸碱-甘草酸纳米胶束的C_(max)、AUC_(0~t)较吴茱萸碱溶液提高了1.75、2.30倍,CL是吴茱萸碱溶液的0.48倍,C_(max)、AUC_(0~t)和CL差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 将吴茱萸碱制备为吴茱萸碱-甘草酸纳米胶束能延长吴茱萸碱在体内的作用时间,延缓吴茱萸碱在体内的代谢。

吴茱萸碱对特应性皮炎模型大鼠的治疗作用

目的探讨吴茱萸碱(Evo)调节环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路对特应性皮炎(AD)模型大鼠的治疗作用。方法通过多次2,4-二硝基氯苯(DNCB)涂抹建立AD大鼠模型,随机分为AD组、Evo低剂量(Evo-L,5 mg/kg)组、Evo高剂量(Evo-H,10 mg/kg)组、Evo-H+H-89(5 mg/kg)组、地塞米松(0.1 mg/kg)组,并以正常大鼠为对照组,随后对各组大鼠皮损程度进行评分;腹部取血,检测血清中白细胞介素(IL)-4、cAMP、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;收集皮损组织,检测皮损组织病理学变化、肥大细胞数量、组织中PKA/CREB相关蛋白表达以及IL-4、TNF-αmRNA表达。结果与对照组相比,AD组大鼠血清中cAMP水平、皮损组织中p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达降低,皮损程度评分、IL-4、TNF-α水平、表皮厚度、肥大细胞数、皮损组织中IL-4、TNF-αmRNA表达增加(P<0.05);与AD组相比,Evo-L组、Evo-H组、地塞米松组大鼠血清中cAMP水平、皮损组织中p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达增加,皮损程度评分、IL-4、TNF-α水平、表皮厚度、肥大细胞数、皮损组织中IL-4、TNF-αmRNA表达降低(P<0.05);与Evo-H组相比,与Evo-H+H-89组大鼠血清中cAMP水平、皮损组织中p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达降低,皮损程度评分、IL-4、TNF-α水平、表皮厚度、肥大细胞数、皮损组织中IL-4、TNF-αmRNA表达增加(P<0.05)。结论Evo调节cAMP/PKA/CREB信号通路抑制AD模型大鼠的炎性反应及病理损伤。

吴茱萸治疗腹泻的质量标志物预测分析

目的:基于网络药理学和分子对接技术探究吴茱萸治疗腹泻的作用机制并预测其质量标志物。方法:通过多个数据库检索和筛选,获取吴茱萸的活性成分、作用靶点及腹泻相关的疾病基因。利用STRING数据库构建蛋白质相互作用(PPI)网络,并结合Cytoscape软件进行网络拓扑分析以识别关键靶点。借助Metascape平台,对PPI网络的基因功能进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路的富集分析。进一步采用AutoDock软件,对活性成分与核心靶点之间的结合能力进行分子对接验证,最终结合“质量标志物-靶点-通路”网络,筛选并预测吴茱萸治疗腹泻的潜在质量标志物。结果:筛选出吴茱萸中24种活性成分,这些成分对应141个作用靶点与腹泻相关。通过网络拓扑分析后获得肿瘤蛋白p53(TP53)、RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、转录因子AP-1(JUN)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL6)等24个核心靶点。GO和KEGG分析显示吴茱萸可能通过参与癌症通路、MAPK信号通路等多条通路在治疗腹泻方面发挥重要作用。通过分子对接和“质量标志物-靶点-通路”网络,筛选出槲皮素、β-谷甾醇作为吴茱萸治疗腹泻的质量标志物。结论:吴茱萸可以通过多成分、多靶点、多通路发挥治疗腹泻的作用,槲皮素、β-谷甾醇可以作为吴茱萸治疗腹泻的质量标志物,该结果进一步完善了吴茱萸的质量评价和控制体系。

吴茱萸碱对H_(2)O_(2)诱导ARPE-19细胞的炎症反应、细胞凋亡和SIRT1表达的影响

目的 探究吴茱萸碱对H_(2)O_(2)刺激下人视网膜色素上皮细胞ARPE-19的炎症反应和细胞凋亡的影响,阐明去乙酰化酶1(SIRT1)在其中的作用和相关机制。方法 分别采用不同浓度的H_(2)O_(2)(0,25,50,100,200,400μmol/L)和不同浓度的吴茱萸碱(0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0μmol/L)处理ARPE-19细胞,CCK-8法筛选H_(2)O_(2)和吴茱萸碱的最佳作用浓度。使用H_(2)O_(2)(200μmol/L)与不同浓度的吴茱萸碱(2.5,5,10,20μmol/L)联合处理ARPE-19细胞,Western blot法检测细胞中SIRT1蛋白表达情况。按处理方式的不同将ARPE-19细胞分为二甲基亚砜处理的对照组、200μmol/L H_(2)O_(2)处理组(H_(2)O_(2)组)、200μmol/L H_(2)O_(2)与不同浓度吴茱萸碱处理组(H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组)及100μmol/L的SIRT1抑制剂Sirtinol拮抗组(H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组),处理24 h后,ELISA法检测各组ARPE-19细胞上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平,Annexin V-FITC/PI染色检测各组ARPE-19细胞的凋亡率,Western blot法检测各组ARPE-19细胞中核因子-κB p65(NF-κB p65)、环氧化酶-2(COX-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、Caspase-3、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达情况。结果 200μmol/L的H_(2)O_(2)对ARPE-19细胞的生长抑制相对稳定。0,2.5,5.0,10.0,20.0μmol/L的吴茱萸碱对ARPE-19细胞活力无明显影响(P均>0.05),40μmol/L吴茱萸碱可明显降低ARPE-19细胞活力(P均<0.05)。H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱各组ARPE-19细胞中SIRT1蛋白相对表达量均明显低于对照组(P均<0.05);H_(2)O_(2)+吴茱萸碱5μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组中SIRT1蛋白相对表达量均明显高于H_(2)O_(2)组(P均<0.05),且H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组升高更明显。与对照组比较,H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显升高(P均<0.05), Bcl-2蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显降低(P均<0.05),Bcl-2蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05);H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显高于H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组(P均<0.05), Bcl-2蛋白相对表达量明显低于H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组(P<0.05),各指标与H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 吴茱萸碱可在体外通过上调SIRT1表达来抑制NF-κB通路、线粒体介导的凋亡通路和PI3K/Akt通路,从而减轻H_(2)O_(2)刺激下ARPE-19细胞的炎症反应,减少细胞凋亡。

吴茱萸碱通过调节核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1/核因子-κB信号通路对白细胞介素1β诱导的软骨细胞炎性损伤的影响

目的观察吴茱萸碱(Evo)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎性损伤的影响及对核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)/核因子κB(NF-κB)信号通路的调节作用。方法将人软骨细胞HCCs分为对照组、模型组、Evo低剂量组、Evo高剂量组、Evo高+ML385组,对照组用DMEM培养基培养,其他组用加入50 ng/mL的IL-1β培养基培养,同时Evo低、高剂量组再加浓度分别为10、30μmol/L的Evo处理,Evo高+ML385组先用2μmol/L的Nrf2抑制剂ML385处理30 min,再用30μmol/L的Evo处理。CCK-8检测细胞增殖活力;流式细胞术检测HCCs细胞凋亡;酶联免疫吸附法检测HCCs细胞上清液中IL-6、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测HCCs细胞中炎症介质环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA水平;Western blot法检测HCCs中Nrf2/HO-1/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组凋亡率、IL-6、IL-18、TNF-α、MDA水平,COX-2、iNOS mRNA表达水平,以及磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκB-α)、细胞质Nrf2、细胞核p65 NF-κB蛋白水平均升高(P<0.05),细胞存活率、SOD活性及HO-1、IκB-α、细胞核Nrf2、细胞质p65 NF-κB蛋白水平均降低(P<0.05)。与模型组相比,Evo低、高剂量组细胞凋亡率、IL-6、IL-18、TNF-α、MDA水平,COX-2、iNOS mRNA表达水平,p-IκB-α、细胞质Nrf2、细胞核p65 NF-κB蛋白水平均降低(P<0.05),细胞存活率、SOD活性及HO-1、IκB-α、细胞核Nrf2、细胞质p65 NF-κB蛋白水平均升高(P<0.05),且Evo高剂量组以上指标与Evo低剂量组组间比较差异也均有统计学意义(P<0.05)。与Evo高剂量组相比,Evo高+ML385组中Nrf2的抑制剂ML385消除了Evo高剂量对上述指标的影响。结论Evo可能通过激活Nrf2和HO-1的表达,抑制下游转录因子NF-κB的表达,改善IL-1β诱导的软骨细胞炎性损伤。

吴茱萸多组分含量测定方法的研究

目的:优化吴茱萸药材HPLC含量测定方法。方法:流动相[乙腈-四氢呋喃(25:15)]-0.05%磷酸水溶液(30:70),流速1min.ml-1,检测波长220nm。结果:吴茱萸内酯,吴茱萸碱,吴茱萸次碱和其它峰分离度良好,吴茱萸内酯回归方程:y=3E-07x+0.007,线性范围:0.1426 mg.L-1～0.8556mg.L-1;吴茱萸碱回归方程:y=1E-08x+0.0008,线性范围:0.0312mg.L-1～0.1872mg.L-1;吴茱萸次碱回归方程:y=2E-08x+0.9992;线性范围:0.0192mg.L-1～0.1152mg.L-1。吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱平均回收率为98.78%、99.58%、99.88%,RDS%分别为1.48%、1.62%、1.24%。结论:该方法稳定,可靠,重现性好。

高效液相色谱法同时测定吴茱萸醇提物中4种生物碱

目的建立同时测定吴茱萸醇提物中去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸新碱含量的方法。方法采用Agilent Zorbax Eclipse Plus-C 18色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm);流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B);体积流量:1.0 mL·min^-1;检测波长:326 nm;柱温:30℃。结果去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸新碱分别在2.52~503,2.50~501,2.52~503和2.56~511μg·mL^-1浓度范围内呈良好的线性关系(R^2≥0.999 5),平均加样回收率为98.4%~101.1%。结论该方法简便、快速、可靠,可用于吴茱萸及其饮片的质量评价。