吴茱萸碱诱导肾癌786-0细胞G2/M期阻滞及其分子机制

【目的】研究吴茱萸碱对肾癌细胞的生长抑制作用及其分子机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测吴茱萸碱对肾癌细胞786-0增殖的影响,流式细胞术分析吴茱萸碱对786-0细胞周期的影响,免疫印迹法检测细胞周期相关靶基因表达水平。【结果】吴茱萸碱能浓度依赖性显著抑制肾癌细胞增殖;细胞周期分析表明吴茱萸碱处理的786-0细胞被阻滞在G2/M期;免疫印迹结果证明吴茱萸碱处理后786-0细胞P53、P21及Cyclin B1蛋白表达均上调。【结论】吴茱萸碱作用786-0细胞导致细胞周期G2/M阻滞,其机制可能依赖于P53和P21蛋白信号通路。

吴茱萸碱联合RO3306对人肝癌细胞HepG2的协同抑制

【目的】探讨吴茱萸碱(EVO)联合细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)的特异抑制剂RO3306对人肝癌细胞HepG2的生长抑制、诱导凋亡是否具有协同增效作用。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测EVO诱导不可逆凋亡的时间转折点;采用MTT法、集落形成法、PI单染流式细胞术检测EVO和RO3306联合用药与单独用药比较是否具有协同增效作用(q>1.15为协同作用)。【结果】MTT法结果显示:作用16 h起,再撤药培养12 h与撤药前比较抑制率明显上升。流式细胞术检测表明:细胞同步化处理后吴茱萸碱作用12 h大部分细胞发生M期阻滞(M-arrest);作用20 h细胞发生M期滑移(M-slippage)。MTT法检测2μmol/L吴茱萸碱、2μmol/L RO3306及两者联合作用的抑制率分别是33.64%、6.10%和52.74%,q值为1.32。集落形成法显示:1μmol/L吴茱萸碱、2μmol/LRO3306和两者联合作用的抑制率分别是48.21%、11.13%和78.13%,q值为1.83;2μmol/L吴茱萸碱、2μmol/LRO3306和两者联合作用的抑制率分别是9.75%、66.8%和91.2%,q值为1.3。流式细胞术显示:2μmol/L吴茱萸碱、2μmol/L RO3306和两者联合作用的抑制率分别是23.7%、6.6%和44.8%,q值为1.31。【结论】吴茱萸碱诱导M-arrest发生于12 h左右,诱导不可逆凋亡的时间转折点为20 h左右,吴茱萸碱联合RO3306对HepG2具有明显的协同抑制作用。

吴茱萸碱对大鼠下丘脑弓状核NPY蛋白表达的影响

目的:研究吴茱萸碱(Evo)对大鼠下丘脑弓状核神经肽Y(NPY)蛋白表达水平的影响。方法:选用雄性5周龄Sprague-Dawly大鼠36只,分为对照组、Evo 4mg/kg组、40mg/kg组。Evo灌胃25d后取材;采用免疫组织化学和蛋白免疫印迹的方法,观察Evo对下丘脑弓状核中NPY免疫阳性产物的表达和NPY蛋白水平的影响。结果:吴茱萸碱40mg/kg干预后,下丘脑弓状核NPY-IR阳性细胞数显著减少,同时NPY蛋白表达水平显著降低。结论:Evo可显著降低大鼠下丘脑弓状核促食欲肽NPY蛋白水平,提示下丘脑可能是Evo调节摄食行为的重要中枢。