治疗浓度哇巴因增强大鼠心室肌细胞收缩功能的机制研究

目的探讨治疗浓度(10-8mol/L)哇巴因对急性分离大鼠心室肌细胞收缩功能的影响及钠钾泵激活的相关信号转导通路是否参与了治疗浓度哇巴因的强心作用。方法采用酶解法急性分离大鼠心室肌细胞并复钙,可视化动缘探测系统检测单个大鼠心室肌细胞收缩功能。观察10^(-9)~10^(-4)mol/L哇巴因对急性分离大鼠心室肌细胞收缩力的影响。采用10^(-8)mol/L哇巴因分别与1μmol/L PP2、100μmol/L NAC、1μmol/L U73122、1μmol/L Xestospongin C和50μmol/L PD98059共同灌流,观察记录5种信号转导通路抑制剂对10^(-8)mol/L哇巴因强心作用的影响。结果10^(-9)~10^(-4)mol/L的哇巴因均能使急性分离大鼠心室肌细胞收缩力增强(P<0.01),且具有浓度依赖性。1μmol/L PP2、100μmol/L NAC、1μmol/L U73122及1μmol/L Xestospongin C均可部分抑制10^(-8)mol/L哇巴因的强心作用(P<0.05,P<0.01);但50μmol/L PD98059+10^(-8)mol/L哇巴因与10^(-8)mol/L哇巴因使大鼠心室肌细胞收缩幅度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论10^(-9)~10^(-4)mol/L的哇巴因均能够增强急性分离大鼠心室肌细胞收缩力。10^(-8)mol/L哇巴因的强心作用极有可能与钠钾泵激活的Src/EGFR/Ras/ROS信号转导通路和Src/EGFR/PLC/PIP2/IP3信号转导通路有关。

抗哇巴因鸡蛋黄抗体IgY的制备

目的制备出高特异性的抗哇巴因多克隆抗体,为进一步提高内源性哇巴因的检测的敏感性和特异性提供实验基础。方法采用不同剂量哇巴因-牛血清白蛋白耦联物(0.5 mg/kg;1.0 mg/kg)免疫母鸡,收集鸡蛋;采用聚乙二醇法分离、纯化鸡蛋黄中抗哇巴因抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY(yolk immunoglobulin)的抗体效价。SDS-PAGE电泳分析IgY纯度。结果免疫后1周,鸡蛋黄中可检测出IgY;免疫后6周,鸡蛋黄中IgY的效价迅速升高,最高效价达到1∶10 240,持续至少4周。结果还显示,大剂量免疫母鸡获得高效价抗体持续时间较长。结论采用大剂量哇巴因-牛血清白蛋白耦联物免疫母鸡,可以获得较高效价的抗哇巴因IgY。该方法简单,高效价抗体持续时间长,是制备抗体较为有效的方法。

哇巴因的升压作用及哇巴因抗体对高血压大鼠血压的影响

目的 :探讨内源性哇巴因在高血压发病中的作用。 方法 :分别给予正常 SD大鼠每天腹腔注射外源性哇巴因 (2 5μg/kg,哇巴因组 )及等量生理盐水 (对照组 ) ,观察用药10周血压的动态变化 ;“一肾一夹”高血压大鼠分别给予舌下静脉注射哇巴因抗体 (哇巴因抗体组 )、生理盐水 (生理盐水组 )及正常兔免疫球蛋白 G(正常兔 Ig G组 ) ,颈动脉插管监测血压 ,观察用药后 3小时内血压的动态改变。 结果 :与对照组比较哇巴因组大鼠注射哇巴因后 3周血压即开始升高 [12 0 .5± 15 .4mm Hg比 10 9.4± 11.8mm Hg(1mm Hg=0 .133 k Pa) ,P<0 .0 5 ],第 10周时血压明显高于对照组 (143.6± 17.3 mm Hg比 12 1.3± 15 .3 mm Hg,P<0 .0 1) ;哇巴因抗体对“一肾一夹”高血压大鼠具有明显的降压作用 ,而正常兔 Ig G组与生理盐水组比较降压作用不明显。 结论 :体内哇巴因含量升高可能是高血压发病因素之一 ,在血压升高中发挥着较为重要的作用。

内源性哇巴因与高血压

内源性哇巴因与高血压西安医科大学第一临床医学院心内科王颢综述吕卓人审校内源性类洋地黄物质是由肾上腺等组织分泌的具有多种生理和病理意义的一种生物活性物质［１］，在高血压的发病中起着重要作用，近年来的研究表明其分子结构、理化特性同外源性哇巴因相同，即为“...

哇巴因和乌头碱诱发豚鼠和大鼠心律失常的离子作用靶点

目的 观察畦巴因和乌头碱对豚鼠和大鼠心肌单细胞离子通道的作用,确定两药诱发心律失常时离子靶点和最佳靶点,建立细胞水平的心律失常模型。方法 用全细胞膜片钳技术记录哇巴因和乌头碱对酶解法分离的豚鼠和大鼠心肌细胞离子通道的作用。结果 5;μmol·L^(-1)哇巴因使豚鼠心肌细胞APD延长、I_(Ca-L)增加、I_k减少、I_(k1)减少;1μmol·L^(-1)乌头碱使大鼠心肌细胞APD延长、I_(Ca-L)增加、I_(to)减少、I_(k1)增加。结论 哇巴因和乌头碱诱发心律失常的离子靶点有APD,I_(Ca-L),I_k,I_(to)和I_(k1)而最佳靶点应为APD,I_(Ca-L),I_k和I_(to)。在单细胞水平分别应用哇巴因和乌头碱诱发豚鼠和大鼠心律失常.具有稳定性高、条件可控、重复性好等优点,可用于药物筛选和机制研究。

哇巴因抑制钠泵β1亚单位和VE-cadherin减弱血管内皮细胞连接功能

目的探讨钠泵抑制剂哇巴因对血管内皮细胞连接的影响及机制。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为靶细胞,Hoechst33342/PI双荧光染色法观察哇巴因作用后细胞凋亡或坏死特征,透射电镜和光镜观察细胞形态结构变化。应用半定量聚合酶链反应检测钠泵α1亚单位、β1亚单位、VE-cadherin和SnailmRNA的表达。结果0.1μmol.L-1哇巴因作用HUVECs24～48h,细胞死亡以凋亡为主,10μmol·L-1哇巴因作用24h,引起细胞坏死;对照组细胞间的细胞连接数量多,结构清晰,而经哇巴因作用后,细胞连接丧失,细胞脱落。哇巴因作用HUVECs后,钠泵α1亚单位和Snail表达上调,β1亚单位和VE-cadherin表达下降,其改变均呈剂量和时间依赖性。结论哇巴因通过下调血管内皮细胞钠泵β1亚单位和VE-cadherin的表达使细胞连接功能减弱。

低浓度双氢哇巴因对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度的影响(英文)

用激光共聚焦显微镜检查研究低浓度双氢哇巴因 (DHO)对豚鼠心室肌细胞内钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。DHO 1fmol/L～ 1mmol/L可增加心室肌细胞的 [Ca2 + ]i,尤其以 10 pmol/LDHO为显著。Nisoldipine、EG TA或TTX可分别部分抑制 10 pmol/LDHO的作用。去除胞外K+ 和Na+ 后 ,上述作用仍存在。以上结果表明 ,低浓度DHO可通过激活钙通道和TTX敏感的钠通道 ,或许还可直接促进胞内钙释放来增加 [Ca2 + ]i,并有不依赖Na+ /K+ 泵而升高 [Ca2 +

人工虫草菌丝体提取物抗哇巴因所致心脏毒性作用的研究

观察了人工虫草菌丝体石油醚及水提取物抗哇巴因所致豚鼠心脏毒性 ,并且通过测定 SOD及MDA观察其抗氧自由基作用。结果表明石油醚提取物可显著提高哇巴因所致豚鼠心脏毒性和死亡剂量 ,可有效地增加 SOD活性及降低 MDA含量 ,提示本品可对抗哇巴因的心脏毒性 ,提高机体的抗氧化能力。

哇巴因和乌头碱对豚鼠和大鼠心肌细胞钠电流的作用

目的观察哇巴因和乌头碱对豚鼠和大鼠心肌细胞钠电流的作用,探讨二药诱发心律失常的机制。方法用全细胞膜片钳技术分别记录豚鼠和大鼠单个心肌细胞钠电流。结果在-40mV电压下,哇巴因5μmol/L使INa从(-48.3±8.9)pA/pF减少到(-22.6±5.6)pA/pF(抑制60.1%,n=5,P<0.01);乌头碱1μmol/L使INa从(-21.8±5.8)pA/pF增加到(-67.3±7.8)pA/pF(增加208.7%,n=4,P<0.01)。结论哇巴因抑制豚鼠心肌细胞钠电流而乌头碱增加大鼠心肌细胞钠电流。不论是抑制还是促进钠电流,二药均使离子通道失衡,这是其诱发心律失常的重要机制。

哇巴因诱发大鼠心律失常作用靶点的研究

目的 观察哇巴因对大鼠心室肌细胞动作电位时程、钾通道的作用 ,探讨哇巴因诱发心律失常的作用机制 ,为寻找新的抗心律失常药物提供依据。方法 应用全细胞膜片钳技术记录哇巴因对大鼠心肌细胞动作电位时程 (APD)、内向整流钾电流 (Ik1 )、瞬时外向钾电流 (Ito)的作用。结果 ①哇巴因 5μmol/L使大鼠心室肌细胞动作电位时程从给药前的 86 .3ms± 2 5 .2ms(APD90 ) ,缩短至 58.9ms± 2 0 .8ms(n =5 ,P <0 .0 1 ,给药 1 0min) ;②哇巴因 5μmol/L可增加大鼠心室肌细胞内向整流钾电流 ,使Ik1 从 - 1 868pA± 1 88pA增加到 - 2 393pA± 367pA(刺激电压 - 1 2 0mV ,n=1 0 ,P <0 .0 1 ) ;③哇巴因 5μmol/L可增加大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流 ,使Ito从 1 2 73pA± 31 8pA增加到 1 70 7pA± 486pA(刺激电压 +60mV ,n =5 ,P <0 .0 1 )。结论 哇巴因诱发室性心律失常可能与它缩短心室肌细胞动作电位时程有关 ,而Ito的增加使二期平台期缩短 ,Ik1 的增加使三期复极加快 ,均参与了动作电位时程缩短的过程。同时增加Ik1 将影响静息膜电位 。

抗哇巴因鸡蛋黄IgY与兔抗体IgG在酶联免疫检测中的比较

目的:探讨提高内源性哇巴因(EO)检测方法的准确性及特异性,为哇巴因的研究打下基础。方法:分别制备出鸡蛋黄抗哇巴因多克隆抗体及兔抗体。然后采用酶联免疫吸附法(ELISA)比较两种抗体检测内源性哇巴因的准确性及特异性。结果:采用IgY检测EO的平均批内变异系数为2.03%,批间变异系数为2.34%。兔抗体IgG则分别为2.83%、3.29%;两者均与氢化可的松及地塞米松无交叉结合反应,与西地兰和地高辛分别存在3.45%vs5.95%、3.20%vs5.20%的交叉反应。结论:IgY比兔抗体ELISA检测内源性哇巴因的特异性及准确性较高。

槐果碱对哇巴因诱发豚鼠室性心律失常的影响

目的观察槐果碱的抗室性心律失常作用。方法将哇巴因诱发的室性心律失常豚鼠,分为对照组与不同剂量槐果碱组(5、2.5和1.25 mg·kg^(-1))。通过心电图仪连续观察记录室性早搏(室早)、室性心动过速(室速)、室扑、室颤及心脏停搏出现时间,计算哇巴因的累积量。结果槐果碱各组与对照组相比,仅5 mg·kg^(-1)组能增加出现室早、室速、室扑、室颤及心脏停搏的哇巴因累积量(P<0.01)。结论槐果碱对哇巴因诱发的豚鼠室性心律失常有一定的抑制作用,以5 mg·kg^(-1)的剂量为佳。

哇巴因对人血管内皮细胞死亡和钠泵α1、β1亚单位表达的影响

目的:研究钠泵抑制剂哇巴因(ouabain)对人血管内皮细胞死亡的影响及其作用机制。方法:以脐静脉内皮细胞系ECV304为靶细胞,应用MTT实验检测哇巴因对细胞生长的作用;采用Hoechst33342/PI双荧光染色、透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳等分析细胞死亡特征,半定量RT-PCR法检测钠泵α1和β1亚单位mRNA的表达。结果:哇巴因以浓度和作用时间依赖的方式抑制ECV304细胞生长。10μmol/L哇巴因作用24 h,引起细胞坏死;0.1μmol/L哇巴因作用24~48 h,细胞明显脱落,细胞间连接丧失,细胞出现染色质凝集、分布于核膜内缘、DNA裂解等凋亡特征。哇巴因能明显上调ECV304细胞钠泵α1亚单位mRNA的表达,下调β1亚单位mRNA表达,且两者均呈时间依赖性。结论:哇巴因能诱导人血管内皮细胞ECV304死亡,其上调钠泵α1亚单位表达、下调β1亚单位表达,可能与亚单位介导信号传递、降低细胞黏附有关。

哇巴因对血管内皮细胞ECV304细胞凋亡及胞内游离钙离子和活性氧浓度的影响

目的研究哇巴因(毒毛花苷G)对人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法哇巴因0.01,0.05,0.1,0.5,1和10μmol·L-1与ECV304细胞作用24,48和72h,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342/碘化丙锭双荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,激光共聚焦显微镜观察细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)和活性氧(ROS)浓度,逆转录PCR和Western印迹法检测胱天蛋白酶3mRNA和蛋白表达。结果哇巴因在0.01～10μmol·L-1浓度范围内与ECV304细胞分别作用24,48和72h,对细胞存活的抑制率明显增加,且呈浓度和时间依赖性,24,48和72h浓度-效应相关系数分别为0.984,0.994和0.997(P<0.05);哇巴因作用24,48和72h的IC50值分别为0.624,0.184和0.041μmol·L-1,时间-效应相关系数为0.974(P<0.05)。哇巴因0.1μmol·L-1与ECV304细胞作用24h,细胞凋亡百分率由正常对照组的(4.2±0.5)%升高到(26.0±3.2)%,作用48h,细胞凋亡率由(4.7±0.5)%升高到(36.5±5.3)%,差异有统计学意义(n=3,P<0.01);同时细胞出现染色质凝集。哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1分别与ECV304细胞作用12,24和36h,[Ca2+]i和ROS浓度呈浓度和时间依赖性增加,在哇巴因0.5μmol·L-1时[Ca2+]i和ROS浓度的时间-效应相关系数分别为0.912和0.924,作用36h时[Ca2+]i和ROS浓度的浓度-效应相关系数分别为0.889和0.907(P<0.05)。逆转录PCR和Western印迹法分析显示,哇巴因0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h后,胱天蛋白酶3mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h,胱天蛋白酶3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哇巴因可诱导人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡,其机制可能与增加[Ca2+]i和ROS浓度及胱天蛋白酶3表达有关。

哇巴因抗体对肾血管性高血压大鼠的降压作用

目的：探讨哇巴因抗体的降压作用及内源性哇巴因与高血压发病的关系。方法：给“一肾一夹（１Ｋ１Ｃ）”、“两肾一夹＋盐（２Ｋ１Ｃ－ｓａｌｔ）”及“两肾一夹（２Ｋ１Ｃ）”肾血管性高血压大鼠随机静注哇巴因抗体、硝普钠、正常免免疫球蛋白（ＩｇＧ）及生理盐水，颈动脉插管观察注射后３小时内大鼠血压的动态变化。结果：哇巴因抗体对“一肾一夹”、“两肾一夹＋盐”型高血压大鼠具有明显的降压作用，而对“两肾一夹”高血压鼠降压作用不明显。正常免免疫球蛋白对各种高血压模型均无降压作用。结论：哇巴因抗体对“一肾一夹”、“两肾一夹＋盐”型高血压大鼠具有降压作用，间接证明了内源性哇巴因可能是高血压的发病因素之一。

胆碱对乌头碱和哇巴因所诱发的心律失常的保护作用

目的探讨胆碱对乌头碱和哇巴因所诱发的心律失常的保护作用。方法大鼠和豚鼠分别注射乌头碱或哇巴因制备心律失常模型,观察预先给予低剂量(5 mg.kg-1)和高剂量(20 mg.kg-1)的胆碱对心律失常的保护作用。结果给予胆碱可明显对抗乌头碱或哇巴因所诱发的心律失常,表现为明显延迟心律失常的出现,推迟动物死亡时间等。高剂量胆碱对心律失常的保护作用优于低剂量。结论胆碱对心律失常具有保护作用,高剂量的作用优于低剂量。

环维黄杨星D与哇巴因等药合用对离体心肌收缩力的影响

环维黄杨星Ｄ（ＣＶＢ－Ｄ）１～１０μｍｏｌ／Ｌ和哇巴因合用后，离体豚鼠心肌收缩力增强，收缩和舒张时间缩短，平均收缩速度和舒张速度加快，最大反应增加。 ＣＶＢ－Ｄ１～１０ｕｍｏｌ／Ｌ增强异丙肾上腺素、去氧肾上腺素、组胺和 ＣａＣｌ２的正性肌力作用，使其量效曲线左移，最大反应增加。 ＣＶＢ－Ｄ能对抗维拉帕米和 Ａｃｈ５ｕｍｏｌ／Ｌ所致的负性肌力作用。结果表明，ＣＶＢ－Ｄ正性肌力作用的机理可能与 ａ、β和 Ｈ２－受体、电压依赖钙通道激动剂及哇巴因不同，而与促进心肌细胞外Ｃａ２＋内流和抑制内Ｋ＋外流有关。

哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡与胱冬酶-3及bcl-2基因家族的关系

本研究探讨哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡及其机制。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对Jurkat细胞生长的抑制作用,应用流式细胞术、原位末端标记技术(TUNEL)等观察细胞凋亡,应用Western-blot测定胱冬酶-3(caspase-3)的活性亚单位及Bcl-2、Bax蛋白表达水平,用比色法检测caspase-3活性。结果表明:哇巴因能诱导Jurkat细胞凋亡,在细胞凋亡过程中,Bax蛋白表达增加,caspase-3活性明显升高。结论:哇巴因可能通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达,从而激活caspase途径诱导Jurkat细胞凋亡。

MAPK信号通路参与哇巴因诱导Jurkat细胞的增殖

本研究目的是探讨哇巴因 (ouabain)对急性淋巴细胞白血病细胞株Jurkat的作用及机制。采用MTT、RT PCR、Westernblot等方法观察低浓度哇巴因对Jurkat细胞的作用 ,同时检测丝裂原活化蛋白激酶MAPK(ERK1 2 )的磷酸化程度及c myc基因的表达水平。结果表明 ,低浓度哇巴因 (<1× 10 - 7mol L)可以诱导Jurkat细胞增殖 ,其作用呈剂量及浓度依赖性 ;同时细胞内MAPK(ERK1 2 )磷酸化程度增强 ,并检测到c myc基因表达水平增高。结论 :哇巴因作用于细胞膜钠泵 ,激活了细胞内MAPK信号通路 ,从而促进Jurkat细胞增殖 ,其作用与c myc基因表达的调控有关。

牛磺酸镁对抗哇巴因诱发心律失常的实验研究

目的 观察新型配合物牛磺酸镁 (TMC)的整体抗心律失常作用。方法 对豚鼠颈静脉分别缓慢推注剂量为10 m g· kg- 1 、2 0 mg· kg- 1 和 4 0 mg· kg- 1 的 TMC,5 min后以 7.5 μg· 0 .2 5 ml· m in- 1 速度持续滴注 0 .0 0 3%哇巴因 ,观察不同剂量 TMC对哇巴因诱发的室性早博、室性心动过速、心室颤动和死亡时间以及相应的哇巴因累积用量的影响 ,并与 3mg· kg- 1 利多卡因进行比较。结果 TMC 2 0 mg· kg- 1 可减慢正常豚鼠心率 ,其作用与 3m g·kg- 1 利多卡因相当。 2 0 m g· kg- 1 、4 0 mg· kg- 1 的 TMC和 3mg· kg- 1 利多卡因可推迟哇巴因诱发的豚鼠室性心律失常的发生时间和延长哇巴因致死时间 ,哇巴因累积用量增加 ,以 2 0 mg· kg- 1 组作用最为显著。结论 TMC具有防治哇巴因诱发心律失常的作用。