PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达分析

为了探索PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达差异,试验随机选取6月龄健康的哈萨克绵羊雌雄各5只,进行屠宰,采集样本采用实时荧光定量PCR方法对PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官(脾脏、肺脏、胰腺、肾脏、心脏、肝脏、睾丸、卵巢、子宫)及淋巴组织(颈前淋巴、肩前淋巴、网胃淋巴、瓣胃淋巴、瘤胃淋巴、肠系淋巴、十二指肠淋巴、腹股沟淋巴、空肠淋巴和回盲淋巴)的表达规律进行研究。结果表明:哈萨克绵羊胰腺PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他器官(P<0.01),卵巢PLC-γ1基因的相对表达量显著高于肾脏和子宫(P<0.05),其余器官PLC-γ1基因相对表达量均差异不显著(P>0.05);十二指肠淋巴PLC-γ1基因的相对表达量显著高于瓣胃淋巴(P<0.05),瓣胃淋巴PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他淋巴组织(P<0.01)。说明PLC-γ1基因在哈萨克绵羊各系统器官和淋巴组织中均有表达,并且在胰腺、卵巢、十二指肠淋巴、瓣胃淋巴中的表达明显,对机体免疫、生殖和消化等方面具有重要作用。

哈萨克绵羊MC1R和ASIP基因多态性及表达量与被毛颜色表型相关性的研究

旨在探究黑色素皮质受体-1基因(MC1R)和刺鼠基因(ASIP)多态性及其mRNA的表达量与哈萨克绵羊被毛颜色之间的关系。本研究利用PCR-SSCP和DNA测序技术,对168只哈萨克绵羊(62只黑色被毛,56只白色被毛及50只棕色被毛)的MC1R和ASIP基因的多态性进行检测,并分析突变位点与不同毛色之间的相关性,同时利用实时定量PCR技术检测3种毛色皮肤组织中这2个基因的表达量,分析基因的表达量与不同毛色之间的相关性。结果显示,MC1R基因的多态位点(P.M73K)与被毛颜色极显著的相关(P<0.01);ASIP基因的多态位点与被毛颜色没有相关性(P>0.05)。实时定量PCR检测黑色被毛中MC1R基因的表达量与白色被毛中差异极显著(P<0.01),与棕色被毛差异显著(P<0.05),ASIP基因的表达量在不同颜色被毛中没有显著差异(P>0.05)。该研究初步表明,MC1R基因是影响哈萨克绵羊被毛颜色的主效基因。

蒙古绵羊和哈萨克绵羊MHC-DRB_3基因外显子2的多态性

采用PCR RFLP方法对蒙古绵羊和哈萨克绵羊MHC DRB3 基因第 2外显子 2 85bp的扩增产物进行多态性分析 ,共检测到 17种基因型 ,由A、B、C、D、E、F和H共 7个复等位基因控制。通过酶切图谱分析表明 ,蒙古绵羊和哈萨克绵羊的MHC DRB3 基因第 2外显子的第 15 4、16 8和 2 2 0位的碱基表现出多态性。统计分析表明 ,MHC DRB3 基因的部分基因型频率和等位基因频率在两个群体之间差异显著或极显著 (P <0 10、P <0 0 5或P <0 0 1)。χ2 适合性检验结果表明 ,蒙古绵羊和哈萨克绵羊的MHC DRB3 基因第 2外显子的HaeⅢ酶切位点均未达到Hardy Weinberg平衡状态 (P <0 0 1)。

哈萨克绵羊MHC-DRB1基因SSCP多态性与细粒棘球蚴病遗传抗性关联分析

目的研究新疆哈萨克绵羊MHC-DRB1基因多态性与细粒棘球蚴病遗传抗性之间的相关性。方法应用巢式PCR-SSCP对细粒棘球蚴病阳性和阴性各100只哈萨克绵羊的MHC-DRB1第2外显子进行多态性分析。结果试验结果共检测出15个等位基因和37种基因型。χ2适合性检验结果表明,哈萨克绵羊MHC-DRB1基因第2外显子的SSCP带型未达到Hardy-Weinberg平衡(P<0.01)。将细粒棘球蚴病阴性和阳性哈萨克绵羊的等位基因频率和基因型频率进行差异性显著检验和相对危险性估计(RR值估计)分析,发现等位基因H(P<0.01,RR=0.394)和F(P<0.01,RR=0.465)、基因型FF(P<0.05,0.352)和GH(P<0.05,RR=0.45)与细粒棘球蚴病的抗性具有较强的相关性;等位基因B(P<0.01,RR=14.5>4.1)和基因型GG(P<0.01,RR=13.5>4.1)与细粒棘球蚴病易感性具有很强的相关性,K(P<0.01,RR=3.76)和G(P<0.01,RR=3.395)与细粒棘球蚴病易感性具有较强的相关性,基因型KK(P<0.05,RR=3.996)与细粒棘球蚴病易感性具有较强的相关性。结论巢式PCR-SSCP方法证明了哈萨克绵羊MHC-DRB1基因第2外显子存在丰富的多态性,并初步筛选出了与包虫病抗性或易感性相关的等位基因与基因型。

乏情期新疆哈萨克绵羊血清中P_4、E_2、FSH和LH生殖激素变化规律分析

采用酶联免疫法(ELISA)测定孕酮(P4)、雌激素(E2)、促卵泡素(LH)和促黄体素(FSH)浓度,研究新疆哈萨克绵羊乏情期发情及不发情绵羊体内激素变化。结果表明:乏情期发情绵羊P4的含量显著低于不发情绵羊(P<0.05),发情绵羊E2、LH和FSH的含量显著高于不发情绵羊(P<0.05),且P4浓度变化趋势可以作为乏情期绵羊发情鉴定的手段。结果表明:乏情期发情绵羊P4的含量显著低于不发情绵羊(P<0.05),发情绵羊E2、LH和FSH的含量显著高于不发情绵羊(P<0.05),且P4浓度变化趋势可以作为乏情期绵羊发情鉴定的手段。

新疆哈萨克绵羊在乏情期和发情期生殖激素的变化规律

旨在通过检测乏情期和发情期的发情绵羊外周血液中4种重要生殖激素孕酮(P4)、雌激素(E2)、促卵泡素(LH)和促黄体素(FSH)浓度,解析绵羊乏情期和发情期哈萨克绵羊发情时生殖激素的变化规律,以期阐明哈萨克绵羊发情时生殖激素变化规律,为调控绵羊的季节性发情提高激素方面的理论。采用ELISA方法测定4种生殖激素浓度,结果表明:哈萨克绵羊P4和E2在发情周期内呈现波动式变化,LH和FSH在发情周期内呈现脉冲式变化,且乏情期和发情期4种激素浓度变化显著(P<0.05)。

基于转录组测序的哈萨克绵羊感染包虫病后小肠组织新转录本预测及分析

前期研究发现具有MHC-DRB1基因单倍型MvaⅠbc-SacⅡab-HinlⅠab的哈萨克绵羊对包虫病具有很强的抵抗能力,但具体机制尚不明确,推测可能与可变剪切形成的小肠组织新转录本具有密切关系,因此,本研究采用PCR-RFLP方法从290只哈萨克绵羊中选择抗病和非抗病个体,分为抗性组(A租)、非抗性组(B组)和空白对照组(C组)。其中A组和B组人工感染包虫病一定时间后,与C组同时宰杀,分别取小肠组织进行Illumina转录组测序,测序结果通过荧光实时定量实验验证后,利用生物信息学方法对各组的新转录本进行预测和分析。结果显示:qRT-PCR验证实验表明转录组测序结果可信度较高,通过生物信息学方法分别从A、B和C组样本中预测出1393、1260、1097个,共计3750个新转录本。转录本所含外显子数与其生物功能多样性具有密切联系,研究发现3个组样品中含有2个以上外显子的新转录本占34.64%(1299个)。研究发现哈萨克绵羊感染包虫病后小肠组织新转录本显著增多,与C组相比A组和B组分别增加了26.98%和14.86%。KEGG Pathway富集分析结果表明,新转录本所对应的差异表达基因被富集到了自然杀伤细胞介导的细胞毒性通路、细胞色素C-P450介导的外源性化学物质代谢途径和视黄醇代谢途径等代谢通路上。结论:研究发现哈萨克绵羊感染包虫病后,不同MHC-DBR1基因型个体的小肠组织中存在大量新转录本,可能与个体抗病性存在相关性。本研究为探讨哈萨克绵羊分子抗病机制和挖掘遗传育种标记提供了新的思路和理论依据。

哈萨克绵羊MHC-DRB基因位点的多态性分析

本文运用ＰＣＲ—ＲＦＬＰ方法对哈萨克绵羊ＭＨＣ—ＤＲＢ基因位点的第二个外显子进行了多态性研究，结果表明，其扩增产物的ＴａｑⅠ，ＰｓｔⅠ和ＨａｅⅢ酶切结果分别出现了３，３和１４种基因型；共检测到２４种等位基因，并对其基因频率进行了初步分析。

哈萨克绵羊肝包虫病B超诊断和病理组织学观察

本研究应用便携式兽用B超仪对患肝包虫的哈萨克绵羊进行了扫查,分析了包囊型和钙化型肝包虫典型病例的声像图,对部分患羊屠宰后的肝脏组织进行了剖解验证,并采样做常规切片进行了病理组织学观察。结果表明,哈萨克绵羊应用B超诊断这2种类型肝包虫具有很高的符合率,因此,应用B超诊断哈萨克绵羊患肝包虫具有可行性。

细粒棘球蚴侵染哈萨克绵羊早期血清IgE、IgM的变化规律研究

为探讨细粒棘球蚴侵染哈萨克绵羊早期血清IgE、IgM的变化规律,对每只哈萨克绵羊人工口服包虫虫卵约10000~15000枚,共6只。在喂服前0h、喂服后6h、8h、10h颈静脉采血。应用ELISA方法检测绵羊血清中IgE、IgM水平。结果表明,血清中IgE在喂服后各时间段逐渐升高,但与喂服前(0h)比极显著下降(P<0.01);血清中IgM在喂服后各时间段与喂服前(0h)相比均显著升高(P<0.01),喂服后各时间段之间无显著变化。提示哈萨克绵羊在感染细粒棘球蚴早期过程中血清IgE升高、IgM降低这一变化规律可为临床上诊断该病提供一定的理论依据。

两种MHC-DRB1单倍型哈萨克绵羊细粒棘球六钩蚴侵染期小肠消减文库的构建

为了分离两种MHC-DRB1单倍型哈萨克绵羊个体在细粒棘球六钩蚴侵染期小肠组织的差异表达基因,试验在实验室前期采用PCR-RFLP方法筛选获得这两种MHC-DRB1单倍型(包虫病抗性相关的MHC-DRB1MvaIbc-SacIIab-Hin1Iab单倍型和包虫病非抗性相关的MHC-DRB1 MvaIbb-SacIIaa-Hin1Iaa单倍型)的基础上,采用抑制性消减杂交技术构建了以非抗性相关哈萨克绵羊六钩蚴侵染期小肠cDNA为实验方(Tester),抗性相关哈萨克绵羊六钩蚴侵染期小肠cDNA为消减方(Driver)的消减文库。结果显示:以内参基因GAPDH为指标,检测文库的消减效率为215倍;从文库中随机挑选98个阳性克隆进行了PCR检测,显示插入片段的大小分布于150～1000bp。结论:消减文库的构建成功,为进一步分离和鉴定相关的差异表达基因,探讨包虫病抗性相关MHC-DRB1单倍型哈萨克绵羊抵抗六钩蚴侵染的分子作用机制奠定了研究基础。

左旋肉碱对哈萨克绵羊激素的影响

本试验通过对哈萨克绵羊外源性添加L-肉碱(左旋肉碱),观察哈萨克绵羊发情行为变化,分析添加L-肉碱对哈萨克绵羊激素的影响,试验选用16只1周岁哈萨克绵羊,将试验羊群随机分成2组:实验组与对照组,每组8只哈萨克绵羊(1岁)。实验组在精料(200 g)中添加肉碱(每只羊75 mg/kg),对照组只饲喂精料(200 g),每天采集血样并分离血清保存,测定激素变化。结果表明:饲料中添加的L-肉碱间接地影响了绵羊体内MLT (褪黑素);E2 (雌二醇);FSH (促卵泡素);LH (促黄体生成素);P4 (孕激素)的分泌量并在绵羊繁殖方面产生了重要影响。

新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类基因第二、三外显子序列多态性分析

为研究新疆中国哈萨克绵羊主要组织性抗原复合体Ⅰ类基因第二、三外显子的序列多态性,采用PCR和测序的方法对新疆伊犁地区36只哈萨克绵羊MHCⅠ类基因第二、三外显子进行了扩增和测序,并对序列进行了生物信息学分析。结果表明:哈萨克绵羊MHCⅠ类基因第二、三外显子序列具有丰富的多态性,碱基组成具有一定的不平衡性,并且经过了自然选择的作用,与数据库中牛的序列的进化分析显示了跨物种多态性。实验数据为深入研究绵羊MHCⅠ类基因的多态性及绵羊抗病新品种的选育提供理论依据。

哈萨克绵羊肝包虫病的B超图像分析与诊断

为提高绵羊肝包虫病诊断的准确率,了解包虫病转归过程和各个包囊类型的发展状况,探讨适合的治疗方案,同时也为临床诊断、流行病学调查以及相关研究提供参考依据,本研究采用B超技术对塔城地区新疆兵团农九师165团的206只哈萨克绵羊进行肝包虫病的群体检查,参考WHO-IWGE提出的囊型包虫病B超影像学分型标准进行B超图像分析,并对部分可疑囊型病灶和将犬小肠中收集分离得到的细粒棘球绦虫口服进行人工感染的7只哈萨克绵羊,结合ELISA和DIGFA辅助方法进一步进行诊断。结果发现,该绵羊群体患有肝包虫病羊58例,阳性率28.16%。阳性绵羊进行B超图像分型,其中CL型19例(占32.75%)、CE1型21例(占36.20%)、CE2型2例(占3.44%)、CE3型7例(占12.06%)、CE4型1例(占1.72%)、CE5型8例(占13.79%)。在7只羊的辅助检测中ELISA在包囊CE3型期出现阳性;DIGFA在包囊CE1型期出现阳性。结果表明,绵羊肝包虫诊断首选方法为B超,B超声像图分型分析可以参考WHO-IWGE提出的人囊型包虫病B超影像学分型标准,辅助诊断方法中DIGFA在早期诊断上比ELISA具有优势。

哈萨克绵羊DRB1基因外显子1和4多态性与布鲁氏菌病的相关性研究

试验旨在对哈萨克绵羊DRB1基因外显子1和4多态性与布鲁氏菌病的相关性进行研究。使用虎红平板凝集试验(RBPT)对试羊的血清进行血清学检测,参考GenBank中绵羊MHC ClassⅡ区DRB1基因序列(登录号:NC_040271.1),对其外显子1和4片段设计引物,采用PCR-SSCP和DNA测序技术对230只哈萨克绵羊的DRB1基因进行多态性检测,分析其多态位点与哈萨克绵羊布鲁氏菌易感性之间的关系。RBPT检测发现66只哈萨克绵羊为布鲁氏菌感染阳性,阳性检出率为28.7%。外显子1片段存在一个SNP位点(F1-G22A),测序确定两种基因型(GG、GA),优势等位基因和基因型分别为G、GG,F1-G22A多态位点的易感基因型为GA。卡方检验表明,哈萨克绵羊DRB1基因F1-G22A多态位点与布鲁氏菌易感性的相关性不显著(P>0.05)。通过生物信息学在线软件分析得出,F1-G22A多态位点导致了RNA二级结构的改变和最小自由能的降低,引起了蛋白质二级结构的改变。DRB1基因外显子4片段未发现SNPs。由此得出,哈萨克绵羊DRB1基因F1-G22A多态位点与布鲁氏菌易感性可能存在一定的相关性。

新疆哈萨克绵羊MHC Ⅰ类分子基因的克隆与生物信息学分析

为了研究新疆哈萨克绵羊主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子基因序列的多态性,采用PCR和测序的方法分别克隆新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因重链和轻链的c DNA全长,并进行生物信息学分析。结果表明:成功扩增出新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因重链、轻链,大小分别为1 107 bp、357 bp;通过生物信息学软件预测蛋白质分子质量分别为90 ku和29.694 ku;等电点(p I)分别为5.00,5.23;重链富含G、C碱基,有两段跨膜螺旋,最大疏水指数为3.622,最小疏水指数为-2.922,预测整条肽链表现为亲水性,在1~84位碱基之间存在信号肽;轻链四种碱基含量基本一致,也有两段跨膜螺旋,在1~63位碱基之间存在信号肽。新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因编码蛋白质的二级结构以无规则卷曲元件的含量最高,该蛋白质的三级结构由一条α链,另一条为β链通过非共价键组成,由α1、α2组成抗原结合槽;NCBI数据库中不同地区的哈萨克绵羊的MHCⅠ类分子基因的同源性在89.87%~99.91%之间,与数据库中牛的MHCⅠ类分子基因同源性达到了98.88%,轻链MHCⅠ类分子基因还与猪和人的同源性相对较高。

Slc7a11基因在不同被毛颜色哈萨克羊皮肤组织中的表达分析

Slc7a11基因属于溶质转运家族,编码胱氨酸/谷氨酸xCT转运载体,经证实该基因调控黑色素与伪黑色素的转换。文章利用实时荧光定量PCR技术分析Slc7a11基因在3种不同毛色哈萨克绵羊羔羊皮肤组织中的mRNA转录水平,构建原核表达载体,诱导表达融合蛋白,并对包涵体蛋白进行纯化,免疫新西兰大白兔制备抗血清,最后检测不同毛色皮肤中该蛋白的表达水平。结果表明,Slc7a11基因在3种毛色皮肤中的表达水平有显著差异,棕色被毛皮肤中表达水平最高,其次是黑色,在白色中表达最少。利用纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,发现sxCT蛋白在棕色被毛中表达最高,其次是黑色,白色最低,因此,Slc7a11基因可能与哈萨克绵羊毛色表型有相关性。

TYR基因多态性与哈萨克羊毛色相关的研究

采集新疆伊犁哈萨克自治州特克斯县4种不同被毛颜色2~3周岁的216只哈萨克母羊血样,其中黑色被毛羊51只,棕色被毛羊50只,青灰色59只,白色被毛羊56只。运用PCR-SSCP及测序方法对TYR基因多态性及其对哈萨克羊毛色的影响进行分析。结果表明,TYR基因存在3种基因型：AA、AB和BC型。在白色和青灰色被毛群体中,AB基因型为优势基因型。在棕色和黑色被毛群体中,AA基因型为优势基因型。在此群体中A等位基因为4种毛色的优势等位基因。经χ2检验,TYR基因的基因型频率在4种毛色羊中的分布差异不显著（P〉0.05）。

MC1R与Slc7a11基因多态性与哈萨克羊毛色相关的研究

本研究采集新疆伊犁哈萨克自治州特克斯县4种不同被毛颜色2~3周岁的220只哈萨克母羊血样用于提取DNA,其中黑色被毛羊52只,棕色被毛羊52只,青灰色被毛羊59只,白色被毛羊57只;并采集绵羊左侧肩胛皮肤样本,每种毛色各10个,用于组织形态学观察。本研究运用PCR-SSCP技术及测序技术对MC1R基因及Slc7a11基因多态性及其对哈萨克羊毛色的影响进行研究。运用皮肤样本制作切片用于不同毛色组织形态学观察。结果表明:MC1R基因突变位点在白色和棕色被毛群体中,只存在BB基因型;而在黑色和青灰色被毛群体中,存在AA、AB和BB 3种基因型;且AB基因型均为优势基因型,A等位基因为优势等位基因。由组织形态学观察可知,黑色和青灰色被毛组织毛囊分布极为相似,毛囊分布稀疏且皮脂腺发达;棕色被毛最具特色,毛囊丛分布明显,皮脂腺分布不发达;白色被毛毛囊分布最为密集,且皮脂腺分布密集并且最为发达。经χ~2检验,MC1R基因的基因型频率在4种毛色羊中的分布差异极显著(P<0.01)。Slc7a11基因位点在伊犁哈萨克羊群体中发现其不存在多态性。

应用外源生殖激素对细毛羊和哈萨克羊进行反季节受胎对比试验

养羊业在新疆畜牧业经济中占有主要位置,因新疆的绵羊品种基本上是季节性多次发情的品种,它对外源激素的效应不太敏感,遗传性能比较稳定的土种本地品种羊,数量比较多,所以养羊生产受季节性限制,同时影响新疆养羊业经济收入。满足不了畜产品种市场的全年需求,制约着养羊业高效发展。为探索应用激素调控绵羊繁殖生产,诱导绵羊非繁殖季节发情配种,挑选细毛羊和部分土种羊经产母羊共计187只,分成两组,第Ⅰ组157只细毛羊和Ⅱ组30只哈萨克羊,用外源促性腺激素进行诱导发情处理,结果Ⅰ组产羔率达到了32.48%,比Ⅱ组的6.67%高出25.81个百分点,P<0.01,研究表明应用外源生殖激素对细毛羊在非繁殖季节实施诱导发情是可行的,但是哈萨克羊对外源促性腺激素的应答没有细毛羊敏感。