流感病毒感染后小鼠嗅感觉神经元的凋亡与再生

目的 研究病毒感染后小鼠嗅感觉神经元的凋亡和再生 ,探讨病毒感染后嗅觉障碍 (PVOD)的发病机制。方法 经前鼻孔接种流感病毒 ,感染实验动物的鼻腔 ;TUNEL技术检测嗅感觉神经元凋亡 ;BrdU掺入单克隆抗体标记技术检测基底细胞增殖。结果 ①流感病毒感染后嗅感觉神经元凋亡显著增多 ,恢复期凋亡细胞逐渐减少。②基底细胞增殖早期有所增多 ,随后减少至和凋亡细胞相当的水平。结论 流感病毒感染可有效地诱导嗅感觉神经元凋亡 ,并促进基底细胞增殖 ;基底细胞增殖不足以补充嗅感觉神经元凋亡 ,导致嗅感觉神经元总数减少。

影响嗅感觉神经元再生的相关因素的研究进展

成年哺乳动物的神经系统内，许多神经元只在一定时期内分化，且受损后不能再生。嗅感觉神经元（Olfactory receptor neurons，ORNs）是特有的终身维持自我更新能力的神经元。同时也是唯一暴露在外界环境中的神经元，容易受到外界环境的损伤，例如：病毒感染、颅底外伤、化学毒素、炎症刺激等等，从而导致嗅觉障碍。因此了解嗅感觉神经元的发生、发育和受损后的再生是治疗嗅觉障碍的理论基础。

嗅感觉神经元的凋亡

与其它神经元不同,成年哺乳动物的嗅感觉神经元(Olfactory Receptor Neuron,ORN)有自发、持续更新的能力。1996年Murrell等报道成年人的嗅上皮仍保持神经再生和分化能力。ORN这种神经再生和更新的特殊性引起了神经科学和耳鼻喉科学者的广泛关注,他们通过各种方式研究ORN死亡和再生规律,并从不同水平探索再生机制。目前认为,

嗅感觉神经元环核苷酸门控通道研究

环核苷酸门控通道在嗅感觉神经元的信号转导过程中起着重要的作用。随着分子生物学和膜片钳技术的发展,对环核苷酸门控通道的研究有了很大进展。本文就该通道在嗅感觉细胞内的功能、通道的结构、离子选择性及其药理、生理意义等方面作一综述。

秋水仙素对嗅感觉神经元分化过程中β-Ⅲtubulin的作用研究

目的探讨秋水仙素对在嗅感觉神经元分化增生过程中β-Ⅲtubulin的作用。方法孕鼠30只,随机分为秋水仙素组和正常组各15只。秋水仙素组E0.5d起每日尾静脉注射秋水仙素(0.1mg/kg),对照组每日予等量生理盐水尾静脉注射。通过双重免疫荧光检测,分别观察E9.5d、E11.5d、E14.5d、E17.5d胎鼠嗅上皮在分化过程中的形态变化,以及实时定量PCR方法检测嗅标志蛋白含量改变。结果秋水仙素处理后,不同发育时期胎鼠β-Ⅲtubulin及嗅标志蛋白表达均较同时期对照组明显减弱,且实时定量PCR检测嗅标志蛋白含量减低。结论秋水仙素作用于β-Ⅲtubulin蛋白,阻碍了嗅感觉神经元的发育与成熟。

嗅神经切断对小鼠嗅感觉神经元的影响

目的分析嗅神经切断对小鼠嗅感觉神经元(olfactory receptor neurons,ORN)凋亡情况的影响,并探讨这一造模方法的可靠性。方法取2月龄C57小鼠33只,随机分组后,实验组小鼠行嗅神经切断术,通过辣根过氧化物酶(horseradis hperoxidase,HRP)顺行神经示踪验证造模成功与否。以脱氧核苷酸转移酶介导的生物素dUTP缺口末端标记技术(TdTmediat edde xyurid inetriphos phate biotinnic kendlabelling,TUNEL)观察术后8h、2d、3d和5d嗅上皮中ORN的凋亡情况,同时在蛋白和mRNA水平观察成熟ORN的特异性标记蛋白———嗅标记蛋白(olfactorymarkerprotein,OMP)在嗅上皮中的表达情况。结果嗅神经切断术后嗅球中无HRP标记。TUNEL和OMP阳性反应发生于ORN,嗅神经切断术后TUNEL阳性细胞数显著增多,并于术后第2天达到高峰,与此同时OMPmRNA的表达水平开始显著下降,并在术后第5天降至更低,嗅上皮的厚度也相应变薄。结论本实验所采取的造模方法可以较可靠地切断小鼠的嗅神经,并造成小鼠嗅上皮中ORN的同步凋亡。

镧对仔鼠嗅感觉神经元超微结构和嗅功能的影响

目的观察发育期氯化镧暴露对仔鼠嗅感觉神经元超微结构及嗅功能的影响。方法将24只健康8周龄清洁级妊娠2 d的Wistar大鼠按体重随机分为3组,分别为对照(蒸馏水)组和低(2.5 g/L)、高浓度(5.0 g/L)氯化镧染毒组,每组8只。采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒50 d。仔鼠出生4 d后,统计仔鼠存活数和性别情况,并计算生存率和雌雄比;并开始观察并记录仔鼠体重。仔鼠出生后25～27 d,采用嗅觉行为学方法(埋藏食物小球试验)检测嗅觉功能;于出生后28 d,采用透射电镜技术观察仔鼠嗅上皮嗅感觉神经元超微结构并测定嗅球镧含量。结果各组仔鼠体重、生存率、性别比间比较,差异均无统计学意义。与对照组比较,各氯化镧染毒组仔鼠寻找食物所需时间较长,嗅球镧含量较高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着氯化镧染毒浓度的升高,仔鼠寻找食物所需时间均呈延长趋势,嗅球镧含量呈上升趋势。但所有测试均未出现超出400 s以上的情况。另外,随着测试天数的增加,仔鼠寻找食物的时间均呈逐渐缩短的趋势。病理学观察结果显示,氯化镧染毒可造成仔鼠出生后嗅感觉神经元隆起增大,形状不规则,部分与嗅上皮表面分离,且顶端的纤毛数减少。结论氯化镧可损伤子代大鼠的嗅觉功能,这可能与镧损害嗅上皮嗅感觉神经元的超微结构有关。

二甲胺四环素对嗅感觉神经元凋亡的保护作用

目的:观察二甲胺四环素对慢性鼻窦炎大鼠嗅感觉神经元(OSNs)凋亡的保护作用。方法:将大鼠随机分为对照组(A组)、鼻窦炎造模组(B组)和鼻窦炎加二甲胺四环素组(C组),于不同时间取材,用苏木精-伊红染色观察嗅上皮厚度及上颌窦黏膜病理变化,用免疫组织化学染色检测Caspase-3表达阳性细胞。结果:苏木精-伊红染色镜检发现上颌窦黏膜病理学改变:A组明显轻于B组和C组,B、C两组嗅上皮厚度差异有统计学意义(P<0.05),免疫组织化学镜检发现B、C两组Caspase-3阳性细胞表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:二甲胺四环素能抑制鼻窦炎大鼠模型Caspase-3的表达,可能成为治疗嗅觉障碍的有效药物。

慢性鼻窦炎嗅感觉神经元凋亡

目的探讨慢性鼻窦炎患者嗅觉障碍的病因。方法用嗅感觉神经元标记蛋白抗体(Anti-OMP)标记慢性鼻窦炎患者(A组)及正常人(B组)嗅黏膜中成熟嗅感觉神经元,荧光显微镜观察并计数;用TUNEL法检测细胞凋亡现象。结果B组单视野嗅黏膜OMP阳性细胞数为(20.75±10.05)个,明显多于A组的(4.38±2.41)个(P<0.05);B组OMP阳性细胞中TUNEL阳性细胞数为(0.38±0.52)个,明显少于A组的(3.88±2.47)个(P<0.05)。结论慢性鼻窦炎患者嗅觉障碍可能与成熟嗅感觉神经元细胞凋亡有关。

人腺样体间充质干细胞向嗅感觉神经元诱导分化的体外研究

目的探讨体外分离和培养人腺样体组织来源的间充质干细胞(adenoid-derived mesenchymal stem cells,aMSCs)的可行性,并诱导观察aMSCs向嗅感觉神经元的分化。方法收集2020年9—11月来源于中南大学湘雅二医院腺样体肥大患儿的手术切除腺样体组织,胰蛋白酶消化联合贴壁法培养P0细胞,传代培养,流式细胞技术检测P5代细胞表面抗原CD45、CD73、CD90的表达,观察成骨、成脂诱导分化能力。采用维甲酸(retinoic acid,RA)、音猬因子(sonic hedgehog,SHH)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),以及RA+SHH、RA+bFGF、SHH+bFGF和RA+SHH+bFGF分别诱导分化P5代aMSCs,倒置显微镜下观察细胞形态,免疫荧光抗体法检测细胞表面感觉神经元标志物β-tubulin 3、嗅感觉神经元标志物生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP43)和嗅标记蛋白(olfactory maker protein,OMP)的表达。采用两个样本率的四格表资料的χ2检验比较表达强度的差异。结果P0代aMSCs具有良好的贴壁和增殖性能,P2代细胞已基本纯化。P5代细胞阳性表达CD73和CD90,其纯度分别为99.3%和97.75%,不表达CD45,成骨和成脂诱导分化良好。RA、SHH、bFGF诱导分化细胞均成神经元样外观,β-tubulin 3阳性表达;bFGF+SHH组和RA+SHH+bFGF组诱导细胞均表达GAP43,后组表达阳性更强(χ^(2)=17.48,P<0.005);所有诱导组均未见OMP阳性表达。结论腺样体组织可培养获得能稳定传代、具有良好分化能力的aMSCs。aMSCs是间充质干细胞家族新成员,具有向神经元分化的能力,RA、SHH和bFGF体外联合诱导能促使其分化为未成熟嗅感觉神经元。

嗅感觉神经细胞体外培养的历史回顾和研究进展

嗅觉系统是一个非常特殊的感觉系统，嗅感觉神经元不经换元赢接进入中枢神经系统，具有终生不断更新和再生的能力，它的这种特性引起相关学者的广泛关注。许多学者通过动物实验和人体鼻腔粘膜活检，成功对嗅感觉神经细胞进行了体外培养。嗅感觉神经细胞成功的体外分离和培养，是在体外和急性分离嗅感觉神经细胞研究的一个重要补充，为治疗嗅觉障碍带来了成功的曙光，且有利于中枢神经系统功能障碍的研究和治疗。

嗅神经元死亡和再生动物模型的研究

目的 采用摘除单侧嗅球的方法建立嗅神经元死亡和再生的动物模型，观察同侧嗅上皮病理改变以证实动物模型建立的可靠性。方法 摘除SD大鼠左侧嗅球，观察术后3、7、15和30天同侧嗅上皮病理改变，并以上皮厚度和神经特异性烯醇酶(NsE)免疫组化染色作为死亡和再生程度的观察指标。对侧嗅上皮作为对照。结果 嗅球摘除后嗅神经元出现变性和死亡。至术后7天上皮中嗅神经元几乎消失。术后15天可见球基细胞有丝分裂相。术后15～30天球基细胞渐分化为新生神经元。术后30天再生嗅上皮厚度达到对照组的88．31±9．4％；NsE免疫组化染色也较对照组弱。结论 大鼠摘除嗅球后嗅神经元出现变性、死亡和再生，其造模方法可靠，为研究嗅神经元特殊的神经再生性奠定了动物模型基础。

嗅神经切断术后白血病抑制因子在嗅上皮中的表达

目的分析白血病抑制因子(leukemiainhibi-toryfactor,LIF)与嗅感觉神经元(olfactoryreceptorneurons,ORNs)再生的关系。方法建立嗅神经切断的小鼠动物模型,在术后8小时、2天、3天和5天分别通过免疫组化和相对半定量RT-PCR的方法,在蛋白和mRNA水平观察LIF及其特异性受体LIF-R在嗅上皮中的表达情况。结果LIF和LIF-R的表达都是在术后8小时迅速、一过性地上升,随后又迅速恢复至对照组水平。LIF由残留的ORNs表达,LIF-R则由基底细胞和嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)表达。结论LIF是在ORNs凋亡再生机制中较早表达的一种细胞因子,凋亡中的ORNs产生并分泌的LIF作用于基底细胞和嗅鞘细胞,从而启动调节ORNs再生的一系列分子机制。

单鼻腔通气障碍小鼠模型嗅黏膜的组织学变化

目的建立单鼻腔通气障碍的小鼠动物模型,并观察其嗅黏膜的组织学变化情况。方法取刚出生的昆明小鼠只,显微镜下缝合小鼠左侧前鼻孔。在刚出生,出生后2周、4周、6周时分别取5只小鼠头部制成石蜡冠状位切片。以嗅标记蛋白(OMP)特异抗体对切片行免疫组织化学染色,对比观察小鼠两侧鼻腔嗅黏膜的厚度和嗅标记蛋白表达强度。结果刚出生时小鼠两侧鼻腔嗅黏膜厚度、嗅标记蛋白表达强度大致相同(P>0.05)。第2周时,左侧鼻腔嗅黏膜略薄、嗅标记蛋白表达强度略低,但差异不显著(P>0.05)。第4周时,这种差异变得显著(P<0.05)。第6周时,这种差异变得非常显著(P<0.01)。结论显微镜下缝合小鼠前鼻孔,可以作为构建单鼻腔通气障碍小鼠动物模型的可靠方法。鼻腔通气障碍单一因素即可以使嗅黏膜萎缩,成熟嗅感觉神经元的数量明显下降。

β-Ⅲ微管蛋白和嗅标志蛋白在不同胎龄胎鼠嗅上皮中的表达

目的探讨β-Ⅲ微管蛋白(tubulin)和嗅标志蛋白(olfactory marker protein,OMP)在小鼠胚胎不同时期嗅上皮中的表达。方法采用免疫组化染色进行嗅感觉神经元(olfactory receptor neurons,ORNs)细胞计数,观察E9.5天、E11.5天、E14.5天、E17.5天胎鼠及新生鼠β-Ⅲtubuin和OMP在嗅上皮中的表达变化。结果在小鼠E9.5天胚胎嗅基板中,即可见到许多β-Ⅲtubulin染色阳性细胞,表达持续经过嗅泡、嗅囊等发育阶段,至小鼠出生均有表达,且表达逐渐增强。到胚胎E14.5天,OMP阳性的成熟ORNs开始出现,至出生嗅上皮全层几乎均见OMP阳性染色,但均少于同胎龄β-Ⅲtubulin的阳性表达,P<0.05。结论小鼠胚胎E14.5天的嗅上皮中已有大量ORNs细胞,并有部分发育成熟,随胎龄的增大,成熟的ORNs逐渐增多,到出生嗅器官已基本发育成熟。

糖皮质激素对嗅上皮再生的影响

嗅觉是一种复杂的感觉系统,嗅上皮(OE)中的嗅觉神经元能够感受气味分子并传递嗅觉信号。OE具有强大的自我修复和再生功能,即使在神经元大量死亡的情况下亦可快速再生修复缺损。OE的再生速度及嗅觉功能恢复的程度取决于病变性质(如创伤、化学损伤、感染、炎症等)。糖皮质激素(如地塞米松)常规用于治疗慢性鼻窦炎等上呼吸道炎症,旨在最小化炎症损伤及改善鼻腔嗅觉障碍,新的证据表明这些药物可能会损伤OE的再生能力。本文讨论糖皮质激素对OE再生的影响及其可能的作用机制,为减轻其副作用提出新的诊疗方案。

小鼠鼻甲腹侧区的气味编码

目的研究位于嗅觉鼻甲腹侧区的一种新的气味编码模式。方法通过钙成像来显示嗅觉鼻甲腹侧区域上的单个嗅感觉神经元对不同气味的反应,并分析这些产生响应的细胞。结果细胞外钙离子浓度对响应的发生至关重要,不同气味诱发的钙响应与气味呈剂量依赖性。结论直链长度,环状结构和立体构型是影响鼻甲腹侧区域识别气味的三个重要因素。嗅觉鼻甲腹侧区域存在一种新的气味编码模式。

凋亡相关基因Bcl-2和bax及iNOS在流感病毒感染后小鼠嗅上皮的表达

目的:研究凋亡相关基因Bcl-2、bax和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在流感病毒感染后小鼠嗅上皮的表达,探讨其对嗅感觉神经元凋亡的调节作用。方法:采用半定量RT-PCR法检测流感病毒感染后小鼠嗅上皮Bcl-2、bax和iNOS的mRNA表达水平。结果:流感病毒感染后:①嗅上皮表达Bcl-2mRNA相对恒定;②嗅上皮表达baxmRNA早期显著增加,恢复期逐渐回落;③嗅上皮表达iNOSmRNA在一段较短的时期内显著增加,1周后逐渐下降至不可测水平。结论:凋亡相关基因Bcl-2、bax和iNOS可能在流感病毒感染所致的嗅感觉神经元凋亡中起重要的调节作用。