FAC对小鼠嗅球小胶质细胞和星形胶质细胞的影响

目的 探究经鼻给予枸橼酸铁铵(FAC)对小鼠嗅觉及嗅球(OB)中小胶质细胞和星形胶质细胞的影响。方法 取健康雄性8周龄C57BL/6小鼠20只,随机分成对照组和FAC组,每组10只。FAC组小鼠按照200 mg/kg体质量双侧鼻孔交替滴入FAC溶液,对照组给予等体积生理盐水,两组均隔天滴1次,共2周。2周后测试小鼠嗅觉功能,采用免疫荧光染色方法观察经鼻给铁对OB中小胶质细胞和星形胶质细胞的影响。结果 与对照组相比,FAC组小鼠出现明显的嗅觉障碍,差异有统计学意义(t=9.57,P<0.05);FAC组小鼠OB的质量明显降低,差异有统计学意义(t=10.50,P<0.05);FAC组小鼠OB中激活的小胶质细胞和星形胶质细胞明显增多,差异有统计学意义(t=5.07、4.83,P<0.05)。结论 经鼻给FAC能够引起嗅觉障碍,造成OB损伤以及小胶质细胞和星形胶质细胞激活。

脑磁共振成像嗅沟与嗅球测量分析

目的对嗅觉正常成年男性嗅沟深度(olfactory sulcus depth,OSD)与嗅球体积(olfactory bulb volume,OBV)进行测量与分析,探讨其二者相关性。方法选取40例男性受试者(为了除外性别差异),并在嗅觉检测正常之后立即进行脑结构磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI),在冠状T2加权脑MR图像上进行OSD测量,应用箱框法(box-frame method,BF)测量OBV,进行统计学分析。结果男性左侧平均嗅沟深度(OSD-L)1.28 cm,右侧平均嗅沟深度(OSD-R)1.39 cm,左侧平均嗅球体积(OBV-L)21.1 mm^(3),右侧平均嗅球体积(OBV-R)23.7 mm^(3),左侧嗅沟深度(OSD-L)与右侧嗅球体积(OBV-R)相关(t=0.350,P<0.05),右侧嗅沟深度(OSD-R)与右侧嗅球体积(OBV-R)相关(t=0.525,P<0.05),左侧嗅沟深度(OSD-L)与右侧嗅沟深度(OSD-R)相关(t=0.777,P<0.05),左侧嗅球体积(OBV-L)与右侧嗅球体积(OBV-R)相关(t=0.739,P<0.05)。结论嗅觉结构优势是从儿童到成人的发育过程中形成,随年龄增长逐渐出现优势偏向。右侧嗅球在嗅觉传入及中枢传出离心神经的联系上可能与双侧嗅沟存在联系。

Sniffin' Sticks嗅觉检测、嗅球体积测量对原发性震颤与帕金森病的鉴别诊断分析

帕金森病和原发性震颤均是常见的运动障碍性疾病,前者以静止性震颤为主要特征,与原发性震颤的主要表现较为相似,早期鉴别存在难度,容易误诊,贻误病情^([1-2])。因此,临床急需能够简单、准确区分两种疾病的定量诊断工具。随着对帕金森病非运动症状的探索,发现帕金森病患者普遍存在嗅觉减退,且出现时间早于震颤及其他运动症状,有一定预警作用^([3])。对此推测评估患者嗅觉功能,可能有助于早期发现并诊断帕金森病。嗅觉评估方法主要分为两类,一类是主观检查,如Sniffin'Sticks嗅觉测试;另一类是影像学检查,如测量嗅球体积(olfactory bulb volume,OBV)^([4])。

大鼠嗅球成鞘细胞的分离、培养与鉴定

目的 探讨大鼠嗅球成鞘细胞 (Olfactoryensheatingcells ,OECs)分离与培养的方法。方法 无菌条件下嗅球置于少量人工脑脊液中 ,用眼科镊子直接将嗅球撕烂、挤压 ,得片状组织块 ,胰酶消化 ,吹打 ,细胞悬液进行培养。结果 本方法分离、培养的OECs具有双极或多极突起 ,且突起十分细长 ,神经生长因子受体和胶质纤维酸性蛋白免疫组化呈阳性。结论 该方法简便易行 ,为深入研究OECs神经生物学特性。

大鼠嗅球切除抑郁症动物模型的改进与评价

目的改进大鼠嗅球切除(olfactory bulbectomy,OB)抑郁症动物模型的建立方法并评价模型的可行性。方法应用探针捣毁嗅球与负压吸引相结合的方法进行嗅球切除,恢复2周后分组:假手术组、嗅球切除模型组、氟西汀(10 mg.kg-1,ig,每天1次,14 d)治疗组。给药2周后通过开场实验、蔗糖饮水实验和逃避实验检测各组大鼠的行为学。结果与假手术组比较,嗅球切除模型组大鼠开场实验水平运动得分和垂直运动得分明显增多,蔗糖偏嗜度明显降低,逃避失败次数明显增多,长期氟西汀治疗能够逆转嗅球切除引起的行为学改变。结论大鼠嗅球切除后出现抑郁样行为学改变,经典抗抑郁药物治疗有效,通过改进建立了稳定的大鼠嗅球切除抑郁症动物模型及可靠的评价方法。

棕色田鼠与沼泽田鼠犁鼻器和副嗅球的组织结构

用组织学方法研究了棕色田鼠 (Microtusmandarinus)、沼泽田鼠 (M .fostis)副嗅球和犁鼻器的结构及其在两种鼠间的差异 ,以此探讨两种田鼠的进化机制与适应功能。两种田鼠的犁鼻器位于鼻腔前端鼻中隔基部的两侧 ,呈管状结构 ;沿着犁鼻器的长轴犁鼻管呈现不同的形态学特征 ,犁鼻管直接开口于鼻腔 ,从前向后沿着长轴旋转 ,中间管壁 (犁鼻粘膜 )变成底部 ,侧面管壁 (假覆层上皮 )变成犁鼻管顶壁 ,最终犁鼻管变小成为一个腺体的分支 ,不同部位具有不同的组织学特征。通过选取中间相似部位对两种田鼠进行比较研究 ,发现棕色田鼠犁鼻粘膜比沼泽田鼠厚 ,而其长度却短于沼泽田鼠。棕色田鼠副嗅球颗粒细胞带宽和僧帽细胞带宽均大于沼泽田鼠 ,而带长却小于沼泽田鼠。相关分析发现 ,犁鼻器和副嗅球形态有一定的对应关系 ,这可能和两个结构之间存在着神经投射有关。棕色田鼠幼体的犁鼻粘膜、神经细胞核、假覆层上皮。

成年大鼠嗅球成鞘细胞的原代培养及形态学研究

目的探讨大鼠嗅球成鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)分离与纯化培养方法并对形态学进行研究。方法取材后采用差速贴壁和阿糖胞苷(Arac)抑制相结合的纯化培养方法培养嗅鞘细胞,并分不同阶段进行观察和NGFRp75和GFAP免疫组化染色鉴定。结果成功培养出高纯度的嗅鞘细胞,胞体呈梭形、多突起形及油煎蛋形三种类型,突起细长编织成网状为其特点。结论差速贴壁和Ara-c抑制相结合的纯化培养方法兼收了两者的优点,实践证实是一种简单经济而又有实效的嗅鞘细胞培养方法。

嗅神经、嗅球和嗅束的应用解剖

目的 :填补国人嗅神经、嗅球和嗅束的形态学资料 ,为鼻腔顶、颅前窝手术提供保护病人嗅觉功能的解剖学依据。材料和方法 :正常成人头颅标本 ,在手术显微镜下解剖观测嗅神经、嗅球和嗅束。结果 :上鼻甲内侧面的嗅丝密度高于鼻中隔上部。上鼻甲外侧列嗅丝数 6～ 1 2条。硬膜、蛛网膜包裹嗅丝至鼻腔顶部呈囊状者为 1 0 %。嗅球前端距大脑额极 1 9.3 3mm ,嗅球中部、嗅束中部、嗅束后端的内侧缘距大脑眶面内侧缘依次为 3 .64mm、6.5 8mm、8.96mm。结论 :提供国人嗅神经、嗅球和嗅束的一些解剖学数据 ,提示鼻腔或经鼻腔至颅前窝入路的手术 ,应尽量保护上鼻甲内侧面粘膜 ,应在一定范围内向上轻拉额叶眶面 。

嗅球摘除后丁香酚对昆明鼠水迷宫和自主活动行为的影响

目的探讨药物丁香酚对鼠的神经行为学的影响及其途径。方法通过嗅觉吸入的给药方法,并以完全摘除嗅球来对照,用水迷宫和自主活动箱分别测定小鼠学习记忆能力和自主活动能力。结果丁香酚给药组的水迷宫潜伏期明显小于空白组的水迷宫潜伏期(P<0·05),而嗅球摘除后给药组与假手术组和模型组的水迷宫潜伏期差异无显著性。结论丁香酚能够通过嗅觉给药的途径改善小鼠的学习记忆功能。

嗅球成鞘细胞的培养纯化及与功能相关的形态学研究

目的 培养纯化嗅球成鞘细胞 (Olfactoryensheathingcells ,OECs)并对其进行免疫细胞化学研究 ,探讨其相关功能。方法 分离嗅球嗅神经纤维层获得嗅球成鞘细胞 ,采用免疫溶解法对培养的嗅球成鞘细胞进行纯化 ,并利用免疫细胞化学方法和电镜技术进行形态学观察。结果 通过纯化可以使培养的OECs纯度达 95 %以上 ,免疫细胞化学显示OECs表达P75NGFr、GAP43、N CAM和GFAP ;电镜结果显示OECs呈分叶状核 ,胞浆电子致密 ,胞膜有伪足样皱褶。结论 免疫溶解法可以较好的纯化OECs并保持其良好的生长状态 ,培养的OECs表达P75NGFr、GAP43、N

嗅球成鞘细胞在坐骨神经损伤后功能恢复中的作用

目的 探讨嗅球成鞘细胞 (OECs)在坐骨神经损伤后促进神经功能恢复中的作用。 方法 SD大鼠30只随机分成对照生理盐水 (SAL )组和实验 (OECs)组 ,采用硅胶管套接大鼠切断的坐骨神经 ,硅胶管内对照组给予SAL,实验组给予培养成活的新生大鼠 OECs悬液 ,分别于术后 30或 90天 ,应用电生理检测、HRP逆行示踪法及轴突图像分析检测损伤的神经在电传导轴浆运输、髓鞘再生等方面的恢复情况。 结果 术后 30和 90天 ,OECs组与 SAL 组比较 :1OECs组损伤侧下肢复合肌肉动作电位 (CMAP)的潜伏期 (L AT)分别缩短了 0 .6 0 ms和 0 .5 6 m s;神经传导速度分别加快了 6 .4 2 m/ s和 5 .36 m/ s;波幅分别增加了 3.92 mv和 5 .84 mv;2 OECs组损伤侧脊髓前角 HRP阳性细胞率分别增加了 11.6 3%和 2 5 .0 1% ;3OECs组坐骨神经纤维数目分别增加了 10 4 7个 / mm2 和 14 2 2个 / mm2 ;神经髓鞘厚度分别增加了 0 .4 3μm和 0 .6 3μm。 结论 嗅球成鞘细胞对周围神经损伤后的神经功能恢复有积极的促进作用。

贯叶连翘提取物对大鼠双侧嗅球损伤模型的行为学影响

目的研究贯叶连翘提取物对抑郁动物行为学的影响。方法采用大鼠双侧嗅球损伤抑郁模型,灌胃给药,行为学测试方法。结果①将经典的嗅球吸除法改为电热损伤,不仅降低了动物死亡率,而且其行为学改变与嗅球吸除模型相近;②贯叶连翘提取物150,75 mg·kg-1显著降低大鼠敞箱实验的站立数和走格数;显著减少跳台实验训练期和测试期的停留时间;明显延长避暗实验中测试期的潜伏时间并减少动物的钻箱次数。结论贯叶连翘提取物能改善大鼠双侧嗅球损伤引起的行为综合征,具有一定的抗抑郁作用,机制值得探讨。

微囊化兔嗅球组织移植对脊髓损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的:观察微囊化兔嗅球组织细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤后细胞凋亡及功能恢复的影响,并探讨其对脊髓继发性损伤的保护作用及其机制。方法:实验于2004-10/2005-07在南昌大学基础医学院应用解剖研究室完成。选择清洁级SD大白鼠120只,按随机数字表法分为4组:正常对照组、损伤对照组、单纯细胞悬液移植组、微囊化移植组,每组30只。制作T10节段脊髓全横断损伤模型。正常对照组仅打开椎管,暴露脊髓不作移植;损伤对照组仅用明胶海绵填塞脊髓损伤腔隙;单纯细胞悬液移植组植入吸附细胞悬液的明胶海绵块;微囊化移植组用与断端腔隙大小相吻合的明胶海绵块吸附10μL的微囊化细胞,植入洞腔。分别于术后12h,1,3,7,21d5个时间点对动物进行BBB评分后处死。取损伤区1cm范围脊髓节段,常规石蜡包埋,水平切片进行苏木精-伊红染色、TUNEL染色,观察凋亡细胞的数量及分布变化。按BBB评分法对大鼠术后运动功能的恢复情况进行评分,共分22级,最低分0分,最高分21分,分数越高,运动功能恢复越完善。结果:纳入大鼠120只,存活96只,存活率为80%。其中以损伤对照组及单纯细胞悬液移植组死亡率较高,损伤对照组大鼠死亡的主要原因可能是脊髓损伤导致损伤平面以下神经功能的丧失所引起的一系列并发症所导致的;而单纯细胞悬液移植组是因为免疫排斥反应所导致。①术后3d内各组间BBB评分差异无显著性意义(P>0.05);术后7,21d微囊化移植组和单纯细胞悬液移植组大鼠BBB评分高于损伤对照组,差异均有显著性意义[分别为(7.25±1.17),(4.58±0.38),(2.67±0.61)分;(10.42±1.63),(6.08±0.80),(3.33±0.68)分,F=4.528,3.821,P<0.05],且经微囊化处理后比单纯兔嗅球组织细胞悬液移植运动功能恢复更好(F=4.112,P<0.05);而损伤对照组大鼠后肢运动功能恢复均较差。②光镜下损伤对照组、单纯细胞悬液移植组脊髓损伤后,脊髓内空洞增大,损伤范围基本确定,周围有炎性细胞浸润;在微囊化移植组脊髓损伤明显减轻,细胞皱缩不明显、胞质、胞核较清晰。③术后1,3,7d微囊化移植组TUNEL阳性细胞数及凋亡指数低于损伤对照组,差异有显著性意义(以术后3d为例,TUNEL阳性细胞数分别为(8.83±1.33),(14.50±1.05)个/视野,P<0.01;凋亡指数分别为10.45±1.58,17.06±1.23,P<0.01)。结论:微囊化兔嗅球组织细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤后细胞凋亡具有保护作用,能促进脊髓功能的恢复。

传入神经阻滞对成年大鼠嗅球calbindin表达的影响

目的:研究传入神经阻滞对成年SD大鼠嗅球中calbindin(CB)表达的影响。方法:成年SD大鼠,ZnSO4灌流单边鼻孔,10、20、30和60d后用免疫组化方法检测嗅球的CB表达。结果:损伤后10、20、30和60d,与对照组相比,损伤组嗅球的CB阳性细胞密度和染色强度显著下降,并且从10、20到30d逐渐下降,损伤后60d的结果与30d接近。结论:大鼠嗅球中CB的表达受传入神经阻滞的影响。

Triton损伤成年大鼠嗅上皮对嗅球钙结合蛋白D和小白蛋白表达的影响

目的 探讨嗅觉障碍的可能机制。方法 成年SD大鼠,TritonX 10 0灌流单侧鼻孔,30 ,4 5和6 0d后用免疫组化方法检测嗅球的钙结合蛋白 D(CB)和小白蛋白(PV)表达。结果 损伤后30d ,与对照侧相比,损伤侧嗅球的CB和PV阳性细胞密度减少6 8.9%和6 6 .7% ,4 5d后减少4 6 .4 %和5 0 .0 % ,4 5d的CB和PV阳性细胞密度比30d时增加,6 0d时接近对照侧。结论 大鼠嗅球中CB和PV的表达受Triton诱导的传入神经阻滞的可逆调控。

嗅球和嗅黏膜来源的嗅鞘细胞对脊髓损伤小鼠的治疗效果比较

目的体外分离、培养不同来源的嗅鞘细胞,并鉴定其生物学特性,比较不同来源的嗅鞘细胞生物活性,评价其对脊髓损伤模型小鼠的疗效的差异。方法差速贴壁法分别培养嗅球和嗅黏膜来源的嗅鞘细胞,免疫荧光染色检测该细胞特异性蛋白S100、P75的表达,并对二者生长曲线及在不同代次、不同浓度梯度条件下神经营养因子分泌情况进行检测,实时定量PCR(qRT-PCR)鉴定二者脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子3(NT-3)、神经营养因子4(NT-4)、轴突膜蛋白生长相关蛋白43(GAP-43)、微管相关蛋白(MAP-2)基因表达,并分别将两种细胞移植入脊髓横断小鼠模型中,以小鼠神经功能评分及脊髓内移植细胞分布情况进行评估。结果所获得不同来源的嗅鞘细胞呈双极、三极样形态生长,且S100、P75蛋白表达均为阳性,嗅黏膜来源细胞不表达MAP-2,高表达GAP-43,嗅球来源的细胞低表达MAP-2和GAP-43,嗅球来源细胞生长活性大于嗅黏膜来源的细胞,其中嗅黏膜细胞来源分泌营养因子高于嗅球来源的细胞,小鼠神经功能评分显示嗅黏膜来源细胞治疗脊髓损伤模型效果明显高于嗅球来源的嗅鞘细胞。结论两种来源的嗅鞘细胞存在生物学差异,嗅黏膜来源细胞治疗脊髓损伤效果高于嗅球来源的嗅鞘细胞,可以作为临床应用的种子细胞。

成年大鼠嗅球和鼻腔嗅粘膜成鞘细胞的分离、培养与鉴定

目的 在嗅球成鞘细胞 (OECs)移植到脊髓可有助于损伤神经纤维再生的基础上 ,分别对嗅球和嗅粘膜的OECs进行培养 ,探索自体嗅粘膜作为OECs供体的可能性。 方法 根据OECs、成纤维细胞和星形胶质细胞贴壁时间的不同 ,采用差时贴壁方法分离出OECs,培养 14div后进行NGFRp75和GDNF的免疫细胞化学染色。 结果 按形态学和免疫组织化学特性 ,培养的嗅球和嗅粘膜OECs可分为 3类 :双极细胞、三级细胞和扁圆细胞 ,其中以双极细胞最多。嗅粘膜的双极成鞘细胞的突起更加细长。 结论 差时贴壁细胞分离法是一种简单、经济、实用的成鞘细胞分离方法。鼻腔嗅粘膜OECs的形态学和免疫细胞化学特性与嗅球OECs基本相同 。

双侧嗅球切除对小鼠行为、海马神经递质及抑郁相关基因表达的影响

目的研究双侧嗅球切除对C57BL/6小鼠行为和海马神经递质及抑郁相关基因表达的影响。方法用探针捣毁并用负压吸出小鼠嗅球建立嗅球切除模型,术后18 d开始分别进行强迫游泳、悬尾、旷场、高架迷宫行为学测试,同时应用LC-MS/MS液质联用法检测海马内7种神经递质的变化,实时定量PCR法检测海马抑郁相关基因的表达。结果嗅球切除后小鼠在旷场中的水平运动明显增加(P<0.05),进入高架迷宫开臂的时间明显延长(P<0.01),海马组织中的5-HIAA/5-HT明显降低(P<0.01),Glu/GABA明显增高(P<0.01)。同时海马组织中的BDNF、Trkb、GDNF、CD11b、TNF-α基因表达明显升高(P<0.05),而TPH2基因表达下调(P<0.05)。结论嗅球切除导致小鼠多种行为学改变,是多种神经传递以及神经营养因子、炎症因子和合成蛋白基因综合作用的结果,提示将该模型作为抗抑郁药物的研发及筛选工具时需要综合考虑多方面因素的影响,从而对实验结果作出科学合理解释。

大鼠嗅球神经干细胞培养

目的 建立大鼠嗅球神经干细胞 (neuralstemcells,NSC)体外培养方法 ,研究其增殖和分化特性。方法 采用添加丝裂原的无血清培养基分离、培养新生第 1天和成年大鼠嗅球NSC ,应用免疫细胞化学方法鉴定培养的NSC及自然分化为特异性神经细胞的类型 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法测定嗅球NSC的生长曲线。结果 从生后第 1天和成年大鼠嗅球分离、培养出表达巢蛋白(nestin) ,并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的NSC。生后第 1天和成年大鼠嗅球的神经球形成率分别为 2 0 %～ 30 %和 0 1%。嗅球NSC的增殖依赖表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (fibroblastgrowthfactor basic,bFGF) ,其中EGF的促分裂增殖作用明显优于bFGF。结论 从生后第 1天和成年大鼠嗅球可以培养出具有自我增殖和多向分化潜能的NSC。

阿尔茨海默大鼠嗅球p38MAPK的表达

目的观察阿尔茨海默(AD)大鼠嗅球p38MAPK的表达,探讨p38MAPK在AD病理改变发生中的作用机制。方法采用大鼠侧脑室注射Aβ25-35建立AD动物模型,Y迷宫实验测定行为学变化,免疫组化染色法检测建模后4d、7d和14d时AD组、生理盐水组、抑制剂组和抑制剂对照组p38MAPK在大鼠嗅球中的表达。结果①建模后7d、14dAD组大鼠行为学测试出现明显改变,学会训练次数(N)、完成所有反应中错误反应的次数(EN)及全天总反应时间(TRT)均较生理盐水组增加(P<0.05),抑制剂组较AD组N、EN和TRT均有明显改善。②AD组在建模后4d,嗅球出现明显的p38MAPK表达,且随时间的延长表达增加(P<0.05),与生理盐水组比较,AD组p38MAPK阳性细胞数明显升高(P<0.01)。抑制剂组p38MAPK的表达在3个时间点,较AD组、抑制剂对照组均明显下降(P<0.01)。结论Aβ25-35可激活痴呆大鼠嗅觉中枢p38MAPK信号转导通路,p38MAPK可能参与了AD早期嗅觉障碍的形成过程。p38MAPK抑制剂SB203580能部分减弱Aβ25-35的神经毒性作用。