基于嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7的资生肾气丸镇痛机制研究

目的:探索资生肾气丸对醋酸致小鼠扭体模型的镇痛作用。方法:将42只小鼠随机分为7组,分别给予相应药液灌胃,末次灌胃1 h后造模,建立醋酸致小鼠扭体模型。观察小鼠扭体次数,计算其扭体抑制率,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E 2(PGE 2)、神经生长因子(NGF)含量,采用实时PCR(RT-PCR)检测嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)mRNA、Nod样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、NIMA相关激酶7(NEK7)mRNA的表达情况。结果:与模型组比较,随着时间的增加,资生肾气丸低剂量、中剂量、高剂量均可抑制小鼠扭体反应,降低扭体次数,增加小鼠扭体抑制率,降低小鼠血清中IL-1β、PGE_(2)、NGF的含量,降低P2X7RmRNA、NLRP3mRNA、NEK7mRNA的表达以抑制疼痛反应,以高剂量效果最优(P<0.05),与吲哚美辛、痛风舒片疗效相近。结论:资生肾气丸高剂量对小鼠血清疼痛因子的降低效果显著,其机制可能与嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7信号通路有关。

嘌呤受体P2X配体门控离子通道7与老年高血压合并冠心病患者心肌缺血的关系

目的 分析外周血胞膜上嘌呤受体P2X配体门控离子通道7(P2X7R)水平与老年高血压合并冠心病患者心肌缺血及自主神经改变的关系。方法 前瞻性选取2020年8月至2022年8月三二〇一医院诊治的老年冠心病患者146例,根据心肌缺血情况分为心肌缺血组86例,非心肌缺血组60例。比较2组外周血P2X7R水平与心肌缺血总负荷(TIB)差异,分析P2X7R与TIB的相关性。采用ROC曲线分析P2X7R对心肌缺血的预测价值。以P2X7R预测心肌缺血的截断值分为高水平组76例,低水平组70例,比较2组心率变异性时域指标、频域指标差异。结果 心肌缺血组外周血P2X7R及TIB明显高于非心肌缺血组(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,P2X7R水平与TIB呈正相关(r=0.624,P<0.01)。ROC曲线分析显示,P2X7R预测老年高血压合并冠心病患者心肌缺血的截断值为698.94 ng/L,曲线下面积为0.800(95%CI:0.726~0.874),敏感性、特异性分别为70.9%、88.3%。P2X7R、TIB是老年高血压合并冠心病患者心肌缺血发生的危险因素(OR=2.056,95%CI:1.373~3.079,P<0.01;OR=1.276,95%CI:1.128~1.444,P<0.01)。高水平组心率变异性时域指标明显低于低水平组,心率变异性频域指标明显高于低水平组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 外周血P2X7R是老年高血压合并冠心病患者心肌缺血的影响因素,与心肌缺血严重程度相关,可反映自主神经功能损害程度。

P2X7R过表达的巨噬细胞MSU晶体诱导痛风炎症反应过程中IL-1β、TNF-α、NLRP3表达观察

目的观察嘌呤能受体P2X配体门控离子通道7的配体(P2X7R)过表达白血病细胞诱导分化的巨噬细胞单钠尿酸盐(MSU)晶体诱导痛风炎症反应过程中NOD样受体家族3(NLRP3)蛋白、IL-1β、TNF-α表达情况。方法取人单核细胞白血病细胞系THP-1,并随机分为过表达组、空白组、模型组、对照组;过表达组和空白组分别转染P2X7R过表达质粒、空白载体质粒,转染5 d,将过表达组、空白组、模型组THP-1细胞用100 ng/mL的PMA刺激3 h后分化为巨噬细胞,另将MSU晶体用氢氧化钠溶解配制成浓度为100μg/mL的MSU乳糜状悬液加入培养液中孵育6 h;对照组正常培养。分别采用RT-PCR法和Western blot法测算巨噬细胞P2X7R mRNA、蛋白,ELISA法检测巨噬细胞上清液IL-1β、TNF-α,Western blot法测算巨噬细胞NOD样受体家族3(NLRP3)蛋白。结果与对照组比较,过表达组、空白组、模型组P2X7R mRNA和蛋白相对表达量升高,细胞上清液IL-1β、TNF-α水平升高,细胞NLRP3蛋白相对表达量升高(P均<0.05);与模型组、空白组比较,过表达组P2X7R mRNA、蛋白相对表达量升高,细胞上清液IL-1β、TNF-α水平升高,细胞NLRP3蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。结论P2X7R过表达白血病细胞诱导分化的巨噬细胞MSU晶体诱导痛风炎症反应过程中IL-1β、TNF-α、NLRP3表达增加,IL-1β、TNF-α水平升高可能通过激活NLRP3蛋白来实现。

ATP门控离子通道P2X_7受体在中枢系统的表达与功能

P2X受体是由ATP激发的离子通道,从中可渗透Na＋、K＋和Ca2＋,这些蛋白参与一系列生理过程,包括调节突触传输、平滑肌收缩、化学递质分泌和免疫反应调控。P2X7受体作为P2X受体家族最独特的成员,其与其它成员在结构和功能上有显著差异,属于低分子溶质转运的非选择性离子通道。

P2X配体门控离子通道7基因多态性在痛风发病机制中的作用

痛风是一组嘌呤代谢紊乱和/或尿酸排泄减少使尿酸盐结晶沉积导致关节肿痛的炎性反应性疾病。研究表明,仅有约10%的高尿酸血症人群会患痛风,提示痛风的发生还有其他因素。白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)作为痛风发作的重要促炎因子,其产生与P2X嘌呤受体家族中的P2X配体门控离子通道7 (purinergic receptor P2X ligand-gated ion channel 7,P2X7R)密不可分。目前发现与P2X7R相关的单核苷酸多态性位点超过13个,表明P2X7R基因多态性在痛风发病机制中起着至关重要的作用。本文综述痛风与P2X7R有关的单核苷酸多态性以及与痛风有关联的其他基因研究进展。

天香丹抑制P2X7/NLRP3表达改善动脉粥样硬化的作用机制研究

目的:探讨天香丹对动脉粥样硬化小鼠嘌呤能配体门控离子通道7(P2X7)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的影响。方法:选取8周龄无特定病原体(SPF)级雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠30只,予以高脂饲料喂养12周,造模成功后随机分为模型组、阿托伐他汀组、天香丹组,每组10只;另选取C57BL/6J小鼠10只予普通饲料喂养,设为空白对照组。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-18、IL-1β、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)的水平;免疫组化检测组织中P2X7、NLRP3的表达。结果:ELISA结果显示:与空白对照组相比,模型组IL-18、IL-1β、ATP水平升高(P<0.05);与模型组相比,阿托伐他汀组、天香丹组IL-18、IL-1β、ATP水平降低(P<0.05)。免疫组化结果显示:与空白对照组相比,模型组P2X7、NLRP3表达均明显升高(P<0.05);与模型组相比,阿托伐他汀组、天香丹组P2X7、NLRP3表达均明显降低(P<0.05)。结论:天香丹改善动脉粥样硬化与调节钾稳态抑制炎症小体的激活有关。

血清CCL5、P2X7R水平与大血管闭塞性急性缺血性脑卒中并发恶性脑水肿的关系

目的探讨血清C-C基序趋化因子配体5(CCL5)、嘌呤能2X7受体(P2X7R)水平与大血管闭塞性急性缺血性脑卒中(AIS-LVO)并发恶性脑水肿(MBE)的关系。方法选择AIS-LVO患者162例(观察组),接受静脉溶栓联合机械取栓治疗后72 h并发MBE 43例、未并发MBE 119例,同期另选体检健康的志愿者60例作为对照组。采集所有研究对象外周静脉血,离心留取血清,采用ELISA法检测血清CCL5、P2X7R。采用多因素Logistic回归模型分析AIS-LVO并发MBE的危险因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CCL5、P2X7R水平对AIS-LVO并发MBE的预测价值。结果观察组血清CCL5、P2X7R水平均高于对照组(P均<0.05)。单因素分析发现,AIS-LVO患者并发MBE者NIHSS评分、ASPECTS评分及血清CCL5、P2X7R水平均高于其未并发MBE者(P均<0.05);多因素Logistic回归分析发现,NIHSS评分增加及血清CCL5、P2X7R水平升高为AIS-LVO并发MBE的独立危险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析发现,血清CCL5、P2X7R水平单独和联合预测AIS-LVO并发MBE的曲线下面积(AUC)分别为0.780、0.790、0.880,血清CCL5、P2X7R水平联合预测AIS-LVO并发MBE的AUC大于二者单独(P均<0.05)。结论血清CCL5、P2X7R水平升高是AIS-LVO并发MBE的独立危险因素;血清CCL5、P2X7R水平对AIS-LVO并发MBE均有一定预测价值,二者联合预测价值更高。

腺嘌呤核苷三磷酸-嘌呤受体P2X配体门控离子通道7-白细胞介素-1β通路参与痛风性关节炎发病的初步研究

目的 探讨腺嘌呤核苷三磷酸-嘌呤受体P2X配体门控离子通道7-IL-β（ATP-P2X7R-IL-1β）通路在调控痛风性关节炎发病中的作用.方法 分离痛风与高尿酸血症患者外周血白细胞,分别用尿酸钠盐（MSU）和MSU＋ATP（5＇-三磷酸腺苷二钠盐水合物）刺激细胞培养,ELISA检测培养上清液中IL-1β浓度;流式细胞术检测外周血CD14＋P2X7R＋细胞.统计学处理采用t检验、非参数检验、Pearson相关分析.结果 ①单独MSU刺激时,痛风和高尿酸血症患者细胞培养液中IL-1β 的浓度[（50.9±1.5）pg/ml,（6.5±7.1）pg/ml]差异无统计学意义（Z=-1.088,P＞0.05）;用MSU＋ATP共同刺激白细胞时,痛风患者细胞培养液中 IL-1β 的浓度[（148±218） pg/ml]显著高于高尿酸血症患者[（24 ±39） pg/ml]（Z=-2.177,P＜0.05）.②高尿酸血症患者中,MSU刺激组[（6±7） pg/ml]和MSU＋ATP共同刺激组[（24±39） pg/ml]细胞培养液 中 IL-1β浓度差异无统计学意义（Z=-1.514,P＞0.05）;痛风患者中MSU＋ATP共同刺激组IL-1β浓度[（148± 218） pg/ml],显著高于MSU刺激组[（50.9±1.5） pg/ml],差异有统计学意义（Z=-2.704,P＜0.05）.③痛风患者外周血中CD14＋P2X7R＋细胞的百分比显著高于高尿酸血症患者[（1.6±0.5）％,（1.0±0.5）％],差异有统计学意义（t=-3.567,P＜0.05）.④痛风和高尿酸血症患者CD14＋P2X7R＋细胞的百分比与细胞培养液IL-1β浓度相关性均无统计学意义（r=-0.504,P＞0.05;r=-0.379,P＞0.05）.结论 ATP参与了痛风的发病,可能是引起急性痛风性关节炎发病的重要信号;其受体P2X7R的功能状态可能是决定痛风能否发病的重要因素.

嘌呤受体P2X配体门控性离子通道7在初发系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞的表达及意义

目的探讨嘌呤受体P2X配体门控性离子通道7（P2X7R）在初发系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血淋巴细胞上的表达及其与部分炎症细胞因子的相关性。方法选择29例初发SLE患者及28名健康对照，分离外周血单个核细胞（PBMC），采用流式细胞术检测淋巴细胞、CD4＋淋巴细胞、CD19＋淋巴细胞上P2X7R的表达水平，酶联免疫吸附试验（EusA）检测P2X7R相关的细胞因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6及肿瘤坏死因子（TNF）-α水平。采用t检验、Wilcoxon秩和检验和Spearman相关分析进行统计学分析。结果①SLE患者外周血CD4-淋巴细胞、CD19＋淋巴细胞表面P2X7R的表达明显高于健康对照组[CD4＋淋巴细胞：2．21（3．55）和0．89（1．15），Z=-1．527，P=0．015；CD19＋淋巴细胞：11．53（20．01）和6．66（6．27），Z=-2．091，P=-0．037]；②SLE患者血清中3种细胞因子水平均明显高于健康对照组，差异有统计学意义；SLE患者外周血淋巴细胞中P2X7R表达水平与IL-6呈正相关（r=0．449，P=0．015）；③SLE患者中，关节炎组淋巴细胞上P2X7R表达显著高于非关节炎组[3．84（11．53）与0．90（1．81），Z=-2．772，P=0．006]；P2X7R在淋巴细胞及CD19＋淋巴细胞中的表达均与SLE疾病活动指数（SLEDAI）评分呈正相关；淋巴细胞上的P2X7R表达与抗B：糖蛋白I抗体呈正相关（r=0．575，P=0．008）。结论P2X7R可能通过介导炎症因子的释放参与SLE发病；可能与SLE患者的关节炎、狼疮肾炎及神经精神狼疮相关。

嘌呤受体P2X配体门控性离子通道7及相关炎症因子与系统性红斑狼疮抑郁障碍的发病关系

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）是典型的自身免疫性疾病,免疫功能紊乱是其主要特点,有多种自身抗体和免疫炎性细胞参与其发病.SLE临床表现复杂多样,可以累及全身多个系统,神经精神狼疮（neuropsychiatric systemic lupus erythematosus,NPSLE）是最常见的临床表现之一并与预后密切相关,发病率为12%～71%.

P2X_7受体在神经系统表达及功能的研究进展

P2X受体是对ATP及其类似物敏感的配体门控离子通道。迄今已从哺乳动物成功克隆出7种P2X亚单位（P2X1-7）。P2X7受体（P2X7 receptor，P2XTR，曾被称为P2Z）因其独特的结构和功能特点而倍受关注。P2X7R广泛分布于免疫细胞、造血细胞、上皮细胞、内皮细胞、骨组织等多种细胞和组织。在神经系统，P2X7R参与神经递质释放、胶质细胞活化，对病理状态下多个信号通路具有关键的调节作用。

脑出血病人血清P2X7R水平与脑水肿程度及认知功能相关性研究

目的 检测脑出血病人血清胞膜上嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)水平以及脑水肿程度,并分析二者与脑出血病人认知功能障碍的相关性。方法 前瞻性选取2019年7月~2021年7月本院收治的115例脑出血病人为研究组,另取同期体检健康者90例为健康对照组。检测血清P2X7R水平以及脑水肿体积;采用Pearson分析血清P2X7R水平与脑水肿体积的相关性;根据病人是否出现认知功能障碍分为无认知功能障碍组(78例)和认知功能障碍组(37例),多因素Logistic回归分析脑出血病人认知功能障碍的影响因素,绘制血清P2X7R水平与脑水肿体积对脑出血病人认知功能评估的ROC曲线。结果 研究组病人发病第1天时血清P2X7R水平高于健康对照组(P<0.05),脑出血病人血清P2X7R水平、脑水肿体积在1~5天出现逐渐升高的趋势,在第5天达到峰值然后降低(P<0.05);脑出血病人发病第1、3、5、7天血清P2X7R水平与脑水肿体积均呈正相关(r=0.712、0.583、0.589、0.472,P<0.05);认知功能障碍组血清P2X7R水平、脑水肿体积均高于无认知功能障碍组(P<0.05);血清P2X7R水平、脑水肿体积是影响脑出血病人认知功能的危险因素(P<0.05);血清P2X7R水平、脑水肿体积单独及联合预测病人认知功能障碍的曲线下面积分别是0.763、0.750和0.829。结论 脑出血病人血清P2X7R水平升高,脑水肿体积增大,二者呈正相关,联合检测可预测病人认知功能障碍的发生。

脑内P2X7受体研究进展

三磷酸腺苷（ATP）是细胞供能和储能的物质，在研究中发现它还是中枢神经系统的一种重要神经递质。1970年Burnstock G证实ATP是非胆碱能和非肾上腺素能神经释放的神经递质，正式提出了神经元细胞膜表面存在嘌呤受体。1985年他将ATP结合的受体命名为嘌呤能受体，并将其分为P1（腺苷）、P2（腺嘌呤核苷酸）两大类受体。

ATP门控离子通道研究进展

ATP是细胞内组成成分和能源物质,但它也可以作为许多细胞表面P2受体的胞外配体[1].1972年,Geoffery 首次提出嘌呤受体的概念,用来描述细胞膜腺苷受体和ATP受体.Harden等1995从分子生物学上证实ATP受体的存在 [2] .

P2X受体研究进展

P2X受体为配体门控离子通道,属于P2受体家族.P2X受体的配体是ATP,胞外ATP结合时P2X受体通道打开,允许阳离子(Na+、Ca2+等)通过.目前已克隆了7个哺乳动物的P2X(P2X1～7)受体,并阐明了它们的药理学特性.天然P2X受体可以组装成同型或异型聚合体,形成功能性离子通道.对有关P2X受体的结构、分布、功能、生物物理学特性等研究的最新进展进行了综述.

P2X受体在血细胞中的表达及意义

P2X是ATP配体门控离子通道,属P2受体族。与细胞外ATP结合时P2X通道开放,允许阳离子(Na^+、Ca^(2+)等)通过。已克隆了7个哺乳动物的P2X(P2X_(1-7))受体,并阐明了其结构和功能。天然P2X可以同型或异聚体形式组成离子通道,在包括血液在内的多种组织中存在,与信号传导有关。P2X的异常与人类疾病的关系已引起关注,如慢性淋巴细胞白血病P2X的表达水平可能有预后意义。本文介绍P2X的结构、功能及其与血细胞关系的研究进展。

三叉神经痛和P_2X受体的研究进展

多种伤害性刺激均可引起细胞内腺苷三磷酸(ATP)的释放,ATP可激活P2X和P2Y受体,引起相应的生物学效应。P2X和P2Y受体均属于P2受体家族,其中P2X受体为配体门控非选择性阳离子通道受体,允许钠、钙、钾等阳离子通过。P2Y受体属于G-蛋白耦联受体。三叉神经节中含有大量与外周痛觉传导有关的中小型神经细胞,P2X受体在三叉神经节的痛觉传导过程中起至关重要的作用。下面就三叉神经痛以及P2X受体的结构、分布、生物学特性等研究进展作一综述。

电针对局灶脑缺血/再灌注模型大鼠大脑缺血皮质区P2X7R与NLRP3炎性小体表达的影响

目的观察电针治疗对局灶脑缺血/再灌注模型大鼠大脑缺血皮质区嘌呤受体配体门控性离子通道7(purinergic2X7 receptor,P2X7R)和Nod样受体蛋白3(NOD-like receptor pyrin 3,NLRP3)炎性小体表达的影响,探讨电针治疗减轻局灶脑缺血/再灌注炎性损伤的可能机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组16只。采用改良线栓法制备局灶脑缺血/再灌注模型。以大鼠"百会"、"合谷"和"太冲"为电针穴位。采用Bederson行为学评分评价各组大鼠神经功能缺损程度,Western blot和RT-q PCR检测大脑缺血皮区P2X7R、NLRP3蛋白及m RNA表达情况,ELISA检测脑内IL-1β和IL-18含量,荧光共聚焦显微镜检测脑内Iba-1阳性小胶质细胞数量。结果脑缺血再灌注后24h,电针治疗可明显改善神经功能缺损症状。RT-q PCR和Western blot检测显示,模型组大脑皮质缺血区P2X7R和NLRP3 m RNA和蛋白表达较假手术组明显升高,电针治疗可明显减少脑缺血再灌注后P2X7R和NLRP3 m RNA和蛋白表达的升高。ELISA测定表明,与模型组相比,电针组大脑皮质缺血区IL-1β和IL-18含量明显降低。激光扫描共聚焦显微镜观察发现,脑缺血再灌注后24h,电针治疗可明显减少大脑皮质缺血区Iba-1阳性小胶质细胞数量。结论电针可抑制局灶脑缺血/再灌注模型大鼠脑内P2X7R、NLRP3表达的上调,削弱小胶质细胞激活,减轻炎症因子分泌,从而减轻脑缺血/再灌注炎性损伤。

血清铁蛋白、P2X7R、HSP70在痛风患者中的表达及其临床价值

目的分析血清铁蛋白(SF)、胞膜上嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)、热休克蛋白70(HSP70)在痛风患者中的表达及其临床价值。方法回顾性选取2018年1月至2020年1月十堰市太和医院收治的痛风患者83例,将其纳入观察组。另选取同期83例高尿酸血症患者,将其纳入对照组。比较两组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平,分析观察组组内SF正常组(n=33)、SF升高组(n=50)、急性期组(n=52)和慢性期组(n=31)患者血清SF、P2X7R、HSP70水平,探讨其诊断价值。结果观察组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平为(546.99±16.24)mg/m L、(678.98±20.19)pg/m L、(53.29±2.19)ng/m L,均高于对照组[(325.18±16.29)mg/m L、(384.29±20.17)pg/m L、(11.17±2.15)ng/m L],差异均有统计学意义(P<0.05)。SF正常组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平为(646.89±12.64)mg/m L、(795.91±18.32)pg/m L、(65.97±4.06)ng/m L,均低于SF升高组[(415.81±15.29)mg/m L、(466.29±18.36)pg/m L、(36.98±4.01)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。急性期组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平为(598.02±32.14)mg/m L、(741.28±32.15)pg/m L、(72.15±12.69)ng/m L,均高于慢性期组[(308.47±32.19)mg/m L、(365.28±32.16)pg/m L、(40.25±12.61)ng/m L],差异均有统计学意义(P<0.05)。血清SF水平升高导致P2X7R、HSP70水平升高,血清SF水平与P2X7R、HSP70水平呈正相关(P<0.05)。血清SF、P2X7R、HSP70联合诊断痛风价值高于任何单一血清SF、P2X7R、HSP70指标或任2项指标。结论痛风患者血清SF、P2X7R、HSP70水平明显升高,且联合检测能明显提升痛风诊断价值,推荐使用。