应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅱ结合蛋白

目的 通过筛选乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原基因启动子Ⅱ(SPⅡ)结合蛋白 ,为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体展示技术 ,以HBV的表面抗原基因启动子Ⅱ的聚合酶链反应 (PCR)产物DNA作为固相筛选分子 ,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析。结果 噬菌体经富集后 ,从随机筛选的 2 0个克隆中得到 4个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性分析 ,确定了和HBVSPⅡ结合的肝细胞蛋白———尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶 4 (NADHDH4 )。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HBVSPⅡ的结合蛋白 ,分析了该蛋白的编码基因 ,为进一步研究HBV的复制、转录、调节机制开辟了新的途径。

应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒核心启动子结合蛋白

目的 通过筛选乙型肝炎病毒 (HBV)核心启动子 (corepromoter)结合蛋白 ,为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体表面展示技术 ,以HBV核心启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子 ,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索。结果 噬菌体经富集后 ,从随机筛选的 2 0个克隆中得到 6个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索 ,确定了和HBV核心启动子结合的肝细胞蛋白———羧肽酶N(CPN)。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBV核心启动子的结合蛋白 ,分析了该蛋白的编码基因 ,为进一步研究HBV的复制机制创造了新的途径。

噬菌体展示技术定位主要食物过敏原表位的研究进展

噬菌体展示技术是一项可以在噬菌体颗粒的表面展示外源多肽的体外筛选技术。由于该技术实现了基因和蛋白质的体外统一,现已被广泛应用于生命科学和医学等领域。目前噬菌体展示系统主要有丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统和T7噬菌体展示系统。本文主要介绍了噬菌体展示技术以及该技术在八类食物抗原表位分析的应用。

噬菌体展示技术及其应用

噬菌体展示技术是一项新兴的分子生物学技术;该技术将基因型和表现型有效地联系起来,是后基因组时代的有力工具。目前用于构建展示文库的噬菌体主要有丝状噬菌体、λ噬菌体、T4噬菌体和T7噬菌体;它们所展示的外源蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性。随着此项技术的不断完善和发展,噬菌体展示技术已在新型疫苗的研制、酶抑制剂的筛选、医学诊断和治疗、多肽药物的开发、蛋白质相互作用的研究等领域得到了广泛的应用,并显示了良好的应用前景。

用T7噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒PreS1相互作用蛋白

目的:用T7噬菌体筛选系统筛选乙型肝炎病毒PreS1的相互作用蛋白。方法:应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到的乙型肝炎病毒PreS1作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行生物筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜索。结果:经鉴定得到1个阳性克隆,确定了能与乙型肝炎病毒PreS1相互作用的蛋白可能为:细胞色素C氧化酶1(Cytochrome c Oxidase Subunit I,COX1)。结论:T7噬菌体展示筛选系统是筛选相互作用蛋白的一种简单、快速和有效的手段,筛选到的相互作用蛋白为进一步探讨PreS1的致病机制提供重要依据。

噬菌体展示技术及其在天牛防治中的应用展望

本文综述了噬菌体展示技术的研究现状和发展趋势 ,着重描述了噬菌体展示技术的筛选方法及其在生命科学研究领域的广泛应用 ,结合目前我国天牛防治存在的问题 。

噬菌体展示技术筛选bFGF抗原表位

目的:以抗-bFGF单克隆抗体GF22为目标,用噬菌体随机七肽库进行筛选。经三轮筛选后的噬菌体阳性克隆能特异地抑制bFGF与CF22结合。测序结果表明与CF22结合的序列高度保守,为LP(P/L)GH(F/I)K,LPPGHFK与bFGF分子(155氨基酸)上22-27位氨基酸一致,表明该序列在bFGF上是一个主要的抗原表位。用此序列的阳性噬菌体克隆免疫小鼠,发现此序列摸拟肽能诱导抗bFGF抗体反应,且序列LPLGHIK诱导的抗体反应比LPPCHFK序列强三倍,序列LPLGHIK可能作为一种有价值的肽疫苗诱导抗bFGF抗体的产生。

应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA的结合蛋白

目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA结合蛋白,探索HCTP4基因的表达调控机制。方法:应用噬菌体表面展示技术,以多聚酶链反应(PCR)技术扩增的HCTP4启动子DNA片段作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”富集过程,噬斑裂解液PCR扩增后,回收产物并进行克隆化,对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索。结果:噬菌体经富集后,筛选出12个阳性克隆,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索,确定了与HCV核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA结合的蛋白有:核糖体蛋白L15、视网膜母细胞瘤结合蛋白8。结论:用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HCV核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA结合蛋白,分析了这些蛋白的功能,为研究HCTP4的生物学调节机制,进一步阐明HCV核心蛋白的致病机制奠定了基础。

应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A结合蛋白

目的 筛选丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS4A结合蛋白 ,为HCV致病机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体展示技术 ,以HCV非结构蛋白NS4A作为固相筛选分子 ,对T7噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析。结果 噬菌体经富集后 ,从随机挑选的 12个克隆中得到 2个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过序列同源性分析 ,确定了与HCV非结构蛋白NS4A结合的是肝细胞蛋白 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活蛋白激酶 5 (MAPKAPK5 )。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HCV非结构蛋白NS4A的结合蛋白 ,为进一步研究HCV的致病机制奠定了良好的基础。

应用噬菌体展示技术筛选中药的药物靶点蛋白研究进展

噬菌体展示技术是一种有效的药物靶点筛选工具,可用其筛选中药的药物靶点蛋白。其原理是将外源性蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,使外源基因随外壳蛋白的表达而表达。药物靶点是药物在体内的作用结合位点,是药物筛选和新药研究的基础,良好的药物靶点也是发现性质优良药物的基础。利用现代生物技术为基础的高通量药物筛选技术,进行中药活性组分筛选是实现中药现代化的有效途径,并促进我国天然药物的开发和应用,为中药的研究提供一套完整的筛选和验证方案。

用T7噬菌体展示技术筛选HCV核心蛋白的相互作用蛋白

目的用T7噬菌体筛选系统筛选HCV核心蛋白的相互作用蛋白。方法应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到HCV的核心蛋白作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜索。结果经鉴定得到1个阳性克隆,确定了能与HCV核心蛋白相互作用的蛋白为:Smad interacting-protein 1(SIP1)。结论T7噬菌体展示筛选系统是筛选相互作用蛋白的一种简单、快速和有效的手段,筛选到的相互作用蛋白为进一步探讨核心蛋白的致病、致癌机制提供重要依据。

应用噬菌体展示技术筛选HBsAg启动子I的DNA结合蛋白

目的:通过筛选HBsAg基因启动子Ⅰ(SP Ⅰ,surface promoter Ⅰ)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径. 方法:应用噬菌体展示技术,以HBsAg基因启动子Ⅰ的聚合酶链反应(PCR)产物DNA作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索. 结果:噬菌体经富集后,从随机筛选的14个克隆中得到8 个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性搜索,确定了和HBV表面抗原基因启动子Ⅰ特异结合的肝细胞蛋白,共编码7种蛋白.其中3个克隆编码未知功能蛋白;其余的克隆分别编码4-氨基丁酸氨基转移酶、触珠蛋白、复制蛋白等蛋白. 结论:用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBsAg基因启动子Ⅰ的结合蛋白,分析了该蛋白的编码基因.

噬菌体展示技术与病毒抗原表位研究

噬菌体展示技术（Phage display technology）始创于1985年，Smith首次将外源基因插入丝状噬菌体f1的基因，使目的基因编码的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面，从而创建了该技术。1988年Parmley等将已知抗原决定簇与PⅢ的N端融合呈现在噬菌体表面，可特异性地被抗体选中，因此提出了通过构建随机肽库了解抗体识别的抗原表位的设想。

噬菌体展示技术在食品安全分析中的应用

随着噬菌体展示技术的发展,其在食品安全领域的应用也越来越多,该技术可以作为一种高效的抗体制备技术应用于食品中常见的抗生素、生物毒素、有害小分子的检测及食源性致病菌控制,同时可以开发有毒待检物的替代品建立绿色检测技术。此外,噬菌体展示技术在新型食品防腐剂开发等方面也具有广阔的应用前景。本文在介绍噬菌体展示技术的基础上,对其在食品安全领域的应用进行了综述。

噬菌体展示技术制备甲氧基有机磷农药抗独特型抗体

抗独特性抗体可用于建立针对农药等小分子物质的非竞争免疫检测模式。本研究将甲氧基有机磷农药通用半抗原(S-羧甲基O-,O-二甲基二硫代磷酸酯,CMP)连接至琼脂糖凝胶,进而对甲氧基有机磷农药广谱特异性抗体进行纯化;以纯化抗体为固相抗原,以人源scFv抗体库(Tomlinson I+J)为抗体源,进行抗独特型抗体的筛选;利用所筛选到的抗独特型抗体建立非竞争免疫检测技术。经过鉴定,共筛选出12个阳性克隆,其中D11和B9分别属于β型和α型抗独特型抗体。利用D11和B9建立的非竞争免疫分析法对马拉硫磷的IC50为(113.7±34.2)μg/L,检出限为10.5μg/L。

应用DNA shuffling及T7噬菌体展示技术定向进化并筛选鉴定sCD74突变体

目的利用DNA shuffling技术，结合T7噬菌体表面展示技术，定向进化MIF受体sCD74，以获得高亲和力突变体基因。方法定点突变的牛、小鼠、人CD74胞外同源区基因以DNaseⅠ消化，回收25—50bp片段进行DNA shuffling；将500bp shuffling产物经限制性酶切后与T7噬菌体DNA连接，与T7 package extracts组建噬菌体文库；采用竞争淘洗方法进行5轮筛选，富集得到高亲和力结合MIF的噬菌体；挑取20株噬菌体单克隆进行基因克隆并测序，对测序结果进行生物信息学分析，同时以竞争ELISA初步鉴定进化效果。结果20株噬菌体单克隆具有相同的sCD74突变基因，为相同克隆，将此克隆命名为sHCD74m，其基因命名为sHCD74mD；竞争性ELISA分析显示其MIF结合力提高。结论得到了与MIF高亲和力结合的sCD74突变体基因sHCD74mD。

噬菌体展示技术筛选胃癌高表达CD44分子特异性多肽序列的可行性分析

目的探讨噬菌体展示技术筛选胃癌高表达CD44分子特异性多肽序列的可行性。方法使用噬菌体展示随机十二肽文库,以CD44纯化蛋白为筛选靶点,进行4轮亲和力筛选。从第四轮的洗脱物中随机挑选30个噬菌体克隆,对这些克隆进行测序并对序列进行生物信息学分析。通过ELISA法检测噬菌体克隆对CD44分子的亲和力,挑选阳性克隆,再通过细胞免疫荧光法进一步鉴定阳性克隆。结果从第4轮的洗脱物中随机挑选的30个噬菌体克隆中共有7种多肽序列,重复20次六肽基序WHXXXX。该基序与CD44透明质酸结合域能很好地结合,ELSIA法挑选出S1、S2、S5、S7四个阳性克隆。细胞免疫荧光法鉴定出对CD44亲和力最好的克隆为S1-WHXXXXXXQQA。结论通过噬菌体展示技术筛选S1-WHXXXXXXQQA多肽序列对CD44的亲和力和特异性最好;该序列有望成为特异性探针用于胃癌的分子影像学诊断。

噬菌体展示技术在毒素检测分析中的应用

霉菌毒素严重危害动物及人类健康,毒素检测已成为评价农产品、食品、饲料品质的重要内容之一。毒素检测有一定危险性,建立新的毒素检测手段意义重大。噬菌体展示技术是一种设计精巧、具有极强分离多肽功能的生物学技术。综述了此项技术的发展和在筛选霉菌毒素模拟表位肽中的作用及模拟表位肽在毒素检测中的应用,并展望了该技术的应用前景。

噬菌体展示技术及其应用

噬菌体展示技术是近年来兴起的一种基因表达筛选技术,以噬菌体或噬粒为载体,使外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在载体表面进行融合表达,进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体。该技术实现了表型与基因型的统一,具有广泛的应用前景。本文介绍了噬菌体展示技术的基本原理类型、优势特点及其应用。