褐飞虱中肠内膜结合短肽P2S的筛选

【目的】筛选与褐飞虱Nilaparvata lugens中肠内膜相结合的短肽,探索能阻断褐飞虱传播水稻病毒的新方法。【方法】通过改良的膜饲喂法和噬菌体短肽文库展示技术,模拟褐飞虱正常取食的行为,筛选能够与其中肠内膜结合的短肽。将筛选到的短肽与加强绿色荧光蛋白进行融合表达,经纯化后,将融合蛋白饲喂给褐飞虱若虫,通过荧光显微镜观察饲喂后若虫的中肠。【结果】使用改良的膜饲喂法,16h后褐飞虱若虫的取食率达到91%,24h后达到95%。经形态学验证,确定了一种短肽与褐飞虱中肠内膜具有结合活性,并将其命名为P2S。【结论】改良了针对褐飞虱的膜饲喂法,筛选并验证了能够与褐飞虱中肠内膜结合的活性短肽P2S。研究结果为阻断相关的水稻病毒与褐飞虱中肠内膜间的相互作用研究提供了科学依据,也为褐飞虱新型膜穿孔毒素蛋白的研究提供了理论基础。

与水稻褐飞虱中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)相结合的活性短肽筛选

参照鳞翅目和双翅目昆虫中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)的提取方法,成功提取了水稻褐飞虱中肠BBMV蛋白,利用噬菌体短肽文库展示技术,筛选到2个能够与水稻褐飞虱中肠BBMV结合的短肽P1Z和P2Z.以EGFP蛋白为标签通过Pull down和Western blot方法对短肽P1Z、P2Z与褐飞虱中肠BBMV的结合活性进行了验证.结果表明,利用噬菌体短肽文库展示技术,以褐飞虱中肠BBMV作为底物,经过3轮淘洗筛选到的短肽蛋白与褐飞虱中肠BBMV上的潜在受体具有较强的结合能力.通过对短肽结构域的分析发现,短肽结构α两亲区与β两亲区的分布情况是影响短肽与褐飞虱中肠BBMV结合的一个潜在因素.本研究成功筛选并验证了能够与褐飞虱中肠BBMV结合的短肽.