四甲基偶氮唑蓝比色法测定促肝细胞生长素对SMMC-7721细胞的作用

目的：建立一种用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定促肝细胞生长素对SMMC-7721细胞的促生长作用，以测定其生物活性的方法。方法：在体外采用MTT法，观察促肝细胞生长素在不同浓度（6．2～800．0mg·L^-1）及不同的培养时间（24，48，72h），对不同浓度SMMC-7721细胞（1．5～100．0）×10^3个·mL^-1生长的影响作用，并考察了此方法的重复性、与对人胃癌MGC-830及结肠癌HT-29细胞相比较的特异性及与法定^3H-TdR掺法比较的相关性。结果：MTT法测定结果表明，浓度为100mg·L^-1的促肝细胞生长素在培养时间为48h时。对细胞浓度为2．5×10^4个·mL^-1的SMMC-7721细胞促生长作用最明显（刺激指数SI值≥6．0），此方法重复性好，并对SMMC-7721细胞具有特异性，与^3H-TdR掺法比较测定的SI值差异无显著性。结论：MTT法适用于促肝细胞生长素的活性测定。

四甲基偶氮唑蓝法测定植酸酮对HeLa细胞的作用

目的:分析植酸酮妇科清洗装置(商品名:美福康)Ⅱ型1号及2号对体外培养的HeLa细胞生长的抑制作用,为后期实验提供实验依据。方法:体外培养HeLa细胞,分为实验组和对照组,实验组从8个浓度水平上给药,分别经过24,48,72 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测药物对HeLa细胞增殖的影响。结果:与对照组相比,经2种型号的药物作用后的HeLa细胞存活率降低,凋亡增加,作用呈时间-剂量依赖关系。结论:植酸酮妇科清洗装置Ⅱ型1号及2号均能有效抑制宫颈癌HeLa细胞的生长。

四甲基偶氮唑蓝法测定肠毒素C活性初步研究

目的：探讨四甲基偶氮唑蓝（MTT）法替代升白实验测定肠毒素C（SEC）活性。方法：采用小鼠脾T淋巴细胞增殖试验，用MTT法对20批样品进行脾T淋巴细胞增殖活性测定，在酶联免疫仪上检测吸光度，与空白组比值作为生物活性标准指数。结论：MTT法可靠性、重复性好，易操作，适合替代升白实验作为高聚生的生物活性检测方法。

四甲基偶氮唑蓝法检测自然杀伤细胞活性

四甲基偶氮唑蓝法检测自然杀伤细胞活性崔晓明，谢海宝，林茂芳，张丽娟，叶刚本研究对四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法的有关实验条件及其在检测自然杀伤细胞（ＮＫ）活性中有关的影响因素及可行性作了探讨。一、材料与方法１．试剂和仪器：ＭＴＴ为Ｓｉｇｍａ公司产品，...

四君子汤总多糖及各单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞增殖的影响

目的研究四君子汤总多糖及各单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞增殖的影响。方法以IEC-6细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,观察四君子汤总多糖及各单味药多糖对该细胞增殖的影响。结果各多糖的作用存在差异,茯苓多糖具有明显的促进细胞生长的作用,甘草多糖与党参多糖作用不显著,而白术多糖则具有明显的抑制细胞生长的作用。当采用每两味多糖组合时,结果表明所有两组多糖作用强度远不如四君子汤总多糖。结论四君子汤总多糖的作用可能是各种单味药多糖综合作用的结果,也提示中药复方用药具有一定的合理性。

2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯-4′-胂酸的合成及生物活性初探

本文通过丹皮酚与对氨基苯胂酸 (阿散酸 )进行偶联反应 ,合成了丹皮酚的偶氮化合物 ,即 2 甲氧基 4 羟基 5 乙酰基偶氮苯 4′ 胂酸 (化合物 4 )。同时 ,对该化合物进行了结构表征 ,以及采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度化合物 4作用下不同时间对人肝癌细胞株HepG2细胞生长的抑制作用。初步研究显示化合物 4能明显抑制人肝癌细胞株HepG2的生长 ,其作用呈剂量及时间依赖性 ,且明显强于丹皮酚和阿散酸的单独作用 ,表明其有潜在抗肿瘤活性。

浅蓝霉素对大肠癌细胞的影响

目的：研究浅蓝霉素能否抑制大肠癌细胞的生长及其可能作用机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法观察浅蓝霉素对大肠癌细胞的影响。以流式细胞仪对浅蓝霉素作用后肿瘤细胞的细胞周期变化进行观察。结果：浅蓝霉素对大肠癌细胞生长的抑制作用具有时间－剂量依赖关系，与对照组比较有显著性差异（P＜0．05）。浅蓝霉素引起大肠癌细胞发生G2／M期阻滞。结论：浅蓝霉素通过诱导肿瘤细胞发生G2／M期阻滞而引起大肠癌细胞死亡。

姜黄素-生物素偶联物的合成及抗肿瘤活性研究

为进一步开发安全有效的抗口腔癌药物,利用酰基化法及羧氨缩合法制备一系列姜黄素类衍生物,采用药物拼合原理,使姜黄素连接具有一定抗肿瘤活性及靶向性的生物素,合成一系列姜黄素-生物素偶联物(目标化合物2、4、5),其结构经^(1)H NMR、^(13)C NMR和HR-MS(ESI)确证。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测目标化合物对人口腔表皮样癌细胞(KB细胞)增殖的抑制作用。结果显示:化合物2在作用24 h及48 h时对KB细胞的IC_(50)分别是40.82μmol/L和26.23μmol/L,提示其抗肿瘤活性优于姜黄素。化合物4在作用24 h及48 h时对KB细胞的IC_(50)分别是39.83μmol/L和51.24μmol/L,提示在作用24 h时,其抗肿瘤活性优于原药姜黄素。

大黄素对体外人肺腺癌细胞增殖抑制作用的影响

目的探讨大黄素对人肺腺癌Anip973细胞(简称肺癌细胞)作用的机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和生长曲线测定比较不同浓度的大黄素在不同作用时间内对体外培养的肺癌细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞凋亡率,并对此进行电镜分析。结果在一定范围内,大黄素的浓度越大、作用时间越长对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高,60μmol/L大黄素处理肺癌细胞72h后增殖抑制率达90%。结论大黄素可明显抑制肺癌细胞的增殖,其抑制作用具有时效和量效关系。

热疗促进HSP70表达对免疫效应细胞杀伤肿瘤的影响

目的: 探讨热疗通过促进乳腺癌药物敏感细胞株与多药耐药细胞株表达热休克蛋白 (HSP)70,提高免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性。为开展基于热疗的细胞免疫治疗提供实验依据。方法: 采用IFNγ、CD3单抗、IL 1和IL 2等细胞因子诱导并扩增免疫效应细胞。分别给予乳腺癌药物敏感株MCF7和耐受株MCF7 /ADR非致死温度热冲击 42℃ 1h,继续培养 4h, 24h, 48h后收获细胞,用流式细胞术检测靶细胞上HSP70的表达。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定靶细胞增殖活性以及免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性。结果: HSP70在两种靶细胞上的表达有差异,加热前MCF7 /ADR细胞HSP70表达明显高于MCF7,加热后 4h,HSP70在MCF7 /ADR表达提高了 6倍,在MCF7表达提高了 22倍,超过了耐药株。药物敏感株MCF7增殖的热抑制率低于耐药株MCF7 /ADR。热冲击前免疫效应细胞对MCF7细胞的杀伤活性低于MCF7 /ADR细胞。热冲击后免疫效应细胞对MCF7的杀伤活性提高了 86. 23%,超过了对MCF7 /ADR的杀伤活性 (提高了 30. 32% )。结论: 热疗明显提高HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的表达,增加了免疫效应细胞对这两种靶细胞的杀伤活性。HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的差异性表达对免疫效应细胞的杀伤活性有影响。

姜黄素对肾小球系膜细胞增殖的影响及其意义

目的:观察姜黄素对体外培养的人肾小球系膜细胞(MC)增殖的影响。方法:采用不同浓度姜黄素处理体外培养的人肾小球系膜细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定系膜细胞活性(A值),并与地塞米松进行比较。结果:当姜黄素浓度≥6.25μmol/L时,系膜细胞增殖明显受到抑制,且表现为浓度依赖性;当姜黄素浓度≥50 μmol/L时,姜黄素抑制系膜细胞增殖的作用明显强于地塞米松(P<0.05)。结论:姜黄素能抑制体外培养的人肾小球系膜细胞增殖,且作用强于地塞米松。

藤茶提取物的抗肿瘤作用研究

目的观察藤茶提取物(FL0810)体内外抗肿瘤的作用。方法采用S180腹水瘤模型观察FL0810体内抗肿瘤作用。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究FL0810对肿瘤细胞体外增殖的影响。结果 FL0810能延长S180腹水瘤小鼠生存时间,与模型对照组相比有显著差异(P<0.05);FL0810对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、人前列腺癌细胞DU145均有较强的体外增殖抑制作用,且呈现明显的剂量依赖性,抑制率随着药物浓度增加而增加;72 h半数抑制浓度(IC50)为别为208.71,226.14,150μg/mL。结论藤茶提取物在体内对S180的生长有一定的抑制作用,在体外对人乳腺癌和人前列腺癌有明显的抑制作用。

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞增殖的影响

目的探讨藤梨根乙酸乙酯提取物影响肺癌A549细胞生长增殖的作用机制。方法体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,倒置显微镜观察藤梨根乙酸乙酯提取物作用后A549细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞增殖活性的影响,集落形成实验观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌克隆原细胞增殖的影响,3H-掺入法检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞DNA合成的影响,免疫组化SP法检测用药后A549细胞Ki-67抗原表达变化。结果倒置显微镜下观察细胞形态学变化、MTT实验、集落形成实验结果均显示在体外藤梨根乙酸乙酯提取物在一定浓度下可以抑制肺癌A549细胞的生长,当药物浓度在20～160μg/ml时,抑制呈现出明显的时间和剂量依赖性。并且A549细胞cpm值及增殖指数随着药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐降低,仍以40、80、160μg/ml组作用明显,与对照组比较差异显著,有统计学意义(P<0.05)。结论藤梨根乙酸乙酯提取物可以明显抑制肺癌A549细胞的生长、增殖,其机制可能与抑制细胞DNA合成、降低Ki-67抗原表达有关。

隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的通过测定隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,采用Real Time RT-PCR检测隐丹参酮对VEGF m RNA表达的影响。结果 20、40、60、80、100μmol/L的隐丹参酮作用于人胃癌SGC-7901细胞6-48 h,其生长和增殖均受到一定程度的抑制;24 h为隐丹参酮对SGC-7901细胞抑制作用的最佳时间,IC50为59.11μmol/L;选取40、60和80μmol/L 3个剂量作用于人胃癌细胞SGC7901 24 h后,60和80μmol/L的隐丹参酮均可下调VEGF m RNA的表达（均P〈0.01）。结论隐丹参酮可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并能抑制VEGF mRNA的表达,提示这可能是其抗肿瘤的作用机制之一。

阿魏酸乙酯对过氧化氢损伤人血管内皮细胞的保护作用

目的 :观察阿魏酸乙酯对人血管内皮细胞的保护作用。方法 :实验分对照组、模型组、阿魏酸 4个剂量组、阿魏酸乙酯 4个剂量组。过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤 ,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活数量 ,用比色法测细胞培养液中过氧化物丙二醛含量及乳酸脱氢酶的活性。结果 :阿魏酸乙酯及阿魏酸不同剂量 (2 ,4 ,8,16nmol·L-1)对过氧化氢损伤的人血管内皮细胞具有保护作用 ,可抑制过氧化氢损伤的血管内皮细胞释放乳酸脱氢酶和丙二醛。相同剂量组的阿魏酸乙酯的作用强于阿魏酸。结论 :阿魏酸乙酯具有减轻过氧化氢损伤 ,保护血管内皮细胞的作用 。

polβ高表达与食管癌细胞耐药的相关性

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系及稳定高表达人野生型DNA聚合酶beta(polβ)的食管癌细胞系,分析polβ高表达与食管癌细胞耐药的相关性.方法:顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP;同时脂质体转染法将人野生型polβ重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-AC3转染入Ec9706细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系.荧光显微镜观察转染效果,普通倒置显微镜观察细胞形态变化.RT-PCR方法分别检测耐药细胞与转染细胞中polβmRNA的表达水平,MTT法检测各组细胞对cDDP的敏感性.结果:荧光显微镜下转染细胞荧光强,转染效率高,倒置显微镜下耐药细胞与转染前后细胞形态无明显改变.RT-PCR结果表明耐药细胞Ec9706/cDDP中polβ表达较亲本细胞增加,转染细胞的polβ表达较空载体转染细胞、对照细胞也增加.Ec9706/cDDP细胞耐药指数为15.70;转染后细胞对cDDP的敏感性降低,耐药指数为1.78.结论:成功建立了耐药细胞系Ec9706/cDDP与稳定高表达人野生型polβ的Ec9706细胞系,polβ的高表达可引起耐药性的产生,耐药细胞中polβ的表达也增高.polβ的表达与食管癌细胞的耐药性有一定相关性.

氨甲喋呤对映体对ECV304细胞抑制作用及其机制

目的探讨氨甲喋呤[(±)MTX]及其对映体[(+)MTX、(-)MTX]对ECV304细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法采用培养的ECV304细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期。结果在0.1～150μmol·L-1范围内,(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用于ECV304细胞24、48、72h,均抑制细胞ECV304增殖,但抑制强度依次为(+)MTX>(±)MTX>(-)MTX,倒置显微镜观察不同浓度(±)MTX、(+)MTX和(-)MTX作用ECV304细胞不同时间后,出现细胞体积变小、核固缩等形态学改变。用10μmol·L-1的(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用ECV304细胞48h后,PI单染流式细胞术检测ECV304细胞周期的影响,表明MTX消旋体及单一体干扰ECV304细胞DNA合成。结论(+)MTX和(-)MTX对ECV304细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,(+)MTX的抗ECV304细胞增殖作用明显强于(-)MTX。

细胞毒性试验测定麻痹性贝毒素的检测方法

目的 建立测定麻痹性贝毒素的细胞毒性试验。方法 体外培养小鼠神经母细胞瘤细胞 ,用石房蛤毒素为标准品 ,利用其钠通道阻断剂的特性 ,以四甲基偶氮唑蓝标定活细胞量 ,建立麻痹性贝毒素剂量与吸光度之间的标准曲线。结果 箭毒 /藜芦碱对照组OD值平均为 0 385 0 ,石房蛤毒素在 0 2～ 0 6ng剂量范围内与吸光度值呈直线相关关系 ,得回归方程为y =0 3996 +0 5 0 3x(r =0 9880 ,P <0 0 2 )。 结论 在 0～ 0 6ng剂量范围内 ,石房蛤毒素剂量与所测的OD值呈现剂量反应关系 。

MTT、WST-8法测定细胞生长抑制率的结果比较

体外培养的乳腺癌细胞给予不同浓度的A p igen in处理,72h后分别用M TT、W ST-8法检测细胞生长抑制率。结果两种方法测定的乳腺癌细胞M CF-7生长抑制率结果相似,但W ST-8法步骤少,操作更为简便,值得推广。