土壤放线菌分离方法的初步研究

本文对土壤放线菌的一种新分离技术进行了研究。结果表明 :用加有氟哌酸、青霉素、制霉菌素的培养基 ,可以选择性地从土壤中分离放线菌 ,0 0 5%SDS(十二烷基磺酸钠 )在 4 0℃预处理土壤样品 ,可以促进放线菌的孢子萌发而获得更多的放线菌株 ,进一步提高放线菌的分离效果。

不同种植年限人参地土壤放线菌生态研究

【目的】探索不同种植年限人参地土壤中放线菌的生态差异,分离筛选有较好防效的生防放线菌。【方法】采用稀释平板法及皿内琼脂块法,对采自黑龙江省铁力市小兴安岭南麓桃山、石长不同种植年限(1,5和7年)人参地土壤样品中的放线菌进行分离测数及拮抗放线菌筛选。【结果】①在石长样点,种植5,7年人参地土壤的放线菌总数和链霉菌数量分别为106×105,193×105CFU/g和41×105,83×105CFU/g,其年份间差异均达到极显著水平(P<0.01);小单孢菌及未鉴定放线菌数量分别为11×105,20×105CFU/g和54×105,90×105CFU/g,其年份间差异均达到显著水平(P<0.05),表现出随种植年限的增加,放线菌总数、链霉菌数量及小单孢菌数量均呈增加趋势。桃山样点从高氏1号培养基上分离到的放线菌总数随种植年限的变化趋势与石长样点类似,但高氏1号培养基上的链霉菌数量和小单孢数量及腐殖酸琼脂培养基上的链霉菌数量和放线菌总数则随种植年限的增加而减少。②在筛选出的271株放线菌中,有108株对人参土传病害靶标病原菌有拮抗性,约占全部筛选放线菌总数的40%;在桃山样点,从种植1年人参地土壤筛选到的对5株靶标病原菌有拮抗性的放线菌株数,分别约为种植5年人参地土壤的2.2～12倍,表现出种植年限愈长的土壤中拮抗放线菌株数愈少的变化趋势。③拮抗性较强的菌株有15株,约占全部放线菌的4%,其中以黄色类群较多。④供试土壤有机质及速效N、P、K含量能充分满足放线菌生长,与放线菌数量无显著相关性;土壤pH与拮抗放线菌株数之间的相关性达到显著或极显著水平。【结论】随种植年限增加,人参土传病害加重与土壤放线菌数量的变化,特别是与拮抗放线菌数量的减少有一定关系。

土壤放线菌分离中抑制剂的应用研究

为了提高从土壤中分离放线菌的效率 ,解决土壤中的细菌和真菌对放线菌分离培养中的污染问题 ,研究了重铬酸钾、放线菌酮、制霉素和多菌灵等 4种抑制剂对细菌、真菌及放线菌的作用。结果表明 ,重铬酸钾、放线菌酮对土壤真菌、细菌有明显抑制作用 ,而且可显著提高土壤放线菌的分离效益 ;其中重铬酸钾对放线菌有一定刺激生长的作用 ,是一种高效、方便。

2株塔里木盆地土壤放线菌发酵产物抑菌作用初探

通过离体和活体法测定了土壤放线菌Y3和Y5菌株对病原真菌的抑菌活性和室内药效.菌丝生长速率法测定结果表明菌株Y3发酵液对20种病原真菌中的13种有一定抑制作用,其中对油菜菌核病菌菌丝生长抑制效果最佳,抑制率为95.6%;组织法测定结果表明发酵液对油菜菌核相对防效为93.4%.菌株Y5发酵液对20种病原真菌中的19种菌丝生长有抑制作用,其中对10种菌丝生长抑制率均大于60%,对辣椒疫霉病菌抑制效果最佳,菌丝生长抑制率和孢子萌发抑制率分别为98.7%和90.3%.对这株菌的盆栽法测定表明发酵液对辣椒疫病具有一定的保护和治疗效果,相对防效分别为57.4%和50.3%.说明菌株Y3和Y5有进一步深入研究和开发的价值.

土壤放线菌FX05发酵培养基及发酵条件的优化

以高氏1号培养基为基础,通过单因素分析和正交试验,对土壤放线菌FX05最佳培养基和最优培养条件进行了研究。结果表明:适宜FX05产抑绿脓杆菌活性物质的发酵培养基配方为玉米粉1%、NaNO30.3%、K2HPO40.075%、MgSO40.075%,发酵条件为初始pH为7.0,培养温度为28℃,培养96 h产抑菌物质达最大值。

马铃薯与玉米间作体系根际土壤放线菌多样性及拮抗菌株的筛选

为研究马铃薯间作玉米体系土壤放线菌的群落多样性,采用微生物分离培养技术,运用高氏Ⅰ号培养基对马铃薯单作田、马铃薯间作玉米田和玉米单作田土壤放线菌进行分离培养,对各菌株进行16SrDNA序列分析、纤维素酶活性评价和拮抗植物病原真菌菌株筛选。结果显示,挑取的代表菌株中,马铃薯间作玉米田的17株土壤放线菌均为链霉菌属(Streptomyces),马铃薯单作田的11株放线菌也均为链霉菌属,玉米单作田的16株菌株中仅有1株为小单孢菌属(Micromonospora),其他15株均为链霉菌属;马铃薯间作玉米田、马铃薯单作田、玉米单作田土壤放线菌中具纤维素酶活性的菌株分别占各处理菌株数的41.17%、27.27%和25.00%;具拮抗活性的菌株分别占各处理菌株数的29.42%、27.27%和37.50%,其中,菌株J2-3/4对小麦根腐病菌(Cochliobolus sativus)、小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminisr)、烟草赤星病菌(Alternar iaalternata)和稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)有良好的抑菌效果,抑菌率分别为75.70%、63.97%、64.85%和72.94%。说明:不同种植模式下,土壤放线菌群落结构均较单一,且链霉菌属为优势种群;菌株J2-3/4在作物真菌病害生物防治菌株资源开发中具有良好的潜在价值。

土壤放线菌分离纯化实验的研究

通过精品实验项目"细菌纯种分离和培养"的实施,在环境专业本科生中开展了土壤放线菌的分离、纯化实验。在老师的带领下,学生从崇明岛采集了土壤样品,利用浇注平板法、划线分离法对土壤中的放线菌进行分离、纯化并得到其纯菌。由16S rDNA序列分析结果初步判断:该放线菌为灰黄链霉菌。通过实验中的学习,学生亲身体会了野外采样的过程,锻炼了学生的实践动手能力,激发了学生的学习热情,加深了学生对微生物基础理论知识的理解,促进了学生创新思维和创新能力培养和提高。

云南土壤放线菌生态分布的研究

云南具有极为复杂的地理气候。根据云南省不同的地质、地理、土壤、气候、植被特点选择样区,采集土壤样品,研究了云南不同地区、不同生态环境放线菌的生态分布与植被的关系。将云南土壤放线菌区系划分为热带区系、亚热带高原区系、滇西北高山区系和雪山区系四种类型。对云南土壤放线菌区系的特点进行了讨论。

土壤放线菌Streptomyces sp.2215代谢物的分离鉴定及抗肿瘤活性研究

土壤来源的放线菌Streptomyces sp.2215经发酵罐发酵,培养液经乙酸乙酯提取,硅胶柱层析、C18反相色谱、Sephadex LH-20、及TLC和HPLC分离纯化得到四个化合物,并通过理化性质,IR,FAB-MS,1H,13C NMR,1H-1HCOSY,HSQC,HMBC等鉴定为单亚砜棘霉素(monosulfoxide quinomycine,1)、棘霉素(echinomycin,2)、喹喔啉-2-羧酸(3)、十六烷酸(4)。其中化合物1、2经MTT法测定体外对K562细胞具有抑制活性,其IC50值分别为34.0、1.5 ng/mL。

9株土壤放线菌分离鉴定及抗菌活性

初步研究了贵州习水国家级自然保护区土样放线菌。用改良HV培养基分离放线菌，对9株放线菌进行了形态学、生理生化和分子鉴定，系统发育分析和抗菌活性检测。结果显示：l株为小单孢菌属（Micromonospora），相似性97％；8株为链霉菌属（Streptomyces），相似性96％-99％。抗菌活性检测发现，链霉菌C2对3株供试细菌有抑菌作用，抑菌圈直径8．5～12mm：链霉菌C12对5株供试细菌具有抑菌效果，抑菌圈直径17～20mm。研究结果表明，小单孢菌为稀有放线菌，链霉菌为优势放线菌；C2和C12相比，C2抑菌作用弱，C12抑菌作用强，C12抑菌谱更广，效果更好。

抑制剂对土壤放线菌分离的影响

研究了青霉素、萘啶酸、制霉菌素、重铬酸钾和氟哌酸5种抑制剂对分离土壤放线菌的影响,其中以重铬酸钾的分离效果最好,其次为制霉菌素;通过正交试验研究了重铬酸钾、萘啶酸、制霉菌素3因子组合对放线菌分离的影响;最后用STATISTICA6.0进行分析。正交试验结果分析得到的最优抑制剂组合为重铬酸钾0.6 mg.L-1,制霉菌素10 mg.L-1,萘啶酸10 mg.L-1,其中制霉菌素在3个因子中起的作用最大。

土壤放线菌3423代谢产物的分离纯化及结构鉴定

目的对土壤来源的Streptomyces sp. 3423代谢产物中的抗肿瘤活性成分进行分离纯化和结构鉴定。方法采用MTT法,以对K562细胞的抑制活性为指标,筛选活性菌株。发酵培养液经各种色谱技术分离纯化,并通过对其理化性质、质谱、紫外、红外和核磁共振等图谱数据分析,确定化合物的结构。结果和结论Streptomyces sp. 3423代谢产物中分离得到6个哌嗪二酮类化合物。生物学活性研究发现化合物III和IV对K562细胞具有抑制活性,其中化合物IV活性最强,IC50为14.1μg/ml。

赤水河流域土壤放线菌及其拮抗活性研究

从贵州赤水河流域茅台镇及周边地区采集土样,用高氏1号培养基从6份土样中共分离到放线菌32株,根据形态学和生理生化特征,从中筛选15株进行分子鉴定和系统发育树分析,16S rDNA测序比对结果表明:MA06为白色类诺卡氏菌(Nocardioides albus),MA24为原小单孢菌(Promicromonospora),其余13株为链霉菌(Streptomyces),其中MA03为极暗黄链霉菌(Streptomyces fulvissimus),MA14为Streptomyces europaeiscabiei,MA07属Streptomyces sp.。通过构建系统发育树发现:15株放线菌分离株聚为三支,MA06和MA24各单列一支,其余的聚为第三大支,进一步表明了链霉菌属、类诺卡氏菌属和原小单孢菌属相互之间亲缘关系较远。抗菌活性检测发现M07、M25、M30和M32抗菌作用强,预示其作为生防资源菌和抗生素产生菌的潜在价值。

土壤放线菌分离杂菌抑制方法研究

采用平板涂布法研究了土样不同预处理方法、杂菌抑制剂种类对土壤放线菌分离效果的影响。结果表明：风干处理（7～10d）土样,放线菌的分离效果优于热处理（120℃×1h）,所分离到的放线菌数量和种类较多,且易于纯化,杂菌（细菌、真菌）明显减少,而供试土样经120℃热处理1h几乎未分离出放线菌,细菌数量仍较多,真菌全部被杀死;通过对4种杂菌抑制剂及其组合反复试验,选择出了土壤放线菌分离与纯化适宜的杂菌抑制剂种类（S＋Q）和最佳用量,山梨酸钾（S）、氨苄西林钠（Q）在GA中的最佳使用剂量分别为30、3mg/L,而重铬酸钾（Z）及其组合Z＋Q对土壤细菌、真菌也有一定的抑制作用,但抑菌效果比S＋Q差,且放线菌的分离数量也较低。因此,进行风干处理土样和向放线菌分离培养基（GA）中加入杂菌抑制剂S＋Q双重处理,可得到土壤放线菌分离与纯化较佳的效果。

抗多重耐药金黄色葡萄球菌土壤放线菌筛选

[目的]从土壤中发现拮抗多重耐药金黄色葡萄球菌的放线菌。[方法]将土壤稀释后在高氏一号培养基上划线分离放线菌,并测试抗菌活性。[结果]获得放线菌一株B0602具有很强的抗菌活性。[结论]放线菌B0602可能开发出高活性的抗生素制品。

不同林分土壤放线菌的分布及其与土壤因子的关系

研究了５种不同林分土壤放线菌的分布特征及其与某些土壤因子的相关性。结果表明：①不同林分土壤链霉菌类群分布差异明显，以楠木林下分布的数量和类群最多。②链霉菌各种群在不同林分中有其一定的谱带，且各类群的组成和优势类群的组合有一定的差异。③土壤放线菌的分布与土壤肥力因素成正相关关系。

神农架自然保护区土壤放线菌生态分布的研究

自神农自然保护区采取不同海拔的土壤,在分析其土壤微生物区系的基础上,对其中的放线菌类群及其拮抗性作了研究。

高黎贡山土壤放线菌初步研究

[目的]寻找适合高黎贡山特点的放线菌分离方法，为新种的发现和筛选奠定基础。[方法]采集高黎贡山海拔1500m下7个土样，以K2Cr2O7为抑制剞，对高黎贡山土壤放线菌的分布情况进行了初步的研究。[结果]200mg／LK2Cr2O7具有很好的抑菌效果。放线菌种类丰富，但有机质丰富的土壤中放线菌的分布较耕地、旱地少。供试菌明胶液化培养5d后，中度液化能力的占42％。淀粉水解试验表明，绝大多数供试菌均有较强的水解能力，淀粉水解直径≤1cm的占13％，1～2cm的占40％，〉2cm的占47％。[结论]该研究为进一步对高黎贡山放线菌及微生物资源的研究提供了依据，也为高海拔微生物资源的调查研究做了方法上的准备。

土壤放线菌的选择性分离及其代谢产物抗菌活性评价

从土壤中选择性分离放线菌,并进行抗菌活性评价,以期筛选到具有潜在应用开发价值的菌株。以改良的HV培养基为分离培养基,添加萘啶酮酸、制霉菌素作为抑制剂,对从安徽、重庆、河北、湖北、江苏、吉林、山东、四川、天津、云南及德国莱比锡等地采集的45份土壤样品中的放线菌进行了选择性分离。以植物病原菌黑曲霉、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌、辣椒疫霉、茄青枯病菌为指示菌,通过平板琼脂块初筛,并结合摇瓶复筛和盆栽防效进行评价。共选择性分离到570株放线菌;初筛显示,212个菌株代谢产物显示了抗真菌或抗细菌活性,占总菌株数量的37.2%,33个菌株代谢产物兼具抗真菌活性和抗细菌活性,占菌株数量的5.8%;摇瓶复筛显示,其中2株放线菌TJ231、TJ430发酵液对黑曲霉、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌、辣椒疫霉、茄青枯病菌显示了强烈的抑制效果;1株放线菌TJ561发酵液对黑曲霉、棉花枯萎菌、稻瘟菌、辣椒疫霉显示了强烈的抑制效果;盆栽试验表明,放线菌TJ231、TJ430、TJ561发酵液对辣椒疫霉病的保护效果分别为56.2%、87.2%、61.4%。

贵州西南部土壤放线菌资源及其抗菌活性

为了解贵州西南部土壤放线菌资源及其抗菌活性,从采集土样中分离得到28株放线菌,对其中19株进行了形态学鉴定,其中4株还做了分子鉴定和系统发育分析,并检测了其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、齐整小核菌和拟盘多毛孢的抗菌效果。结果显示,MLH17、MLH18、MLH24、HJ1、C12对金黄色葡萄球菌抑菌效果强,MLH9、MLH3、MLH21、MLH26对金黄色葡萄球菌抑菌效果弱;对大肠杆菌、齐整小核菌和拟盘多毛孢都没有抑制效果。鉴定结果表明链霉菌为优势菌属。