去氢土莫酸在大鼠体外肝微粒体体系中的生物转化研究

目的:研究中药茯苓中主要化学成分之一的去氢土莫酸在大鼠肝微粒体中的生物转化。方法:用大鼠肝微粒体体外温孵法进行去氢土莫酸的生物转化,优化了温孵体系;高效液相色谱法检测和制备原形化合物去氢土莫酸及其生物转化产物,核磁共振波谱法和质谱法确定生物转化产物的结构。结果:去氢土莫酸在苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶作用下,产生2个转化产物,分别为土莫酸和去氢茯苓酸。结论:去氢土莫酸可被苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶转化为土莫酸和去氢茯苓酸。

HPLC法同时测定补益资生丸中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸

目的建立高效液相同时测定补益资生丸中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸成分的分析方法。方法补益资生丸甲醇提取,分析采用Hypersil C18色谱柱;以乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;体积流量1.2 m L/min;白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的检测波长为220 nm,去氢土莫酸、猪苓酸C检测波长为241 nm,茯苓酸为210 nm。结果白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸质量浓度分别在4.12-82.40μg/m L（r=0.999 8）、6.55-131.00μg/m L（r=0.999 4）、4.30-86.00μg/m L（r=0.999 9）、5.35-107.00μg/m L（r=0.999 2）、4.40-88.00μg/m L（r=0.999 7）时与其峰面积线性关系良好;平均加样回收率（n=6）分别为99.0%、97.6%、99.1%、97.0%、97.9%,RSD分别为1.2%、1.6%、1.2%、0.91%、1.5%。结论暂定本品标准为每丸中含白术内酯Ⅲ不得低于0.26 mg,白术内酯Ⅰ不得低于0.15 mg,去氢土莫酸不得低于0.40 mg,猪苓酸C不得低于0.14 mg,茯苓酸不得低于0.20 mg。

大鼠口服茯苓素后血浆中的去氢土莫酸药代动力学研究

目的:建立测定大鼠血浆中去氢土奠酸浓度的高效液相色谱方法,并以去氢土莫酸为指标,研究大鼠灌胃给予茯苓素混合提取物后的药代动力学行为。方法:采用HPLC方法测定大鼠灌胃给予茯苓素混合提取物后,血浆中去氢土莫酸的浓度。色谱柱为ODS枉(200mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇乙腈-2％冰醋酸水溶液(13:12:10),流速为1.0mL·min^(-1),检测波长为242nm,进样量20μL,室温下操作,内标物为丙酸睾丸素。结果:在0.20～20.0μg·mL^(-1)范围内具有良好线性关系(r=0.9981),方法回收率为85.2％～93.6％,日内、日间RSD均小于6.0％,达峰时间约为2h,峰浓度为(10.4±1.4)μg·mL^(-1),药时曲线下面积为32.6μg·mL^(-1)·h^(-1)。结论:此方法稳定、可靠,适用于茯苓素的药代动力学研究。

HPLC法测定茯苓中去氢土莫酸的含量

目的:建立测定茯苓中三萜类化合物去氢土莫酸含量的 HPLC 法。方法:采用 YMC ODS-A 柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%三氟醋酸梯度洗脱:0～20min,75%～85%甲醇,20～25min,85%～100%甲醇;流速为1.0mL·min^(-1);检测波长为243nm;柱温:室温。结果:去氢土莫酸进样量在2.5～20μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9997),回收率为100.7%,RSD 为0.61%(n=5)。结论:此法准确,重复性好,可为评价不同产地的茯苓药材质量提供依据。

茯苓中去氢土莫酸含量测定

目的:建立茯苓中去氢土莫酸HPLC含量测定方法。方法:色谱柱为Shim-pack C_(18)(150 mm×6.0 mm,10μm),流动相:乙腈-四氢呋喃-5%醋酸(65:3:32),流速:1.0 ml.min^(-1),检测波长:242 nm。结果:去氢土莫酸在0～0.8μg范围内线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率98.6%,RSD 2.3%。结论:该方法分离效果好、准确、重复性好,可用于茯苓的质量控制。

RP-HPLC法测定中药茯苓皮中茯苓酸A和3-表去氢土莫酸的含量

目的:建立一种可用于评价茯苓皮药材质量的含量测定方法。方法:采用Dikma Dimonsal C18色谱柱(250mm×4·6mm,5μm),以0·1%甲酸水溶液和乙腈为流动相,流速:1·0mL·min-1,检测波长:243nm,柱温:25℃,用梯度洗脱法同时测定茯苓皮药材中茯苓酸A和3-表去氢土莫酸的含量。结果:测得茯苓酸A和3-表去氢土莫酸的线性范围分别为0·073～0·292g·L-1(r=0·9997)和0·027～0·135g·L-1(r=0·9999);加样回收率分别为102·63%和98·88%。结论:该法能快速、准确地测定茯苓皮中两个活性成分的含量,为茯苓皮的质量控制提供了一个较好的检测方法。

HPLC法同时测定三白草肝炎糖浆中去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A的含量

目的：建立HPLC法同时测定三白草肝炎糖浆中去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A的含量。方法：采用Hypersil C18（4.6 mm×200 mm,5μm）色谱柱;流动相A采用乙腈-甲醇（1︰1）,流动相B采用0.05%磷酸溶液,进行梯度洗脱;流速为1.0 m L·min^-1;检测波长分别为244 nm（去氢土莫酸和茯苓酸）和230 nm（三白草酮和里卡灵A）。结果：去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A分别在5.400-108.0μg·m L^-1（r=0.9995）、6.050-121.0μg·m L^-1（r=0.9992）、11.94-238.8μg·m L^-1（r=0.9997）、4.510-90.20μg·m L^-1（r=0.9994）范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.23%、99.13%、97.99%、96.93%,RSD（n=6）分别为1.02%、0.76%、1.22%、0.88%。结论：本文建立的波长切换HPLC梯度洗脱法可实现同时测定去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A 4种成分,方法操作简便,可作为三白草肝炎糖浆的质量控制方法。

HPLC梯度洗脱法测定咳喘顺丸金丝桃苷、槲皮苷、去氢土莫酸和茯苓酸含量

目的：建立咳喘顺丸中金丝桃苷、槲皮苷、去氢土莫酸和茯苓酸含量的测定方法。方法：Hypersil C18色谱柱（4.6 mm×200 mm,5μm）;体积流量：0.8 mL/min;流动相A为甲醇-乙腈（3：2）,流动相B为0.1%磷酸溶液;检测波长λ1=350nm（检测金丝桃苷和槲皮苷）,检测波长λ2=210 nm（检测去氢土莫酸和茯苓酸）。结果：金丝桃苷、槲皮苷、去氢土莫酸和茯苓酸分别在0.0612-1.2240（r=0.9997）、0.0978-1.9560μg（r=0.9992）、0.0148-0.2960μg（r=0.9996）、0.0216-0.4320μg（r=0.9995）范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.81%、98.36%、96.79%、97.16%,RSD（n=6）分别为1.20%、1.62%、1.03%、1.12%。结论：该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为咳喘顺丸的含量控制方法。

HPLC法同时测定健脾补血片中党参炔苷、丁香苷、去氢土莫酸和茯苓酸的含量

目的:建立健脾补血片中党参炔苷、丁香苷、去氢土莫酸和茯苓酸等四种成分的含量测定方法,提升健脾补血片质量控制标准。方法:采用高效液相色谱法,以Waters Symmetry C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为液相色谱柱,柱温30℃,流动相为乙腈-0.05%磷酸,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长266 nm和210 nm。结果:健脾补血片中4种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9994),平均加样回收率97.38%~100.05%,RSD 0.68%~1.53%。结论:所建立的方法结果准确,为健脾补血片主要成分的质量控制提供依据。

HPLC梯度洗脱法测定咳喘顺丸金丝桃苷、槲皮苷、去氢土莫酸和茯苓酸含量

目的：建立咳喘顺丸中金丝桃苷、槲皮苷、去氢土莫酸和茯苓酸含量的测定方法。方法：Hypersil C18色谱柱（4.6 mm×200 mm,5μm）;体积流量：0.8 mL/min;流动相A为甲醇-乙腈（3：2）,流动相B为0.1%磷酸溶液;检测波长λ1=350nm（检测金丝桃苷和槲皮苷）,检测波长λ2=210 nm（检测去氢土莫酸和茯苓酸）。结果：金丝桃苷、槲皮苷、去氢土莫酸和茯苓酸分别在0.0612-1.2240（r=0.9997）、0.0978-1.9560μg（r=0.9992）、0.0148-0.2960μg（r=0.9996）、0.0216-0.4320μg（r=0.9995）范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.81%、98.36%、96.79%、97.16%,RSD（n=6）分别为1.20%、1.62%、1.03%、1.12%。结论：该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为咳喘顺丸的含量控制方法。

超高效液相色谱法同时测定茯苓中去氢土莫酸等6种活性成分的含量

目的建立同时测定茯苓中去氢土莫酸、土莫酸、猪苓酸C、3-表去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸的超高效液相色谱。方法采用ACQUITY UPLC,HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.05%的磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长采用210 nm。结果去氢土莫酸、土莫酸、猪苓酸C、3-表去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸质量浓度与峰面积分别在5.400～108.0,2.040～40.80,5.020～100.4,2.120～42.40,5.060～101.2和5.100～102.0μg.mL-1内呈良好的线性关系。平均回收率去氢土莫酸为98.0%,RSD为2.9%;土莫酸为99.0%,RSD为2.8%;猪苓酸C为101.5%,RSD为2.5%;3-表去氢土莫酸为97.7%,RSD为2.7%;去氢茯苓酸为101.5%,RSD为2.1%;茯苓酸为99.6%,RSD为1.1%。结论该方法快速、准确,分离度好,可用于同时测定茯苓中多种三萜酸的含量。

分子印迹技术定向分离桂枝茯苓胶囊中活性成分去氢土莫酸

目的建立利用分子印迹技术从桂枝茯苓胶囊提取物中定向分离制备去氢土莫酸的方法。方法以去氢土莫酸为分子模板,采用溶胶-凝胶法制备了去氢土莫酸分子印迹聚合物,并对其吸附性能进行研究。以此聚合物为填料,从桂枝茯苓胶囊提取物中一步分离制备得到去氢土莫酸,根据理化性质和波谱数据鉴定其结构。结果经Scatchard分析,去氢土莫酸分子印迹聚合物最大表观结合位点数(Qmax)为9.10 mg/g。经HPLC检测去氢土莫酸质量分数为90.76%。结论该方法可用于从桂枝茯苓胶囊提取物中靶向分离制备去氢土莫酸,有利于减少提取过程中有机溶剂的使用,操作简单,为其高效分离纯化提供新的方法。

HPLC测定不同产地茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸

目的建立一种测定茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸的方法,并比较不同产地茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸量的差异。方法应用HPLC法测定猪苓酸C、去氢土莫酸的量,色谱柱为Alltima-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水-磷酸(70∶29.85∶0.15);体积流量为1mL/min;检测波长为244nm;进样量为20μL;柱温为30℃。结果测得8个产地茯苓中猪苓酸C、去氢土莫酸的量分别为0.1886～0.5756、0.1137～0.2167mg/g,其中以浙江产茯苓药材中猪苓酸C、去氢土莫酸量最高,四川次之,其他几个产地的量相对较低;猪苓酸C定量测定的线性范围为0.1792～2.2400μg(r2=0.9999),平均加样回收率为98.88%,RSD为1.77%;去氢土莫酸测定的线性范围为0.1372～1.7150(r2=1),平均加样回收率为97.76%,RSD为0.62%。结论所建立的色谱方法可以简便、准确测定茯苓中猪苓酸C、去氢土莫酸的量,重现性好;各产地茯苓中的猪苓酸C、去氢土莫酸的量差别较大,有必要建立猪苓酸C、去氢土莫酸的定量控制方法。

UPLC-MS/MS快速测定茯苓中去氢土莫酸和茯苓酸的含量

目的:建立一种测定茯苓药材中茯苓酸和去氢土莫酸含量的UPLC-MS/MS方法。方法:采用ZORBAX Eclipse plus C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相乙腈-1.0 mmol·L-1乙酸铵(80∶20),流速0.3 m L·min-1,柱温40℃,进样量5.0μL。ESI离子源,负离子模式,多反应监测模式(MRM),检测离子对分别为茯苓酸m/z 527.40/465.30,去氢土莫酸m/z 483.20/421.20。结果:茯苓酸和去氢土莫酸分别在26.2~524μg·L-1(r=0.999 8)和24.2~488μg·L-1(r=0.999 9)线性良好,分析时间为6 min,平均回收率分别为101.4%(RSD 1.2%)和99.8%(RSD 1.2%)。结论:该方法准确、快速、可靠、灵敏,可作为茯苓酸和去氢土莫酸的一种快速定量分析方法。

HPLC法测定参苓健体粉中去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ

目的：建立梯度洗脱联合波长切换高效液相色谱（HPLC）法对参苓健体粉中去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ同时进行测定。方法采用Venusil MP C18色谱柱（250 mmx4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈–0.05%磷酸溶液，梯度洗脱；检测波长：210 nm（0-19 min，检测去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸）、220 nm（19-35 min，检测白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ）；体积流量：0.8 mL/min；柱温：30℃；进样量为10μL。结果去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯III、白术内酯I质量浓度分别在4.62-92.40μg/mL（r＝0.9997）、3.80-76.00μg/mL（r＝0.9999）、5.76-115.20μg/mL（r＝0.9999）、3.95-79.00μg/mL（r＝0.9998）、5.05-101.00μg/mL（r＝0.9996）与峰面积关系良好；回收率分别为99.24%、97.75%、98.66%、98.49%、99.10%，RSD值分别为1.23%、1.79%、1.66%、0.80%、1.25%。结论建立的方法操作简便、结果可靠，可用于参苓健体粉的质量控制。

茯苓中去氢土莫酸和茯苓酸含量的高效液相色谱波长切换法同时测定

目的建立茯苓中去氢土莫酸和茯苓酸含量的测定方法。方法采用紫外波长转换检测的RP-HPLC法。色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（4.6mm×150 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液（75∶25）,检测波长为0~5 min,241 nm（去氢土莫酸）,5~16 min,210 nm（茯苓酸）,流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃。结果去氢土莫酸和茯苓酸分别在25.5~255.0μg·ml-1（r=0.9999）和11.16~111.6μg·ml-1（r=0.9999）,浓度与峰面积呈良好的线性关系;方法回收率分别为100.4%（RSD=2.8%）、99.1%（RSD=2.9%）。结论 HPLC法快速、准确、选择性好、灵敏度高,适合茯苓中去氢土莫酸和茯苓酸的含量测定。

HPLC法测定威喜丸中猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸

目的建立HPLC波长切换法同时测定威喜丸中猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸的方法。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.05%磷酸溶液,梯度洗脱;0～24.0 min在248 nm波长下检测猪苓酮B和猪苓酮A,24.0～50.0 min在210 nm波长下检测去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸;体积流量1.0m L/min;柱温30℃;进样量为10μL。结果猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸分别在5.79～115.80、1.66～33.20、3.28～65.60、7.07～141.40、1.46～29.20、0.88～17.60μg/mL与峰面积线性关系良好;平均加样回收率分别为98.75%、97.60%、98.23%、99.49%、97.10%、96.81%,RSD值分别为0.75%、1.66%、1.44%、0.90%、1.15%、1.38%。结论本方法简便、准确、重复性好,为威喜丸的质量控制提供了实验依据。

HPLC法测定八珍液中地黄苷A、地黄苷D、去氢土莫酸和茯苓酸

目的建立HPLC同时测定八珍液中的地黄苷A、地黄苷D、去氢土莫酸和茯苓酸的方法。方法 Kromasil C18色谱柱（200 mm×4.6 mm,5μm）;流动相：乙腈–0.05%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长：203 nm（0-34 min,检测地黄苷A和地黄苷D）、210 nm（34-65 min,检测去氢土莫酸和茯苓酸）;体积流量1.0 m L/min。结果地黄苷A、地黄苷D、去氢土莫酸和茯苓酸分别在5.76-115.20、4.05-81.00、6.10-122.00、6.35-127.00μg/m L线性关系良好;平均回收率分别为98.90%、99.08%、98.71%、97.95%,RSD值分别为1.49%、1.19%、1.63%、0.92%。结论该方法操作简便,准确,重复性好,可作为八珍液的质量控制方法。

HPLC法测定八味肾气丸中去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇和桃叶珊瑚苷

目的建立同时测定八味肾气丸中去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇、桃叶珊瑚苷4个成分的高效液相色谱测定方法。方法采用Hypersil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈–0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长：0~18 min,241 nm（去氢土莫酸）;18~50 min,210 nm（茯苓酸、梓醇和桃叶珊瑚苷）;体积流量为1.0 m L/min;柱温25℃;进样量20μL。结果去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇和桃叶珊瑚苷分别在3.35~67.00μg/m L、3.50~70.00μg/m L、3.07~61.40μg/m L、3.25~65.00μg/m L线性良好,r值均大于0.999 0,平均回收率分别为96.72%、97.87%、98.21%、98.09%,RSD值分别为1.08%、0.95%、0.64%、1.22%（n=6）。结论该方法简便,结果准确,可用于八味肾气丸中去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇、桃叶珊瑚苷的质量控制。

UPLC-MS/MS法测定茯苓、茯苓皮和茯神中茯苓新酸B、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸

目的建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定茯苓、茯苓皮和茯神中茯苓新酸B、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸。方法采用Shim-pack GIST C18AQ色谱柱(100 mm×2.1 mm,3μm),以乙腈–0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,柱温40℃,进样量5μL。质谱采用离子源:ESI,负离子模式采集,采集模式:多反应监测(MRM),离子源温度150℃,毛细管电压2.5 kV,锥孔电压40 V,去溶剂气流量900 L/h,去溶剂气温度500℃。结果茯苓新酸B、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸在各自的线性范围内线性关系良好,平均回收率分别为97.80%、99.65%、97.32%、102.82%、99.57%,RSD值分别为3.46%、1.29%、3.01%、3.11%、1.89%。茯苓皮中5种三萜类成分含量均高于茯苓和茯神。结论本法具有分析速度快、准确度高的优点,可为茯苓、茯苓皮和茯神的质量标准提高和开发利用提供依据。