微囊藻毒素-LR超灵敏均相免疫分析方法的建立与优化

目的基于多克隆抗体免疫分析,构建并优化一种超灵敏、均相的光激化学发光法（AlphaLISA）,用以检测水体中微囊藻毒素（MC）-LR含量。方法采用竞争原理,MC-LR人工抗原偶联的发光微球与标准品或样品MC-LR共同竞争限量一抗,再被二抗捕获,然后再通过生物素-亲和素与感光微球形成成免疫复合物,此时感光微球与发光微球发生接近,则产生并传递能量,发出特殊荧光。选择了合适的一抗和二抗工作稀释度,比较缓冲体系和反应时间的作用,从而优化了反应条件。结果通过优化反应条件,即筛选合适的一抗和二抗反应浓度、缓冲体系和反应时间,从而构建了MC-LR AlphaLISA检测法,其总反应时间40 min,灵敏度0.006μg·L^-1,可测线性范围0.006～5μg·L^-1,变异系数小于10%,平均添加回收率107.7%,与MC-RR和MC-RY的交叉反应率分别为13.2%和0.91%。结论本研究方法灵敏度高,特异性好,免疫反应迅速,适用于多样本量水体的MC-LR检测。

癌胚抗原毛细管电泳-化学发光均相免疫分析

设计了一种测定人血清中癌胚抗原的毛细管电泳-化学发光检测均相免疫分析新方法。采用四苯硼酸钠增强luminol-H2O2-HRP体系化学发光的原理,化学发光检测经毛细管电泳分离的,用辣根过氧化物酶（HRP）标记的癌胚抗体及免疫复合物。测定癌胚抗原的线性范围2.0-80.0μg/L（R=0.9921）,检出限为0.1μg/L（绝对检出限为0.75 fg）。

癌胚抗原毛细管电泳-化学发光均相免疫分析

建立了一种测定人血清中癌胚抗原的毛细管电泳．化学发光检测的均相免疫分析新方法。采用四苯硼钠增强luminol—H2O2-HRP体系化学发光的原理，化学发光检测经毛细管电泳分离的，用辣根过氧化物酶（HRP）标记的癌胚抗体及免疫复合物。测定癌胚抗原的线性范围2．0～80．0ug／L（R=0．9921），检出限为0．1ug／L（绝对检出限为0．75fg）。

光激化学发光均相免疫分析的应用动态

光激化学发光均相免疫分析(LOCI)技术,是一种新型的免疫纳米传感技术,它结合了激光技术、化学发光传感技术与免疫分析技术的优点,并以其简单快速、灵敏度高、特异性强、适用面广等优势引起越来越多的关注,成为当今免疫传感检测领域的前沿热点.LOCI技术有效避免了传统免疫分析方法中的洗脱、分离等繁琐步骤,降低了交叉反应的可能性以及背景噪音的影响,显著提高了分析效率和检测灵敏度.LOCI技术在诸多领域的高通量检测和筛选中得到了广泛应用,因此,极有必要对LOCI技术的相关应用及发展趋势进行总结,从而加速其推广应用.本文综述了LOCI技术在生物医学、药物学、食品安全以及检验检疫等领域的应用状况,并根据各自学科发展的不同特点探索了其发展趋势.

荧光共振能量转移体系的均相免疫分析对前列腺癌诊断运用价值初探

目的：初步探索荧光共振能量转移体系（FRET）的均相免疫分析对前列腺癌诊断运用价值。方法：选择2013年5月至2014年9月我院收治的182例前列腺疾病患者,其中有31例患者为前列腺癌（PCa）,151例患者为前列腺增生（BPH）。选择同期在我院进行健康体检的122例男性健康人群。采取FRET的均相免疫分析法对游离前列腺特异抗原（f PSA）和总前列腺特异抗原（t PSA）指标进行测定。分别观察三组人群的f PSA、t PSA、f/t PSA三项指标。依据PCa患者检测的TPSA值,采用TPSA〈4μg/L、4~10μg/L以及〉10μg/L三组指标,将其患者分为A、B、C组,从中对其三组之间的f PSA、t PSA、f/t PSA三项指标进行比较。当TPSA〈4μg/L时,比较正常人群和前列腺患者之间的三项指标。结果：三组人群的f PSA、t PSA、f/t PSA三项指标均存在明显的差异,差异具有统计学意义（P〈0.05）。三组患者的f PSA、t PSA、f/t PSA三项指标均有明显的差异,差异具有统计学意义（P〈0.05）。前列腺癌患者和正常人群t PSA〈4μg/L的f PSA、t PSA、f/t PSA指标比较存在明显的差异,具有统计学意义（P〈0.05）。结论：采用FRET的均相免疫分析法对f PSA和t PSA指标进行检测,能够准确、快速的提供有效的临床依据,在前列腺癌诊断中具有较高的诊断价值,值得广泛推广使用。

普鲁士蓝增敏压电均相免疫分析法测定免疫球蛋白G

建立了普鲁士蓝增敏的均相压电免疫分析法,用于人尿液中免疫球蛋白G(IgG)的检测。本方法以蛋白质为种子,形成蛋白质-普鲁士蓝粒子,该粒子不断"滚雪球"增大,使得压电检测信号明显放大。在pH 4.0、盐浓度0.1 mol/L,5 mmol/L FeCl3,2.5 mmol/L K4Fe(CN)6(K4Fe(CN)6与蛋白浓度比≥5000),FeCl3加样速度为0.5μL/s的优化条件下,IgG的检测范围为0～625 nmol/L;检出限为2.4 nmol/L。α1-微球蛋白,β2-微球蛋白、尿微量白蛋白均无明显干扰。本方法用于临床样本的IgG测定,并与免疫比浊法进行对比,两者结果一致,表明本方法可行。

一种新型多元均相时间分辨荧光免疫分析方法的建立

制备出具有光学特异性的3种不同颜色量子点纳米微球和铽螯合物,分别与CEA、AFP和HBsAg的两株抗体偶联,采用双抗体夹心法模式,充分利用两株抗体与抗原的相互作用,通过采集不同量子点发出的荧光信号,根据其信号的强弱判定标记在量子点纳米微球上的抗体结合的抗原的量,从而实现多元待分析物的定性定量分析.结果表明,量子点的荧光信号与CEA、AFP和HBsAg抗原浓度呈线性关系,其函数分别为:lgY=2.791 73+0.915 84lgX(R=0.998 08)、lgY=3.695 43+0.456 44lgX(R=0.998 48)和lgY=4.128 98+0.409 45lgX(R=0.998 45),分析灵敏度分别为:0.44、0.24和0.02ng/mL.

均相酶扩大免疫分析法监测地高辛血浓度的质量控制与评价

目的:评价和控制均相酶扩大免疫分析法(Emit)监测患者地高辛血浓度的质量。方法:以标准质控为样本,进行预防性质量控制和室内质量控制研究。对2008年血药浓度监测中随行质控样本的测定值进行统计学分析,做回顾性的质量控制研究,同时建立新的质控规则。结果:Emit法在本单位实验条件下,地高辛低(L)、中(M)、高(H)三种浓度质控日内、日间RSD在2.19%～6.30%之间,平均回收率在97.92%～104.19%之间,符合《中国药典》生物样品检测规定。2008年随行质控的RSD,L、M、H分别为14.45%、14.11%和11.30%,适合本单位的质控规则为1_(2S)/1_(3S)/2_(2S)/4_(1S)/7tr。结论:Emit法监测地高辛血药浓度是一种较理想的测定方法,但是该法的影响因素较多,特别是温度,必须做好质量控制。

均相酶扩大免疫分析法与高效液相色谱法测定癫痫患儿丙戊酸钠血药浓度比较研究

目的考察均相酶扩大免疫分析法(enzyme-multiplied immunoassay test,EMIT)和高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分别测定癫痫患儿丙戊酸钠血药浓度的相关性,为临床测定丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)血药浓度方法学选择提供依据。方法收集服用丙戊酸钠的癫痫患儿血样200例,分别用均相酶扩大免疫分析法和高效液相色谱法进行测定,对结果的相关性进行分析。结果以HPLC法测定结果(X)与EMIT法测定结果(Y)作回归方程如下:Y=1063.517X-331.351(r=0.933),此2种测定方法具有显著相关性(P<0.05﹚,EMIT法测定血浆VPA浓度较HPLC法偏高。结论均相酶扩大免疫分析法和高效液相色谱法测定癫痫患儿丙戊酸钠血药浓度结果具有显著相关性,临床在进行丙戊酸钠血药浓度测定中应根据实际情况选择方法。

均相酶免疫分析法测定霉酚酸血药浓度的方法学评价

目的建立霉酚酸(MPA)血药浓度方法学平台并评价试剂盒的稳定性。方法评价霉酚酸血药浓度的精密度、回收率、线性等相关指标,并分析经霉酚酸和他克莫斯(FK506)联合用药患者血标本中两种药物血药浓度的相关性。结果高、中、低浓度批内变异系数分别为7.08%,1.49%,2.16%,批间变异系数分别为8.51%,5.93%,3.12%,在0.1-15μg/ml范围内,线性良好。与FK506的联合用药检测中未发现相关性。结论该方法操作简便、快速、准确、稳定,可用于临床病人霉酚酸血药浓度监测。

均相酶免疫分析技术检测血清硫酸去氢表雄酮浓度的方法学建立

目的基于均相酶免疫分析技术建立检测体系,检测血清中硫酸去氢表雄酮浓度。方法收集解放军总医院第一医学中心健康查体人员血清标本,用本方法检测标本中硫酸去氢表雄酮浓度,参照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)的EP文件对该方法进行正确度、精密度、线性范围、可报告范围、生物参考区间的验证。结果5份校准品偏倚百分比均小于12.5%,正确度验证通过;高、低水平标本检测结果批内变异系数(CV)≤6.25%,批间CV≤8.33%,精密度验证通过;检测线性范围为10.0~1200.0μg/dL;临床可报告范围上限6000.0μg/dL;建立正常人群血清硫酸去氢表雄酮参考区间为10.0~610.0μg/dL,20份用于验证的标本DHEA-S浓度全部在参考区间内。与贝克曼原装试剂测试结果的相关系数为0.987,一致性较好。结论该检测方法能够满足临床DHEA-S项目的检测需求,可以进一步推广使用。

基于量子点的新型均相荧光免疫分析技术

研究一种检测人血清中癌胚抗原(CEA)的新型量子点均相免疫分析方法。制备还原型谷胱甘肽包被的水溶性量子点(QDs),偶联上抗CEA单克隆抗体,使异硫氰基荧光素(FITC)偶联上另一株抗CEA单克隆抗体,采用双抗体夹心法模式,充分利用两株抗体与CEA抗原的相互作用,从而验证QDs、FTTC两者与抗体偶联的生物活性,并研究QDs用于均相荧光共振能量转移(HFRET)免疫分析中的可行性与实用性。结果表明,FITC与QDs之间能够发生能量转移,其荧光共振能量转移信号与CEA浓度成线性相关,其工作曲线为LogY=2.504+0.154LogX(r2=0.981 97,P=0.002),并计算出其分析灵敏度为0.4ng/mL。该新型均相荧光免疫分析方法具有不需冲洗掉游离荧光标记物、灵敏度高等优势,为今后实现快速便捷、多通道、高灵敏度、微量化、自动化及高通量化的生物医学传感技术和现代免疫分析技术提供科学依据。

均相光激化学发光免疫分析技术的研究进展

均相光激化学发光免疫分析技术是一种基于纳米微珠的化学发光的新型技术,其具有更高的敏感度、均一性、背景低,且不用洗涤及样本需求量少等特点。该技术可用于生物标志物、激酶及抗原抗体的检测,蛋白:蛋白相互作用的检测,高通量分析的研究及疾病诊断等方面。优化和发展均相光激化学发光免疫分析技术将会在更多研究领域中得到应用。

均相时间分辨免疫分析铕穴状螯合剂的合成

以2,6-二(溴甲基)吡啶-3,5-二甲酸二乙酯为起始原料,经溴化、取代、加成及酸化反应合成了两种铕穴状荧光螯合剂Eu 3+ 2,6-{ N,N′,N,N′-[二(2,2′-联吡啶-6,6′-二甲基)]二(氨甲基)}-吡啶-二羧酸[Eu 3+ bpy.bpy.py(CO 2 H) 2 , 1 ]和Eu 3+ 2,6-{ N,N′,N,N′-[二(2,2′-联吡啶-6,6′-二甲基)]二(氨甲基)}-吡啶-二[ N -(2-氨基乙基)酰胺]{Eu 3+ bpy.bpy.py[CONH(CH 2 ) 2 NH 2 ] 2 , 2 },其结构和性能经 1 H NMR, MS(ESI)和荧光光谱表征。结果表明: 1 的最佳激发波长为312 nm,发射特征峰位于598和615 nm,荧光寿命为 1 064 μs,量子产量为10%。 2 的最佳激发波长为311 nm,发射特征峰位于597和616 nm,荧光寿命为398 μs,量子产率为12.1%。

均相化学发光免疫分析技术定量检测NT-proBNP方法的建立

目的建立一种基于均相化学发光免疫分析技术定量检测血清N-末端脑钠肽前体(NT-proBNP)的方法。方法以生物素化的NT-proBNP单克隆抗体1、包被有NT-proBNP单克隆抗体2的受氧微球和包被有链霉亲和素的供氧微球作为检测试剂,实现对NT-proBNP含量的检测,并对该方法的灵敏度、线性范围、精密度、准确度进行初步评价。结果均相化学发光免疫分析技术可以用于检测NT-proBNP含量,其分析灵敏度为:10 pg/mL,检测范围为:20.0~30000.0 pg/mL,批内及日间变异系数均小于10.0%。本方法与罗氏电化学发光检测试剂盒平行检测55例临床样本,两者的相关系数达0.99。结论均相化学发光免疫分析技术定量检测血清NT-proBNP检测方法的建立为临床应用提供了参考依据。

血清肌钙蛋白-I均相化学发光免疫检测方法的建立

目的：采用光激化学发光免疫分析技术建立血清肌钙蛋白-I（cTnI）均相免疫检测方法。方法：使用兔抗人cTnI多克隆抗体包被受体微球,羊抗人cTnI单克隆抗体进行生物素化与链霉亲和素包被的供体微球共同构成检测试剂,优化反应条件并进行方法学评价。结果：本方法快速、敏感,检测时间为17.5 min;分析灵敏度为0.045 ng/mL,功能灵敏度为0.053 ng/mL;回收率为104.96%～108.21%;批内精密度为3.88%～5.53%,批间精密度为7.60%～8.75%;特异性分析中各种内源性物质的干扰率均〈10%;本方法测得的cTnI正常参考值上限为1.05 ng/mL。与直接化学发光检测法具有良好的相关性（r2=0.979）。结论：本研究建立的方法能够用于定量检测血清cTnI,该方法具有均相、免清洗分离等优点,为临床提供了一个便捷高敏的检测平台。

血清糖链抗原-125均相化学发光免疫检测方法的初建

目的建立血清糖链抗原-125(CA125)光激化学发光免疫分析的检测方法。方法用兔抗人CA125多克隆抗体包被受体微球,1株单克隆抗体用生物素标记,与链霉亲和素包被的供体微球共同组成试剂检测人血清CA125,利用棋盘滴定法确定受体微球及生物素化抗体的最适浓度并进行方法学评价。结果本方法的批内及批间精密度为3.93%～4.40%和5.60%～8.39%;功能灵敏度为3.91 U/ml,分析灵敏度为3.49 U/ml;回收率为105.14%～108.74%;特异性分析中溶血、黄疸和类风湿疾病的干扰率均<10%;本文建立方法的CA125参考值上限为26.53 IU/ml;采用本方法检测50份临床标本结果与Roche Elecsys 2010电化学发光检测法的结果相关系数为0.974。结论本研究建立的方法能够用于定量检测血清CA125,且具有免洗涤、灵敏度强、准确性高、重复性好、便于操作等优点。

基于纳米金多光子激发荧光的均相免疫检测新方法

本文报道了粒径小于20nm的球形纳米金颗粒(AuNSs)的强多光子激发荧光,这主要归因于多光子激发过程中的高光子密度引起的局域场增强效应。AuNSs的多光子荧光与影响局域场增强效应的颗粒尺寸及团聚程度有关。基于吸附在纳米金表面的BSA与Anti-BSA的作用引起纳米金团聚导致其多光子荧光增强,结合近红外区的多光子激发可以避免生物分子自发荧光及散射光的干扰这一优势,建立了一种高灵敏、高选择性检测血清中Anti-BSA的均相免疫分析方法。检测的线性范围从1.16nmol/L到35nmol/L,检出限为0.08nmol/L。而且通过在纳米金颗粒表面包覆硅壳实现了纳米金的荧光增强及表面功能化,由此可以建立一系列基于纳米金多光子荧光的分析检测方法。

半自动生化仪在磁分离均相酶联免疫分析技术中的应用

本文对近年来兴起的磁分离均相酶联免疫分析技术(MAIA)中使用的Serono测定仪与半自动生化仪在测定性能上做了系统比较，尝试了用半自动生化仪开展MAIA技术的可能性。结果显示：如果对半自动生化分析仪比色方式做合理调整，完全可以替代Seronp专用测定仪开展MAIA技术，并且，在准确性上，很可能优于Serono仪，这对无Serono仪而需开展此项技术的实验室具有指导意义。

微流体芯片技术在免疫分析中的应用

微流体芯片技术最初起源于分析化学领域,它采用网络式的通道结构为免疫分析研究提供一个新的平台。在微流体芯片通道中,人们利用它所提供的较高比表面积来完成免疫反应,这样可大大提高分析速度,改善分析效率并降低样品和试剂消耗。随着微电子及微机械制作技术的不断进步,近年来微流体芯片技术发展迅速,并开始在化学、生命科学及环境科学等领域发挥越来越重要的作用。本文对微流体芯片技术在均相免疫分析和非均相免疫分析中的应用进行综述,介绍用于免疫分析研究的多种微芯片系统并讨论在芯片上进行免疫反应的各种方法。