基于网络药理学探究垂盆草保护急性肝细胞损伤的作用机制

目的通过网络药理学和体外细胞实验,探究垂盆草保护急性肝损伤的有效成分及潜在的功能机制。方法利用网络药理学和生物信息学预测垂盆草的有效成分、主要活性成分和靶点。800μl的四氯化碳(CCl_(4))处理肝细胞HepaRG 2 h,构建肝细胞损伤模型;10μmol/L异鼠李素或白细胞介素(IL)-17信号通路激活剂SR0987处理HepaRG细胞,再CCl4溶液培养2 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝损伤生化指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH);细胞计数试剂盒(CCK8)、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡;逆转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、Western印迹检测IL-17 mRNA和蛋白表达。结果中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药综合数据库(TCMID)分析垂盆草得到5种主要活性成分,302个靶基因;疾病相关的基因与突变位点数据库(DisGeNET)、人类孟德尔遗传数据库(OMIM)分析肝损伤得到398个靶基因,与有效成分靶基因取交集,共有177个靶基因。通过对靶基因的京都基因组百科全书(KEGG)富集分析和基因本体论(GO)富集分析发现,IL-17信号通路富集率和差异均最高。体外细胞实验表明,成功构建CCl4诱导HepaRG细胞模型,模型细胞ALT、AST、LDH、MDH含量均显著升高,增殖率显著降低,凋亡率显著升高,IL-17 mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05);异鼠李素处理后,这些指标的变化均得到抑制。SR0987处理后明显减弱异鼠李素的作用。结论垂盆草的主要活性成分异鼠李素通过抑制IL-17信号通路的活性发挥肝保护作用。

垂盆草饮片及其提取物高效液相色谱指纹图谱与多成分含量测定

目的评价垂盆草饮片及其提取物的质量。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定垂盆草饮片中没食子酸、金丝桃苷、木犀草苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素的含量,色谱柱为Hanbon Hedera ODS-2 C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm(没食子酸)和350 nm(金丝桃苷、木犀草苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素),柱温为35℃,进样量为20μL。建立15批垂盆草饮片及其提取物的HPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)进行相似度评价,结合主成分分析法对垂盆草饮片及其提取物进行质量评价。结果15批垂盆草饮片中6种成分平均含量为0.0054%~0.0488%,RSD为3.05%~24.84%;15批垂盆草提取物中6种成分的平均含量为0.0323%~0.2725%,RSD为44.06%~77.20%。共确定20个共有峰,指认出峰1为没食子酸、峰9为金丝桃苷、峰10为木犀草苷、峰15为槲皮素、峰18为山柰酚、峰20为异鼠李素。垂盆草饮片相似度为0.739~0.942,垂盆草提取物相似度为0.735~0.998。主成分分析结果显示,垂盆草饮片及其提取物分别得到2个和3个主成分,累计方差贡献率分别为97.130%,94.648%;垂盆草饮片及其提取物主成分综合得分排序按样品编号从大至小分别为S2>S1>S3>S4>S5>S6>S9>S7>S8>S10>S12>S13>S11>S14>S15,T14>T12>T15>T13>T11>T7>T9>T1>T2>T8>T3>T10>T4>T6>T5。结论所建立的方法简便快速、稳定可靠,可用于垂盆草饮片及其提取物的质量控制与评价。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术的垂盆草化学成分表征与鉴定

建立超高效液相-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS),表征与鉴定垂盆草中的化学成分。采用Phenomenex Kinetex C 18(2.1 mm×100 mm,2.6μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量为3.0μL;选择电喷雾离子源,正、负离子模式扫描。根据化合物的保留时间、精确分子量、二级碎片离子、裂解规律及对照品比对进行化合物分析鉴定。结果显示,从垂盆草中共鉴定或初步推导出了53个化学成分,主要包括25种黄酮、12种Megastigmanes类化合物、11种有机酸、3种生物碱及2种其他化合物。其中有5种化合物与对照品比对获得鉴定,3种化合物目前未见报道。该研究建立的UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS方法可快速且全面表征垂盆草的化学成分,为其质量控制及药效物质基础研究提供参考数据。

垂盆草抗逆性研究现状与展望

垂盆草是中国南方喀斯特地区典型的石生耐旱药食植物,具有药用价值、经济价值和生态价值。为了掌握垂盆草的抗逆性,挖掘垂盆草的潜在价值。从耐旱、耐寒、耐高温、光照适应性和重金属与盐碱化适应性五个方面综述了垂盆草抗逆性。经分析,垂盆草抗逆性机制研究较少,今后要进一步深入研究垂盆草抗逆性的机制。垂盆草在耐旱、耐高温、耐低温上的综合表现明显,考虑石漠化缺水易干旱的环境,建议将垂盆草与苔藓结皮组合用于石漠化环境的裸岩植被生态修复,可以减轻裸岩加热效应,改善石漠化生态系统,开创新的土地资源。

垂盆草药材质量控制方法研究

以垂盆草苷为指标 ,用TLC法 ,建立了垂盆草药材的定性鉴别方法 ;用RP -HPLC法测定了两个产地垂盆草药材中垂盆草苷的含量 ,结果表明 ,南京紫金山样品平均含量为 :0 .40 5 % ,RSD =4.0 7% (n =5 ) ;宜兴凤凰山样品平均含量为 :0 .42 5 % ,RSD =4.40 % (n =5 )。数理统计显示 ,两者比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。

垂盆草甘草煎剂与垂盆草冲剂治疗非酒精性脂肪肝的疗效比较

目的验证垂盆草甘草煎剂和垂盆草冲剂对非酒精性脂肪肝的疗效。方法非酒精性脂肪肝80例，分治疗组和对照组各40例，分别接受垂盆草甘草煎剂与垂盆草冲剂治疗，2mo后比较两组血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)正常化率和门冬氨酸氨基转移酶(AST)下降幅度。结果治疗组和对照组ALT正常化率分别为85％(34／40)和57．13％(22／40)，TG正常化率分别为65．37％(21／33)和33．29％(10／32)；AST下降幅度分别为(29．12+10．21)U／L和(12．31+7．17)U／L。两组ALT和TG正常化率和AST下降幅度之间均有显著性差异(P<0．05)。结论在改善肝功能及降低血清甘油三酯方面，垂盆草甘草煎剂对非酒精性脂肪肝的疗效优于垂盆草冲剂。

垂盆草苷的合成

目的：垂盆草苷（1）是从垂盆草（Sedum sarmentosum Bunge)中分得的，能降低慢性病毒性肝炎病人血清谷丙转氨酶的活性成分并有免疫调节作用。以1，2，4－丁三醇－1，2－丙缩酮（3）为原料，经8步反应完成其全合成。方法和结果：溴化α－D－四乙酰基吡喃葡萄糖在氧化银和分子筛存在下，与3缩合生成β－葡糖苷4。去缩酮保护后，伯醇基用三苯甲基保护得化合物6。6的仲醇基用PCC氧化成酮7，羰基与丙酮合氰化氢交换得到加成物8。氰醇8用氯化亚砜脱水，形成所需的E式双键化合物9。用三甲碘硅烷脱除三苯甲基得烯丙醇10，最后用三乙胺含水甲醇溶液除去乙酰基，得目标产物1。总产率5.8%。结论：首次完成了天然产物垂直盆草苷的人工合成。

超声波辅助乙醇提取垂盆草中总黄酮及其抗氧化活性

用超声波辅助乙醇提取湘西垂盆草中的总黄酮。通过单因素和正交试验讨论料液比、乙醇体积分数、超声时间、温度等因素对提取效果的影响,考察黄酮提取物对油脂的抗氧化性能及对羟自由基的清除效果,并与一些天然抗氧化剂作比较。结果表明:在80℃条件下,选择40%乙醇为提取剂、料液比1:25(g/mL)、超声40min,提取率达到1.968%。提取物对羟自由基的清除作用明显,并能增加植物油和动物油的抗氧化能力,在相同条件下该提取物对油脂的抗氧化效果强于柠檬酸而弱于VC。

垂盆草中的甾醇化合物

从景天科药用植物垂盆草的新鲜全草中分离到４种甾醇类成分，经化学和光谱鉴定为：β－谷甾醇（β－ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ），胡萝卜甙（ｄａｕｃｏｓｔｅｒｏｌ），３β，６β－豆甾－４－烯－３，６－二醇（３β，６β－ｓｔｉｇｍａｓｔ－４－ｅｎ－３，６－ｄｉｏｌ）和一新化合物３β，４α，１４α，２０Ｒ，２４Ｒ－４，１４－二甲基麦角甾－９（１１）－烯－３－醇（３β，４α，１４α，２０Ｒ，２４Ｒ－４，１４－ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｒｇｏｓｔ－９（１１）－ｅｎ－３－ｏｌ）。

垂盆草的研究进展

本文从化学成分、药理学作用和开发应用等方面对垂盆草研究进行综述,为充分利用垂盆草资源提供科学依据。

垂盆草不同提取部位保肝降酶试验

目的 :确定垂盆草的活性部位 ,为保肝降酶活性组分的筛选提供线索和依据。方法 :用 80 % Et OH对原药材进行回流提取 ,然后 ,依次用 Pet、Et OA c、n-Bu OH对垂盆草药材的醇浸膏进行萃取 ,分别制得 Pet部分、Et OAc部分、n-Bu OH部分和 H2 O部分 ,通过保肝降酶试验 ( D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤 ) ,考察其活性部位。结果 :实验表明 ,H2 O部分及 n-Bu OH部分高剂量组降酶作用有极显著意义 ( P<0 .0 1) ,Et OA c部分高剂量组对降 AL T有显著意义 ( P<0 .0 5 )。结论 :垂盆草中具有保肝降酶作用的活性成分主要存在于 H2 O部分和 n-Bu OH部分。

垂盆草提取物对乙醇致小鼠肝损伤的保护作用研究

目的研究不同剂量垂盆草提取物对乙醇致小鼠肝损伤动物模型的保护作用。方法采用乙醇灌胃造成乙醇型肝损伤小鼠模型。用70%乙醇对原药材进行回流提取,将垂盆草药材的醇浸膏分得醇提高剂量组、醇提低剂量组2组;另取等量原药材加水煎煮,并将水煎液分得水提高剂量组、水提低剂量组2组;以联苯双酯为阳性对照。垂盆草提取物4个剂量组小鼠均连续灌胃给药10 d,分别测定各组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及肝匀浆中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果垂盆草水提物(ESB-Ⅱ)、醇提物(ESB-Ⅰ)能抑制乙醇所致的ALT及AST活性的升高,降低乙醇所致的MDA含量的升高(P<0.01),扭转乙醇所致的鼠肝脏SOD活性的降低。结论垂盆草水提物、醇提物对乙醇致小鼠急性肝损伤有保护作用。且对血清ALT及肝组织SOD活性影响,水提物强于醇提物;对AST活性尤其MDA含量影响,醇提物强于水提物。

垂盆草总黄酮对APAP诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的研究垂盆草总黄酮对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)所致小鼠肝损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法将48只ICR雄性小鼠随机分为6组(n=8),正常对照组,模型组,阳性药物组(联苯双酯,300 mg/kg),垂盆草总黄酮低(150 mg/kg)、中(300 mg/kg)、高剂量组(600 mg/kg)。各组小鼠均灌胃相应药物或生理盐水,连续灌胃7 d,于第7天灌胃后1 h,除正常组外(腹腔注射生理盐水),其余各组均腹腔注射APAP 300 mg/kg进行肝损伤造模。APAP造模24 h后,采用相应的试剂盒测定肝组织和血清的生化指标,HE染色观察小鼠肝脏损伤情况,实时荧光定量PCR法检测Nrf2、HO⁃1 mRNA变化;Western blot法检测小鼠肝脏Nrf2、HO⁃1蛋白表达。结果垂盆草总黄酮降低了APAP诱导的ALT、AST、ALP、TBIL、LDH水平,降低肝脏指数和MDA水平,增加肝组织CAT、GSH水平以及SOD、GSH⁃PX活性;降低TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6水平;明显改善肝脏组织病变;增加Nrf2、HO⁃1 mRNA和蛋白表达。结论垂盆草总黄酮对APAP诱导的肝损伤有一定的保护作用,其可能的作用机制是减少氧化应激和炎症反应。

近缘种药材垂盆草与佛甲草的比较鉴定

目的:对属于近缘种、外形极似的药材垂盆草与佛甲草进行鉴定比较研究。方法:采用显微鉴定法研究两者茎的横切面及粉末的显微特征;采用薄层色谱比较两者的异同。结果:垂盆草与佛甲草茎横切面组织特征十分相似,但在导管数目、髓部形状及含紫红色物质的细胞数目等有显著差异。对8月份样品而言,前者导管数一般仅有35-58个,髓部多呈三角形;后者则多达75-150个,髓部呈"Y"形。两者的薄层色谱也有较大不同。此外,不同采集期的样品在显微特征上存在某些明显差异。结论:研究结果为两种药材的应用提供了鉴定参考依据,并提示近缘植物药的显微鉴定应注意排除共性。

垂盆草提取物对马兜铃酸致大鼠肾小管上皮细胞损伤的改善作用

目的研究马兜铃酸(AA)致肾小管上皮细胞损伤的分子机制及垂盆草提取物(SSBE)对AA损伤的干预机制。方法将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E加入AA 1,5,10,50和100 mg·L-1;或AA 10 mg·L-1+SSBE 10,50,100,500和1000 mg·L-1,培养24 h后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测NRK-52E细胞凋亡;ELISA和免疫细胞荧光染色检测巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达;实时荧光定量RT-PCR和Western蛋白质印迹法检测凋亡相关基因c-Myc和p53 mRNA和蛋白的表达。结果随着AA浓度的增加,NRK-52E细胞损伤愈加明显。与正常对照组相比,AA 10和50 mg·kg-1诱导细胞凋亡,并促进了c-Myc和p53明显表达(P<0.05);AA 10和50 mg·kg-1损伤肾小管上皮细胞后,MIF的分泌和表达量明显增加(P<0.05)。与AA 10 mg·L-1组相比,SSBE 1000 mg·L-1不仅减轻了AA所致的损伤,而且明显下调了MIF的表达(P<0.05)。同时,SSBE1000 mg·L-1也明显抑制了c-Myc和p53的表达(P<0.05)。结论 AA损伤肾小管上皮细胞,诱导细胞凋亡,并促进MIF的表达,进而影响炎症应激反应过程中巨噬细胞的浸润和活化。SSBE的干预可明显降低AA所致的损伤,这可能与MIF的表达下调有关。

保水剂对垂盆草建植和生理代谢的影响

研究了基质(蛭石、泥炭和粉煤灰等体积混合)中添加保水剂对垂盆草Sedumsarmentosum生长及生理代谢的影响。结果表明:适量保水剂能促进垂盆草新生芽的萌发和伸长,提高光合色素含量、叶片相对含水量、游离氨基酸含量和根系活力,有利于干物质的积累。在干旱处理后,保水剂对促进植物干物质的积累、地上部的生长以及提高叶片相对含水量、游离氨基酸含量的作用更明显,但过高的用量反而会降低根系活力。根据综合表现,1 g/L是垂盆草屋顶草坪较适宜的用量。

垂盆草对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠的作用及其相关机制研究

目的研究垂盆草提取物对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)导致的急性肺损伤(ALI)的影响及相关作用机制。方法健康成年SD大鼠随机分成3组:假手术组(C)、胰腺炎组(SAP)、垂盆草提取物干预组(SSBE),每组14只。逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)建立SAP模型,SSBE组在模型基础上给予SSBE(100 mg/kg)干预,C组和SAP组给予等量生理盐水。建模成功后分别于12 h、24 h取标本并处死大鼠,HE染色观察胰腺和肺脏病理损伤,测定各组各时间段大鼠血清淀粉酶(AMS)、炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的含量。Western blotting法观察肺组织中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、磷酸化的核转录因子-κB(NF-κB)、P65亚基(p-P65)蛋白表达的变化。结果肉眼及光镜下观察到SAP组与SSBE组均出现明显肺损伤,病理评分显示SSBE组肺损伤情况明显好于SAP组(P<0.05)。与C组比较,SAP组与SSBE组AMS、IL-1β、IL-6、TNF-a的含量明显升高(P<0.05),Western blotting法观察到SAP组肺组织中p-ERK、p-P65蛋白表达均高于C组。与SAP组比较,SSBE组AMS、IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显低于SAP组,且肺组织中p-ERK、p-P65蛋白表达均明显低于SAP组。结论垂盆草提取物对大鼠重症急性胰腺炎导致的急性肺损伤有改善作用,其作用机制可能是通过调控ERK-P65信号通路,减少炎症因子释放,从而减轻炎症反应。

复方垂盆草胶囊治疗慢性乙型肝炎的疗效及安全性

目的:研究复方垂盆草胶囊在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)治疗中的有效性及安全性。方法:将104例初治的CHB病人随机分为对照组和治疗组。对照组(n=53)给予口服替比夫定600mg,qd,联合安慰剂4粒/次,tid;治疗组(n=51)给予口服替比夫定600mg,qd,联合复方垂盆草胶囊4粒/次,tid。治疗至12周时,停用复方垂盆草胶囊和安慰剂,继续替比夫定抗病毒治疗。分别观察基线,第2、4、8、12、24、48周等时间点病人的血清学指标动态变化,评价疗效及安全性。结果:两组病人乏力、纳差、尿黄及厌油腻等临床症状在1周内均有明显好转。治疗组病人丙氨酸氨基转移酶(ALT)的下降幅度比对照组在2、4、12、24周更加明显(P<0.05),治疗组病人的乙肝病毒DNA(HBV DNA)阴转率在第2周更高,有统计学差异(P<0.05)。两组病人的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)载量中位数在4、12、24、48周逐步下降,在各时间点均无组间差异。治疗期间,两组病人均未出现严重药品不良反应。结论:复方垂盆草胶囊能够显著改善CHB病人肝脏的炎症反应,降低ALT水平,对抗病毒药物的疗效起到辅助作用。