荧光定量聚合酶链式反应联合显色培养法在孕晚期孕妇B群链球菌筛查中的价值

目的 分析荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)联合显色培养法在孕晚期孕妇B群链球菌筛查中的价值,为临床提供参考。方法 选取2022年10月至2024年3月阳光融和医院孕35~37周行B群链球菌筛查的1 000例孕妇进行回顾性分析,分别采用B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法对孕妇肛拭子或阴拭子B群链球菌进行检测。以肉汤增菌培养法为金标准,比较B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法检测B群链球菌的一致性;评估B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法对B群链球菌的检测效能;以B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法任一检测方法阳性作为联合检测阳性,评估联合检测与肉汤增菌培养法对B群链球菌的检测一致性及检测效能。结果 1 000例标本经金标准检出阳性94例,阴性906例,阳性检出率为9.40%。B群链球菌显色培养法检出阳性89例,阴性911例,阳性检出率为8.90%,与金标准检测一致性中等(Kappa值=0.681,P<0.05);qRT-PCR法检出阳性98例,阴性902例,阳性检出率为9.80%,与金标准一致性较好(Kappa值=0.839,P<0.05);联合检测阳性148例,阴性为852例,阳性检出率为14.80%,与金标准检测一致性较好(Kappa值=0.881,P<0.05)。与B群链球菌显色培养法相比,qRT-PCR法检测灵敏度、准确率均较高,漏诊率较低,联合检测灵敏度较高,特异度、漏诊率均较低(均P<0.05);与qRT-PCR法相比,联合检测灵敏度较高,特异度、漏诊率均较低(均P<0.05),准确率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法联合检测可提高检测敏感度,提升B群链球菌阳性检出能力,可为临床诊断提供参考。

痰涂片、固体培养法、GeneXpert MTB/RIF单独及联合检测结核分枝杆菌能力的比较

目的 评估痰涂片、固体培养法、 Gene Xpert MTB/RIF单独及联合检测对结核分枝杆菌的检出能力。方法 选取2019年1月-2024年3月在天津市蓟州区人民医院结核门诊就诊的疑似肺结核的患者568例,满足同时送检痰涂片、固体培养法、GeneXpert MTB/RIF三种检测方法,以临床最终诊断结果为金标准,评价上述三种方法检出结核分枝杆菌的能力。结果 在568例疑似肺结核患者中,临床最终诊断依据《肺结核诊断》(WS 288—2017)[1]标准进行,肺结核患者280例,非结核患者288例。痰涂片、固体培养法、GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的灵敏度分别为60.4%、84.3%、95.0%,差异具有统计学意义(χ^(2)=109.616,P<0.001),其中GeneXpert MTB/RIF灵敏度最高;三种检测方法特异度比较结果显示,差异无统计学意义(χ^(2)=1.002,P=0.606)。三种方法两两组合检测分析结果显示,痰涂片+固体培养法、痰涂片+GeneXpert MTB/RIF、固体培养法+GeneXpert MTB/RIF灵敏度分别为92.9%、98.2%、99.6%,差异具有统计学意义(χ^(2)=23.893,P<0.001),其中固体培养法+Gene Xpert MTB/RIF组合的灵敏度最高。两种方法联合检测特异度比较结果显示,差异无统计学意义(χ^(2)=0.502,P=0.778)。三种方法联合检测的灵敏度为100%,与金标准相一致;特异度比较结果显示,差异无统计学意义(χ^(2)=2.007,P=0.157)。结论 三种方法联合检测结核分枝杆菌优于单独检测及任意两种方法联合检测,所以建议三种方法同时检测有助于提高结核分枝杆菌的检出率,避免漏诊。

半固体培养法制备非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的单克隆抗体

为了快速、高效制备非洲猪瘟病毒(ASFV)单克隆抗体,本研究通过大肠杆菌系统表达并纯化了ASFV重组蛋白pA104R。以ASFV重组蛋白pA104R为抗原,分别比较了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂和常规弗氏佐剂两种免疫策略,并重点比较半固体培养法和常规有限稀释法来制备ASFV pA104R单克隆抗体的效率。结果显示,本研究获得了相对分子质量为3.5×104的ASFV重组可溶性蛋白pA104R,通过其与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫小鼠,在第21 d即可达到融合要求,本试验方法(重组蛋白pA104R与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫)较重组蛋白pA104R与常规弗氏佐剂免疫节省14 d时间。通过半固体培养法筛选单克隆的试验周期比有限稀释法缩短28 d,并减少了亚克隆的工作量。半固体培养法获得5株阳性杂交瘤细胞,挑选效价较高的3株(9A4、9H6、11F5)进行鉴定,重链均为IgG,轻链均为KAPPA。纯化后的3株单克隆抗体针对pA104蛋白和全病毒蛋白质的效价分别达1∶160000~1∶320000和1∶200~1∶400。本研究优选了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂结合半固体培养法筛选pA104R的单克隆抗体,为单克隆抗体制备提供了快速高效的新策略。

聚合酶链式反应检查法、细菌培养法在阴道细菌检查中的应用价值

目的:探究聚合酶链式反应(PCR)检查法、细菌检查法在阴道细菌检查中的应用价值。方法:选择2022年1—12月进行阴道细菌检查的阴道炎患者作为研究对象,共45例。收集所有患者的阴道分泌物,行PCR检查和细菌培养法检查,分析检验结果。结果:PCR检查法阳性检出率高于细菌培养法、肠球菌、棒状杆菌、加特纳菌、检出率高于细菌培养法(P<0.05)。结论:在阴道细菌检查中,PCR检查法相对于细菌培养法具有更高的应用价值,其病原菌检出率更高,为细菌性阴道炎的准确诊断和个体化治疗提供了更可靠的手段。

组织培养法保存新鲜同种异体骨软骨移植物的研究进展

关节软骨(articular cartilage,AC)因无血管和神经的解剖学特性而具有免疫特权,非常适合同种异体移植手术[1]。同种异体骨软骨移植(osteochondral allograft,OCA)技术治疗由骨坏死、剥脱性骨软骨炎和创伤性损伤等引起的软骨缺损疗效显著[2-3]。传统上,OCA技术是在移植物获取后7d内植入的,具有较高的软骨细胞活性,新鲜的同种异体骨软骨移植物(osteochondral allografts,OCAs)5年生存率已经超过80%[2-4]。

基于纯培养法结合高通量测序技术解析胀袋辐照凤爪中的微生物多样性

为研究真空包装胀袋辐照凤爪中的微生物多样性,该研究采用纯培养法与高通量测序技术对其微生物多样性进行解析。纯培养法结果表明,13株菌经鉴定分为4株植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)、3株短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、1株寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)、3株欺诈明串珠菌(Leuconostoc fallax)以及2株热带假丝酵母(Candida tropicalis)。高通量测序的结果表明,乳杆菌属(Lactobacillus)在胀袋辐照凤爪中的相对丰度最高(平均占比97.30%),是胀袋凤爪中的优势菌。此外,产气胀袋验证试验的结果表明L.brevis及L.fallax可引起产品胀袋。该研究结果可为掌握辐照凤爪胀袋产品中微生物污染及群落组成提供一定参考,并为后续产品微生物污染控制及产品品质提升提供一定理论依据。

GB 4789.15—2016正置培养法易受污染的原因分析和解决方法

GB 4789.15—2016第一法与旧版相比,最大的改动就是由倒置培养法变为正置培养法,但正置培养法有时会出现空白对照被污染的情况。本文从“人、机、料、法、环”5要素设计试验,发现空白对照被污染主要是由于培养箱内的鼓风系统引起的空气流动所致。通过风速增加试验,确证其原因,发现通过外加透气保护袋试验,可以解决正置培养法污染问题。

比较细菌培养法与革兰染色法在阴道细菌检验中的应用分析

目的:对比细菌培养法与革兰染色法在阴道细菌检验中的应用价值。方法:选取2021年10月-2022年10月佛山市第三人民医院就诊的120例细菌性阴道炎疑似患者进行研究,所有患者均经细菌培养法和革兰染色法行细菌检验,对比两种方式不同类型阴道细菌阳性检出率,以Amsel临床诊断标准为“金标准”,对比两种方式疾病诊断价值和不同致病菌检出率,另对比两种方式检查时间和满意度情况。结果:细菌培养法诊断阴道细菌的灵敏度为95.65%、特异度为82.14%、准确性为92.50%,阳性预测值为94.62%,阴性预测值为85.19%,革兰染色法诊断阴道细菌的灵敏度、特异度、准确性、阳性预测值和阴性预测值分别为83.70%、50.00%、75.83%、84.62%和48.28%,差异有统计学意义(P<0.05);细菌培养法对加特纳菌、棒状杆菌和肠球菌的检出率明显高于革兰染色法,差异有统计学意义(χ^(2)=6.628、4.694、7.336,P<0.05);细菌培养法检查时间为(4.21±1.18)h,长于革兰染色法的(0.44±0.08)h,差异有统计学意义(t=34.918,P<0.05);患者满意度高于革兰染色法,差异有统计学意义(Z=2.422,P<0.05)。结论:与革兰染色法比较,细菌培养法可准确诊断不同类型阴道细菌,灵敏度和特异度都比较强,患者更为满意。但前者耗时短,能够快速获得诊断结果,可根据临床需求合理选择检验方式。

混合培养法在检测食品中沙门氏菌中的应用评价

目的通过对标准菌株以及人工污染样品的检测,评价混合培养法在检测食品中沙门氏菌的应用。方法本研究采用混合培养法对3株不同血清型的沙门氏菌和30株非沙门氏菌进行检测,分析该方法的灵敏度和特异性;同时制备人工污染的样品(包括肉制品、乳制品、巧克力)进行检测,评价混合培养法和GB 4789.4—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》方法的一致性。结果混合培养法对3株沙门氏菌的检出限为1 CFU/25 g,而30株非沙门氏菌检测结果均为未检出,说明该方法具有良好的特异性;用混合培养法和GB 4789.4—2016分别对人工污染样品进行检测,对3类加标样品的检测灵敏度为:100%、100%、100%,总体灵敏度为100%;检测特异性为:93.2%、97.8%、93.2%,总体特异性为94.7%;检测假阴性率为:0、0、0,总体假阴性率为0;假阳性率为:6.8%、2.2%、6.8%,总体假阳性率为:5.3%;相对准确度为:97%、99%、97%,总体相对准确度为97.7%;混合培养法与GB 4789.4—2016方法阳性比例显著性差异为:1.33、0、1.33,总体显著性差异为0.89。结论根据SN/T 3266—2012《食品微生物检验方法确认技术规范》的判定规则,混合培养法和GB 4789.4—2016在统计学意义上无显著性差异。该方法具有提高实验效率、降低检测成本的优势,能够快速检测食品中沙门氏菌,在食品中致病性微生物的检测中具有较好的推广性。

植物组织培养新技术:光独立培养法

该文介绍了近年来日本学者开发的光独立营养培养法 (无糖培养法 ) ,在快繁阶段 ,导入大型容器 ,去掉培养基中的糖分 ,增施 CO2 ,并对组培环境进行调控 ,为组培苗的产业化生产提供了可能性。但培养容器内环境因子对培养植物的生长及形态的影响 ,还有很多问题有待进一步研究。光独立营养培养的大型培养容器或小型设施以及机械化。

荧光定量PCR法与培养法检测解脲支原体结果比对分析

目的通过比较荧光定量PCR法(qPCR)和培养法在解脲支原体(UU)检测中的符合率,为临床解脲支原体检测方法的选择提供参考依据。方法收集近期就诊于该院112例患者的生殖道分泌物标本,分别采用qPCR法与培养法检测UU。结果在112例标本中,UU培养法阳性53例,阳性率为47.32%,qPCR法阳性61例,阳性率54.46%(χ2=1.143,P=0.285>0.05)。61例qPCR法阳性的UU浓度范围1.60×10^(3)-1.04×10^(7)copy/mL,其中10^(3)copy/mL 12例(19.7%),10^(4)copy/mL 15例(24.6%),10^(5)copy/mL 22例(36.1%),10^(6)copy/mL 9例(14.7%),10^(7)copy/mL 3例(4.9%)。培养法阴性而qPCR法阳性病例9例,qPCR法测定浓度范围10^(3)~10^(5)copy/mL。结论qPCR法检测UU的阳性率略高于培养法,两种方法不符合结果的UU测定浓度分布在10^(3)-10^(5)copy/mL之间。

液体MGIT培养法在结核分枝杆菌检测中的应用评估

目的分别用液体分枝杆菌培养管(MGIT)培养法与固体罗氏(L-J)培养法及痰直接涂片抗酸染色检测结核分枝杆菌,评估液体MGIT培养法在结核病诊断中的应用。方法收集上海市松江区中心医院2010年11月至2011年8月肺结核门诊及住院的疑似和确诊后治疗复诊的患者痰标本共1 598例,其中828例为疑似新发患者、770例为已确诊治疗后复诊患者痰标本,所有标本均分别用液体MGIT培养法、固体L-J培养法及痰涂片抗酸染色进行检测。结果疑似新发患者痰液体MGIT培养法报阳时间[(13.63±7.14)d]与固体L-J培养法报阳时间[(28.67±10.04)d]间,复诊患者痰液体MGIT培养法报阳时间[(22.94±9.55)d]与固体L-J培养法报阳时间[(28.53±10.40)d]间差异有统计学意义(P<0.05);疑似新发患者痰液体MGIT培养法培养阳性率[32.00%(265/828)]比痰涂片抗酸染色法[14.80%(123/828)]和固体L-J培养法[17.90%(148/828)]高(P<0.05),复诊患者痰液体MGIT培养法培养阳性率为9.30%(72/770),痰涂片抗酸染色法为6.10%(47/770),二者差异无统计学意义(P>0.05),但比固体L-J培养法[2.60%(20/770)]高(P<0.05);液体MGIT培养法污染率为[6.57%(105/1 598)],比固体L-J培养法[4.00%(64/1 598)]高(P<0.05)。结论液体MGIT培养法在提高阳性率、缩短报阳时间上均优于传统的检测方法,而且操作简便,不需要昂贵设备,在基层医院易于操作和推广。

泌尿生殖道支原体液体培养法检测的实验评价

目的比较液体培养法和固体培养法平行检测解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)结果的一致性;评价液体培养法检测Uu和Mh的可靠性,加强Uu和Mh检测的质量控制。方法采用液体培养基和固体A7琼脂培养基平行检测369例临床标本的Uu和Mh。结果液体培养法阳性155例,阳性率为42%;固体培养法阳性111例,阳性率为30%;液体培养法阳性而固体培养法阴性49例;固体培养阳性而液体培养法为阴性5例。两种方法的阳性检出率差异有统计学意义(P<0.005)。两种方法所得结果基本一致(kappa系数为0.554)。结论泌尿生殖道支原体的检测不能仅凭液体培养法变色而报为阳性,应结合固体培养法作鉴定,才能报为阳性.用固体培养法提高检验的特异性,用液体培养法进行药敏试验,两者结合诊断和指导临床治疗,具有较好的临床应用价值,值得临床推广应用。

液体培养法检测泌尿生殖道支原体感染的准确性评价

目的通过液体-固体培养结合聚合酶链反应(PCR)法来评价目前临床所广泛应用的液体培养检测泌尿生殖系统支原体感染的准确性,进一步对液体培养法检测支原体的优、缺点进行探讨,并为临床诊断泌尿生殖系统支原体感染提供更为准确可靠的实验数据和方法。方法收集临床所用液体培养法已诊断为人型支原体感染、解脲支原体感染及人型和解脲双重支原体感染的临床标本的培养液,用准确性更高的液体-固体法进行传代培养,所得菌液再用PCR法扩增并测序,进一步鉴定菌种具体种属,并对比两次鉴定结果是否一致。结果临床上诊断为支原体属的61株菌液中,在该试验中仅23株确诊为支原体,25株为污染菌生长,13株为阴性。结论仅用液体培养法检测泌尿生殖道相关支原体感染情况,存在较高假阳性,应结合固体培养法以及分子测序方法以提高检测准确性。

载人航天器环境微生物免培养法检测技术研究进展

随着飞行时间的延长,载人航天器座舱中微生物的危害会越来越严重,环境微生物监测对保障乘组健康和航天器安全至关重要。目前载人航天器所使用的检测方法主要为培养法,随着新技术的不断涌现,以ATP、LPS、DNA等分子生物标志物为靶点的非培养法检测技术被设计应用于载人航天器环境微生物监测。回顾了在轨微生物检测技术的发展过程,重点介绍了目前在轨应用的以培养法为基础的微生物评价方法和以非培养法为基础的微生物鉴定方法的研究进展,比较分析了各类方法的优点及不足,以期为中国在轨微生物检测技术的发展提供建议和参考。

解脲支原体和人型支原体的液体培养法和固体培养法比较及耐药性分析

目的探讨液体培养法和固体培养法检测解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)的临床价值,并进行耐药性分析,为临床用药提供依据。方法选取2017年10-12月该院采集的819份泌尿生殖道支原体培养标本为研究对象,同时用液体培养法和固体培养法检测Uu、Mh。比较两种方法的检出率。以固体培养法为“金标准”,分析液体培养法检测Uu、Mh的效能。分析支原体(Uu、Mh)的耐药性特征。结果液体培养法对Mh和Uu的总检出率为53.97%,高于固体培养法的总检出率(45.79%),差异有统计学意义(χ^(2)=583.18,P<0.05)。液体培养法检测Uu的灵敏度为100.00%,特异度为85.22%;检测Mh的灵敏度为98.41%,特异度为94.05%。374份支原体阳性标本对诺氟沙星(97.33%)、环丙沙星(88.24%)和壮观霉素(83.42%)有较高的耐药率;对米诺环素(76.20%)、交沙霉素(63.37%)和多西环素(62.83%)的敏感率较高。结论液体培养法检测Uu、Mh的灵敏度较高,但同时有一定的假阳性率,应结合固体培养法以提高检测的准确性。针对Uu、Mh感染,临床需依据患者药敏试验结果合理使用抗菌药物,米诺环素、交沙霉素和多西环素可作为首选。

泌尿生殖道支原体液体显色培养法与固体培养法的比较

目的以固体培养法为标准,探讨液体显色培养法培养支原体的敏感性、特异性和一致性。方法采用培养鉴定药敏一体化液体显色培养基和固体A7琼脂培养基平行检测155例泌尿生殖道标本的支原体。结果液体显色培养法培养的敏感性为96.5%,特异性为79.7%,一致性Kappa=0.7737,U=11.4767,P<0.001,两种方法具有好的一致性。男性标本与女性标本比较,敏感性差异无统计学意义(χ2=0.1298,P>0.05),特异性差异有统计学意义(χ2=5.4197,P<0.025)。结论液体显色培养法可用于支原体培养初筛,结合固体培养法可以提高支原体培养的准确性。

多重PCR联合传统培养法在食源性致病菌检验中的应用

研究多重PCR联合传统培养法在食源性致病菌检验中的应用效果,为食源性致病菌的检测方法的适用性、有效性进行确认。方法 采取单纯多重PCR技术、传统培养法和联合方法进行检验,分析三种方法的检测结果。结果 联合检验方法的检验结果均优于单一方法。结论 在食源性致病菌的检验中,应用多重PCR联合传统培养法进行检验,检验效果良好,值得推广。

PCR检验法和细菌培养法在阴道细菌微生物检验中的结果比较观察

目的针对阴道细菌微生物检验过程中所使用的聚合酶链式反应(PCR)检验法和细菌培养法检验结果进行比较与观察,筛选出更准确灵敏的检测方法,以便更好地为临床服务。方法选择2022年5月—2023年3月在滕州市工人医院接受妇科检查的189例疑似细菌性阴道炎患者作为研究对象,所有患者均接受PCR检验法和细菌培养法检验,针对两种检验方法的结果、诊断价值进行观察与分析。结果PCR检测法与细菌培养法Kappa值的数据比较,差异有统计学意义(P<0.05)。PCR检测法与细菌培养法对于肠球菌、加纳特菌、棒状杆菌的检出率显示出相似性特征,差异无统计学意义(P>0.05)。PCR检测法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于细菌培养法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论分别使用PCR检验法、细菌培养法针对细菌性阴道炎患者的阴道细菌微生物感染情况实施检验,PCR检验法显示出较高的诊断灵敏度、特异度,并且具有耗时较短、操作方便的特点,值得临床应用。

PCR检查法与细菌培养法在阴道细菌检查中的临床研究

PCR检查法与细菌培养法在阴道细菌检查中的临床研究。方法 选取2023年1月-2023年12月本院收治的阴道炎患者45例,45例患者均接受细菌培养法、PCR检查法检验。对比应用效果。结果 不同检验方法的检验阳性率、加特纳菌分布检验准确率、检验认可度对比结果(P均<0.05)。结论 PCR检查法检验阴道炎的阳性率更高,可有效诊断阴道细菌分布,且患者认可度更高,有推广的价值。