灵芝诱导子对南方红豆杉悬浮培养细胞产紫杉醇的影响

为提高红豆杉悬浮细胞紫杉醇产量,采用制备的灵芝(Ganoderma lucidum)诱导子处理南方红豆杉(Taxus wallichiana var.mairei)悬浮细胞,通过分析细胞生长量、紫杉醇总产量,研究灵芝诱导子对红豆杉悬浮细胞的影响。结果表明,灵芝诱导子添加质量浓度为100µg/mL时,红豆杉悬浮细胞生长指数和紫杉醇总产量显著高于其他质量浓度(P<0.05),该质量浓度为灵芝诱导子的最佳添加质量浓度;灵芝诱导子在细胞生长的第8天加入时,第21天的细胞生长指数和紫杉醇总产量显著高于其他添加时间(P<0.05),细胞生长的第8天为灵芝诱导子的最佳添加时间;灵芝诱导子持续作用6 d时,细胞生长指数和紫杉醇总产量显著高于其他持续作用时间(P<0.05),该持续作用时间为灵芝诱导子的最佳持续作用时间。在悬浮细胞培养的第8天加入100µg/mL灵芝诱导子培养至第21天时,细胞干质量和紫杉醇总产量达到峰值,分别为对照(等量蒸馏水处理)的221.13%、569.69%;细胞膜表面黏膜和球状物质增加;苯丙氨酸解氨酶活性和总酚含量提高,细胞活力和多酚氧化酶活性降低。

日本血吸虫成虫培养细胞的超微结构观察

报告日本血吸虫成虫培养细胞的超微结构。在透射电镜下日本血吸虫成虫培养细胞呈多角形、圆颗粒形、三角扇形和鞭毛形等多种形状 ,其中以多角形为主。细胞表面光滑 ,或有乳头状突起、微绒毛和微饮泡等。胞质内有不同数量的线粒体、内质网、核糖体和糖原颗粒等分布 ,高尔基复合体很少或无 ;其中线粒体超微结构的变化可以作为评判培养条件优劣的一个指标。核常呈圆形 ,核膜为一单位膜 ,核孔清晰 ;核内具较丰富的异染色质 ,核膜内缘常有块状异染色质分布 ;核仁圆形。不同来源的细胞具不同的内部特征 ,生殖细胞内核质比例较高 ,胞质内具许多大小不等的囊泡和不同类型的皮质颗粒 ;卵黄细胞的典型特征是胞质中存在由高电子密度颗粒组成的卵黄球、卵黄滴 ;焰细胞的胞质中具纤毛束 ;神经细胞内具丰富的圆形或椭圆形突触小泡。可识别来源的这些培养细胞中卵黄细胞的数量最多 ,神经细胞的数量最少。

草鱼、青鱼体外培养细胞的属间、亚科间核移植

自King和Briggs 1952年首次报道了细胞核移植在两栖类上获得成功以来,这项卓绝的技术引起国内外学者的极大重视和兴趣,并逐渐应用到两栖类以外的其它动物。在我国,童第周教授等1963年首次应用此项技术于鱼类。他们在金鱼和鳑鮍鱼上的开拓性实验,证明鱼类细胞核同样可以进行核移植。七十年代起,我国在鱼类细胞核移植方面的研究得到迅速发展,并逐渐以理论研究走向实际应用。在鲫、鲤,鲢、草鱼、团头鲂等鱼类上进行研究,得到了几个不同组合的移核鱼或胚胎,其中某些移核杂交鱼是可育的。为了进行鱼类遗传改良研究,作者在草鱼、青鱼、团头鲂上着手进行了细胞核的移植,利用体外长期培养的体细胞作供体,在属间和亚科间鱼类上作移核实验,得到了不同发育期的胚胎。现将此工作作简要报道。

日本血吸虫童虫培养细胞SOD和MDA动态变化的研究

目的：观察日本血吸虫童虫细胞在体外培养过程中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和丙二醛（ＭＤＡ）含量的动态变化，探讨培养细胞的退化过程。方法：应用邻苯三酚自氧化法及硫代巴比妥酸法分别测定童虫细胞在培养０－５４ｄ过程中ＳＯＤ和ＭＤＡ含量的变化。结果：在培养第１２ｄＳＯＤ出现一个高峰，以后一直处于低平状态。ＭＤＡ在培养第１８ｄ和第４８ｄ分别各有一个高峰，其后均逐渐降低。结论：日本血吸虫童虫培养细胞呈逐步退化过程。

连二亚硫酸钠在建立培养细胞的无氧环境中的应用

目的 无氧环境是我们在用细胞进行研究的过程中经常会需要的。利用连二亚硫酸钠清除氧的能力 ,我们希望得到简便适用的方法制造培养细胞的无氧气、液相环境。方法 2mmol的连二亚硫酸钠可完全清除溶液里的氧气 ,我们用血气分析的方法检测连二亚硫酸钠溶液的性质 ,以及装有连二亚硫酸钠溶液的密闭容器内的气体成分的变化。结果 2mmol的连二亚硫酸钠溶液可保持无氧状态 1h左右 ,溶液的pH值并无变化。含 2mmol的连二亚硫酸钠的溶液可消耗密闭容器内的氧气 ,使容器内的氧含量接近与零。结论 连二亚硫酸钠可帮助我们得到简便使用的方法制造培养细胞的无氧气、液相环境。

真菌诱导子对胡桐悬浮培养细胞产生红厚壳素的影响

目的 探讨真菌诱导子对胡桐悬浮培养细胞产生红厚壳素的影响。方法 通过对胡桐叶斑病病菌的分离培养 ,制成真菌诱导子补加到胡桐细胞悬浮培养基中 ,考察不同浓度、不同加入时间对胡桐细胞生物量及红厚壳素产量的影响。结果 S I菌株诱导胡桐CR2细胞合成红厚壳素的最佳浓度为 60mgGE·L- 1,诱导子在细胞生长静止期初期 (即培养d 18)加入对红厚壳素产量影响最大 ,可使产量提高 2 7% ,并促进了红厚壳素向胞外分泌。

离体培养细胞的力学实验方法

细胞力学是组织工程和细胞工程的基础之一 ,在细胞离体培养过程中对细胞施加不同的机械力以研究应力对细胞的影响是细胞力学的一个重要研究领域 ,也是细胞力学的重要研究手段。本文综述了离体培养细胞的力学实验方法 ,根据不同的载荷施加方式可分为 :微吸管吸吮技术、压力载荷法、基底拉伸法和流体剪切法等 。

甲基硝基亚硝基胍诱导日本血吸虫成虫培养细胞增殖的研究

将培养第 5天的日本血吸虫成虫培养细胞在含甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)终浓度分别为 0 (对照 )、1、2、3、4、6、9μg/ml的附加 2 0 %小牛血清及常量抗生素的RPMI 16 40培养基中分别处理 2 4h、36h、48h ;随后 ,换用含 2 0 %小牛血清及常量抗生素的RPMI 16 40培养基培养 ;3d后 ,改用含 5 %小牛血清及常量抗生素的RPMI 16 40培养基继续培养 ,每天在OlympusIM倒置显微镜下观察。用浓度为 6 μg/ml、9μg/ml的MNNG处理的日本血吸虫成虫培养细胞在处理后 3天左右大片脱落 ,残留的少量细胞在换用 5 %小牛血清及常量抗生素的RPMI 16 40培养后逐渐死亡 ;用 1、2、3、4μg/ml浓度MNNG处理后的日本血吸虫成虫培养细胞 ,生长良好 ,与对照组相比 ,培养细胞的体积变大 ,分裂细胞增多 ,尤以 3μ/ml的MNNG处理48h的试验组最为明显 ,并观察到转化灶 ,但传代培养没有成功。结果表明在一定程度上 ,MNNG能够诱导日本血吸虫成虫培养细胞出现转化灶 ,并发生分裂。

日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组织化学观察

目的 探讨日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)、碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)的组织化学变化。方法 应用组织化学染色方法显示日本血吸虫成虫培养细胞SDH、AKP和ACP。结果 日本血吸虫成虫培养细胞均具SDH、AKP、ACP活性 ,体积较大的细胞在胞膜附近和鞭毛细胞的鞭毛部位SDH活性最强 ;圆颗粒细胞、三角扇形细胞及合胞体的AKP活性细胞质较细胞核弱 ,团簇状排列的细胞主要分布在细胞质 ,而鞭毛形细胞则集中于细胞核和鞭毛部位 ;ACP的活性均较强 ,尤其是体积较大的培养细胞 ,活性部位集中分布在核周或弥散分布在细胞质中。结论 日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组化染色可做为简便易行、快速敏感的细胞培养条件优劣的评价指标。

培养细胞电镜样品制备方法

随着细胞生物学的发展,大量培养细胞实验取代了动物实验.由于培养细胞体积小而且数量少,给电镜样品制备带来一定的难度.细胞培养的方法一般分悬液式和贴壁式两种.根据观察目的及细胞培养方式的不同,培养细胞的电镜样品制备也可分成不同的几种方法.

高效液相色谱法测定红豆杉培养细胞中紫杉醇的含量

采用Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ Ｃ_６Ｈ_５柱，以甲醇：乙腈：水（２：３：８．５）为流动相，在２２８ｎｍ波长下检测，对３种红豆杉即云南红豆杉（Ｔａｘｕｓ ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ）、红豆杉（Ｔ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）和欧洲红豆杉（Ｔ．ｂａｃｃａｔａ）培养细胞中紫杉醇（Ｔａｘｏｌ）的含量进行了测定。建立了一套简单、快速、准确的测定红豆杉培养细胞中紫杉醇的高效液相色谱方法，最低检出量可达０．５μｇ。

离心速度及时间对培养细胞透射电镜样品制备的影响

目的:探讨消化离心法中不同的离心条件对培养细胞超微结构的影响,寻找最佳的离心速度及时间。方法:将培养细胞消化后分成不同的离心速度和时间组,电镜下比较各组细胞超微形态的变化。结果:当离心速度低于800r/min,8min时,无法收集到足够的细胞量。离心速度2000r/min,15min时细胞挤压变形,胞浆出现撕裂等人工假象。离心速度在800～1500r/min,8～15min时制样较容易,细胞超微结构保存良好。结论:消化离心法制备培养细胞透射电镜样品,其最佳的离心速度和时间是800～1500r/min,8～15min。

三七培养细胞对心血管系统的作用

三七培养细胞(SCC)粗提物腹腔注射能增强小鼠耐缺氧能力,增加冠脉流量及减慢心率,对抗去甲肾上腺素收缩主动脉条的作用,对肠管平滑肌有解痉作用。小鼠灌胃SCC粉末混悬液可缩短出血和凝血时间。SCC的上述药理活性与三七生药相同。

组织因子对人类大肠癌培养细胞侵袭能力的影响

目的 :分析组织因子表达对人类大肠癌细胞 (HT 2 9细胞 )体外侵袭能力的影响。方法 :利用构建有正义/反义组织因子cDNA(TFcDNA)的真核表达载体 pcDNA3.1 /Zeo ,以脂质体法转染HT 2 9细胞 ,经验证转染成功的HT 2 9细胞采用Western印迹分析检测组织因子的蛋白表达水平并进行基质胶 (Matrigel)侵袭实验观察细胞体外侵袭能力的变化。结果 :转染了正义TFcDNA的HT 2 9细胞的组织因子表达水平及侵袭能力较未转染的HT 2 9细胞升高 ;转染了反义TFcDNA的HT 2 9细胞的组织因子表达水平及侵袭能力较未转染的HT 2 9细胞相比降低。结论

日本血吸虫童虫培养细胞的超微结构观察

本文报道日本血吸虫童虫培养细胞的超微结构。透射电镜下，日本血吸虫童虫的培养细胞可分为圆颗粒形、鞭毛形、三角扇形、多角形和不规则形等，其中以圆颗粒形为主；它们一般呈高核质比例，核多呈圆形或椭圆形，异染色质常聚集成块状；胞质中含有丰富的游离核糖体、散在的线粒体，还有内质网、糖原颗粒等；不同组织来源的培养细胞按其各自的特征，可划分为生殖细胞、焰细胞、神经细胞、肥大细胞、肌肉细胞。

日本血吸虫卵黄培养细胞超微结构动态的研究

从超微结构水平研究日本血吸虫卵黄细胞培养的动态。在体外培养过程中，卵黄细胞对外界环境的改变比日本血吸虫的其它体细胞更加敏感。随着培养时间的延长，卵黄细胞发生不同程度的变性，成熟卵黄细胞比未成熟卵黄细胞先发生变性。变性主要表现在核和胞质的电子密度降低；卵黄球相互融合，或卵黄球与膜之间的空隙逐步增大，最终卵黄球从中释放出来，变成裸露体；脂滴数目增多，体积增大；粗面内质网扩大和囊泡变，其上的核糖体脱颗粒等。由此认为，未成熟卵黄细胞在体外培养过程中超微结构的变化可以作为评价培养条件优劣的一个指标。

水分胁迫对小麦幼苗及悬浮培养细胞中诱导蛋白表达的影响

丰抗 8号小麦幼苗及成熟胚诱导的悬浮培养细胞在水分胁迫 (- 1 .0 MPa PEG60 0 0 )下 ,可溶性蛋白含量与蛋白组分变化有差异 ;幼苗可溶性蛋白含量高于对照 ,并随生长的延长呈降低趋势 ;悬浮培养细胞可溶性蛋白含量低于对照 ,且略有上升 ;复水后均可恢复到对照水平。 SDS- PAGE电泳及薄层扫描分析结果表明 ,幼苗受水分胁迫诱导 ,出现 44.2 k D蛋白亚基 ,该蛋白亚基含量可随胁迫时间延长上升 ,复水后消失 ;在正常条件下悬浮培养细胞中含有44.2 k D蛋白亚基表达 ,轻度胁迫处理时 ,该蛋白亚基含量上升 ,对悬浮培养细胞进行水分胁迫 ,该蛋白则表现下降趋势 。

甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞磷酸酶影响的研究

目的 研究甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)活性的影响。方法 将虫龄 2 6 d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,在RPMI- 16 40含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中培养第 7天时 ,随机分为实验组和对照组 ,实验组用含浓度为 3μg/ ml MNNG的常规培养基处理 48h,对照组用不含 MNNG的常规培养基处理同样时间 ,随后换用常规培养基培养 3周 ,当再换用含 5 %小牛血清的培养基培养 1周时 ,分别用 Gomori钙钴法和 Gom ori硫化铅法对两组培养细胞进行 AKP和 ACP细胞化学染色 ,用Olym pus BH- 12显微镜观察并拍照 ,用 HPIAS- 2 0 0 0图像分析仪测量其含量 ,并作统计分析。结果 实验组培养细胞的 AKP、ACP活性明显高于对照组培养细胞的活性 (P<0 .0 1)。结论 MNNG能增强日本血吸虫成虫培养细胞 AKP、ACP的活力 ,对培养细胞有促生长或 /和诱导其转化的作用。

环境激素阿特拉津对家蚕卵巢培养细胞(BmN)凋亡的影响

为探讨利用鳞翅目昆虫对环境激素进行生物学评价和监测的方法,用2,3-二苯基溴化四唑(MTT)、4’,6二乙酰基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染色和单细胞凝胶电泳(SCGE)、流色细胞仪检测(FCM)等技术,分析检测了环境激素阿特拉津(AT)对体外培养家蚕卵巢细胞(BmN)细胞增殖和凋亡的影响。结果显示：AT浓度超过0．0625mmol/L,显著抑制了BmN培养细胞48h的存活率(p＜0．001),LC_(50)为0．0703mmol/L；0．0625～0．5000mmol/L AT处理24h后,BmN细胞核出现明显的凋亡现象；0．5000mmol/L的AT处理48h后,BmN细胞DNA链发生断裂。AT对BmN细胞增殖和凋亡的影响有明显的时间-剂量效应。长期处于AT污染的环境中对鳞翅目昆虫可能有严重的细胞毒性。

肺生物基质及鼠尾胶对日本血吸虫培养细胞影响的研究

目的 研究细胞外基质 (ECM)对日本血吸虫培养细胞生存、生长的影响 ,佐证 ECM有利于培养细胞的生存、生长。方法 将虫龄 2 1d的日本血吸虫细胞接种于预先涂有肺生物基质、鼠尾胶的培养瓶和小盖玻片上常规培养 ,分别在光镜及扫描电镜下观察、拍照 ,并运用酶细胞化学方法进行培养细胞的乳酸脱氢酶 (L DH)染色。对照组未涂生物基质。结果 与对照组相比 ,实验组细胞饱满 ,弹性好 ,立体感强 ,存活时间长 ,L DH活性强 ,对高温具一定的耐受性 ;尤其是肺基质中培养的细胞 ,酶活性最强 ,培养 6 0 d的细胞仍观察到具有分裂能力。结论 ECM能改善日本血吸虫培养细胞生存、生长的微环境。实验组间比较 。