野生型p16和p53抑癌基因共转染对K562细胞增殖的抑制作用

抑癌基因p1 6和 p53在抑制肿瘤的发生中起重要作用 ,在髓细胞白血病细胞系K562中检测出这两种基因有纯合缺失。为探讨野生型 p1 6和 p53基因的转染与表达对K562细胞的生长影响 ,采用了脂质体介导外源野生型 p1 6和 p53共转染K562细胞 ,用免疫细胞化学染色检测p1 6和 p53基因的表达 ,检测细胞生长曲线 ,采用流式细胞术进行细胞周期分析。结果显示 ,共转染后 p53和p1 6在K562细胞中表达阳性率分别为 2 3 %和 2 8% ;细胞生长受到一定程度的抑制 ,G1 期细胞的比例增加 ,S期细胞减少 ,与单独转染 p53或p1 6基因的抑制作用有明显差别 (P <0 .0 5)。结论 :外源野生型 p1 6和p53基因的共转染比转染单基因对K562细胞生长有更明显的抑制作用 。

逆转录病毒载体介导胰岛素原基因突变体与葡萄糖激酶基因共转染的应用价值

目的 研究逆转录病毒载体介导基因共转染的效率 ,探讨其在基因共转染领域的应用价值。方法 以携葡萄糖激酶 (glucokinase ,gk)基因的逆转录病毒及携人胰岛素原基因突变体 (mutantproinsulingene ,mpin)的逆转录病毒共同感染HepG2细胞 ,经G418筛选 ,放免法、SDS PAGE、Western blot挑选联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞 ,RT PCR鉴定。结果 G418筛选 3周获阳性细胞克隆 ,采用放射免疫法、SDS PAGE、Western blot从 2 0个细胞克隆中挑选出联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞 4株 ,选取 1株命名为细胞克隆“β” ;RT PCR证实细胞“β”中已有两个目的基因的转录。结论 在需要目的基因长期表达的基因共转染领域 ,逆转录病毒载体仍有一定的应用价值 ,但如何提高其介导的基因共转染效率有待进一步探究。

HLA-A＊0201／Kb及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用

目的:为了用HLA-A2·1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A*0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法:采用基因共转染的方法,将HLA-A*0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、流式细胞术(FCM)和Westernblot检测了HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和提呈。结果:RT-PCR、FCM和Westernblot检测到HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MAGE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制。结论:MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价。

bax和p53基因共转染对人舌癌细胞增殖和凋亡的影晌

目的 探讨诱导凋亡的 bax基因和 p5 3抑癌基因共转染对人癌细胞增殖和凋亡的作用。方法 构建 p SV- CIP- bax- CAT嵌合基因。在其 bax基因上游含人 a1( )型胶原基因的第一内含子 2 17bp片段 ( + 82 2～ +10 93)和 317bp启动子片段。经阳离子转染试剂 DOSPER介导 ,分别用 p SV- CIP- bax- CAT转染、p SV- CIP- bax-CAT和 p SV- p5 3- CAT共转染培养的人舌癌 Tca8113细胞系 ( L CC)。结果 免疫狭缝印迹和 EL ISA检测证实 ,转染组和共转染组比对照的 bax和 p5 3基因表达量明显增加。 MTT显色分析、TU NEL荧光显微镜和流式细胞仪监测结果显示 ,bax基因或 p5 3基因均具抑制 L CC增殖和诱导凋亡的作用 ( bax组和 bax+ p5 3组的抑制率分别为2 3.9%和 2 6 .1% )。结论 人 a1( )型胶原基因的顺式作用元件能促使 bax基因在 L CC异位表达 ;bax与 p5 3共转染 48小时 ,对 L

HLA-A0201/K^b及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用

目的用HLA-A2.1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法采用基因共转染的方法,将HLA-A0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、细胞流式和western blot的方法检测了HLA-A0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和递呈。结果RT-PCR、细胞流式和western blot的方法检测到HLA-A0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MAGE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制。结论MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价。

腺相关病毒介导骨形态发生蛋白-7和性别决定区Y框蛋白9双基因共转染兔退变椎间盘的生物学效应

近年来，椎间盘退变基因治疗的实验研究较多。既往基因转染多采用腺病毒载体，但其具有免疫原性高、转染率低的特点。我们采用腺相关病毒（AAV）介导骨形态发生蛋白（BMP）-7和性别决定区Y框蛋白9（SOX9）双基因体内转染退变兔椎间盘髓核细胞，探讨体内应用腺相关病毒介导正向调控因子对退变椎间盘基因治疗的可能性。