非小细胞肺癌pl6/CDKN2基因失活的研究

目的：分析中国人非小细胞肺癌中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因失活的情况，探讨该基因在肺癌发生中的作用。方法：选取与ｐ１６基因紧密连锁的Ｄ９Ｓ１７４８位点，对１７例临床切除的原发性肺癌标本进行微卫星不稳定性分析，用甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ， ＭＳＰ）检测 ｐｌ６基因启动子区 ＣｐＧ岛甲基化状况，用免疫组织化学法检测Ｐ１６蛋白表达情况。结果：微卫星不稳定性分析结果表明，在１３例Ｄ９Ｓ１７４８位点存在多态性的肿瘤ＤＮＡ中有 ９例（６９ ．２％）发生了杂合性缺失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ， ＬＯＨ）。 ＭＳＰ的结果显示，有 ７０． ６％（１２／１７）的肿瘤组织存在ｐ１６启动子区的异常高甲基化。在本研究中，８２．４％（１４／１７）的肿瘤组织可以检测出一种或两种ｐ１６基因的异常改变。对此１７例肿瘤标本进行的免疫组织化学分析显示，有 １３例 Ｐ１６蛋白表达阴性，其中 ９２ ３％（１２／１３）存在一种或两种ｐ１６基因的异常改变。免疫组化结果与ｐ１６基因分子遗传学改变情况基本吻合。结论：作为一种抑癌基因，ｐ１６在多种肿瘤组织中都有异常改变。我们的研究表明，ｐ１６基因失表达是非小细胞肺癌?

角质形成细胞增生行为与p16^(INK4a)蛋白表达和基因失活的相关性研究

目的:探讨角质形成细胞(KC)增生行为与p16INK4a蛋白表达及其基因失活的相关性。方法:对20例皮肤鳞状细胞癌、24例基底细胞癌、18例Bowen病、12例光线性角化病以及8例脂溢性角化病共计82例患者中具不同增生行为的KC,分别应用免疫组化检测其p16INK4a蛋白表达;应用聚合酶链反应(PCR)、PCR-单链构象多态性以及PCR-限制性内切酶分析方法分别检测p16INK4a基因外显子1和外显子2的缺失、突变和甲基化。结果:p16INK4a蛋白表达的阳性率和表达强度随着KC恶性程度的增加而降低,基因缺失和甲基化是皮肤癌p16INK4a基因失活的主要方式,p16INK4a蛋白失表达与其基因失活是一致的。结论:p16INK4a基因失活在KC恶性转化中起重要作用;p16INK4a基因有可能成为皮肤癌诊断与治疗的一种新靶位。

卵巢交界性、恶性上皮性肿瘤P16/MTS1基因失活的研究

抑癌基因的缺失与突变在恶性肿瘤的发生和发展中起重要作用。多肿瘤抑制基因Ｐ16/ＭＴＳ1的突变和缺失广泛存在于人类多种原发性肿瘤组织及肿瘤细胞株中[1,2]但在卵巢交界性、恶性上皮性肿瘤中的失活研究,国内报道极少。我们采用显微切割-聚合酶链反应(ＰＣＲ)方法,对11例...

脑胶质瘤p16基因CPG岛高甲基化与基因失活的研究

目的 探讨脑胶质瘤中ｐ１６基因５’端ＣＦＧ岛高甲基化与该基因失活的相关性。方法 应用免疫组化检测５０例脑胶质瘤中Ｐ１６蛋白的表达；应用ＰＣＲ技术检测脑胶质瘤中ｐ１６基因第ｌ、２外显子缺失及第１外显子５’ＣＰＧ岛高甲基化。结果 免疫组化结果显示５０例脑胶质瘤组织中２７例恶性胶质瘤Ｐ１６蛋白缺失，２３例低级别胶质瘤Ｐ１６蛋白阳性；９例恶性胶质瘤Ｐ１６基因纯合性缺失；Ｐ１６蛋白阴性的恶性胶质瘤中７例显示Ｐ１６基因ＣＲＺ岛高甲基化。结论 恶性脑胶质瘤中Ｐ１６蛋白缺失而没有Ｐ１６基因纯合性缺失，是由于ｐｌ６基因５’端ＣＰＧ岛高甲基化后抑制该基因的转录所致。ｐ１６基因高甲基化也是该基因失活的重要机制之一。

抑癌基因失活在多原发性恶性肿瘤发生中的意义

目的 探讨抑癌基因在多原发性恶性肿瘤 (MPMN)发生中的重要作用。方法 采用回顾性分析的方法对近年来多原发性恶性肿瘤中常见的相关抑癌基因研究进行了综述。结果 目前在多原发性恶性肿瘤研究中 ,研究较多的抑癌基因有 p5 3、APC、p16、BRCA1、BRCA2、PTEN/MMAC1等基因 ,许多MPMN可检测出相同的抑癌基因突变。 结论 多原发性恶性肿瘤发生与抑癌基因失活有重要关系 ,通过对抑癌基因在MPMN中作用的研究 ,可揭示出MPMN发生的某些共同规律。

变形链球菌耐氟菌株gtfB基因失活菌株的构建

目的:构建变形链球菌(S.mutans)耐氟菌株UA159-FR中gtfB基因失活株,为研究耐氟菌株gtfB基因的功能奠定基础。方法:培养UA159-FR并以其为模板扩增gtfB基因上游、下游同源臂片段,以质粒pEGFP-N1为模板扩增kan基因;通过重叠延伸聚合酶链反应法(overlap extension polymerase chain reaction,OE-PCR)获取上述3个片段的同源重组片段;与pEASY-Blunt Cloning Vector连接形成重组质粒后,进行PCR鉴定和测序鉴定;将重组片段电转化入UA159-FR感受态细胞中得到gtfB基因失活菌株,并进行PCR鉴定。结果:经PCR鉴定和测序鉴定,含有gtfB基因重组片段的重组质粒构建成功;经PCR鉴定,UA159-FR的gtfB基因失活株构建成功。结论:成功构建了含有gtfB基因重组片段的重组质粒和S.mutans耐氟菌株UA159-FR的gtfB基因失活株,可用于gtfB基因功能的研究。

p16基因失活致消化系肿瘤发生的机制

据美国癌症协会1999年统计,男性前10位肿瘤死因中半数为消化系肿瘤,其中结、直肠癌居第3位,胰腺癌居第4位,食管癌居第7位,肝癌居第8位,胃癌居第10位,共计6.74万例.女性中结、直肠癌、胰腺癌和胃癌分别居第3、第4和第10位[1].因而,消化系恶性肿瘤是严重危害人类健康的重要疾病,但其发病机制并不完全清楚.近年随着分子生物学技术的广泛应用,人们已认识到肿瘤的发生涉及多种癌基因的激活和抑癌基因的失活,其中p16基因的作用引起了分子生物学、分子遗传学和临床医学等各领域学者的广泛关注[2].

p73基因失活在儿童急性淋巴细胞白血病发病和预后中的意义

目的 探讨p73基因mRNA失表达与儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)的发病和预后的关系。方法 采用反转录聚合酶链反应 (RT -PCR )方法检测了 34例ALL患儿骨髓单个核细胞内 p73mRNA的表达情况 ,并分析了 p73mRNA失表达与化疗的反应及复发的关系。结果 儿童ALL患者中 p73mRNA失表达率达 2 6.5 % ( 9/34 ) ,且与诱导缓解治疗的反应和复发显著相关 (P <0 .0 5 )。结论 p73mRNA失表达在小儿ALL的发病过程中起重要作用 ,p73mRNA检测对评估儿童ALL预后 。

初诊和复发的急性淋巴细胞白血病P15、P16基因失活的研究

目的 :探讨多肿瘤抑制基因 (MTS)P15和 (或 )P16的改变是否可影响急性淋巴细胞白血病 (ALL)的病程及其预后。方法 :跟踪 3 0例复发的ALL患者在初诊和第 1次骨髓复发时的骨髓标本 ,用PCR法监测P16exon 1、P16exon 2、P15exon 1的缺失 ;用REP法检测P16exon 1、P15exon 1高度甲基化情况。结果 :在初诊患者中共有 5 0 % ( 12 / 3 0 )的患者有P15和 (或 )P16基因失活 ,P16缺失的患者有 8例 ,其中 7例伴有P15缺失 ,7例P15甲基化的患者有 2例伴P16甲基化。在初诊时 ,15例无该基因异常的患者 ,复发期间有 11例出现P15和(或 )P16异常 ,占 86.7% ( 2 6/ 3 0 ) ,与初诊时 48% ( 12 / 2 5 )比较 ,差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。结论 :我们认为P15和 (或 )P16的失活可加快疾病的复发 ,监测ALL患者的P15和 (或 )P16失活 ,可用于预测疾病的病程和预后 。

变形链球菌gcp基因失活菌株生物膜形成能力及在唾液包被羟基磷灰石表面的黏附率

背景:前期实验发现外源性单磷酸鸟苷环二聚体能够抑制变形链球菌生物膜的形成及其体外黏附能力。变形链球菌内部存在的单磷酸鸟苷环二聚体是否具有同样作用。目的:成功构建了变形链球菌内部单磷酸鸟苷环二聚体相关基因gcp的失活菌株,观察gcp基因失活后变形链球菌生物学特性的改变。方法:将gcp失活菌和野生菌菌悬液在96孔酶标板中厌氧培养48h,用结晶紫染色,乙醇/丙酮混合液显色,测量A575nm值,以定量反映生物膜形成量;荧光标记gcp失活菌和野生菌,与唾液包被的羟基磷灰石粉末共同孵育后,测定羟基磷灰石沉淀的荧光值,比较黏附率的差异。结果与结论:gcp失活菌生物膜形成量低于野生菌,gcp失活菌在唾液包被羟基磷灰石表面的黏附率低于野生菌(P<0.05)。提示gcp基因的失活可抑制变形链球菌生物膜形成能力及在生物体表面的黏附。

白血病p16基因失活的研究

为探讨白血病p16基因失活的发生率及其与疾病预后的关系,对48例初发或复发的白血病进行了p16基因失活研究。首先应用多重聚合酶链反应(MPCR)方法扩增p16基因纯合子缺失,然后用限制性内切酶-PCR方法检测p16基因甲基化。研究结果表明,48例患者中有p16基因失活者10例(占20.4％),其中p16纯合子缺失者5例(2例伴有9p丢失),p16基因甲基化者5例。有p16基因失活者,病情进展迅速,治疗效果差,患者在短期内死亡。结论提示:p16基因失活在部分白血病的发生、发展中起重要作用;有p16基因失活者预后较差;p16基因失活的检测对于判断预后具有重要意义。

25例原发性肝细胞性肝癌中P16基因失活的研究

目的：调查Ｐ１６基因是否与原发性肝细胞性肝癌（ＰＨＣＣ）的发生有关。方法：采用多重ＰＣＲ分析法、单链构象多态性（Ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍ ａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍ ｏｒｐｈｉｓｍ ，ＳＳＣＰ）分析法及以ＰＣＲ为基础的甲基化分析法对２５例原发性肝细胞性肝癌（ＰＨＣＣ）标本及其相应的非肿瘤肝组织标本中Ｐ１６ 基因的缺失、点突变及甲基化情况进行检测。用免疫组织化学法对３５例（包括前述已作基因检测的２５ 例）原发性ＨＣＣ肿瘤标本及其相应的非肿瘤组织标本中Ｐ１６ 蛋白的表达情况进行了调查。结果：２５ 例ＨＣＣ肿瘤标本中，３ 例有Ｐ１６基因缺失，其中２例为纯合子缺失，１例为半合子缺失。另发现１例Ｐ１６基因无缺失者有Ｄ９ｓ１６２缺失。无Ｐ１６基因缺失的２２例肿瘤标本中均未发现有Ｐ１６ 基因点突变存在。肿瘤标本中基因的甲基化发生率为２４％ （６／２５），而全部非肿瘤组织均未出现Ｐ１６基因甲基化。在３５例ＨＣＣ肿瘤标本中发现Ｐ１６蛋白表达缺失１６ 例（４５．７％ ），而全部非瘤组织Ｐ１６ 蛋白均表达阳性。Ｐ１６ 蛋白表达缺失与肿瘤的病理分级有关，分级高者（Ⅲ、Ⅳ级）比分级低者更易发生（Ｐ＜ ０．０１）。在２５例作了Ｐ１６基因检?

恶性血液病患者P^(16)及P^(15)基因失活与甲基化的相关性研究

用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增 86例恶性血液病患者 P1 6 及 P1 5基因的外显子 1及外显子 2 ,再用限制性内切酶— PCR方法检测两基因的甲基化。发现 2 9例患者有 P1 6 、P1 5基因失活 ,以甲基化失活为主。对 P1 6 、P1 5基因失活与甲基化进行相关性分析 ,发现 P1 6 、P1 5基因失活与甲基化呈正相关 ,且患者的治疗效果差、缓解率低、缓解期明显缩短。认为 P1 6及 P1 5基因失活和甲基化的检测对于探讨恶性血液病的发病机制。

p53基因失活与大肠腺癌病理改变的关系

目的探讨ｐ５３基因失活与大肠腺癌Ｄｕｋｅｓ分期、转移等病理改变的关系。方法Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ和ＲＦＬＰ分析大肠腺癌组织中１７ｐＬＯＨ的改变：ＲＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测大肠腺癌ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变；两种单抗（ＰＡｂ２４０．ＰＡｂ１８０１）ＬＳＡＢ免疫组化方法检测大肠腺癌ｐ５３蛋白表达，ＳＰＳＳ下Ｆｉｓｈｅｒ'ｓｅｘａｃｔｔｅｓｔ处理结果。结果１０９例大肠腺癌中，１７ｐＬＯＨ与Ｄｕｋｅｓ＇Ｄ期和远处转移有关（Ｐ＜０．０１）；１８７例大肠腺癌中，ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变与Ｄｕｋｅｓ'Ｃ期和淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０１）；１００例大肠腺癌中，ＰＡｂ２４０和ＰＡｂ１８０１单抗阳性率分别为７６％和６２％，两种单抗相加总阳性率为８２％。ｐ５３蛋白高表达与Ｄｕｋｅｓ＇分期及癌转移间的关系无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论ｐ５３基因失活参与大肠腺癌的病理发展各阶段和转移行为；高频率的ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变和高频率１７ｐＬＯＨ的出现，分别提示Ｄｕｋｅｓ'Ｃ期和Ｄｕｋｅｓ'Ｄ期的病理阶段形成，这两种ｐ５３基因的改变分别提示淋巴结转移和远处转移的分子生物学标记。免疫组化方法可检测突变型ｐ５３基因产物高表达。

肠膜明串珠菌基因失活体系的建立

构建肠膜明串珠菌的基因失活体系。四环素抗性基因表达盒连接到pTA2 T载体上,在T载体的左右多克隆位点上分别定向插入ack(乙酸激酶)的上、下游同源臂,构建成自杀性同源重组载体,转化明串珠菌,使染色体的ack失活,得到突变型。检测突变型产乙酸的量并利用PCR验证ack失活。与原始菌株相比,突变型的乙酸产量减少49.1%;突变型的ack PCR扩增产物比原始菌株的大1200 bp左右。成功地使ack基因失活,说明肠膜明串珠菌基因失活体系的构建成功。

抗癌基因失活的另一重要机制──DNA甲基化异常

抗癌基因失活的另一重要机制──ＤＮＡ甲基化异常第三军医大学西南医院（６３００３８）肖文华综述，刘为纹审校肿瘤研究的热点已逐渐从癌基因转向抗癌基因，因后者在肿瘤的发生发展过程中起更重要的作用。突变、重排和缺失被认为是抗癌基因失活的重要机制。然而，这些机...

膀胱癌细胞p16抑癌基因失活的研究

目的 探讨膀胱癌中 p16基因失活情况。 方法 采用PCR、PCR SSCP和DNA甲基化分析技术等方法对 2 5例膀胱癌组织中 p16基因进行检测。 结果 2 5例膀胱癌标本中有 6例存在 p16基因纯合性缺失 ,缺失率为 2 4 % ;无 1例出现点突变 ;16例出现异常甲基化 ,检出率为 6 9.6 % (16 /2 3)。结论 外显子 2的纯合性缺失在安徽区域发生的膀胱癌中可能不是一个较频繁发生的事件 ;通过CpG岛异常甲基化失活可能是膀胱癌 p16基因失活的主要机制。

大肠杆菌fliC基因失活突变株的构建及其特征

构建编码大肠杆菌鞭毛蛋白基因(fliC)失活突变株,并探究其生物被膜形成改变后在应激状态下的生物学特征。使用Thermotargetron靶向基因失活系统,构建fliC基因失活突变株(ΔfliC420s),测定ΔfliC420s与野生型菌株的生长速率、运动能力、生物被膜形成能力、自溶速率、pH敏感性及对抗生素耐受性的变化。ΔfliC420s相比野生型菌株,生长速率未受影响,在半固体培养基中运动能力缺失,生物被膜形成能力明显降低,菌体自溶速率加快,pH敏感性增强,以及对D-环丝氨酸、红霉素、诺氟沙星的耐受性降低。大肠杆菌fliC基因在细菌生物被膜形成和对外界压力的抵抗中具有重要作用。

S-丙二酰转移酶基因失活对地中海拟无枝酸菌产利福霉素的影响

为提高利福霉素的产量,构建了S-丙二酰转移酶基因失活的地中海拟无枝酸菌。利用融合PCR构建S-丙二酰转移酶基因的同源重组载体,通过电击转化导入到地中海拟无枝酸菌中,使之发生同源重组,以安普霉素为标记,筛选了S-丙二酰转移酶基因失活菌株,并对比了突变菌株与原始菌株的利福霉素SV产量。成功构建了S-丙二酰转移酶基因的同源重组载体,获得了地中海拟无枝酸菌突变株A.mediterranei △fab D,失活菌株的利福霉素SV产量为168.08 mg/L,比原始菌提高了9.94%。S-丙二酰转移酶基因的失活,弱化了突变菌株脂肪酸的合成,强化了利福霉素的合成。