胶质瘤中Axin基因点突变检测及表达研究

目的 检测胶质瘤中Axin基因的点突变及其表达情况 ,初步探讨Axin与胶质瘤发生的关系。方法 采用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术及DNA测序方法检测Axin基因外显子 8,9及 10在 2 8例胶质瘤中的突变情况 ;同时对上述胶质瘤及正常脑组织进行免疫组化染色。结果 在 2 8例胶质瘤组织中Axin的第 10个外显子共有 6例样本 (2 1.4 % ) 3处发生了错义突变 ;3例 3处发生了同义突变 ;2 8例胶质瘤中 8例 (2 8.6 % )Axin表达阳性 ,正常脑组织中神经元表达阳性 ,神经胶质细胞表达阴性 ,检测到突变的样本中 1例表达阳性。

广东地区汉族人MBL基因点突变的研究

目的:研究我国汉族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)结构基因外显子1第52、54、57位密码点突变(CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA)。方法:收集广东地区汉族普通人群的血标本,提取白细胞基因组DNA,以PCR扩增目的基因片段,应用荧光探针杂交可视技术检测其MBL基因的点突变。结果:从202份样本中,检出GGC54GAC点突变纯合子6例和杂合子44例(等位基因频率为0.139),GGA57GAA点突变杂合子1例(频率为0.002),未发现CGT52TGT点突变(频率为0)。结论:广东地区汉族人群MBL基因点突变的频率较高,为防治MBL缺损病提供了一定的实验依据。

毛细管电泳技术快速检测p53基因点突变

目的 探讨利用毛细管电泳技术快速检测 p5 3基因点突变的临床应用价值。方法 采用毛细管电泳作 SSCP分析 ,检测 2 0例结肠癌肿瘤标本 p5 3基因第 7外显子 PCR扩增产物 ,并与传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果进行比较 ,最后用 DNA序列测定判断其准确性。结果 2 0例结肠癌标本中 ,毛细管电泳技术检测出 5例标本( Ca4,Ca6,Ca7,Ca8,Ca14)有突变 ,而凝胶电泳结合银染技术仅检出 4例标本 ( Ca4,Ca6,Ca7,Ca14)有突变 ,测序证实经毛细管电泳所检出的 5例标本均存在点突变。结论 对于 PCR产物的单链构象多态性分析 ,毛细管电泳技术是一种更加快速、简便、敏感的方法 。

乳腺癌变过程中的P53基因点突变

目的 :探讨乳腺癌变、发展与P5 3基因点突变的关系。方法 :应用聚合酶链反应 单链构象多态性(PCR SSCP)方法对 87例癌前状态、癌症初期、癌症后期及正常乳腺组织的P5 3基因 5～ 8外显子点突变进行检测。结果 :3例癌前状态、8例癌症初期和 14例癌症后期者发生点突变 (突变率分别为 15 .8%、34 .8%和6 3.6 % ) ,三者 (亦即乳腺癌变、发展过程 )P5 3基因突变率 (统计学结果 )呈明显渐进性。结论 :P5 3基因突变是乳腺癌的早期、多发事件 ,是引起乳腺癌变、发展的因素和标志之一。

HBeAg阳性慢性乙肝患者红细胞补体受体Ⅰ型分子基因点突变的分布及意义

目的:研究免疫耐受与应答组HBeAg阳性慢性乙肝患者红细胞补体受体Ⅰ型分子(complement receptor type1,CR1)基因点突变分布特点及数量水平,并分析其临床意义。方法:选择114例肝脏功能正常、血清HBV DNA含量大于106IU/mL的HBeAg阳性慢性乙肝患者作为免疫耐受组研究对象,选择110例初次转氨酶高于正常值2倍以上伴或不伴有肝细胞性黄疸的HBeAg阳性慢性乙肝患者为免疫应答组研究对象。采用PCR和HindⅢ酶切技术对红细胞CR1分子基因点突变进行分类,并采用酶联法定量测定红细胞CR1分子数量水平。结果:免疫耐受组红细胞CR1基因无点突变的患者明显低于应答组(P<0.05);免疫耐受与应答组的女性患者其无点突变百分率明显高于男性患者(P<0.05);在红细胞CR1基因无点突变的患者中,耐受组患者CR1分子数量较应答组明显下降(P<0.05);发生点突变个体的CR1分子数量明显低于未发生点突变的患者(P<0.01)。结论:红细胞CR1基因点突变与HBeAg阳性慢性乙肝患者的免疫反应状态有关,女性患者以无点突变类型为多。

肝硬化患者红细胞I型补体受体基因点突变与数量表达的变化

目的 动态观察肝炎肝硬化患者红细胞I型补体受体基因点突变与数量表达及其天然免疫黏附功能 (erythrocytecellnature immune adhesionfunction ,RNIAF)的变化 ,探讨它们在评估肝炎肝硬化病情严重程度中的应用价值。方法 分别检测 13 4例肝炎肝硬化不同分级的I型补体受体基因点突变与数量表达及其RNIAF的变化。结果 与正常人群相比较 ,肝硬化患者I型补体受体基因点突变率无统计学差异 ,而肝硬化Child分级各组的CRl数量表达及RNIAF都明显低于正常人群组 ,且随着分级病情严重 ,CRl、RNIAF逐渐降低。结论 红细胞I型补体受体活性及天然免疫黏附功能可灵敏地反映肝炎肝硬化患者病情的发展 。

应用PCR-SSCP银染技术检测HBV基因点突变

为了对乙型肝炎患者HBV基因突变进行大样本大面积筛检,建立简便可靠的检测HBV基因突变的方法。方法:采用单链构象多态性(SSCP)银染技术,检测HBV Pre-C基因突变。结果:在10份HBeAg阳性标本中,有8份PCR阳性,SSCP显示有2份标本有HBV Pre-C基因突变,直接测序证实为非终止密码突变。48份抗-HBe阳性标本中,有12份为PCR阳性,有8份SSCP显示PCR产物单链泳运状态异常,其中4份标本经直接测序证实在1898位发生了G→A变异,出现TAG终止密码突变。结论:PCR-SSCP银染技术检测HBV Pre-C基因点突变有很高的特异性和敏感性,该方法稳定、简便、快速,能基本满足临床大面积大样本筛检的需要。

中国人中发现的6种G6PD基因点突变

作者对产检夫妇中查出葡糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症的男性患者39例作了生化变异型鉴定（按1967年WHO统一法）。并研究了其G6PD基因突变的性质。方法是，在分别扩增G6PD编码的13个外显了的基础上，用其PCR产物作非对称PCR（APCR）。将获得的单链产物以双脱氧链终止法进行DNA顺序测定。

应用非同位素PCR-SSCP方法检测乳腺癌p53基因点突变

目的 探讨乳腺癌组织中p53基因点突变。方法应用非同位素PCR -SSCP技术检测 4 8例石蜡包埋乳癌组织中p53基因点突变。结果 4 8例乳腺癌中 2 0例出现异常电泳 ,表明这些病例相应DNA片段中发生了点突变 ,其中 8例位于第 5- 6外显子 ,9例位于第 7外显子 ,3例位于第 8外显子。免疫组化检测突变p53蛋白的表达 2 5例为阳性 ( 52 % ) ,其中 5例SSCP未发现基因突变 ,突变可能发生在所检测的基因片点以外。结论 非同位素PCR -SSCP是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法 ,特别适用于大量标本基因点突变的筛选 ;

耐氟喹诺酮类药物的大肠埃希菌gyr A 基因点突变检测

目的：研究大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法：对大肠埃希菌标准菌４４３０２和临床收集的３株对氟喹诺酮类药物高度耐药的大肠埃希菌及１株敏感菌，用ＰＣＲ方法扩增ＤＮＡ旋转酶ｇｙｒＡ基因的Ｎ末端编码区，并进行克隆和序列测定。结果：对氟喹诺酮类药物高度耐药的大肠埃希菌的ｇｙｒＡ基因的序列分析，发现３个导致氨基酸改变的基因点突变：丝氨酸－８３→亮氨酸；丙氨酸－８４→脯氨酸；天冬氨酸－８７→天冬酰氨。结论：对氟喹诺酮类药物高度耐药的大肠埃希菌的ＤＮＡ旋转酶Ａ亚单位存在着基因点突变。

云南边境地区氯喹及与青蒿琥酯伍用治疗前后恶性疟原虫pfcrt和pfmdr1抗药性有关基因点突变的变化特征(英文)

目的 了解氯喹单用及与青蒿琥脂伍用治疗恶性疟前后 ,pfcrt和 pfmdr1抗药性有关基因的点突变变化特征。 方法 使用PCR RFLP技术检测基因点突变。 结果 氯喹及与青蒿琥脂伍用治疗前后的所有样本都发现有恶性疟原虫pfcrt基因氨基酸编码 76突变为苏氨酸的特征。但是 ,氯喹治疗前 ,5 0 % pfmdr1基因氨基酸编码 86为天冬酰氨酸 (野生型 ) ,而剩余的 5 0 %为野生型和突变型 (苏氨酸 )的特征。氯喹治疗后 ,在 18个复燃的病例中 ,83 .3 %的 pfmdr1基因 86位点为野生型 ,剩余的 16.7%是混合型。氯喹与青蒿琥脂伍用治疗前 ,3个样本携带混合型基因型 ,剩余的 (86% )为野生型 ,但治疗后 ,所有样本只携带野生型。 结论 这些结果可能支持这样的假说 :pfcrt基因突变起主导作用 ,但 pfmdr1基因突变增强了氯喹抗药性的效果。

1种检测基因点突变的新型MLP-RT-PCR技术构建

目的构建1种检测基因点突变的新型MLP-RT-PCR技术。方法将多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术与实时PCR技术相结合,优化杂交和连接反应条件,建立MLP-RT-PCR反应步骤。设计检测HBV耐药相关基因5个突变位点的4类MLPA探针,根据反应特异性筛选出高特异性探针。同时对5个突变位点进行检测,考察该方法的特异性。检测不同浓度突变株的样本考察该方法的灵敏度。结果统一优化了各个位点的探针反应条件,提高了检测通量;选择单个错配碱基的MLPA探针,可提高检测特异性,5个突变位点检测之间无交叉反应;该方法的扩增效率可达99%～105%,可检测最低0.1%突变率的样本。结论成功构建了检测基因点突变的新型MLP-RT-PCR技术,该方法可在1个反应管中同时检测HBV耐药相关基因的5种突变形式,1次检测时间为4～5 h,为临床提供1种能够快速检测HBV耐药相关基因点突变的方法。

顺序特异性引物法快速检测胰腺癌K-ras基因点突变

目的 研究简捷、特异、敏感的检测胰腺癌K-ras基因点突变的方法及其在胰腺疾病中定性诊断的价值。方法 采用针对K-ras基因点突变方式（CGT、GAT、GTT）设计的顺序特异性引物（SSP）,先后对胰腺癌石蜡包埋组织、冰冻新鲜组织、细针穿刺组织及胰液进行多聚酶链反应（PCR）,扩增产物借助常规电泳和染色检测有无K-ras基因突变及突变方式。结果 胰腺癌石蜡包埋组织、冰冻新鲜组织、细针穿刺组织及胰液中K-ras基因点突变率分别为74.2％、95.1％、91.4％及94.1％,而所有被检测的慢性胰腺炎、胰岛素瘤、壶腹癌、胆管癌、十二指肠乳头癌及外伤胰腺的组织标本和胰液标本均无K-ras基因突变发生。结论 该检测法简便、快速、特异、敏感,具有临床实用性,可以作为鉴别胰腺肿块良恶性和诊断胰腺癌的一种方法。

寡核苷酸芯片技术检测中国肝细胞癌p53基因点突变

目的探讨寡核苷酸芯片技术在我国肝细胞癌p53基因点突变发生频率及形式,并以DNA测序法进行验证。方法参照国际p53突变公共数据库资料,以发生频率最高的7个点突变序列设计探针,制备p53基因点突变专用寡核苷酸芯片,应用该技术检测我国肝细胞癌p53基因7个常见突变位点的突变频率及形式,以DNA测序法验证结果,比较不同分组时p53基因点突变差异。结果共检测肝细胞癌石蜡包埋标本54例,p53基因突变率为38.9%(21/54)。54例中广西肝癌高发病区组17例,广西低发病区组(低发区组)19例,区(省)外组18例,三组突变率分别为47%、21%、50%。p53突变主要发生在249编码区,主要突变形式为249ser突变(由AGG→AGT,第三碱基G→T颠换);以DNA测序法对结果进行验证,两种技术检测结果重合率100%。结论寡核苷酸芯片技术可作为检测肝癌p53基因突变的一种新的、可靠和便捷的手段;我国肝癌不同地区之间p53基因突变在频率及形式上既有差异性又有类似性,可能预示不同地区肝细胞癌的病因学异同性。

一例急性髓性白血病的GATA-2基因点突变

GATA是一类属于“锌指”结构家族的新发现的转录因子(G=鸟嘌呤脱氧核苷酸;A=腺嘌呤脱氧核苷酸;T=胸腺嘧啶脱氧核苷酸)。ATA-2在造血细胞的分化早期以及红系和髓系的发育中起一定的作用。为了了解GATA-2在急性髓性白血病(AML)中的作用,我们利用聚合酶链反应(PCR)方法检测86例AML病人GATA-2基因的表达情况。结果77例表达了该基因。

肺癌细胞p53和K－ras基因点突变的研究

肺癌细胞ｐ５３和Ｋ－ｒａｓ基因点突变的研究陈家，吴中亮，高宏光，何玲，杜应秀广州医学院化学致癌研究所（广州５１０１８２）不少研究表明，化学致癌物可选择性地诱发癌基因或抑癌基因某些碱基对的特异性改变，如Ｋ－ｒａｓ的第１２、１３和６１密码子；ｐ５３的２４...

河南省肝细胞癌患者P^(53)基因点突变研究

肝细胞癌(HCC)与抑癌基因P53突变的关系是近年来分子生物学研究的一个热点,特别是其第7外显子(E7)第249编码区(cd249)的高频率点突变引起了许多学者的兴趣.

喉癌p53基因点突变研究

目的 探讨喉癌组织 p5 3基因点突变的频率、特征。方法 选用 P5 3蛋白表达阳性的喉癌标本2 2例 ,正常喉组织 2例 ,采用聚合酶链反应 -限制性内切酶片段长度多态性 (PCR- RFL P)、单链构象多态性 (SSCP)及 DNA直接测序法分析 p5 3基因第 7外显子第 2 49位密码子的点突变。结果 在 2 2例喉癌中有 3例发生突变 ,分别位于 2 48、2 5 0及 2 5 4密码子 ,表现为碱基 C的丢失和 A→ T颠换 ,但无 2 49密码子突变。结论 在喉癌中 p5 3基因第 7外显子的第 2

基于DNA聚合酶I的新型电化学传感器及其胰腺癌K-ras基因点突变检测

本文构建DNA聚合酶Ⅰ的新型DNA电化学传感器，将捕获探针通过Au—S键固定于Au基底表面，与互补靶序列杂交至点突变前一个碱基，通过DNA聚合酶Ⅰ将dUTP-biotin连接在目标DNA的检测位点。再与avidin-HRP反应，而后测定在TMB溶液中的电化学特性．结果表明，DNA电化学传感电极的检测电流值与K-ras突变型基因浓度（1．0×10^-15～1．0×10^-10mol·L^-1）对数呈良好的线性关系，且灵敏度高，特异性较佳．